ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SENYAWA TANIN DARI DAUN BINAHONG

(Anredera cordifolia (Ten.) Steenis)

Rizki Karoby1, Sri Wardatun2, Husain Nashrianto3

123
Program Studi Farmasi, FMIPA, Universitas Pakuan Bogor

ABSTRAK

Penelitian ini dilakukan untuk mengisolasi senyawa tanin daun binahong dengan
Kromatografi Lapis Tipis selanjutnya menentukan panjang gelombang senyawa tanin dengan
spektrofotometri UV-Vis dan mengidentifikasi gugus fungsi dengan spektrofotometer FTIR.
Metode yang digunakan yaitu Metode Kromatografi Lapis Tipis (KLT), Spektrofotometri
UV-Vis, dan FTIR. Daun Binahong sebelumnya dilakukan ekstraksi dengan metode maserasi
menggunakan aseton : air (7:3) dengan penambahan Asam askorbat 10 Mm selama 3 hari,
kemudian difraksinasi dan diidentifikasi senyawa taninnya.
Hasil ekstrak daun binahong dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) didapat 1 spot
tanin dengan eluen n-butanol : asam asetat : air (4:1:5) dengan nilai Rf 0,64.Isolat diukur
serapannya dengan Spektrofotometri UV-Vis dengan nilai serapan 284 nm. Hasil identifikasi
dengan spektrofotometer FTIR menunjukkan serapan-serapan yang spesifik dari gugus O-H,
C=O, C=C terkonyugasi, C-H C-O alkohol skunder dan Benzena Tersubstitusi OH.

Kata kunci : Binahong, tanin, kromatografi lapis tipis, spektrofotometri UV-Vis, FTIR

ABSTRACK

The study is done to isolate compound tannin binahong leaves with chromatography
thin layer next specify wavelengths compound tannin with spectro uv-vis and identify the
function by spektrofotometer ftir .Methods used the method chromatography thin layer ( klt )
, spectro uv-vis , and ftir . Binahong leaves previously done extraction with the maceration
using acetone: water ( 7: 3 ) by the addition of ascorbic acid 10 Mm for 3 days , then in
fractionate and identified tannins compound.
The extract leaves binahong with chromatography layers thin ( klt ) obtained 1 spot
tannin with eluen n-butanol: acetic acid: water ( 4: 1: 5 to the value of rf 0,64.isolat measured
absorption him by spektrofotometri uv-vis with the absorption 284 nm .The identification
with of the spectrophotometer ftir show serapan-serapan specific of a cluster of O-H , C=O ,
C=C terkonyugasi , C-H C-O alcohol skunder and benzene substituted OH.

Keywords: binahong , tannin , chromatography thin layer , spectro uv-vis , ftir

PENDAHULUAN mengandung senyawa seperti flavonoid,

Tanaman binahong (Anredera cordifolia
(Ten.) Steenis) merupakan salah satu taman
Indonesia yang dimanfaatkan sebagai obat
tradisional. Kemampuan binahong dalam
menyembuhkan penyakit berkaitan erat dengan
senyawa aktif didalamnya. Daun binahong
alkaloid, tanin dan saponin (Pansera, 2014).
Tanin terdapat luas dalam tumbuhan
yang berpembuluh, dalam angiospermae
terdapat khusus dalam jaringan kayu dapat
bereaksi dengan proteina membentuk kopolimer
yang tidak larut dalam air (Harbone, 1987).
Senyawa ini dapat ditarik menggunakan pelarut
campuran aseton-air (7:3) dengan penambahan
asam askorbat 0,1% untuk melindungi tanin
terhadap oksidasi udara dengan metode KLT
dan Fraksinasi (Hayati, dkk., 2009 dan
Harbone, 1987). Ekstrak lalu difraksinasi dengan
kloroform. Ekstrak air kemudian dipisahkan
dengan KLT (Kromatografi lapis tipis analisis
dan KLT preparatif dan KLT dua dimensi
selanjutnya dilakukan identifikasi dengan
spektrofotometer UV-Vis dan FTIR.
METODE PENELITIAN
Waktu dan Tempat Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan selama 2 (dua)
bulan mulai dari bulan Agustus sampai bulan
Oktober 2016 di Laboratorium Farmasi Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam
Universitas Pakuan, Bogor.
Alat
Alat yang digunakan pada penelitian ini
adalah seperangkat alat gelas, vacum rotary
evaporator, bejana pengembang, lampu UV 254,
seperangkat alat UV-Vis merk Shimadzu,
seperangkat alat FTIR merk IR Buck M500
Scientific.
Bahan
Bahan yang digunakan pada penelitian
ini adalah daun binahong, aseton, akuades, asam
askorbat 0,1%, kloroform, etil asetat, gelatin,
natrium asetat, asam klorida pekat, asam asetat
glasial, asam asetat, n-butanol, metanol, gelatin,
Pb asetat, Besi (III) Klorida, pelet KBr, plat
KLT silika G60 F254.
Pengumpulan Bahan
Daun binahong yang digunakan dalam
penelitian ini diperoleh dari Balai Penelitian
Tanaman Obat dan Rempah (Balittro).
Pembuatan Simplisia Daun binahong
Daun binahong dikeringkan dengan oven
pada suhu 40ºC selama 12 jam, simplisia
digrinder sampai halus dan berbentuk serbuk,
diayak dengan ayakan mesh 30.
Uji Fitokimia Ekstrak Daun Binahong
1. Uji Flavonoid
Sebanyak kurang lebih 500 mg ekstrak
ditambah 100 ml air panas kemudian dididihkan
selama 5 menit, disaring sehingga diperoleh
filtrat yang digunakan sebagai larutan
percobaan. 5 ml larutan percobaan ditambahkan
serbuk Mg dan 1 ml HCl pekat. Selanjutnya
ditambahkan amil alkohol dikocok dengan kuat
dan dibiarkan memisah. Terbentuknya warna
merah, kuning atau jingga dalam larutan amil
alkohol menunjukan adanya senyawa golongan
flavonoid (DepKes, 1980).
2. Uji Alkaloid
Sebanyak 500 gram ekstrak ditambahkan 1
ml asam klorida 2 N dan 9 ml air suling,
dipanaskan di atas penangas air selama 2 menit,
didinginkan dan disaring. Filtrat yang diperoleh
dipakai untuk test alkaloida sebagai berikut:
a. Filtrat sebanyak 1 mL ditambahkan
dengan 2 tetes pereaksi Bouchardat, reaksi
positif ditandai dengan terbentuknya
endapan berwarna coklat sampai hitam.
b. Filtrat sebanyak 1 mL ditambah dengan 2
tetes pereaksi Dragendorff, reaksi positif
ditandai dengan terbentuknya warna merah
atau jingga.
Filtrat sebanyak 1 mL ditambahkan dengan
2 tetes larutan pereaksi Mayer, reaksi
positif ditandai dengan terbentuknya
endapan menggumpal berwarna putih atau
kuning (DepKes, 1980).
3. Uji Tanin
Ekstrak dilarutkan dengan air, alkohol atau
aseton. Larutan tanin mengendap dengan
penambahan logam berat atau gelatin (protein)
1 % dalam natrium klorida 10 %. Sampel
ditambahkan larutan garam feri (besi), dan akan
menunjukkan reaksi positif warna biru hitam
(Hanani, 2014).
4. Uji Saponin
Sekitar kurang lebih 500 mg ekstrak
dimasukkan ke dalam tabung reaksi,
ditambahkan 10 ml air panas, didinginkan dan
kemudian dikocok kuat-kuat selama 10 detik
(jika zat yang diperiksa berupa sediaan cair,
diencerkan 1 ml sediaan yang diperiksa dengan
10 ml air dan dikocok kuat-kuat selama 10
menit). Reaksi positif jika terbentuk buih yang
mantap selama tidak kurang dari 10 menit,
setinggi 1 cm sampai 10 cm. Pada penambahan
1 tetes asam klorida 2 N buih tidak hilang
(DepKes RI, 1979).
Pembuatan Simplisia Daun Binahong
Daun binahong yang telah dikumpulkan
dibersihkan dari kotoran-kotoran yang
menempel (sortasi basah) lalu dicuci dengan air
mengalir sampai bersih, kemudian ditiriskan
untuk menghilangkan air sisa-sisa pencucian.
Daun yang telah bersih dan bebas air pencucian
dikeringkan di dalam oven pada suhu ± 450C,
lalu dibersihkan kembali dari kotoran yang
mungkin tidak hilang saat sortasi kering.
Simplisia kering tersebut selanjutnya digrinder
hingga menjadi simplisia serbuk lalu diayak
dengan ayakan Mesh 30, disimpan dalam wadah
yang kering dan bersih.
Penetapan Kadar Air
Penetapan kadar air dilakukan dengan
menggunakan alat moisture balance dengan cara
meletakkan simplisia pada plat lempengan alat
sebanyak 1 g, pada suhu 1050C selama 10 menit
kemudian dicatat hasilnya pada saat persentase
kadar air konstan.
Penetapan Kadar Abu
Ditimbang seksama lebih kurang 2-3 g
sampel yang telah digerus dan di timbang
seksama, dimasukkan ke dalam krus platina atau
krus silikat yang telah dipijarkan dan ditara,
diratakan. Dipijarkan perlahan-lahan hingga
arang habis, didinginkan lalu ditimbang, jika
dengan cara ini arang tidak dapat dihilangkan,
ditambahkan air panas, disaring melalui kertas
saring bebas abu. Sisa dipijarkan dan kertas
saring dalam krus yang sama. Filtrat dimasukkan
ke dalam krus, diuapkan, dipijarkan hingga berat
tetap, dan ditimbang
Pembuatan Ekstrak Daun Binahong
Ekstraksi dilakukan dengan metode
maserasi selama 24 jam. Serbuk daun binahong
ditimbang sebanyak 50 g kemudian direndam
dengan 400 mL pelarut. Pelarut yang digunakan
adalah aseton dan air dengan perbandingan (7:3)
dengan penambahan 3 mL asam askorbat 10
mM, ekstrak cair dipisahkan dari residu lalu
didiamkan selama 24 jam Kemudian ekstrak
dipekatkan dengan menggunakan vakum rotary
evaporator (Hayati, dkk 2009).
Uji Fraksinasi Senyawa Tanin Daun
Binahong
Cairan hasil vaccum rotary evaporator
difraksinasi dengan kloroform (4x25 mL)
menggunakan corong pisah sehingga terbentuk 2
lapisan. Lapisan kloroform (bawah) dipisahkan
dan lapisan air 1 (atas), diekstraksi kembali
dengan etil asetat (1x25 ml), sehingga terbentuk
2 lapisan. Lapisan etil asetat 1(atas) dipisahkan
dan lapisan air 2 (bawah) dipekatkan dengan
waterbath (Hayati, dkk 2009).
Identifikasi KLT Analitik
Lempeng alumunium silika gel GF254
Merck dipanaskan dalam oven selama 10 menit,
disiapkan dengan ukuran panjang 10 cm dan
lebar 3 cm. Ekstrak kental yang telah dilarutkan
dengan aseton : air (7:3) ditotolkan pada
lempeng tepi bawah dan diangin-anginkan
beberapa saat. Lempeng dimasukkan ke dalam
chamber yang berisi eluen yaitu campuran
homogen lapisan bawah pelarut antara n-butanol
: asam asetat : air (4:1:5) (Sa’adah, 2010).
Setelah gerakan larutan pengembang
sampai pada garis batas, elusi dihentikan dan
dikeringkan. Spot yang terbentuk masing-
masing diukur nilai Rf nya. Spot yang terbentuk
diperiksa dengan lampu UV-Vis pada panjang
gelombang 254 nm dan 366 nm.
Identifikasi KLT Preparatif
Lempeng preparatif silika gel 60 F254
Merck disiapkan dengan ukuran panjang 20 cm
dan lebar 20 cm. Ekstrak kental yang telah
dilarutkan dengan aseton : air (7:3) ditotolkan
sepanjang plat pada jarak 1cm dari garis bawah
dan 1cm dari garis tepi, kemudian diangin-
anginkan beberapa saat. Lempeng dimasukkan
ke dalam chamber yang berisi eluen n-butanol :
asam asetat : akuades (4:1:5) yang memberikan
pemisahan terbaik pada KLT analitik (Sa’adah,
2010). Setelah gerakan larutan pengembang
sampai pada garis batas, elusi dihentikan. Spot
yang terbentuk masing-masing diukur nilai Rf
nya. Spot yang terbentuk diperiksa dengan
lampu UV-Vis pada panjang gelombang 254 nm
dan 366 nm.
Identifikasi Menggunakan KLT Dua Dimensi
Isolat yang diperoleh kemudian
ditotolkan pada lempeng KLT G60 F254, dielusi
2 eluen dengan tingkat kepolaran dan arah yang
berbeda. Hasil elusi diamati menggunakan sinar
ultra violet 254nm. Hasil pengamatan yang
menunjukan satu spot tunggal menandakan
senyawa isolat tunggal (Harborne, 1984)
Isolat- isolat dari hasil KLT preparatif,
dilarutkan dengan aseton : air dan disentrifuge
kemudian dianalisis dengan spektro UV-Vis
merk shimadzu.
Masing-masing isolat sebanyak 2 ml
dimasukkan dalam kuvet dan diamati
spektrumnya pada bilangan gelombang 200-800
nm. Identifikasi dilanjutkan dengan penambahan
pereaksi geser natrium hidroksida 2M,
aluminium klorida 5%, asam klorida, sodium Kadar abu yang diperoleh dari serbuk
asetat. Kemudian diamati pergeseran puncak simplisia daun binahongsebesar 7,5254%. Nilai
serapannya. ini menunjukkan bahwa simplisia yang
Tahapan kerja penggunaan pereaksi digunakan memenuhi ketentuan mutu simplisia
geser adalah sebagai berikut: yang baik yaitu kadar abu tidak lebih dari 12%.
1) Isolat diamati pada panjang gelombang Rendemen yang diperoleh dari ekstrak
200-800 nm, direkam dan dicatat pekat daun binahong sebesar 8,29%.
spektrum yang dihasilkan.
2) Isolat ditambah 3 tetes natrium
hidroksida 2 M kemudian dikocok
sampai homogen dan diamati
spektrumya, sampel didiamkan selama 5
menit dan diamati spektrum yang
dihasilkan.
3) Isolat ditambah 6 tetes pereaksi Hasil pengujian fitokimia ektrak daun
aluminium klorida 5% dalam metanol binahong positif mengandung senyawa
kocok sampai homogen dan diamati flavonoid, saponin, tanin, alkaloid.
spektrumnya. Sampel ditambah dengan Hasil uji kualitatif Tanin
3 tetes Asam klorida kemudian
dicampur hingga homogen dan diamati
spektrumnya.
Isolat ditambah serbuk natrium asetat
±250 mg. kocok sampai homogen
menggunakan vortex dan diamati
spektrumnya, selanjutnya larutan ini
ditambah asam borat ±150 mg. dikocok
sampai homogen dan diamati
spektrumnya (Markham, 1988). dari hasil uji kualitatif dari ekstrak tanin
Isolat hasil KLT Preparatif diidentifikasi Dengan dari daun binahong menunjukan bahwa didalam
Metode FTIR. Ditimbang 0,2 gram pellet KBr daun binahong diduga mengandung tanin galat
ditambahkan dengan 1 tetes yang diduga dikarenakan pada saat pengujian penambahan
senyawa tanin, dikeringkan kemudian di FeCl3 1% dan larutan gelatin menunjukkan hasil
identifikasi dengan spektrofotometer FTIR merk positif.
IR Buck M500 Scientific dengan panjang Hasil KLT Analitik
gelombang 4000-400 cm-1 Hasil dari pemisahan senyawa tanin
dengan menggunakan KLT analitik menunjukan
HASIL PENELITIAN bahwa eluen campuran n-butanol : asam asetat:
Hasil Determinasi Tanaman air (4:1:5) menghasilkan 3 spot yaitu Rf 0,64;
Berdasarkan hasil determinasi di 0,68; 0,70, spot tersebut terpisah dengan baik
Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia Bidang dan dapat diamati dengan bantuan Lampu
Botani Pusat Konservasi Tumbuhan Cibinong, Ultraviolet 354 nm, data dapat dilihat pada
menyatakan bahwa sampel atau bahan yang Gambar. Eluen tersebut bersifat polar sehingga
digunakan dalam penelitian adalah Daun dapat memisahkan senyawa tanin.
Binahong (Anredera cordifolia (Ten.) Steenis). Hasil KLT Analitik dari eluen n-butanol
Penelitian kadar air simplisia dianalisis : asam asetat : air (4:1:5).
menggunakan alat moisture balance diperoleh
kadar air sebesar 7,90 % nilai ini menunjukkan
bahwa simplisia yang digunakan memenuhi
ketentuan mutu simplisia yang baik yaitu kurang
dari 10%.

Hasil KLT Preparatif
Hasil pemisahan dengan KLT preparatif
hampir sama dengan KLT analitik hanya
berbeda pada jumlah ekstrak yang ditotolkan
pada plat dan ukuran plat KLT yang digunakan.
Plat yang digunakan pada KLT preparatif adalah
plat KLT silika gel G 60 F254 dengan ukuran
yang lebih besar yaitu 10 cm x 20 cm. Eluen
yang digunakan pada pemisahan KLT
preparatif adalah eluen terbaik hasil
pemisahan pada KLT analitik yaitu n-butanol :
asam asetat : air (BAA) dengan perbandingan
(4:1:5). Pada panjang gelombang 254 nm terlihat
1 spot terpisah. Dilakukan reaksi warna dikerok
1 cm sepanjang plat KLTP dan direaksikan
dengang FeCl3. Hasil yang diperoleh
menunjukkan reaksi berwarna biru keungunan.
Hal ini menunjukan hasil yang sama saat
penyemprotan plat KLT analitik dengan FeCl3
yang menunjukan warna biru keunguan pada Rf
0,64. Plat yang diidentifikasi dengan UV 254
nm.
Hasil KLT 2 dimensi
Hasil pemisahan KLT Preparatif
selanjutkan diidentifikasi menggunakan KLT
dua dimensi atau bisa disebut KLT dua arah
untuk mengetahui keberadaan isolat tunggal
(Harborne, 1987). KLT dua dimensi dilakuakn
dengan pengembang yag berbeda kepolarannya,
Pengembang pertama n-butanon : Asam asetat :
Air (4:5:1) dan pengembang ke dua etil asetat :
kloroform : asam asetat 10% (15:5:2) Hasil
kromatografi dua dimensi yang diperoleh
menunjukkan terbentuknya spot tunggal yang
berarti hasil tersebut adalah spot tunggal yang
didapat dari isolat. Plat KLT yang telah
diidentifikasi dibawah sinar UV 254 nm.
1
2
Ket : 1 (n-butanol : Asam asetat : Air)
2 (etil asetat : kloroform : asam asetat
10% )
Hasil Identifikasi Spektrofotometri UV-Vis
Isolat tanin dari ekstrak aseton : air (7:3)
daun binahong (Anredera cordifolia (Ten.)
Steenis) yang diperoleh dari hasil KLT
preparatif. isolat yang didapat dilarutkan dengan
menggunakan aseton : air (7:3) sebanyak 100
ml, kemudian disentrifuge dan dianalisis dengan
spektrofotometer UV-Vis panjang gelombang
200-500. Hasil analisa Spektrofotometri UV-Vis
menunjukkan bahwa isolat hasil KLTP daun
binahong menghasilkan nilai absorbansi
maksimum 0,728 pada panjang gelombang 284
nm. Spektra tanin yang dihasilkan pada
penelitian ini berbeda dengan pola spektra tanin
yang dihasilkan oleh Rosyda (2010) yang
menyatakan bahwa panjang gelombang tanin
adalah 280,5 nm.
Hasil Identifikasi FTIR
Sebelum dilakukannya analisis FTIR dibuat
pellet KBr terlebih dahulu yang berfungsi
sebagai media identifikasi kemudian dilakukan
penetesan pada pellet KBr dan dikeringkan
kemudian dianalisis dengan bilangan gelombang
4000-400 cm-1. Hasil identifikasi senyawa tanin
dengan spektrofotometer FTIR.
Hasil spektrum inframerah dari hasil
pemisahan KLTP menunjukkan bahwa isolat
mengandung gugus fungsi seperti rentangan
asimetri O-H dari gugus alkohol yang terikat
pada gugus alifatik dan aromatik. Puncak
serapan sangat lebar terbentuk pada bilangan
gelombang 3387,06 cm-1, akibat dari vibrasi
ikatan hidrogen intramolekul (Sastrohamidjojo,
2001). Pelarut yang digunakan adalah aseton :
air yang bersifat sangat polar yang
mempengaruhi serapan-serapan O-H. Karena
dimungkinkan gugus O-H yang terbaca pada
spectrum IR dari gugus pelarut (aseton : air)
sehingga pada bilangan gelombang 3500-3000
cm-1 terbentuk serapan O-H yang sangat
melebar. Terdapat pita serapan agak melebar
di bilangan gelombang 1607,27 cm-1
dimungkinkan merupakan pita gabungan dari
uluran C=O yang terkonjugasi oleh ikatan C=C
yang bertetangga dengan gugus karbonil yang
menyebabkan terjadinya delokalisasi electron π
pada ikatan karbonil dan ikatan rangkap.
Konjugasi ini menaikan ikatan tunggal C=O
yang mengakibatkan tetapan kekuatan k turun
dan frekuensi absorpsi C=O turun, pada
umumnya adanya ikatan rangkap ɑ,ß pada
senyawa karbonil menyebabkan pergeseran
sekitar 30 cm-1 ke arah frekuensi yang lebih
rendah dari harga dasar yang diberikan table dan
menyebabkan penurunan frekuensi vibrasi
(Harmita, 2009). Sedangkan menurut Markham
(1988) melebarnya serapan pada bilangan
gelombang 1607,27 cm-1 dikarenakan adanya
glukosa yang terikat
pada tanin. Selanjutnya pada bilangan
gelombang 1398,77 cm-1 terdapat serapan C-O.
selanjutnya pada bilangan gelombang 1045,82
cm-1 dan 1076,02 cm-1 terbentuk serapan C-O
alkohol skunder dengan intensitan kuat. Dugaan
senyawa tanin diperkuat dengan adanya cincin
aromatik yang tersubstitusi pada posisi orto
yang ditunjukkan dengan puncak serapan pada
bilangan gelombang 788,32 cm-1. Hal ini sesuai
dengan penelitian yang dilakukan oleh Sa’adah
(2010) bahwa senyawa tanin dari tanaman
belimbing wuluh memperoleh nilai dengan
puncak serapan pada bilangan gelombang
782,50 cm-1.
DAFTAR PUSTAKA
Ansel, C.H. 1989. Pengantar Bentuk Sediaan
Farmasi. Edisi IV. UI press. Jakarta.
Halaman 390, 489.
Aryanto, B., Wardatun, S., dan Wiendarlina, I.Y.
2015. Fraksinasi dan Identifikasi Tanin
Pada Daun Tempuyung (Sonchus arvensis
L). Jurusan Farmasi. Fakultas Matematika
dan Ilmu Pengetahuan Alam. Universitas
Pakuan. Bogor.
DepKes RI. 1989. Materia Medika Indonesia.
Jilid V. Departemen Kesehatan Republik
Indonesia. Jakarta.
________. 1980. Materia Medica Indonesia.
Jilid IV. Direktorat Jendral Pengawasan
Obat dan Makanan. Cetakan Pertama.
Jakarta. Hal. 94-98.
________. 1995. Materia Medika. Edisi VI.
Departemen Kesehatan Republik
Indonesia. Jakarta. Hal. 337.
________. 2000. Parameter standar Umum
Ekstrak Tumbuhan Obat. Direktorat
Pengawasan Obat dan Makanan.
Departemen Kesehatan Republik
Indonesia. Jakarta. Hal. 1-2.
DitjenPOM. 1995. Farmakope Indonesia. Edisi
IV. Departemen Kesehatan RI. Jakarta.
Halaman 4-8, 891-898, 1035.
Hanani E., 2014. Analisis Fitokimia. Buku
Kedokteran EGC. Jakarta.
Harbone, J.B. 1996. Metode Fisikokimia:
Penuntun Cara Modern Menganalisa
Tumbuhan. Terbitan Kedua. ITB.
Bandung. Hal: 123-129.
Harborne, J.B. 1987. Metode Fitokimia
Penuntun Cara Modern Menganalisis
Tumbuhan. Terjemahan Padmawinata K,
Soediro I, Niksolihin S. Terbitan Pertama.
Institut Teknologi Bandung. Bandung.
Hal. 151.
Harborne, J.B. 1984. Metode Fitokimia
Penuntun Cara Modern Menganalisis
Tumbuhan. Penerjemah: Kosasih
Padmawinata dan Iwang Soediro. Terbitan
Kedua. Institut Teknologi Bandung.
Bandung. Hal. 47-102, 152-153..
Harmita. 2009. Buku Ajar Analisis Fisikokimia.
Buku Kedokteran EGC. Jakarta. Hal: 65.
Hayati, E.K. 2007. Dasar-Dasar Analisis
Spektroskopi. Malang: Universitas Islam
Negeri (UIN) Malang
Hayati, E.K, Jannah, A. dan Fasya, A.G. 2009.
Aktifitas Antibakteri Komponen Tanin
Ekstrak Daun Blimbing Wuluh (Averrhoa
Billimbi L) Sebagai Pengawet Alami.
Laporan penelitian Kompetitif Depag.
Malang: UIN Malang.
http://www.ansci.cornell.edu/plant/toxicag
ents/tannin/image/int.big.gif. cornert
university. Diakses tanggal 25 Mei 2016.
Markham, R.K. 1988. Cara Mengidentifikasi
Flavonoid. Bandung: ITB.
Pansera, M.R. 2004. Extraction Of Tannin By
Acacia Mearnsii With Supercritical
Fluids. Journal Internasional Brazilian
Archives Of Biology and Technology. Hal
197-201.
Rosyda, A.I dan Ersam, T. 2010. Peningkatan
Kualitas Kayu (Instia bijuga) :Komplekasi
Logam Cu (II), Fe (III) dan Zn (II) Oleh
Senyawa Tanin. Jurusan Kimia. Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam.
Institut Teknologi Sepuluh November.
Surabaya.
Sa’adah, L. 2010. Isolasi dan Identifikasi
Senyawa Tanin dari Daun Belimbing
Wuluh (Averrhoa bilimbi L.). Jurusan
Kimia. Fakultas Sains dan Teknologi,
Universitas Islam Negri (UIN) Maulana
Malik Ibrahim. Malang.