Informe N° 5 de Laboratorio de Microbiología Ambiental

Díaz Navarrete, Ludwig

Góngora Curi, Paolo
Loayza Gonzales, Renato
Loayza Pastor, Daniella
Milla Luna, Deyanira
Pandal Piélago, Franze
Vicente Hidalgo, Vivian
Recepción: //2018
Resumen
En el quinto laboratorio de microbiología ambiental, se trató el tema de tinciones básicas. Se
separaron bacterias de un cultivo y se realizó la tinción GRAM en ellas, tiñéndolas con azul
violeta y luego, safranina para diferenciar las GRAM+ (pared de peptidoglucano) de las
GRAM- (doble membrana lipídica). Además, se realizó una tinción de azul de lactofenol en
los micelios de hongos filamentosos aislados en la práctica anterior. El resultado de ambas
tinciones se analizó en el microscopio y se determinó una gran cantidad de bacterias
GRAM+, principalmente bacilos y cocobacilos.

Palabras clave:​ Tinción GRAM, Tinción de azul lactofenol, Curvas de crecimiento.

Introducción
Las colonias aisladas y caracterizadas son cruciales para la identificación de las cepas y la
caracterización de sus actividades degradadoras y de su crecimiento. Es importante identificar
la composición de la pared celular de las bacterias, y la morfología reproductiva de los
hongos. Es por ello por lo que es de crucial importancia el correcto procedimiento del
proceso de tinciones básicas.
El presente informe se refiere a las tinciones básicas, la cual es fundamental en la
clasificación de los microorganismos ya que permite establecer diferencias morfológicas y
estructurales de la pared. Asimismo, en la tinción de Gram está basado en las características
de la pared celular de las bacterias, la cual le confiere propiedades determinantes a cada
microorganismo. La pared celular de las bacterias Gram negativas está constituida por una
capa fina de peptidoglucano y una membrana celular externa, mientras que las bacterias
Gram positivas poseen una pared celular gruesa constituida por peptidoglicano, pero no
cuentan con membrana celular externa.
Finalmente, el informe de laboratorio tiene como objetivo distinguir el tipo de pared
bacteriana (Gram positivo o Gram negativo) y la morfología bacteriana (cocos, bacilos u
otros) de las diferentes bacterias y los micelios de hongos filamentosos. De la misma manera
se realizó una revisión bibliográfica para un mayor conocimiento del tema tratado
Materiales y metodología
Materiales
● Tubos de ensayo ● Porta objeto
● Asa de Digrasky ● Cubre objeto
● Asa de Nicrom ● Pipeta graduada tipo Pasteur
● Agua destilada ● Placa Petri

Reactivo
● Cristal violeta
● Lugol
● Alcohol acetona
● Safranina
● Azul de lactafenol

Equipos
● Microscopio
● Mechero Bunsen

Áreas de estudio
Se utilizaron las 8 placas preparadas en el laboratorio anterior.
Tinción Gram
Para esta tinción se utilizó una muestra de las placas que contenían bacterias (Medio de
cultivo agar nutritivo). Se selecciona una colonia específica y se raspa con el asa de siembra,
luego se coloca la muestra sobre una lámina portaobjetos. Se recubre con una gota de agua
destilada y con ayuda del mechero se calienta hasta evaporar el agua. Una vez realizado esto
se procede propiamente a la tinción, la cual consta de 4 pasos.
Paso 1.-Cubrir la superficie donde están las bacterias con cristal violeta y esperar 30-40
segundos. Eliminar el exceso con agua. Paso 2.-Agregar lugol sobre las bacterias y esperar
30-40 segundos. Paso 3. –Lavar el exceso de lugol con alcohol acetona 3 segundos y luego
lavar con agua. Paso 4. –Agregar safranina y esperar 30-40 segundos y lavar con agua. Una
vez acabado esto se deja secar la placa portaobjetos y se lleva al microscopio (Es necesario
utilizar aceite de inmersión).
Resultados
.​Las muestras se obtuvieron de la anterior práctica , posteriormente se llevó al microscopio.

Tinción GRAM Tinción GRAM

Bacteria Bacteria
Bacilo Gram negativo Coco Gram negativo

Tincion GRAM Tinción GRAM

Bacteria Bacteria
Bacilo Gram negativo Cocos en racimo Gran negativo
 Tinción fúngica con Azul de Lectofenol Tinción fúngica con Azul de Lectofenol
Hongo Filamentoso Hongo Filamentoso

Discusión de resultados
Conclusiones
Referencias bibliográficas