diterima Naskah

Judul: tanggapan Biokimia dan mitokondria dimediasi aktivasi

apoptosis pada efek jangka panjang dari aspartam di otak tikus

Penulis: Iyaswamy Ashok, Rathinasamy Sheeladevi

PII: S2213-2317 (14) 00.064-0

DOI: 10,1016 / j.redox.2014.04.011

Referensi: REDOX 168

Muncul di: Redox Biologi

tanggal diterima: 2 April 2014

tanggal revisi: 22 April 2014
tanggal diterima: 24 April 2014

Silakan mengutip artikel ini sebagai: Ashok Iyaswamy, Sheeladevi Rathinasamy, tanggapan
biokimia dan mitokondria dimediasi aktivasi apoptosis pada efek jangka panjang dari aspartam
dalam otak tikus, Redox Biologi (2014), doi: 10,1016 / j.redox.2014.04.011

Ini adalah Þle PDF dari sebuah naskah diedit yang telah diterima untuk publikasi. Sebagai layanan
kepada pelanggan kami kami menyediakan versi awal ini naskah. Naskah akan menjalani copyediting,
typesetting, dan review bukti yang dihasilkan sebelum diterbitkan dalam bentuk Þnal nya. Harap dicatat
bahwa selama kesalahan proses produksi dapat ditemukan yang dapat mempengaruhi isi, dan semua
penolakan hukum yang berlaku untuk jurnal berhubungan.
 DITERIMA NASKAH

tanggapan biokimia dan mitokondria dimediasi aktivasi apoptosis

pada efek jangka panjang dari aspartam di otak tikus

Iyaswamy Ashok dan Rathinasamy Sheeladevi

Departemen Fisiologi, Dr. ALM PG Institut Ilmu Kedokteran Dasar, Universitas Madras,
kampus Sekkizhar, Taramani, Chennai 600 113.

Penulis yang sesuai

Dr. Rathinasamy Sheeladevi.
Asosiasi Prof dan Kepala I / C, Departemen Fisiologi,
Dr. ALM.PG. Institut Ilmu Kedokteran Dasar, Universitas Madras,
Taramani Kampus, Chennai -600 113, Tamilnadu, India. Telepon No:
91-44-24547162,
Fax: 91-44-24540709
E-mail: drsheeladeviibms@gmail.com
 DITERIMA NASKAH

Abstrak

Aspartam, pemanis buatan sangat banyak digunakan dalam banyak makanan dan minuman. Tapi

ada kontroversi tentang metabolit yang ditandai toksisitas. Oleh karena itu diyakini tidak aman

untuk digunakan manusia. Studi sebelumnya telah melaporkan pada paparan metanol dengan

keterlibatan radikal bebas pada excitotoxicity apoptosis neuronal. Oleh karena itu, studi ini

diusulkan untuk menyelidiki apakah aspartam kronis (FDA menyetujui Harian Intake Acceptable

(ADI), 40 mg / kg b.wt) administrasi bisa melepaskan metanol, apakah itu dapat menyebabkan

perubahan status stres oksidatif otak dan gen dan ekspresi protein anti-apoptosis Bcl-2 dan pro-

apoptosis Bax dan caspase-3 di wilayah otak tikus. Untuk meniru metabolisme metanol manusia,

methotrexate (MTX) -treated Wistar galur tikus putih jantan yang digunakan dan setelah

pemberian oral aspartam, efek dipelajari bersama dengan kontrol dan kontrol MTX-diobati.

paparan Aspartame mengakibatkan dengan peningkatan yang signifikan dalam aktivitas

enzimatik protein karbonil, tingkat peroksidasi lipid, superoksida dismutase, Glutathione-S-

Transferase, Glutathione peroksidase dan aktivitas katalase dalam (aspartam MTX) hewan -

treated dan dengan penurunan yang signifikan dalam mengurangi Glutathione, glutathione

reduktase dan tiol protein, menunjukkan generasi radikal bebas. Gen dan protein ekspresi pro

apoptosis penanda Bax menunjukkan peningkatan sedangkan penanda anti apoptosis Bcl-2

menurun tajam menunjukkan aspartam yang berbahaya pada tingkat sel. Jelas bahwa paparan

aspartam jangka panjang bisa mengubah otak status antioksidan, dan dapat menyebabkan

perubahan apoptosis di otak.

kata kunci: Radikal Bebas, Stres oksidatif, Antioksidan, Apoptosis, Aspartam, Mitokondria.
 DITERIMA NASKAH

pengantar

Aspartame (L-aspartil-L-fenilalanin metil ester) adalah kalori pemanis buatan rendah dikonsumsi

oleh 200 juta orang di seluruh dunia. Pada tahun 1965 aspartame ditemukan oleh James Schlatter

dan telah disetujui untuk digunakan oleh FDA pada 1970-an. Pemanis ini ditambahkan ke

banyak minuman ringan, kue dll, dan penggunaannya meningkat dalam masyarakat yang sadar

kesehatan seperti yang digunakan dalam rezim penurunan berat badan [1]. Setelah menelan

sekitar 50% dari molekul aspartam adalah phenylalanine, 40% adalah asam aspartat dan 10%

adalah methanol [2]. Berdasarkan studi literatur Kruse

[3] menyarankan bahwa di antara metabolit, metanol adalah racun yang menyebabkan toksisitas

sistemik. Parthasarathy et al., [4] melaporkan bahwa metanol terutama dimetabolisme untuk

formalin dan kemudian ke formate, disertai dengan pembentukan anion superoksida dan

hidrogen peroksida. Ada beberapa laporan tentang konsumsi aspartam pada berbagai efek

neurologis yang termasuk sakit kepala, insomnia dan kejang [5], perubahan dalam konsentrasi

regional katekolamin [6] yang disertai dengan gangguan perilaku [7]. Akumulasi format daripada

metanol itu sendiri dianggap menyebabkan keracunan metanol [8]. Selain itu, penghambatan

sitokrom oksidase oleh format juga mengarah ke generasi superoksida, peroxyl dan radikal

hidroksil [9].oksidatif stres didefinisikan sebagai ketidakseimbangan antara tingkat tinggi spesies

oksigen reaktif (ROS) dan / atau gangguan fungsi dari sistem pertahanan antioksidan. Aspartam

dapat mempengaruhi otak dan mereka dengan perilaku [12].Gratis kelebihan radikal secara

langsung menyebabkan kematian dewasa neuron berbudaya kortikal [13] dan langsung

menginduksi kerusakan DNA [14].

 DITERIMA NASKAH

Dari semua organ dalam tubuh, SSP memakan waktu lebih dari pangsa penyalahgunaan

oksidatif. Hal ini terkait dengan banyaknya ion logam transisi aktif redoks, dan kematian relatif

sistem pertahanan antioksidan [15].Chandra et al., [16] reported bahwa spesies oksigen reaktif

(ROS) dapat memicu apoptosis.Di samping konsumsi oksigen yang tinggi dan adanya tingkat

tinggi asam lemak tak jenuh ganda (PUFA), otak dapat menjadi target untuk radikal bebas [17]

membuat mereka bahkan lebih terhormat stres oksidatif. Ada bukti mengumpulkan dari

keterlibatan langsung dari status redoks selular di aktivasi dan fungsi mesin apoptosis [18].

Scaiano et al., [19] telah melaporkan bahwa radikal bebas yang bertanggung jawab untuk induksi

kerusakan sel yang mengarah ke kromosom penyimpangan. Apoptosis, suatu bentuk kematian

sel terprogram, memainkan peran penting dalam embriogenesis dan dalam perkembangan

normal dan pemeliharaan banyak jaringan dewasa [20-21]. Apoptosis diatur secara ketat oleh

ekspresi atau aktivasi beberapa gen dan protein [22].Inisiasi dan pelaksanaan apoptosis

tergantung pada aktivasi reseptor dan / atau mitokondria bergantung jalur kematian [23, 24, 25].

The Bax (Bcl-2 terkait protein X) gen adalah yang pertama diidentifikasi anggota pro-apoptosis

dari keluarga protein Bcl-2 (B-sel lymphoma- 2) [26]. Dalam sistem saraf, Bcl-2 melindungi

terhadap berbagai rangsangan yang menyebabkan kematian neuronal apoptosis [27-28].

Mitokondria keluarga gen Bcl2 protein telah ditunjukkan untuk menjadi penting untuk mengatur

apoptosis diinduksi oleh berbagai rangsangan [29, 26]. Caspases, (protease sistein-aspartat atau

aspartate-diarahkan protease sistein-dependent) adalah keluarga dari protease sistein yang

memainkan peran penting dalam apoptosis (kematian sel terprogram). Caspase-3 aktivasi

mungkin memainkan peran kunci dalam memicu apoptosis pada sel neuron juga telah disarankan

oleh Stefanus et al. [30].

Karena hati kandungan folat yang tinggi, tikus tidak mengembangkan asidosis metabolik

selama keracunan metanol sebagai format dimetabolisme dengan cepat. Hanya folat tikus

kekurangan yang diperlukan

 DITERIMA NASKAH

menumpuk format untuk mengembangkan asidosis dan mempelajari keracunan metanol [31-32].

Oleh karena itu, dalam penelitian ini, untuk meniru situasi manusia, status defisiensi folat

diinduksi dengan pemberian methotrexate (MTX) dan folat diet kekurangan. Banyak

kekhawatiran telah dikemukakan tentang efek samping dari konsumsi aspartam dan

keamanannya. Karena dalam laporan penelitian kami sebelumnya (untuk 75mg / hari aspartam)

menunjukkan peningkatan yang ditandai di tingkat metanol darah, apakah pemberian oral kronis

aspartame (40 mg / kg bb) bisa juga menumpuk metanol setelah metabolisme, dan lebih lanjut

untuk menyelidiki status antioksidan di otak dan di sana oleh setiap perubahan dalam gen

apoptosis membentuk dasar dari penelitian ini.

Bahan dan metode

hewan

Wistar galur tikus jantan albino (200 gm - 220 gm) dipertahankan dalam kondisi laboratorium

standar dengan air dan makanan. Untuk folat folat kelompok kekurangan diet kurang diberikan

selama 45 hari sebelum percobaan dan MTX diberikan selama seminggu sebelum percobaan.

Hewan-hewan itu ditangani sesuai dengan prinsip-prinsip perawatan laboratorium dibingkai oleh

panitia untuk tujuan Pengendalian dan Pengawasan Percobaan pada Hewan (CPCSEA),

Pemerintah India. Sebelum persetujuan yang tepat eksperimen diperoleh dari Komite

Kelembagaan Hewan Etis (No: 01/032/2010 / Agustus-11).

Bahan kimia

Aspartam dan Methotrexate yang dibeli dari Sigma perusahaan kimia, St.Louis, MO,

USA. Bovine serum albumin, Malondialdehyde dari Sisco Research Laboratory, Bombay, India.

Taq-Polymerase, dNTP dari (Genet Bio) Cina, RT enzim kit dari (Thermo ilmiah, USA) dan

bahan kimia kelas molekul lain dari Merck Bangalore, India. antibodi adalah
 DITERIMA NASKAH

dibeli dari Pierce, Amerika Serikat. Semua bahan kimia lainnya adalah dari kelas analitis

diperoleh dari Sisco penelitian laboratorium, Bombay, India.

Desain eksperimental

Aspartame dosis:

Eropa Ahli Keamanan Pangan dikonfirmasi asupan diterima Harian nya (ADI) untuk aspartam

40 mg / kg b.wt./day. Dalam rangka untuk membatasi dalam batas eksposur manusia diizinkan

dosis ini dipilih. Aspartam dicampur dalam garam steril diberikan secara oral (40 mg / kg berat

badan) dan dosis ini didasarkan pada FDA menyetujui batas ADI [33].

kelompok:

Tikus-tikus dibagi secara acak menjadi tiga kelompok, yaitu, kontrol saline, kekurangan

folat (MTX-diperlakukan) kontrol, dan MTX-diperlakukan (kekurangan folat) dengan aspartam

diberikan kelompok. Setiap kelompok terdiri dari enam hewan. Methotrexate (MTX) di saline

steril diberikan (0,2 mg / kg / hari) subkutan selama 7 hari untuk folat-kekurangan kelompok

[34]. Setelah 7 hari administrasi dengan MTX, defisiensi folat dikonfirmasi dengan

memperkirakan ekskresi asam formaminoglutamic (FIGLU) [35]. Dari hari kedelapan, MTX-

diperlakukan (kekurangan folat) kelompok (ketiga) yang diberikan secara oral dengan aspartam

selama 90 hari, sedangkan kontrol saline dan (kekurangan folat) MTX diperlakukan kelompok

kontrol menerima volume setara dengan garam sebagai dosis oral dan semua hewan ditangani

sama.

koleksi sampel
 DITERIMA NASKAH

Binatang dikorbankan menggunakan dosis yang lebih tinggi dari panjang akting pentothal

natrium (100mg / kg.b.wt). Sampel darah dan isolasi otak dilakukan antara 8 dan 10 am untuk

menghindari perubahan yang disebabkan ritme sirkadian. Otak itu segera dihapus dan dicuci

dengan saline fosfat dingin buffered (PBS). diseksi lebih lanjut dilakukan di piring kaca es

dingin. Daerah diskrit otak (cerebral cortex, otak kecil, otak tengah, pons medulla, hippocampus

dan hipotalamus) yang dibedah menurut metode yang diberikan oleh Glowinski dan Iverson

[36]. Homogenat (10% b / v) dari masing-masing daerah disusun dalam homogenizer jaringan

Teflon-kaca, menggunakan PBS dingin (100 mm, pH 7,4) buffer dan disentrifugasi secara

terpisah di centrifuge didinginkan pada 3000 rpm selama 15 menit. Supernatan digunakan untuk

menganalisis parameter dalam penelitian ini.

parameter

enzim pemulungan radikal bebas

Interferensi dari radikal bebas dalam oksidasi auto dari pirogalol digunakan sebagai uji

nyaman untuk dismutase superoksida (SOD) (EC.1.15.1.1) dan dinyatakan sebagai unit / menit /

mg protein [37]. Untuk katalase (EC.1.11.1.6) assay, standar hidrogen peroksida (0,2 M)

digunakan sebagai substrat dan aktivitas katalase diakhiri pada interval 0, 15, 30, dan 60 s

dengan penambahan pereaksi asam kalium dikromat-asetat dan dinyatakan sebagai unit / menit /

mg protein [38]. Glutation peroksidase (EC.1.11.1.9) (GPx) aktivitas diuji dengan

kemampuannya untuk memanfaatkan glutathione standar di hadapan jumlah tertentu hidrogen

peroksida (1mM) dan dinyatakan sebagai unit / menit / mg protein [39]. Glutathione- S-

transferase (GST) diperkirakan dengan metode Habig et al., [40]. Aktivitas GST di jaringan

dinyatakan sebagai μ mol 1-kloro-2,4-dinitrobenzene(CDNB) Dimanfaatkan / min / mg protein.

 DITERIMA NASKAH

Glutation tereduksi (GSH) dan glutathione reduktase (GR)

Glutation tereduksi (GSH) diukur dengan reaksinya dengan 5,5 dithiobis 2 nitro asam

benzoat (DTNB), untuk membentuk senyawa yang menyerap di 412 nm [41]. Tingkat GSH

dinyatakan sebagai mg dari GSH / mg protein. Kegiatan Glutathione Reductase diperkirakan

dengan metode Charles dan Robert [42]. Kegiatan GR di jaringan dinyatakan sebagai nanomol

NADPH teroksidasi / min / mg protein.

peroksidasi lipid

Peroksidasi lipid diukur dengan memperkirakan malondialdehid (MDA), produk

perantara peroksidasi lipid, menggunakan asam Thiobarbuteric dan dinyatakan sebagai nanomol

malondialdehid (produk perantara peroksidasi lipid) / mg protein [43].

estimasi protein

daerah diskrit dari jaringan otak yang homogen di phosphate buffered saline (PBS) pH

7,4, dan puing-puing dihapus oleh sentrifugasi pada 12,000g selama 10 menit. Supernatan itu

ditemukan dan konsentrasi protein ditentukan, sesuai dengan metode Lowry et. al., [44]

menggunakan bovine serum albumin sebagai standar.

karbonil protein dan tiol

isi protein karbonil dalam homogenat dibuat dari korteks otak, otak kecil, pertengahan

otak, pons medulla, hippocampus dan hipotalamus dianalisis dengan 2, 4-dinitrofenilhidrazin

metode (DNPH) seperti yang dijelaskan oleh Levine et al [45]. Protein terikat (mis. Dalam

membran ditambah larut fraksi) konsentrasi sulfhidril ditentukan dengan metode Sedlack dan

Lindsay [46] dengan mengurangi konten sulfhidril nonprotein dari total konten sulfhidril.

Jaringan yang homogen di 0.02M larutan EDTA dan dianalisis untuk protein dan konsentrasi

sulfhidril.
 DITERIMA NASKAH

tingkat Methanol Plasma menggunakan HPLC.

100 mL plasma deproteinized dengan volume yang sama asetonitril dan disentrifugasi

selama 7 menit pada 4 ° C [47]. Supernatan (20 mL) dianalisis untuk metanol darah dan formate

menggunakan bias sistem HPLC detektor indeks (Diagram-5) (Shimadzu RID, Jepang)

(dilengkapi dengan Rezex kolom asam ROA-organik 300 mm x 7,5 mm ID, Phenomenex)

dengan penjaga keamanan cartridge (AJO 4490 Phenomenex). Kolom oven digunakan untuk

mempertahankan suhu pada 60 ° C. Fase gerak adalah 0,026 asam N sulfat [48]. Dengan

menggunakan metanol sebagai standar eksternal, pemulihan metanol (HPLC grade) dari darah

ditemukan menjadi 92-96%. Linearitas untuk metanol ditemukan menjadi 5-500 mg / 100 mL.

Sensitivitas detektor untuk metanol ditemukan menjadi 5 mg / 100 mL dan reproduktifitas

adalah> 93%.

Isolasi RNA total & reverse transkripsi-terpolimerisasi Chain Reaction (RT-PCR)

RNA total diisolasi dari sel menggunakan Trizol reagen mengikuti metode Chomczynski dan

Sacchi [49]. Total RNA diperoleh bebas dari protein dan kontaminasi DNA. Kebalikan langkah

transkripsi dilakukan dengan menggunakan RT enzim kit. Setiap campuran reaksi 20 uL berisi 5

uL OligodT (10 M), 1 uL dNTP (10 M), 4 uL Pertama Strand penyangga (5x), 1 ml DTT (0,1

M), 0,2 uL Super naskah III terbalik transcriptase (200U / uL ) kuantitas bervariasi dari RNA

template (tergantung pada konsentrasi RNA) dan RNase air bebas untuk membuat volume.

kondisi siklus termal untuk reaksi untai pertama terdiri dari 25 ◦C selama 5 menit, 50 ◦C selama

45 menit, 70◦C selama 15 menit dan akhirnya dipertahankan pada 4 ◦C selama 5 menit. PCR

amplifikasi dilakukan dengan menggunakan Taq DNA Polymerase. Setiap 20 uL sampel berisi

10 mL Guru campuran (2 M), 1 uL maju primer, 1 uL membalikkan primer untuk kedua gen dari

bunga dan pengendalian internal berturut-turut, 2 uL RT sampel, 4 mL air steril. Campuran

tersebut disimpan di thermocycler dan diperkuat untuk 35 siklus. Setiap thermocycling terdiri

dari 94 ◦C selama 30 s, suhu anil bervariasi untuk setiap

 DITERIMA NASKAH

gen yang diinginkan selama 30 s, 72 ◦C selama 30 s. gen aktin B- adalah co diperkuat dengan

gen apoptosis Bcl2, Bax dan Caspase 3 gen menggunakan prosedur yang sama. Rasa dan

antisense primer untuk penelitian ditabulasi pada Tabel-1. Sepuluh mikroliter setiap produk PCR

dianalisis dengan elektroforesis gel atas 2% gel agarosa.

Agarose gel elektroforesis merupakan metode yang efektif untuk identifikasi molekul

DNA dimurnikan [50]. produk diperkuat dianalisis dengan elektroforesis gel agarosa dengan

etidium bromida pewarnaan. Kemudian gel yang mengandung cDNA divisualisasikan dengan

bantuan imager fluorescent (Bio-Rad, USA) intensitas an Band dikuantifikasi dengan Jumlah

One Software. Band intensifikasi untuk setiap enzim mRNA dinormalisasi dengan yang internal

kontrol β-aktin menggunakan Quantity One Software.

immuno blotting

Tissue lisat dipersiapkan dengan radio immuno assay penyangga (RIPA) (Sigma) dan protease

inhibitor. jumlah yang sama protein (60 mg) dielektroforesis pada 10% SDS-PAGE. Berikut

elektroforesis, protein dipisahkan pada gel SDS-PAGE dipindahkan pada PVDF membran

(Millipore, USA). Untuk memblokir spesifik mengikat, membran diinkubasi memblokir buffer

dengan 5% susu skim selama 2 jam. Membran diperiksa dengan antibodi primer Caspase aktif 3,

Bax, Bcl2 protein (Biovision). Bercak diinkubasi dengan antibodi horseradish peroxidase-

conjugated sekunder (1: 10.000) (Merck). Band yang dikembangkan menggunakan ECL kit

(Millipore, USA) di Chemi Doc gambar scanner dari Bio-Rad. Intensitas Band
 DITERIMA NASKAH

dikuantifikasi dengan Jumlah Salah satu perangkat lunak (Bio-Rad, USA). Membran dilucuti dan

reprobed untuk B-aktin (Sigma) (1: 5000) sebagai kontrol internal.

histopatologi:

Hewan sangat dibius dengan ketamin hidroklorida. Tikus kemudian perfusi transcardially

dengan phosphate-buffered saline, diikuti oleh buffer formalin 10%. otak, telah dihapus, dan

diawetkan dalam formalin sampai diproses untuk pemeriksaan histologi. Kemudian terus air

mengalir untuk menghilangkan pigmen formalin dan dehidrasi dengan nilai menaik alkohol.

Setelah impregnasi dengan lilin parafin, blok parafin dibuat. Mereka diproses dan bagian yang

dipotong dengan 10ìm ketebalan menggunakan “Spencer Lens, mikrotom berputar (tidak ada

820, Newyork, USA) dan kemudian diwarnai dengan Hematoksilin & Eosin sebagai berikut

untuk otak.

analisis imunohistokimia

Analisis imunohistokimia dilakukan dengan menggunakan DAB yang universal staining

kit (Merck Genie, Bengaluru, India). Bagian yang deparaffinized di xylene dan dehidrasi dalam

etanol. Setelah mencuci dengan PBS, slide diinkubasi dengan 3% H2HAI2di pada suhu kamar

selama 15 menit untuk memuaskan aktivitas peroksidase endogen. Setelah pengambilan antigen

(15 menit dari autoklaf di 10 mM sitrat penyangga, pH 6,0), slide diinkubasi dengan memblokir

solusi (10% yang normal kambing serum) selama 5 menit pada suhu kamar. Kemudian, bagian

diinkubasi semalam dengan antibodi primer. Selanjutnya, bagian diinkubasi dengan HRP

sekunder Link antibodi selama 30 menit pada suhu kamar, dicuci dengan PBS. Kemudian,

bagian diobati dengan DAB chromogen selama 15 menit. Akhirnya, bagian dicuci dengan air

deionisasi, melawan patri dengan hematoksilin dan dipasang. Foto-foto diambil menggunakan

Nikon mikroskop.
 DITERIMA NASKAH

Analisis statistik:

Semua data dari berbagai kelompok dianalisis untuk parameter individual dengan ANOVA.

Ketika ada rasio test 'F' yang signifikan data yang dianalisa lebih lanjut dengan beberapa

perbandingan Tukey dengan memperbaiki signifikansi pada P <0,05. Untuk memahami efek

aspartame, yang MTX diperlakukan kelompok bertindak sebagai kontrol yang ketat.

Hasil

aktivitas enzimatik dan non-enzimatik dari enzim radikal bebas

superoksida dismutase (SOD):

Data dari berbagai kelompok disajikan sebagai bar diagram dengan mean ± SD (ara 1). Aktivitas

SOD secara signifikan meningkat di aspartam diperlakukan MTX hewan masing-masing di

daerah korteks serebral (F = 8,7, df = 2), otak kecil (F = 8,9, df = 2), otak tengah (F = 25, df = 2),

pons -medulla (F = 21, df = 2), hippocampus (F = 119, df = 2) dan hypothalamus (F = 11, df = 2)

bila dibandingkan dengan kontrol dan MTX diperlakukan kontrol. Namun, kontrol tidak

menyimpang dari MTX diperlakukan hewan kontrol

katalase

Data dari berbagai kelompok disajikan sebagai bar diagram dengan mean ± SD (gambar 2).

Aktivitas katalase meningkat tajam di semua daerah otak (cerebral cortex (F = 27, df = 2), otak

kecil (F = 34, df = 2), otak tengah (F = 53, df = 2), pons- medulla (F = 14, df = 2), hippocampus

(F = 25, df = 2) dan hypothalamus (F = 50, df = 2)) di aspartam diperlakukan hewan MTX

dengan hormat untuk mengontrol dan MTX diperlakukan kontrol. Namun, kontrol tidak

menyimpang dari hewan kontrol MTX diobati.

 DITERIMA NASKAH

glutation peroksidase

Data dari berbagai kelompok disajikan sebagai bar diagram dengan mean ± SD (gambar

3). Aktivitas glutathione peroxidase nyata meningkat di otak daerah diskrit (cerebral cortex (F =

153, df = 2), otak kecil (F = 151, df = 2), otak tengah (F = 43, df = 2), pons- medulla (F = 152, df

= 2), hippocampus (F = 150, df = 2) dan hypothalamus (F = 237, df = 2)) aspartam diperlakukan

MTX hewan bila dibandingkan dengan kontrol dan MTX diperlakukan kontrol. Namun, kontrol

tidak menyimpang dari hewan kontrol MTX diobati.

glutation tereduksi

Data dari berbagai kelompok disajikan sebagai bar diagram dengan mean ± SD (gambar

4). Aktivitas glutation tereduksi menurun di seluruh daerah otak dipelajari seperti korteks

serebral (F = 62, df = 2), otak kecil (F = 39, df = 2), otak tengah (F = 40, df = 2), pons -medulla

(F = 38, df = 2), hippocampus (F = 33, df = 2) dan hypothalamus (F = 50, df = 2) di aspartam

diobati MTX hewan bila dibandingkan dengan kontrol dan MTX diperlakukan kontrol. Kontrol

dan kontrol MTX diperlakukan tidak berbeda satu sama lain.

glutathione reduktase

Data dari berbagai kelompok disajikan sebagai bar diagram dengan mean ± SD (Gbr.5).

Aktivitas glutathione reduktase menurun di seluruh otak daerah diskrit (cerebral cortex (F = 4.11,

df = 2), otak kecil (F = 6,67, df = 2), otak tengah (F = 8,42, df = 2), pons- medulla (F = 19, df =

2), hippocampus (F = 172, df = 2) dan hypothalamus (F = 20, df = 2)) aspartam MTX

diperlakukan hewan bila dibandingkan dengan kontrol dan MTX diperlakukan kontrol.

Glutathione-S-transferase

Data dari berbagai kelompok disajikan sebagai bar diagram dengan mean ± SD (ara 6).

Glutathione S transferase di aspartam diperlakukan MTX hewan nyata meningkat dari kontrol
 DITERIMA NASKAH

dan MTX diperlakukan kontrol di daerah berikut korteks serebral (F = 71, df = 2), otak kecil (F =

33, df = 2), otak tengah (F = 87, df = 2), pons-medula (F = 19, df = 2), hippocampus (F = 32, df

= 2) dan hypothalamus (F = 72, df = 2). kontrol serta MTX diperlakukan hewan menunjukkan

hasil yang sama.

peroksidasi lipid

Data dari berbagai kelompok disajikan sebagai bar diagram dengan mean ± SD (7 ara).

Tingkat peroksidasi lipid meningkat tajam di semua daerah otak aspartam diperlakukan hewan

MTX dibandingkan dengan kontrol dan MTX diperlakukan kontrol di daerah berikut, korteks

serebral (F = 73, df = 2), otak kecil (F = 313, df = 2), otak tengah (F = 206, df = 2), pons-medula

(F = 362, df = 2), hippocampus (F = 135, df = 2) dan hypothalamus (F = 811, df = 2). Kontrol

serta MTX diperlakukan kontrol menunjukkan tingkat peroksidasi lipid yang sama.

Protein karbonil dan tiol

Data dari berbagai kelompok disajikan sebagai bar diagram dengan mean ± SD (ara 8 &

9). Tingkat karbonil protein ditemukan ditingkatkan di semua daerah otak di aspartam

diperlakukan MTX hewan bila dibandingkan dengan kontrol serta MTX diperlakukan kontrol di

daerah berikut korteks serebral (F = 143, df = 2), otak kecil (F = 23, df = 2), otak tengah (F = 24,

df = 2), pons-medula (F = 14, df = 2), hippocampus (F = 64, df = 2) dan hypothalamus (F = 132,

df = 2). The sulfhidril (thiol) isi dari protein membran menurun tajam dalam aspartam diobati

MTX hewan bila dibandingkan dengan kontrol dan MTX diperlakukan kontrol di daerah berikut,

korteks serebral (F = 78, df = 2), otak kecil (F = 129, df = 2), otak tengah (F = 53, df = 2), pons-

medula (F = 275, df = 2), hippocampus (F = 17, df = 2) dan hypothalamus (F = 239, df = 2).

kontrol serta MTX diperlakukan hewan menunjukkan hasil yang sama

tingkat metanol Plasma

 DITERIMA NASKAH

Data dari berbagai kelompok disajikan sebagai bar diagram dengan mean ± SD (Gbr.10.)

Tingkat metanol di MTX diperlakukan hewan kontrol tidak berbeda dari kontrol saline. Namun,

aspartame diperlakukan MTX hewan menunjukkan peningkatan (F = 140, df = 2) di tingkat

metanol plasma dari kontrol dan MTX diperlakukan hewan kontrol. kontrol serta hewan MTX

diperlakukan tidak menunjukkan variasi.

Ekspresi faktor apoptosis

ekspresi gen Bax

Hasilnya diberikan pada Gambar 11. Pengaruh aspartam jangka panjang pada Bax, Bcl2 dan

Caspase ekspresi 3 mRNA di daerah otak dari Wistar tikus albino. Menggunakan B-aktin sebagai

kontrol internal ekspresi gen Bax dipelajari. The Bax ekspresi gen dalam kontrol hewan MTX

tidak secara signifikan berbeda dari kontrol. Namun, aspartam memperlakukan MTX hewan

menunjukkan peningkatan dalam ekspresi gen Bax di otak daerah diskrit yaitu otak

korteks (F = 57,62, df = 2), otak kecil (F = 48,83, df = 2), hippocampus (F = 97,80, df = 2) dan

hypothalamus (F = 27,74, df = 2) dari kontrol dan kontrol MTX hewan.

ekspresi gen Bcl2

Hasilnya diberikan pada Gambar 11. Menggunakan B-aktin sebagai pengendalian internal

ekspresi Bcl2 dipelajari. Gen Bcl2 dan ekspresi dalam kontrol hewan MTX tidak secara

signifikan berbeda dari kontrol. Namun, aspartame diperlakukan MTX hewan menunjukkan

penurunan tajam dalam ekspresi gen Bcl2 di otak daerah diskrit yaitu korteks serebral (F =

243,29, df = 2), otak kecil (F = 58,96, df = 2), hippocampus (F = 114,14 , df = 2) dan

hypothalamus (F = 222,61, df = 2) dari kontrol dan kontrol hewan MTX.

Diaktifkan Caspase 3
 DITERIMA NASKAH

Hasil diberikan dalam caspase 3 Gambar 11. diaktifkan dipelajari dengan menggunakan B-

aktin sebagai kontrol internal. caspase yang diaktifkan 3 di kontrol hewan MTX tidak secara

signifikan berbeda dari kontrol. Namun, aspartame diperlakukan MTX hewan menunjukkan

peningkatan dalam caspase diaktifkan 3 di otak daerah diskrit yaitu korteks serebral (F =

174,98, df = 2), otak kecil (F = 71,51, df = 2), hippocampus (F = 167,36 , df = 2) dan

hypothalamus (F = 5,08, df = 2) dari kontrol dan kontrol hewan MTX.

ekspresi protein

Hasilnya diberikan pada Gambar 12. Pengaruh aspartam jangka panjang pada Bcl2, ekspresi

protein Bax dan diaktifkan Caspase 3 di daerah otak tikus albino Wistar. Menggunakan B-aktin

sebagai kontrol internal ekspresi protein Bax dan Caspase diaktifkan 3 dipelajari. The Bax

ekspresi protein dan caspase diaktifkan 3 di kontrol hewan MTX tidak secara signifikan berbeda

dari kontrol. Namun, aspartame diperlakukan MTX hewan menunjukkan peningkatan dalam

ekspresi protein Bax dan diaktifkan Caspase 3 di otak daerah diskrit yaitu korteks serebral (F =

23,59, df = 2), otak kecil (F = 5,78, df = 2), dan hippocampus (F = 6,14, df = 2) dari kontrol dan

kontrol hewan MTX.

The Bcl2 ekspresi protein dalam kontrol hewan MTX tidak secara signifikan berbeda dari

kontrol. Namun, aspartame diperlakukan MTX hewan menunjukkan penurunan tajam dalam

ekspresi protein Bcl2 di otak daerah diskrit yaitu korteks serebral (F = 34,07, df = 2), otak kecil

(F = 81,03, df = 2), dan hippocampus (F = 60,35, df = 2) dari kontrol dan kontrol hewan MTX.

Histopatologi otak

Hematoksilin dan Eosin (H & E) pewarnaan dilakukan pada otak daerah hipokampus.

Hasil diberikan dalam (Gambar 13) Pengaruh aspartam jangka panjang (40 mg / kg b.wt) pada

otak di
 DITERIMA NASKAH

tikus albino wistar, mikrograf histo otak ternoda oleh Haematoxylin dan Eosin. Setelah bruto

pemeriksaan, morfologi neuronal normal lapisan sel piramidal dari Cornu Ammonis 1, 2 dan 3

dan Denate gyrus di hippocampus kontrol dan kontrol MTX diamati. Aspartam + MTX

diperlakukan hewan menunjukkan penyusutan neuron lapisan hippocampal karena degenerasi

sel-sel piramidal, seperti yang divisualisasikan olehDIA, Bila dibandingkan dengan kontrol dan

kontrol MTX. Pada perbesaran yang lebih tinggi,DIApewarnaan mengungkapkan morfologi

neuronal yang abnormal dari lapisan sel piramidal dari Cornu Ammonis 1, 2 dan 3 dan Denate

gyrus dalam hippocampus dari aspartame diperlakukan MTX hewan. Sebaliknya, aspartam

diperlakukan MTX hewan menunjukkan morfologi lapisan sel piramidal muncul tidak teratur,

kurang intens patri. Selanjutnya, jumlah badan sel padat patri di lapisan sel piramidal menurun

pada aspartam diperlakukan MTX hewan dan morfologi pertama kali diamati, menunjukkan

aferen utama dan proyeksi eferen yang mengalami degenerasi luas jika dibandingkan dengan

hewan kontrol dan MTX diperlakukan hewan kontrol .

imunohistokimia

Hasil diberikan dalam Gambar 14 Pengaruh aspartam jangka panjang pada Caspase

diaktifkan 3 dan ekspresi protein Bax di otak Wistar tikus albino oleh imunohistochemistry. Itu

fotomikrograf menunjukkan sejumlah besar neuron dengan reaksi imun untuk diaktifkan Caspase

3 dan Bax protein sel saraf berwarna coklat yang dianggap sebagai sel positif di otak. Aspartam

hewan diperlakukan wilayah otak menunjukkan peningkatan dalam caspase diaktifkan 3 dan sel

Bax positif jika dibandingkan dengan kontrol dan kontrol MTX. Hasil keseluruhan menunjukkan

bahwa aspartam secara efektif bisa membawa perubahan pada tingkat sel.

Diskusi
 DITERIMA NASKAH

Penelitian ini menegaskan bahwa pemberian oral harian 40mg / kg dari aspartam selama

90 hari, menyebabkan perubahan dalam status antioksidan dengan menginduksi radikal bebas di

otak. Ashok dan Sheeladevi [51] melaporkan paparan kronis aspartame (75mg / kg b.wt.)

diinduksi tingkat metanol terdeteksi dalam darah. Dalam penelitian ini, metanol darah meningkat

tajam setelah aspartame menelan (40mg / Kg. B.wt) yang merupakan asupan diterima Harian

batas yang diizinkan. Ishak et al., [52] melaporkan bahwa turunan dari metabolisme tersebut

kadang-kadang lebih beracun dari substansi awal yang benar dalam kasus aspartam metanol

dilepaskan setelah metabolisme. Menurut Jeganathan dan Namasivayam [53] metanol

merupakan racun bagi otak sebagai peningkatan tingkat metanol darah dapat menyebabkan

pergeseran berat pada tingkat monoamine otak. Hal ini juga diketahui bahwa sistem saraf sangat

rentan untuk metanol keracunan. Karena hati kandungan folat yang tinggi, tikus tidak

mengembangkan asidosis metabolik selama keracunan metanol sebagai format dimetabolisme

dengan cepat. Hanya folat tikus kekurangan yang diperlukan untuk mengakumulasi format untuk

mengembangkan asidosis dan mempelajari keracunan metanol [31-32]. Oleh karena itu, dalam

penelitian ini, untuk meniru situasi manusia, status defisiensi folat diinduksi untuk mempelajari

toksisitas metanol pada pemberian aspartam.

Radikal bebas generasi oleh metanol metabolit beracun

Peningkatan radikal bebas dalam penelitian ini mungkin karena metanol yang telah dirilis selama

metabolisme aspartam, sebagai cara jalan menuju formate oleh sistem katalase dihentikan

dengan pemberian MTX. Maria et al., [54] memberikan bukti konklusif tentang generasi

metabolit radikal bebas metanol yang diturunkan. Goodman dan Tephly [55] melaporkan yang

metanol dimetabolisme melalui tiga sistem enzim, yaitu sistem alkohol dehidrogenase, katalase

per jalur oksidatif dan sistem mikrosomal pengoksidasi. Di antara mikrosomal ini sistem

pengoksidasi dilaporkan bertanggung jawab untuk generasi radikal bebas. Di dalam

 DITERIMA NASKAH

studi hewan sebagai kekurangan folat digunakan untuk meniru metabolisme manusia dari

metanol katalase per oksidatif jalur jauh menurun.

Sel-sel umumnya dilindungi dengan sistem pertahanan antioksidan yang luas. Dalam

penelitian ini aspartam-diperlakukan MTX hewan meningkat peroksidasi lipid dengan perubahan

dalam enzimatik dan sistem pembilasan non-enzimatik menjamin generasi radikal bebas.

Peningkatan radikal bebas tidak dapat diabaikan sebagai sel dapat terluka atau tewas ketika

generasi ROS menguasai kapasitas antioksidan seluler [56]. Kenaikan peroksidasi lipid tidak

dapat diabaikan karena merupakan mekanisme katalitik mobil terkemuka kerusakan oksidatif

membran sel [57]. peroksidasi lipid dimulai dengan abstraksi dari atom hidrogen dari rantai

samping dari asam lemak tak jenuh ganda dalam membran [58]. Kehadiran lipid per oksida

dalam membran mengganggu fungsinya dengan mengubah fluiditas dan memungkinkan ion

seperti Ca2+ bocor melintasi membran dan kontributor utama hilangnya fungsi sel [59].

Gratis sistem radikal

Antioksidan dan bebas sistem radikal ada di sel untuk melindunginya terhadap efek

merusak dari radikal bebas [60]. Penelitian ini menunjukkan bahwa, pemberian oral aspartam

dapat menyebabkan elevasi yang signifikan dalam SOD, CAT, GPx dibandingkan dengan

kelompok kontrol. Terlepas dari peningkatan aktivitas SOD ketinggian peroksidasi lipid

menentukan peningkatan produksi radikal bebas. Peningkatan aktivitas SOD secara alami bisa

menumpuk oksida super, H2HAI2dan membenarkan peningkatan CAT dan GPx untuk

peningkatan aktivitas mereka setelah aspartam konsumsi. Meningkatkan aktivitas superoksida

dismutase mengkatalisis konversi anion superoksida untuk H2HAI2 yang pada gilirannya bisa

merangsang garis pertahanan kedua yang meliputi glutathione

 DITERIMA NASKAH

peroksidase dan katalase [61]. tingkat SOD meningkat hanya sebagian efektif dalam memerangi

kerusakan oksidatif [62].

Dalam produksi radikal bebas, yang thiol glutathione (glycyl-glutamat asam-sistein)

adalah selular bebas sistem pembersih radikal yang paling penting di otak [63]. Gebiki dan

Gebiki [64] melaporkan bahwa radikal bebas menyebabkan pembentukan peroksida protein.

Glutathione reduktase memainkan peran penting dalam perlindungan antioksidan seluler dengan

menjadi katalis pengurangan GSSG ke GSH [65] an mengurangi aktivitas glutation reduktase

diamati mungkin menjadi salah satu alasan untuk penurunan tingkat GSH diamati dalam

aspartam diperlakukan hewan. Ada penurunan berkurang tingkat GSH diamati pada kelompok

perlakuan MTX- aspartam, karena metabolisme metanol tergantung berkurang GSH. GSH

adalah kofaktor yang diperlukan untuk metanol detoksifikasi [66]. Kandungan protein karbonil

sebenarnya indikator yang paling umum dan jauh penanda paling umum digunakan oksidasi

protein [67]. Dalam studi ini, terjadi peningkatan dalam PUT, tingkat protein karbonil dan

pengurangan ditandai dalam kelompok protein tiol. Menurut Patsoukis et al., [68] dan Nikolaos

et al., [69] tiol protein menurun di otak adalah akibat kerusakan oksidatif dan baik mendukung

temuan ini. Abhilash et al., [70] juga melaporkan penurunan yang signifikan serupa dalam

konsentrasi GSH dan aktivitas glutathione dalam otak tikus setelah mengkonsumsi aspartame

(dosis yang digunakan oleh dia adalah 500mg / kg dan 100mg / kg). Hal ini penting untuk

menunjukkan bahwa bahkan dengan disetujui FDA dosis (40mg / Kg) perubahan yang sama

dalam sistem pemulungan diamati. tingkat karbonil protein dan pengurangan ditandai dalam

kelompok protein tiol. Menurut Patsoukis et al., [68] dan Nikolaos et al., [69] tiol protein

menurun di otak adalah akibat kerusakan oksidatif dan baik mendukung temuan ini. Abhilash et

al., [70] juga melaporkan penurunan yang signifikan serupa dalam konsentrasi GSH dan aktivitas

glutathione dalam otak tikus setelah mengkonsumsi aspartame (dosis yang digunakan oleh dia

adalah 500mg / kg dan 100mg / kg). Hal ini penting untuk menunjukkan bahwa bahkan dengan
disetujui FDA dosis (40mg / Kg) perubahan yang sama dalam sistem pemulungan diamati.

tingkat karbonil protein dan pengurangan ditandai dalam kelompok protein tiol. Menurut

Patsoukis et al., [68] dan Nikolaos et al., [69] tiol protein menurun di otak adalah akibat

kerusakan oksidatif dan baik mendukung temuan ini. Abhilash et al., [70] juga melaporkan

penurunan yang signifikan serupa dalam konsentrasi GSH dan aktivitas glutathione dalam otak

tikus setelah mengkonsumsi aspartame (dosis yang digunakan oleh dia adalah 500mg / kg dan

100mg / kg). Hal ini penting untuk menunjukkan bahwa bahkan dengan disetujui FDA dosis

(40mg / Kg) perubahan yang sama dalam sistem pemulungan diamati. [70] juga melaporkan

penurunan yang signifikan serupa dalam konsentrasi GSH dan aktivitas glutathione dalam otak

tikus setelah mengkonsumsi aspartame (dosis yang digunakan oleh dia adalah 500mg / kg dan

100mg / kg). Hal ini penting untuk menunjukkan bahwa bahkan dengan disetujui FDA dosis

(40mg / Kg) perubahan yang sama dalam sistem pemulungan diamati. [70] juga melaporkan

penurunan yang signifikan serupa dalam konsentrasi GSH dan aktivitas glutathione dalam otak

tikus setelah mengkonsumsi aspartame (dosis yang digunakan oleh dia adalah 500mg / kg dan

100mg / kg). Hal ini penting untuk menunjukkan bahwa bahkan dengan disetujui FDA dosis

(40mg / Kg) perubahan yang sama dalam sistem pemulungan diamati.

Radikal bebas dan penanda apoptosis

Ada bukti mengumpulkan dari keterlibatan langsung dari status redoks selular di aktivasi

dan fungsi mesin apoptosis [18]. Hal ini juga diketahui bahwa kematian neuronal terjadi sesuai

dengan program apoptosis [71]. Ada peningkatan Bax pro-apototic

 DITERIMA NASKAH

dan caspases-3 ekspresi dengan penurunan tajam dalam ekspresi Bcl-2 di aspartam dengan MTX

memperlakukan kelompok dibandingkan dengan kontrol. Bcl-2 adalah tombol pengatur

apoptosis, mempromosikan kelangsungan hidup sel baik dengan menghambat faktor yang

mengaktifkan caspases [72] atau mengatur apoptosis oleh antagonis pembentukan heterodimer

dengan anggota bcl-2 keluarga lainnya. protein Bcl-2 keluarga secara tidak langsung dapat

mengatur aktivitas caspases di jalur apoptosis yang berhubungan [73]. Bax, anggota pro-

apoptosis, di sisi lain, mengikat anti-apoptosis Bcl-2 protein dan dengan demikian bertindak

dengan antagonis fungsi Bcl-2 untuk mencabut apoptosis. Aktivasi yang menonjol dari penanda

apoptosis seperti Bax dan caspases-3 dan mengurangi regulator Bcl-2 oleh aspartam tidak dapat

diabaikan. Karena, induksi Bax juga dilaporkan untuk mempromosikan pelepasan sitokrom c

dari mitokondria yang akhirnya mengarah ke apoptosis [74]. Menurut Mbazima et al, [75]

simultan down-regulasi Bcl-2 protein dan up-regulasi Bax dalam sel saraf dan mengubah rasio

mereka mendukung kematian sel apoptosis.

Caspases yang terkait erat dengan apoptosis. Sistem caspase-cascade memainkan peran

penting dalam induksi, transduksi dan amplifikasi sinyal apoptosis intraseluler. Caspase-3, faktor

kunci dalam pelaksanaan apoptosis, adalah bentuk aktif dari caspase-3. Sebuah menipisnya

intraseluler GSH telah dilaporkan terjadi dengan timbulnya apoptosis [76-77]. Oleh karena

penipisan GSH setelah pemberian aspartam diamati dalam penelitian ini mungkin merupakan

faktor tambahan untuk perubahan apoptosis diamati. Dalam penelitian ini ada peningkatan

diaktifkan caspase 3 serta ekspresi protein dengan penurunan berkurang GSH dan Bcl-2 di

aspartam diperlakukan hewan bila dibandingkan dengan kontrol dan MTX diperlakukan kontrol.

Hubungan antara radikal bebas dan penyakit dapat dijelaskan dengan konsep 'stres

oksidatif' diuraikan oleh SIE [78]. Radikal bebas juga dapat menyerang DNA untai untuk

menginduksi istirahat dan modifikasi dasar yang dapat menyebabkan mutasi titik [79]. Scaiano et

al., [80] melaporkan

 DITERIMA NASKAH

bahwa radikal bebas yang bertanggung jawab untuk induksi kerusakan sel yang mengarah ke

kromosom penyimpangan. AlSuhzibani, [81] melaporkan bahwa aspartame menyebabkan

peningkatan yang signifikan dari frekuensi aberasi kromosom pada tikus dibandingkan dengan

kontrol memberikan bukti ilmiah yang mendukung bahwa aspartam beracun. Keterlibatan

radikal bebas dengan gen supresor tumor dan proto-onkogen menyarankan peran mereka dalam

pengembangan kanker pada manusia yang berbeda [82-83]. Laporan dari Soffritti et al., [84]

menyoroti bahwa aspartam dapat menyebabkan kanker. Penelitian kami sebelumnya juga

didokumentasikan dengan baik di 75 mg / kg b.wt. pengobatan aspartam dikuatkan generasi

radikal bebas dan perubahan perilaku [85,86].Karenanya,mungkin radikal bebas menumpuk

akibat diubah bebas enzimatik pembersih radikal dan sistem non-enzimatik untuk perubahan

diamati dalam penanda pro dan anti-apoptosis sel di daerah otak diskrit. Dampak dari perubahan

yang disebabkan aspartame di otak juga terwakili di histologi daerah hipokampus. The aspartam

diperlakukan hewan menunjukkan penyusutan neuron lapisan hippocampal karena degenerasi

sel-sel piramidal dalam penelitian ini. Morfologi neuronal yang abnormal dari lapisan sel

piramidal dari Cornu Ammonis juga dikaitkan dengan lapisan sel piramidal teratur. Penelitian ini

substantiates yang turun regulasi Bcl2 dan up regulasi Bax dengan aktivasi caspase 3

menyebabkan kerusakan apoptosis sel-sel saraf di daerah otak, sehingga memberikan dukungan

untuk temuan kami hadir.

Dapat disimpulkan bahwa paparan aspartam menyebabkan peningkatan produksi radikal

bebas dan meningkatkan kerusakan oksidatif protein dalam otak diambil untuk penelitian.

Peningkatan radikal bebas dan akibat peningkatan dalam kerusakan protein oksidatif mungkin

memainkan peran penting dalam kematian neuronal apoptosis mengarah ke pengembangan

toksisitas neuronal dalam paparan aspartam jangka panjang.

Kesimpulan
 DITERIMA NASKAH

Penelitian ini memberikan bukti ilmiah untuk menyimpulkan bahwa aspartam adalah racun bagi

sistem tubuh dan terutama di otak itu meningkatkan radikal bebas dan memicu apoptosis

tersebut. konsumsi aspartam dalam jangka panjang dapat mempengaruhi otak. Ini mungkin

karena metanol metabolitnya Aspartam dapat bertindak sebagai stressor kimia seperti yang

ditunjukkan oleh tingkat kortikosteroid. Masih lebih banyak penelitian diperlukan untuk

memahami lebih lanjut tentang aspartam. Sekarang mengumpulkan data dari penelitian ilmiah

harus mencapai masyarakat sebagai aspartam tersedia secara bebas di apotek / super market dan

dikonsumsi oleh sebagian besar diabetes serta orang-orang muda yang ingin mengurangi berat

badan.

Pengakuan

Penulis berterima kasih kepada saran yang ditawarkan oleh Dr. NJ Parthasarathy dan Co-penulis.

Penulis berterima kasih kepada bantuan yang diberikan oleh laboratorium molekuler, departemen

genetika dan endokrinologi. bantuan keuangan yang diberikan oleh Dewan Riset Medis India

(ICMR) untuk Senior Research Fellow, sangat kami hargai. Saya mengakui University of

Madras untuk menyediakan infrastruktur untuk melakukan penelitian

Deklarasi bunga

Para penulis menyatakan bahwa mereka tidak memiliki konflik kepentingan mengenai artikel ini.

Referensi

[1] Shapiro RB. Pernyataan untuk tenaga kerja dan sumber daya manusia komite, Senat AS,

Government Printing Office. DC, Washington. 1988.

[2] Newsome RL. Pemanis: Nutritive dan non-gizi. Dalam Ringkasan Status Ilmiah dari Institute

of Food Teknologi Panel Ahli tentang Keamanan Pangan dan Gizi, Institutive dari Food

Technologies. Chicago, 1986.

[3] Kruse JA. keracunan metanol. Intensive Care Med 1992; 18: 391-397.
 DITERIMA NASKAH

[4] Parthasarathy JN, Ramasundaram SK, Sundaramahalingam M, Rathinasamy SD. Metanol

diinduksi stres oksidatif pada organ tikus limfoid. Journal of Occupational Health 2006; 48:

20-27.

[5] Johns DR. Migrain dipicu oleh aspartame. N Inggris J Med 1986; 315: 456.

[6] Coulombe RA, Sharma RP. perubahan biokimia Neuro disebabkan oleh aspartam pemanis

buatan (NutraSweet). Toxicol Appl Pharmacol 1986; 83: 79-85.

[7] Humphries P, Pretorius E, Naude H. langsung dan efek selular tidak langsung dari aspartame

pada otak. Eur.J.Clin. Nutr 2008; 62 (4): 451-462.

[8] Stegink LD, Filer LJ, Bell EF, Ziegler EE, Tephly TR. Pengaruh konsumsi berulang

minuman aspartam-manis pada asam amino plasma, metanol darah, dan konsentrasi format

darah. Metabolisme 1989; 34 (4): 357-363.

[9] Keyhani J, studi Keyhani E. EPR efek dari format pada sitokrom c oksidase. Biochem

Biophys Res Commun 1980; 92: 327-333.

[10] Liesivuori J, Savolainen H. Methanol dan toksisitas asam format: mekanisme biokimia.

Pharmacol Toxicol 1991; 69: 157-63.

[11] Castro GD, Costantini, MH, Delgado de layno AM, Castro A. Tikus mikrosom hati dan

aktivasi nuklir metanol radikal bebas hidroksil metil. Toxicol. Lett 2002; 129 (3): 227- 236.

[12] SIE H. Stres oksidatif: oksidan dan antioksidan. Exp. Physiol 1997; 82: 291- 295.

[13] Ratan RR, Murphy TH, Baraban JM. stres oksidatif menginduksi apoptosis pada

neuron kortikal embrio. J. Neurochem 1994; 62: 376-379.

 DITERIMA NASKAH

[14] Spencer JP, Jenner A, Aruoma OI, Evans PJ, Kaur H, Dexter DT, Lees AJ, Maraden

DC, Halliwell B. Intens oksidatif kerusakan DNA dipromosikan oleh L-dopa dan

metabolitnya. Implikasi untuk penyakit neurodegenerative. FEBS Lett 1994; 352: 250 264.

[15] Samuel S, Ramanathan K, Tamilselvan J, Panneersevam C. kerusakan Protein oksidatif

di arsenik otak tikus yang diinduksi: pengaruh asam DL-lipoic. Toxicol Lett 2005; 155: 27-

34.

[16] Chandra J, et al. Gratis Rad Biol Med 2000; 29: 32.

[17] Floyd RA, dan Carney JM. kerusakan radikal bebas untuk protein dan DNA: Mekanisme

terlibat dan relevan pengamatan pada otak mengalami stres oksidatif. Ann Neurol 1992; 32:

S22-S27.

[18] Oikawa D, Kimata Y, Kohno K. Self-asosiasi dan BiP disosiasi tidak cukup untuk

aktivasi sensor tekanan ER Ire1. J Sel Sci 2007; 120: 1681-1688.

[19] Scaiano JC, FL Cozens, Mohtat N. Pengaruh gabungan AC-DC medan magnet pada radikal

bebas dalam sistem terorganisir dan biologi. Pengembangan model dan penerapan mekanisme

pasangan radikal radikal di misel. Photochem Photobiol 1995; 62: 818-829.

[20] Saunders JW. Kematian dalam sistem embrio. Sains 1966; 154: 604-612.

[21] Kerr JFR, Wyllie, AH, Currie AR. Apoptosis: fenomena biologis dasar dengan luas

implikasi dalam kinetika jaringan. Br J Kanker 1972; 26: 239 -257.

[22] Steller H. Mekanisme dan gen bunuh diri selular. Sains 1995; 267: 1445-1449.

[23] Ashkenazi A, Dixit VM. reseptor kematian: sinyal dan modulasi. Ilmu. 1998; 281: 1305-

8.

[24] Cohen GM. Caspases: para algojo apoptosis. Biochem J 1997; 326: 1-16.

[25] Greenhalgh DG. Peran apoptosis inwound penyembuhan. Int J Biochem Sel Biol 1998;

30: 1019-1030.
 DITERIMA NASKAH

[26] Oltvai ZN, Milliman CL, Korsmeyer SJ. Bcl-2 heterodimerizes in vivo dengan homolog

lestari, Bax, yang mempercepat kematian sel terprogram. Sel 1993; 74: 609-619.

[27] Allsopp TE, Wyatt S, Paterson HF, Davies AM. Proto-onkogen bcl-2 selektif dapat

menyelamatkan neurotropik neuron faktor tergantung dari apoptosis. Sel 1993; 73:

295-307.

[28] Batistatou A, Merry DE, Korsmeyer SJ, Greene LA. bcl-2 mempengaruhi

kelangsungan hidup tetapi tidak diferensiasi neuron dari sel PC12. J Neurosci 1993;

13: 4422- 4428.

[29] Korsmeyer SJ, Shutter JR, Veis DJ, Merry DE, Oltvai ZN. Bcl- 2 / Bax: rheostat yang

mengatur jalur anti-oksidan dan kematian sel. Semin. Kanker Biol 1993; 4: 327-332.

[30] Stefanus L, Taman DS, Friedman WJ, Greene LA. Caspase-dependent dan kematian

independen camptothecin- diperlakukan corticoneurons embrio. J Neurosci 1999; 19:

6235-6247.

[31] Lee EW, Garner CD, Terzo TS. hewan model untuk studi toksisitas metanol:

perbandingan tanggapan tikus folat-dikurangi dengan data monyet diterbitkan. J Toxicol

Lingkungan Kesehatan 1994; 41: 71-82.

[32] Eells JT, Henry MM, Lewandowski MF, Seme MT, Murray TG. Pengembangan dan

karakterisasi model tikus dari retina metanol-diinduksi dan toksisitas saraf optik.

Neurotoxicol. Rev 2000; 21: 321-330.

[33] Woodrow C Monte. Aspartame: Methanol dan Kesehatan Masyarakat. J Appl Nutr 1984;

36 (1): 42-53.

[34] Gonzalez-Quevedo A, Obregon F, Urbina M, Rousso T, Lima L. Efek administrasi

metanol kronis pada asam amino dan monoamina di retina, saraf optik, dan otak dari tikus”,

Toxicol Appl Pharmacol 2002; 185: 77-84.

 DITERIMA NASKAH

[35] Tabor H, Wyngarden. Sebuah metode untuk penentuan asam formiminoglutamic dalam

urin. J Clin Inrest 1962; 37: 824-828.

[36] Glowinski J, dan Iverson LL. Studi Regional katekolamin di otak tikus. IJ

Neurochem 1996; 13: 655-669.

[37] Marklund S, Marklund G. Keterlibatan Super Oxide anion radikal dalam oksidasi auto

pirogalol dan assay nyaman untuk Super Oxide Dismutase. Eur J Biochem 1974: 47; 469-

474.

[38] Asru K Sinha. uji kolorimetri dari katalase. Anal. Biochem 1972: 47; 389-394.

[39] Rotruck JT. Selenium: Peran Biokimia sebagai komponen Glutathione Peroxidase. Sains

1972: 179; 588-590.

[40] William HH, Michael JP, William BJ. Glutathione S-Transferase. J. Biol. Chem 1974:

249 (22): 25; 7130-7139.

[41] Moron MS, Depierre JW, Mannervik B. Tingkat glutathione, glutathione reduktase dan

kegiatan S-transferase glutathione di paru-paru tikus dan hati. Biochimica et Biophysica

ACTA 1979; 582: 67-78.

[42] Charles EM, Robert GL. Hati Glutathione Reductase. Pemurnian dan sifat kinetik

umum. J Biol Chem 1962; 237 (5): 1589-1595.

[43] Ohkawa H, Ohishi M, Yagi K. Assay untuk peroksidase lipid dalam jaringan

hewan thiobarbituric reaksi asam. Anal Biochem 1970: 95; 351-358.

[44] Oliver H, Lowry Nira J, Rosebrough A, Lewis Farr, Rose JR. pengukuran protein

dengan reagen Folin Fenol. J Biol Chem 1951: 193; 265-275.

 DITERIMA NASKAH

[45] Levine RL, Garland D, Oliver CN, Amici A, Climent saya, Lenz AG, Ahn B, Shaltiel S,

Stadtman ER. Penentuan kadar karbonil protein oksidatif dimodifikasi. Metode Enzymol

1990; 186: 464-478.

[46] Sedlack J, Lindsay RH. Estimasi total, protein terikat dan non-protein sulfhidril

kelompok dalam jaringan dengan reagen Elman. Anal Biochem 1968; 25: 192-205.

[47] Dorman DC, Moss OR, Farris GM, Janszen D, Obligasi JA, Medinsky MA.

Farmakokinetika metanol inhalasi dan metanol berasal formate di normal dan folat monyet

kekurangan cynomolgus. Toxicol Appl Pharmacol 1994; 128: 229-238.

[48] Pecina R, Bonn G, Burtscher E, Bobber O. cair kinerja tinggi perilaku kromatografi elusi

alkohol, aldehida, keton, asam organik dan Karbohidrat pada fase diam Catino-tukar yang

kuat. J Chromatogr 1984; 287: 245-258.

[49] Chomczynski P, Sacchi N. Single-langkah isolasi RNA dari sel budidaya atau jaringan.

(Ausubel FM, Brent R, Kingston RE, Moore DD, Seidman JG, Smith, JA, Struhl K. eds.)

Protokol sekarang dalam biologi molekuler. Greene dan Wiley Interscience, 1990. New

York, 4.2.4-4.2.8.

[50] Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis kloning T. Molecular: Manual laboratorium. II edisi,

Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York.

[51] Ashok saya, dan Sheeladevi R. Efek kronis aspartame pada stres oksidatif di otak daerah

diskrit tikus albino. J Biosci 2012; 37 (4): 1-10.

[52] Ishak KG, Zimmerman HJ, Ray MB, Beralkohol penyakit hati: patologis, aspek

patogenetik dan klinis. Alkohol Clin Exp Res 1991; 15 (1): 45-66.
 DITERIMA NASKAH

[53] Jeganathan PS, Namasivayam A. Methanol diinduksi perubahan amine biogenik di

daerah diskrit otak tikus: Peran administrasi etanol simultan. India J Physiol Pharmacol 1998;

32: 1-10.

[54] Maria B, Kadiiska, Ronald PM. metanol keracunan akut menghasilkan radikal bebas pada

tikus: sebuah perangkap penyelidikan telinga berputar. Radikal Bebas Biologi & Medicine

2000; 28 (7): 1106-

1114.

[55] Goodman J, Tephly TR. Peran microbody hati dan oksidase larut dalam peroksidasi

metanol dalam tikus dan monyet. Mol Pharmacol 1968; 4: 492-501.

[56] Oberly LW, Oberly TD. Radikal bebas, kanker dan penuaan. Dalam Radikal bebas,

penuaan dan penyakit degeneratif (Ed) JE Johnson, Jr, J Miquel, Alan R Liss, Inc, New

York: 1986; 325-371.

[57] Cheeseman KH, Slater TF. Pengantar untuk membebaskan biokimia radikal.Br Med

Banteng 1993; 49 (3): 481-493.

[58] Bergendi L, Benes L, Durackova Z, Ferencik M. Kimia, fisiologi dan patologi dari

radikal bebas. Hidup Sci 1999; 65: 1865-1874.

[59] Halliwell B. spesies reaktif oksigen dan sistem saraf pusat. Journal of

neurokimia 1992; 59: 1609-1623.

[60] Kaplowitz N, Fernandez-Checa JC, Kannan R, Garcia-Ruiz C, Ookhtens M, Yi JR. GSH

transporter: karakterisasi molekuler dan peran dalam GSH homeostasis. Biol Chem 1996;

377 (5): 267-73.

[61] Fridovich I. superoksida radikal dan superoksida dismutases. Annu Rev Biochem 1995;

64: 97-112.
 DITERIMA NASKAH

[62] Vidyasagar J, Karunakar N, Reddy MS, Rajnarayana K, Surender T, Krishna DR.

Stres oksidatif dan status antioksidan pada keracunan insektisida organophosphorous

akut. India J Pharmacol 2004; 36: 76-79.

[63] Berk M, Dean O, Bush AI. stres oksidatif pada gangguan kejiwaan: dasar bukti dan

implicateons terapi. Int J Neuropsychopharmacol 2008; 11: 851-876.

[64] Gebicki S, Gebicki JM. Pembentukan peroksida asam amino protein terkena radikal

bebas oksigen. Biochem J 1993; 289: 743.

[65] Cazenave J, Bistoni MA, Pesce SF, Alberto DW. detoksifikasi diferensial dan respon

antioksidan dalam organ beragam Corydoras paleatus eksperimental terkena microcystin-RR.

Air Toxicol 2006; 76 (1): 1-12.

[66] Pankow D, Jagielki S. Pengaruh metanol pada modifikasi konsentrasi glutation hati pada

metabolisme diklorometana untuk karbon monoksida pada tikus. Hum Exp Toxicol 1993; 12:

227-231.

[67] Beal MF, Hyman BT, Koroshetz W. Do cacat dalam metabolisme energi mitokondria

mendasari patologi penyakit neurodegenerative? Tren Neurosci 1993; 16 (4): 125-131.

[68] Patsoukis N, Zervoudakis G, Panagopoulos NT, Georgiou CD, Angelatou F, Matsokis

NA. negara thiol redoks (TRS) dan stres oksidatif dalam hippocampus tikus setelah pentilena

tetrazol-induced kejang epilepsi. Neurosci Lett 2004; 357: 83-86.

[69] Nikolaos P, George Z, Nikolaos TP, Christos DG, Fevronia A, Nikolaos AM. negara

thiol redoks (TRS) dan stres oksidatif dalam hippocampus tikus setelah pentylenetetrazol-

induced kejang epilepsi. Neurosci Lett 2004; 357: 83-86.

 DITERIMA NASKAH

[70] Abhilash M, Sauganth Paul MV, Mathews V, Varghese R, Harikumaran N. Pengaruh

asupan jangka panjang aspartam pada status pertahanan antioksidan dalam hati. Makanan dan

Kimia Toksikologi 2011; 49: 1203-1207.

[71] Tamagno E, Parola M, Guglielmotto M, Santoro G, Bardini P, Marra L, Tabaton M,

Danni O. peristiwa Beberapa sinyal dalam amiloid beta-diinduksi, oksidatif stres

tergantung apoptosis neuronal. Gratis Radic. Biol Med 2003; 1: 45-58.

[72] Ling YH, Liebes LN, Buckley M, Elliott PJ, Adams J, Jiang JD, Muggia FM, Perez-Soler

R. PS-341, sebuah proteasome inhibitor baru, menginduksi Bcl-2 fosforilasi dan belahan

dada dalam hubungan dengan fase penangkapan G2-M dan apoptosis. Mol. Kanker Ther

2002; 1: 841-849.

[73] Fan TJ, Xia L, Han YR. Mitokondria dan apoptosis. Acta Biochim Biophys Sin 2001;

33: 7-12.

[74] Thomas A, Giesler T, White E. p53 menengahi Bcl-2 fosforilasi dan apoptosis melalui

aktivasi Cdc42 / JNK1 jalur. Onkogen 2000 19: 5259-5269.

[75] Mbazima VG, Matlou PM, Faghri FD, Jasper GR, Leseilane, JM. Perubahan rasio Bax-

to-Bcl-2 memodulasi aktivitas antikanker dari ekstrak metanol gewor (commelinaceae)

dalam sel Jurkat T. Afr J Biotechnol 2008; 7 (20): 3569-3576.

[76] Oda T, Sadakata N, Komatsu N, Muramatsu T. penghabisan khusus dari glutathione dari

domain membran basolateral di sel MDCK terpolarisasi selama apoptosis risin-diinduksi. J

Biochem 1999; 126: 715.

[77] Xu K, Thornalley PJ. Keterlibatan metabolisme glutathione dalam sitotoksisitas dari

isothiocyanate phenethyl dan sistein konjugat untuk sel-sel leukemia manusia in vitro.

Biochem Pharmacol 2001; 61: 165.

 DITERIMA NASKAH

[78] SIE H. Biokimia Stres oksidatif. Angew Chem Internat Ed Eng 1986; 25: 1058-

71.

[79] SIE H. Strategi pertahanan antioksidan. European Journal of Biochemistry 1993; 215:

213-219.

[80] Scaiano JC, Cozens FL, Mohtat N. Pengaruh gabungan AC-DC medan magnet pada radikal

bebas dalam sistem terorganisir dan biologi. Pengembangan model dan penerapan mekanisme

pasangan radikal radikal di misel. Photochem. Photobiol 1995; 62: 818-829.

[81] AlSuhaibani ES. Invivo penelitian sitogenetik pada aspartam. Comp Funct Genomics

2010; 10,1155 / 2010 / 605.921.

[82] Halliwell B, Aruoma OI. (Eds) DNA dan Radikal Bebas. Boca Raton Press, 1993.

[83] SIE H. Biokimia Stres oksidatif. Angew Chem Internat Ed Eng 1986; 25: 1058-

71.

[84] Soffritti M, Belpoggi F, Tibaldi E, Esposti DD, Lauriola M. Hidup-Span Paparan

Rendah Dosis Aspartame Awal selama Prenatal Hidup Meningkatkan Efek Kanker pada

Tikus. Perspektif Kesehatan Lingkungan 2007; 115 (9): 1293-1297.

[85] Ashok saya, Sheeladevi R dan Dapkupar W. 2014 Pengaruh aspartam jangka panjang
(pemanis buatan) pada kecemasan, aktivitas lokomotor dan perilaku emosionalitas pada tikus
Wistar Albino. Biomed Prev Nutr. 4, 39-43.

[86] Iyaswamy Ashok, Rathinasamy Sheeladevi, Dapkupar Wankhar. Efek jangka panjang
dari
aspartam (pemanis buatan) pada membran ketidakseimbangan homeostasis dan histopatologi
dalam otak tikus. Radikal Bebas dan Antioksidan 3 (2013) S42-S49.
 DITERIMA NASKAH

Tabel 1: Rasa dan antisense primer urutan gen yang diinginkan untuk PCR amplifikasi

Target Primer Urutan (5 '-> 3') amplikon Anneal.Temp /

Gene Ukuran (bp) siklus
Bax Rasa: GACACCTGAGCTGACCTTGG 310 58 ° C / 35
Antisense: GAGGAAGTCCAGTGTCCAGC
Bcl2 Rasa: GGGATGCCTTTGTGGAACTA 138 56 ° C / 35
Antisense: CTCACTTGTGGCCCAGGTAT
caspase 3 Rasa: AGTTGGACCCACCTTGTGAG 298 55 ° C / 35
Antisense: AGTCTGCAGCTCCTCCACAT
β-aktin Rasa: TCATGCCATCCTGCGTCTGGACCT 598 550 C / 35
Antisense: CGGACTCATCGTACTCCTGCTTG

Gambar 1): Pengaruh Aspartam (40 mg / kg bb) pada dismutase superoksida (SOD)
aktivitas (Unit / mg protein jaringan) di otak tikus daerah diskrit.

Gambar 2): Pengaruh Aspartam (40 mg / kg bb) pada katalase (CAT) aktivitas (H2HAI2
dimanfaatkan / min / mg protein) di otak tikus daerah diskrit.
 DITERIMA NASKAH

Gambar (3): Pengaruh Aspartam (40 mg / kg bb) konsentrasi Glutathione peroksidase (GPx)
(Unit / mg protein) di otak tikus daerah diskrit.

Gambar (4): Pengaruh Aspartam (40 mg / kg bb) pada glutation tereduksi (GSH) konsentrasi

(Ug GSH / mg protein) di otak tikus daerah diskrit.

Gambar (5): Pengaruh Aspartam (40 mg / kg bb) konsentrasi Glutathione reduktase (GR)
(nM dari NADPH teroksidasi / min / mg protein) di otak tikus daerah diskrit.
 DITERIMA NASKAH

Gambar (6): Pengaruh Aspartam (40 mg / kg bb) pada Glutathione-S-transferase (GST)

(CDNB konjugasi terbentuk / min / mg protein) di otak tikus daerah diskrit.

Gambar (7): Pengaruh Aspartam (40 mg / kg bb) pada peroksidasi lipid (LPO) (nMoles dari MDA / jaringan mg)
pada tikus otak daerah diskrit.

Angka 8): Pengaruh Aspartam (40 mg / kg bb) pada Protein karbonil (ug / mg protein) di otak
tikus daerah diskrit.
 DITERIMA NASKAH

Gambar (9): Pengaruh Aspartam (40 mg / kg bb) pada Protein thiol (ug / mg protein) di
otak tikus daerah diskrit.

Gambar (10): Pengaruh Aspartam (40 mg / kg bb) pada tingkat Methanol Darah (mM) pada
tikus.
 DITERIMA NASKAH

Gambar 11: Pengaruh aspartam jangka panjang pada Bax, Bcl2 dan aktif Caspase 3
apoptosis

ekspresi di daerah otak tikus albino Wistar.

 DITERIMA NASKAH

Gambar 12: Pengaruh aspartam jangka panjang pada Bcl2, Bax, dan aktif Caspase 3 protein

ekspresi di daerah otak tikus albino Wistar.

 DITERIMA NASKAH

Gambar 13 : Pengaruh aspartam jangka panjang (40 mg / kg b.wt) pada otak pada tikus albino
wistar, histo yang

mikrograf otak ternoda oleh Haematoxylin dan Eosin.

 DITERIMA NASKAH

Gambar 14: Pengaruh aspartam jangka panjang pada Caspase aktif 3 dan ekspresi protein

Bax di otak tikus albino Wistar oleh imunohistochemistry.

Legends untuk angka:

Cc- Cerebral cortex, CB-Cerebellum, MB-Otak tengah, PM-Ponsmedulla, HP-Hippocampus,
HY-Hipotalamus
Perbandingan dan analisis yang dilakukan oleh analisis satu arah varians (ANOVA), (n = 6) kelompok
kontrol dibandingkan dengan kelompok kontrol MTX dan kelompok MTX aspartam, kelompok kontrol
MTX dibandingkan dengan kelompok Aspartame MTX.
Kontrol, MTX kontrol-Methotrexate memperlakukan kelompok, Asp + MTX- Aspartame + Methotrexate
memperlakukan kelompok. Data dari berbagai kelompok untuk parameter individu disajikan sebagai bar
diagram dengan mean ± STD. signifikansi tetap pada P <0,05,
Aspartam memperlakukan kelompok bila dibandingkan dengan kontrol signifikansi ditandai sebagai *
dan MTX diperlakukan kelompok signifikansi ditandai sebagai #
 DITERIMA NASKAH

HIGHLIGHT

administrasi Aspartam mengubah aktivitas fungsional dalam otak dengan
 meninggikan tingkat Antioksidan.


konsumsi aspartam kronis  diubah fungsi neuronal dan
 neurodegeneration di otak.
 
 perubahan yang diamati mungkin karena metanol atau metabolitnya.


jangka panjang disetujui FDA asupan diterima harian (40 mg / kg b.wt)

 administrasi aspartam terdistorsi fungsi otak dan dihasilkan apoptosis di otak

daerah.