UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA PROFESIONAL DE ENFERMERIA

METODOS DE FIJACIONY
COLORACION DE MUESTRAS

LABORATORIO N°3
 CURSO: BIOLOGIA E HISTOLOGIA
 DOCENTES: DRA.VIOLETA MORIN GARRIDO
DR. CARLOS HOLGUIN MAURICCI
DR. EMILIO FLORES
 SEMESTRE: 2018/01
 FECHA: 17/05/2018
 ALUMNA: GREYSI ALELI CHINGUEL CASTILLO

1
 INTRODUCCION

pueden observarse directamente al microscopio de campo claro. Sin

embargo debido al bajo contraste entre las células y su entorno, estos
procedimientos se ocupan en ocasiones limitadas
La tinción es un método sencillo para incrementar el contraste entre
la célula y su entorno , por lo tanto contribuye a mejorar la imagen
observada.
Todas las tinciones se realizan a partir de suspensiones de
microorganismos extendidas en un portaobjetos (frotis), secadas y
fijadas).
la fijación permite preservar estructuras celulares, se puede llevar a
cabo con diferentes tratamientos:
Fijación por el calor : consiste en pasar el portaobjetos , con la
suspensión bacteriana extendida y seca, a través de una llama de
machero, preserva la morfología externa, pero no las estructuras
internas
Fijación química con agentes como etanol, formaldehido, entre otros,
se utilizan para preservar las estructuras celulares.

2
  METODOS DE FIJACIÓN:
Se entiende por fijación toda manipulación de un ser vivo o parte de él. Tiene
por objeto mantener toda su estructura, de tal modo que no se altere ni física ni
químicamente para que sus componentes celulares mantengan las mismas
características que cuando dicho ser o tejido estaban vivos. Entonces se dice
que un fijador inmoviliza y estabiliza los elementos celulares.

 Tipos de Fijadores:

- Fijaciones Físicas:

Son varios los fijadores físicos que usualmente se utilizan, sobre todo por su simplicidad,
pero la mayoría de ellos debemos desecharlos, porque alteran gravemente la estructura
de los vegetales, entre algunas fijaciones Físicas tenemos:

1. El calor

Es el más antiguo y más utilizado de estos fijadores. Tanto en microbiología, como en el

frotis de células animales, la fijación se hace a la llama, con lo que se obtiene una
coagulación rápida de las proteínas y por tanto su estabilización. Esta técnica no es
recomendable cuando se trata de tejidos vegetales, puesto que produce alteraciones
importantes y muy desiguales en las paredes celulares.

2. El Frio
Como anteriormente hemos mencionado, el frío (congelación), se ha tenido y se tiene como
agente de fijación, pero es realmente un agente conservador y por tanto no debe utilizarse como
tal.

- fijadores químicos:

unos simples, y otros que son mezcla de varias sustancias, como son: Ácido acético que
Conserva la cromatina, Retrae los tejidos. Es más, un conservante que un fijador. Las
distintas fijaciones químicas son:

1. Fijación por inmersión:

Este método consiste en tomar o extraer una muestra del tejido u órgano que se vaya a
procesar y sumergirlo en una solución fijadora. Normalmente, se introduce la pieza de tejido
en un frasco que contiene la cantidad adecuada de fijador.

2. Fijación por perfusión.

Este método consiste en realizar una perfusión de la solución fijadora utilizando el torrente
vascular. Es el método empleado normalmente con animales de experimentación.

3
  COLORANTES:
LOS COLORANTES SON SUSTANCIAS DE ORIGEN QUÍMICO O BIOLÓGICO, GENERALMENTE
TINTES, PIGMENTOS, REACTIVOS U OTROS COMPUESTOS, EMPLEADOS EN LA COLORACIÓN
DE TEJIDOS MICROORGANISMOS PARA EXÁMENES MICROSCÓPICOS, DEBIENDO TENER AL
MENOS, UN GRUPO CROMÓFORO QUE LE PROPORCIONE LA PROPIEDAD DE TEÑIR.

 Tipos:
a) Simples: utilización de un solo tinte con el cual podemos evaluar solamente la
morfología. Las tinciones simples es cuando toda la muestra se tiñe del mismo color y se

utiliza un solo colorante.

b) Compuestas o especiales: constituidas por 2 o más tintes o reactivos y sirven para

clasificar las bacterias u observar sus características especiales.

c) Positivas: se observa teñida la célula sobre un fondo claro.

d) Negativas: El fondo se tiñe de oscuro para observar la célula o estructuras

refringentes.

- Coloraciones compuestas:

1. coloración de Gram

Principio: Composición de la pared celular de las bacterias, las bacterias G+ está

compuesta por varias capas de peptidoglicanos, las bacterias G- tienen una membrana

externa con un componente estructural único que son los lipopolisacáridos.

Las bacterias G+ retienen el cristal-violeta después de la decoloración y aparecen de color

azul intenso (purpura), las bacterias G- no son capaces de retener el cristal-violeta después

de la decoloración y son teñidas de rojo con safranina.

2. coloración de Moeller (esporas)

Principio: Se suspende una bacteria del género Bacilos, evidencia capsula incolora en un
contraste morado.

3. coloración de Anthony (cápsula)

Principio: Es una tinción negativa en donde vemos la cápsula no teñida sobre un fondo
morado y se visualiza la bacteria en el centro de la cápsula, esta pude ser de glicoproteínas

o polisacáridos.

La cápsula es una sustancia viscosa producida por algunas especies que la sintetizan a partir

de polipéptidos, polímeros de glucosa u otros amino azúcares que contienen nitrógeno, que

4
después de combinarse con el agua es segregada por todo el contorno de la pared celular

como un moco gelatinoso. Cuando la cápsula ha sido producida puede observarse en los

frotis coloreado por el método de Gram como un halo incoloro alrededor de la bacteria.

Cuando se requiere ver la cápsula con más detalle o inducir su producción se recurre a

coloraciones especiales.

4. Coloración de ácido-alcohol resistencia

Principio: Se trata de un procedimiento de tinción diferencial, conocido como método de

Ziehl-Neelsen, que tiene gran relevancia por su aplicación clínica. Permite poder distinguir

aquellos microorganismos cuya coloración resiste la acción de alcoholes y ácidos suaves

(ácido-alcohol resistentes) de otros que no resisten la decoloración (no ácido-alcohol

resistentes).

5. Tinción de azul algodón de lactofenol

Principio: El fenol inactiva las enzimas líticas de la célula e impide que ésta se rompa; de igual
forma, destruye la flora acompañante e inactiva a la célula, quitándole el grado de patogenicidad;
además, actúa como mordiente cuando se usa en combinación con colorantes. El ácido láctico
preserva las estructuras fúngicas al provocar un cambio de gradiente osmótico con relación al
interior fúngico, lo que genera una película protectora. El azul de algodón es un colorante ácido,
que tiñe el citoplasma y la quitina presente en las células fúngicas, mientras que el glicerol
mantiene húmeda la preparación. Una vez preparado el colorante, se debe colocar la muestra
microbiológica en un portaobjetos por medio de una impronta (proceso en el cual se coloca una
impresión de la muestra sobre una estructura utilizando una cinta adhesiva transparente).

5
  CUESTIONARIO:

1. ¿Con respecto a la preparación coloreada con Wrigth, que diferencia

observa entre los glóbulos blancos y rojos?

Los glóbulos blancos tienden a hacerse color violeta y por eso se
diferencian de los rojos.

2. Identifique cuantos tipos de glóbulos blancos se conocen y cuales

observo en su lamina.

Hay cinco tipos de glóbulos blancos:

 Los neutrófilos son el tipo más común de glóbulo blanco. Estas células van al
lugar de una infección y liberan sustancias llamadas enzimas para combatir las
bacterias o los virus invasores
 Linfocitos. Hay dos tipos principales de linfocitos: Linfocitos B y T. Los
linfocitos B combaten las bacterias, las toxinas o los virus invasores. Los
linfocitos T atacan y destruyen las células propias que han sido infectadas por
virus o por células cancerosas
 Los monocitos eliminan las sustancias extrañas y las células muertas y
estimulan la respuesta inmunitaria del cuerpo
 Los eosinófilos combaten las infecciones, la inflamación y las reacciones
alérgicas. También defienden al cuerpo contra los parásitos y las bacterias
 Los basófilos liberan enzimas para ayudar a controlar las reacciones alérgicas y
los ataques de asma

Se observaron los linfocitos.

3. Explique brevemente la función de los glóbulos blancos e indique el

porcentaje y numeración y formula de ellos.

Los glóbulos blancos son un conjunto de células sanguíneas, que se

destacan por ser los efectores celulares de la respuesta inmunitaria
de nuestro organismo. Esto implica que intervienen y participan de
forma activa en la defensa del organismo y contra todo tipo de
agentes infecciosos o sustancias extrañas.
En individuos sanos, representan alrededor del 1% de la sangre. El
recuento normal de glóbulos
blancos es por lo general entre 4000 y 11000/μL para un adulto y
entre 9000 y 30000/μL para un
recién nacido.

4. Cual es el fundamento de coloración Wrigth y que tipos de bacterias

se observa.
Se observa célula animal, colorea a los glóbulos blancos en violeta
para su diferenciación de los glóbulos rojos.

6
5. ¿Por qué existe mayor cantidad de glóbulos rojos que de blancos en
la sangre?

porque estos tienen que llevar ese oxígeno a todos los tejidos y
conjuntos de tejidos que posee el organismo, como estos tejidos que
componen el organismo son muchos por ende se debe recurrir a
muchos glóbulos rojos para llevar el oxígeno a ellos.

6. ¿Qué aumentos cesan en la observación de preparados en fijo y

para que se usa el aceite de cedro y como están dispuestos en el
diafragma y el condenso para permitir el enfoque correcto?

Cesan 400aumentos, La función del aceite de cedro es restringir el

movimiento de la muestra, además de evitar el rozamiento entre el
cubreobjetos y el objetivo, generalmente se lo utiliza cuando vamos a
observar con el objetivo 100x. Otra función del aceite de inmersión es
evitar que la luz se desvíe; al contrario, lo que se pretende es que la
luz llegue concentrada hacia la muestra.