1.

- PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Se plantea obtener una buena cantidad de biomasa bacteriana, la misma que luego será tratada
(downstream process) para obtener un caldo enzimático, el cual, los estudios demuestran que
puede ser utilizado para la degradación de compuestos celulíticos o hidráulicos.

Para el crecimiento de la bacteria se sugiere la utilización de un reactor Fed-Batch, el

microorganismo elegido es una bacteria termófila aislada de las fuentes termales de Papallacta
que según análisis elemental se ajusta a la fórmula 𝐶4,17 𝐻7,21 𝑂1,79 𝑁1 , los reportes
microbiológicos señalan que la fuente de nitrógeno para su crecimiento es nitrato siendo posible
también crecer sobre amonio, además nos indican que la bacteria puede crecer en medio aerobio
o anaerobio (bacteria facultativa, lo cual indica que el aceptor de electrones puede o no ser
oxigeno) y utilizar como fuente de carbono (donador de electrones) monosacáridos de 5 o 6
átomos de carbono, que bien podrían prevenir del jugo de caña o melazas (no crece sobre
polisacáridos como almidón o celulosa vegetal). Desde laboratorio nos reportan que el requisito
𝐾𝑔 𝑠𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜
de mantenimiento es de 0,18 𝐾𝑔 𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠∗𝑡 , el microorganismo crece en un rango entre 5 a 7 pH

Debemos diseñar un reactor Fed-Batch con la finalidad de obtener 1 tonelada por año de biomasa.

En este caso se pide plantear:

 Los balances de masa

 La estequiometria según el modelo termodinámico de McCarty, (la cual debe ser ajustada
a la experimentación.
 La cinética siguiendo el modelo de Monod y un modelo alternativo con el modelo de
Moser.
 Establecer la formulación del medio de crecimiento
 Diseño del reactor

2.- ARGUMENTACIÓN TEÓRICA

2.1.-Biotecnología
• Organización para la Cooperación y el Desarrollo Económico (OCDE):

La aplicación de los principios de la ciencia y la ingeniería al tratamiento de materias por agentes

biológicos en la producción de bienes y servicios (1982).

• Oficina de Evaluación Tecnológica (OTA, Office of Technology Assessment):

Biotecnología, en un sentido amplio, incluye cualquier técnica que utilice organismos vivos (o
parte de ellos) para obtener o modificar productos, mejorar plantas y animales, o desarrollar
microorganismos para usos específicos (1984).

1
• Federación Europea de Biotecnología (EFB, European Federation of Biotechnology):

Uso integrado de la bioquímica, la microbiología y la ingeniería genética para poder aplicar las
capacidades de microorganismos, células cultivadas animales o vegetales o parte de los mismos
en la industria, en la salud y en los procesos relacionados con el medioambiente (1988).

• Organización de la Industria Biotecnológica (BIO, Biotechnology Industry Organization):

En un sentido amplio, biotecnología es “bio” + “tecnología”, es decir, el uso de proceso

2.2.-Proceso Biotecnológico

Son las aplicaciones de los principios de la ingeniería a procesos basados en la utilización de

células vivas o subcomponentes de tales células, sean éstas silvestres o sometidas a manipulación
genética. Es así como los procesos biotecnológicos se han incorporado a diversos ámbitos
industriales, tales como la industria agro-alimentaria, farmacéutica, minería, química, entre otras,
con el consiguiente aumento en la productividad y la mejora de los procesos productivos.

2.3.-Bacterias termófilas
El término termófilo se aplica a organismos vivos que pueden soportar condiciones extremas de
temperatura relativamente altas, por encima de los 45ºC. Es un subtipo de vida extremófila.
Muchos termófilos pertenecen al dominio Archaea. Estos organismos tienen una tasa de
crecimiento rápido pero de corta duración. Ejemplos de este tipo son los organismos vivos que se
desarrollan al lado de las fumarolas o chimeneas hidrotermales en las profundidades del océano.

2.4.-Reparto del Sustrato y rendimiento celular

Los microorganismos utilizan el sustrato donante de electrones para dos funciones para síntesis
de nuevas células 𝑓𝑠0 o para producción de energía 𝑓𝑒0

Figura 1. Utilización de donantes de electrones para producir energía y síntesis.

Fuente: Biotecnología del medio ambiente, principios y aplicaciones/ McCarty &Rittmann

La suma de 𝑓𝑒0 + 𝑓𝑠0 = 1, las porciones convertidas inicialmente en células 𝑓𝑠0 y las utilizadas
para generar energía 𝑓𝑒0, consisten el marco de reparto del sustrato entre generación de energía y

2
síntesis, una faceta importante del marco de reparto es que se realiza en base de electrón
equivalente (e- eq).

2.5.-Reacciones globales de crecimiento biológico.

El crecimiento bacteriano tiene dos reacciones, para producir energía y para sintetizar células. El
donante de electrones suministra electrones al aceptor de electrones para producir energía.

Debemos combinar semirreacciones para tal propósito, con esto podemos establecer la reacción
global equilibrada.

La formación de células depende de la fuente de nitrógeno que tenga.

Tabla 1. Ecuaciones para la formación de células

Fuente Semirreacción
𝑁𝐻4+ (𝑛 − 𝑐) 𝑐 𝑐 𝑐 (2𝑛 − 𝑏 + 𝑐)
𝐶𝑂2 + 𝑁𝐻4+ + 𝐻𝐶𝑂3− + 𝐻 + + 𝑒 − → 𝐶𝑛 𝐻𝑎 𝑂𝑏 𝑁𝑐 + 𝐻2 𝑂
𝑑 𝑑 𝑑 𝑑 𝑑
𝑑 = (4𝑛 + 𝑎 − 2𝑏 − 3𝑐)

𝑁𝑂3− 𝑐 𝑛 (4𝑛 + 𝑎 − 2𝑏 + 6𝑐) + 1 (3𝑐 + 2𝑛 − 𝑏)

𝑁𝑂3− + 𝐶𝑂2 + 𝐻 + 𝑒 − → 𝐶𝑛 𝐻𝑎 𝑂𝑏 𝑁𝑐 + 𝐻2 𝑂
𝑑 𝑑 𝑑 𝑑 𝑑
𝑑 = (4𝑛 + 𝑎 − 2𝑏 + 5𝑐)

𝑁𝑂2− 𝑐 𝑛 (4𝑛 + 𝑎 − 2𝑏 + 4𝑐) + 1 (2𝑐 + 2𝑛 − 𝑏)

𝑁𝑂2− + 𝐶𝑂2 + 𝐻 + 𝑒 − → 𝐶𝑛 𝐻𝑎 𝑂𝑏 𝑁𝑐 + 𝐻2 𝑂
𝑑 𝑑 𝑑 𝑑 𝑑
𝑑 = (4𝑛 + 𝑎 − 2𝑏 + 3𝑐)

𝑁𝟐 𝑐 𝑛 1 (2𝑛 − 𝑏)
𝑁𝟐 + 𝐶𝑂2 + 𝐻 + + 𝑒 − → 𝐶𝑛 𝐻𝑎 𝑂𝑏 𝑁𝑐 + 𝐻2 𝑂
2𝑑 𝑑 𝑑 𝑑
𝑑 = (4𝑛 + 𝑎 − 2𝑏)

Fuente: Adaptado de Rittmann & McCarty (2001)

Es fundamental tener la fuente de aceptor de electrones, depende del microorganismo a utilizar
debido a que puede ser aerobio, anaerobio o facultativo, por lo tanto debemos tener las ecuaciones
o semirreacciones de estos compuestos.

En el caso de bacterias aerobias el aceptor de electrones predilecto es el oxígeno.

3
Tabla 2. Semirreacciones inorgánicas y sus potenciales estándar de energía libre de gibbs

Fuente: Adaptado de Rittmann & McCarty (2001)

Debemos desarrollar las reacciones de síntesis de energía. La Semirreacción del donante se
designa por 𝑅𝑑 , la del aceptor por 𝑅𝑎 y la de la célula por 𝑅𝑐 .

Las reacciones de energía y síntesis son las siguientes:

Reacción de energía 𝑅𝑒 = 𝑅𝑎 − 𝑅𝑑 EC (1)

Reacción de síntesis 𝑅𝑠 = 𝑅𝑐 − 𝑅𝑑 EC (2)

Se entiende que 𝑅𝑑 tiene signo negativo debido a que el donante está oxidándose.

2.6.-Coeficientes de rendimiento y energía de reacción.

El rendimiento microbiano obtenido de la utilización del sustrato tiene lugar en dos pasos.

1. La reacción de energía crea portadores de alta energía, tales como ATP

2. Los portadores de energía se reparten entre la síntesis de células o su mantenimiento.

4
Debemos especificar que la energía requerida para sintetizar un equivalente de células a parir de
una fuente dada de carbono es ∆𝐺𝑠 , cuando la fuente de nitrógeno es el amonio. Se debe
determinar primero el cambio de energía que resulta de la conversión de la fuente de carbono en
intermedios orgánicos corrientes que emplean las células para sintetizar su macromolécula, se
utiliza piruvato como intermediario representativo.

A continuación el carbono del piruvato se convierte en carbono celular. La energía que se requiere
𝐾𝑗
para ello ∆𝐺𝑝𝑐 se basa en un valor estimado de 3,33𝑔−𝑐é𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠..

La transferencia de electrones hay siempre perdida de energía. Esta pérdida se considera

incluyendo el término 𝜀 para el rendimiento de transferencia de energía.

∆𝐺𝑃 ∆𝐺𝑝𝑐
∆𝐺𝑆 = + EC (3)
𝜀𝑛 𝜀

La 𝜀 es un valor de eficiencia este valor oscila entre 0,4 a 0,7 por lo regular siempre se considera
𝜀 = 0,6.

El valor n depende del signo que nos proporcione el ∆𝐺𝑃 .

Si ∆𝐺𝑃 es negativo n=-1

Si ∆𝐺𝑃 es positivo n=+1

Debemos estimar la cantidad de donante de electrones que hay que oxidar para suministrar
energía, definimos que para suministrar la cantidad de energía deben oxidarse A equivalentes de
electrones. La energía liberada de esta oxidación es 𝐴∆𝐺𝑟 .

∆𝐺𝑃 ∆𝐺𝑝𝑐
+
𝜀𝑛 𝜀
𝐴= 𝜀∆𝐺𝑟
EC (4)

Finalizamos con las ecuaciones para determinar los coeficientes de rendimientos y energía

1
𝑓𝑠0 = 1+𝐴 EC (5)

𝐴
𝑓𝑒0 = 1+𝐴 EC (6)

Para obtener la ecuación global debemos ingresar los coeficientes de rendimiento y energía en las
reacciones de síntesis y energía.

𝑅 = 𝑓𝑒 𝑅𝑎 + 𝑓𝑐 𝑅𝑐 − 𝑅𝑑 EC (7)

5
2.7.-Rendimientos de la reacción.

Generalmente rendimiento es la cantidad de producto formado o acumulado por cantidad de

reactante suministrado o consumido. Cuando reactantes o productos se ven involucrados en
reacciones diferentes, el rendimiento observado es diferente al rendimiento teórico.

𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑜 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑑𝑒𝑙 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑡𝑜 𝑓𝑜𝑟𝑚𝑎𝑑𝑜

𝑅𝑒𝑛𝑑𝑖𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜 𝑡𝑒ó𝑟𝑖𝑐𝑜 = 𝑀𝑎𝑠𝑎 𝑜 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑑𝑒𝑙 𝑟𝑒𝑎𝑐𝑡𝑖𝑣𝑜 𝑢𝑡𝑖𝑙𝑖z𝑎𝑑𝑜
EC (8)

𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑜 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑑𝑒𝑙 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑡𝑜 𝑝𝑟𝑒𝑠𝑒𝑛𝑡𝑒

𝑅𝑒𝑛𝑑𝑖𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜 𝑜𝑏𝑠𝑒𝑟𝑣𝑎𝑑𝑜 = EC (9)
𝑀𝑎𝑠𝑎 𝑜 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 𝑑𝑒𝑙 𝑟𝑒𝑎𝑐𝑡𝑖𝑣𝑜 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑖𝑑𝑜

2.8.-Velocidad de reacción

Representa la velocidad de conversión de determinado compuesto. La velocidad de reacción se

determina midiendo la variación de masa de un determinado compuesto en el sistema.

Hay velocidades de reacción tanto de reactivos como de productos la diferencia entre estos es el
signo, las velocidades de los reactivos son negativas y las velocidades de los productos son
positivas.

𝑑𝐶𝐴
𝑟𝐴 = − EC (10)
𝑑𝑡

2.9.-Cinética de la reacción

A medida que transcurre la reacción las concentraciones de los reactantes disminuyen y lo de los
productos aumenta.

𝑟𝐴 = 𝑘𝐶𝐴𝑎 𝐶𝐵𝑏 EC (11)

Donde k es la constante de velocidad o coeficiente de velocidad de la reacción, la k es

independiente de la concentración de la especie reaccionante.

2.10.-Cálculo de la velocidad de reacción a partir de datos experimentales

Se puede determinar por dos métodos.

1. Método del área equivalente a la velocidad media

2. Método de la pendiente en el punto medio

2.11.-Cinética de Michaelis Menten

Esta cinética es la que representa de mejor manera las reacciones enzimáticas.

𝑣𝑚𝑎x ∗𝐶𝐴
𝑟𝐴 = 𝐾𝑚 +𝐶𝐴
EC (12)

6
Figura 2. Representación de Michaelis Menten.

Fuente: Principios de ingeniería para Bioprocesos/ Doran/ pag 282

A elevadas concentraciones de sustrato 𝑆 ≫ 𝐾𝑚 por lo tanto podemos despreciar de la ecuación

𝑣𝑚𝑎x ∗𝑆
𝑣= EC (13)
𝑆

Llegando a obtener 𝑣 = 𝑣𝑚𝑎x, en este intervalo de concentración, la reacción es de orden cero

con respecto al sustrato.

Por otro lado a concentraciones pequeñas de sustrato 𝑆 ≪ 𝐾𝑚 por lo que podemos despresiar ese
valor la ecuación queda

𝑣𝑚𝑎x ∗𝑆
𝑣= 𝐾𝑚
EC (14)

En efecto en este intervalo el coeficiente de velocidad es de primer orden para la reacción.

2.12.-Obtención de las constantes cinéticas

Representación de Michaelis Menten

Este procedimiento consiste en representar directamente parejas de valores (v,S) tal como se
muestra en la figura 2 Los valores 𝑣𝑚𝑎x 𝑦 𝐾𝑚 pueden calcularse de manera aproximada a partir
de esta representación.

𝑣𝑚𝑎x Es la velocidad cuando 𝑠 → ∞

𝐾𝑚 Es el valor de S cuando 𝑣 = 𝑣𝑚𝑎x /2

2.13.-Rendimiento global instantáneo

Los rendimientos pueden variar en un cultivo y algunas veces es necesario calcular el rendimiento
instantáneo en un determinado punto en el tiempo.

7
 𝑟x 𝑣𝑒𝑙𝑜𝑐𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑐𝑟𝑒𝑐𝑖𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜
𝑌x/s = 𝑟𝑠
= 𝑣𝑒𝑙𝑜𝑐𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑜 𝑑𝑒 𝑠𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜 EC (15)

2.14.-Efecto de la concentración de sustrato

La velocidad específica de crecimiento de las células durante las fases de crecimiento y

desaceleración de un cultivo discontinuo, depende de los nutrientes existentes en el medio. El
sustrato limitante del crecimiento es a menudo la fuente de carbono, durante el crecimiento está
relacionado con la concentración de sustrato limitante del crecimiento mediante la ecuación de
Monod que es una expresión homologa a la ecuación de Michaelis Menten.

𝜇𝑚𝑎x ∗𝑆
𝜇= 𝐾𝑠 +𝑆
EC (16)

Representación de la ecuación de Monod

Figura 3. Representación de Monod.

Fuente: Principios de ingeniería para Bioprocesos/ Doran/ pag 291

Determinamos 𝜇𝑚𝑎x 𝑦 𝐾𝑠 de manera aproximada a partir de esta representación.

𝜇𝑚𝑎x Es la velocidad cuando 𝑠 → ∞

𝐾𝑠 Es el valor de S cuando 𝜇 = 𝜇𝑚𝑎x /2

2.15.-Configuración de Biorreactores

El tanque cilíndrico, con o sin agitación es el reactor más utilizado en Bioprocesos. Gran parte
del reto que presenta el diseño de un reactor para la parte de fermentaciones que necesitan oxígeno
recae en la provisión de una mezcla y aireación adecuadas.

8
2.16.-Tanques agitados

La mezcla y dispersión de las burbujas se alcanza mediante agitación mecánica, lo cual requiere
una cantidad de energía por unidad de volumen, en reactores altos se instalan más de un rodete
para mejorar la mezcla.

Figura 4. Fermentador de tanque agitado

Fuente: Fuente: Principios de ingeniería para Bioprocesos/ Doran/ pag 352

Con frecuencia únicamente se llena el 70-80 % del volumen del reactor con líquido, esto nos
ayuda a prevenir derrames además nos ayuda a tener un espacio don posiblemente puede albergar
la espuma que pueda generarse, para solventar el problema de la espumo se necesita un rodete
adicional que se lo denomina separador de espuma.

El factor de forma de los reactores agitados, es decir la relación entre la altura y el diámetro puede
variar considerablemente, el reactor más fácil es el que tiene un factor de forma de 1 pero debemos
considerar si nuestra mezcla necesita oxígeno la relación obligadamente debe aumentar lo que
ayuda que el tiempo de contacto entra la burbuja y el líquido sea mayor, además el material debe
ser más resistente debido a la carga hidrostática que va a ser mayor dependiendo de la altura del
reactor.

9
2.17.-Reactor columna de burbujas

Otro tipo de reactor es el de columna de burbuja, donde la aireación y la mezcla se alcanza

mediante la inyección de gas, proceso que requiere menor energía que la agitación mecánica, este
tipo de reactores se los utiliza principalmente para la generación de biomasa.

Figura 5. Reactor columna de burbuja

Fuente: Fuente: Principios de ingeniería para Bioprocesos/ Doran/ pag 353

Este tipo de reactores son de estructura más sencilla donde el factor es de 2:1, estos reactores
tienen únicamente un difusor en la parte inferior.

La hidrodinámica de la columna de burbuja depende del comportamiento de las burbujas

formadas en el difusor. Existen diferentes regímenes de flujo dependiendo del caudal de gas, del
diseño del difusor, del diámetro de la columna y de la viscosidad.

Un flujo homogéneo se produce únicamente a caudales bajos de gas, es este flujo todas las
burbujas ascienden a la misma velocidad.

Flujo heterogéneo, en este caso las burbujas suben por el centro de la columna de manera caótica
provocando la mezcla produciendo una retromezcla.

2.18.-Operación del reactor Batch

Este tipo de procesos operan en sistemas cerrados de manera que el sustrato se añade al comienzo
del proceso y los productos son retirados solo al finalizar el mismo.

10
Debido a que [m] en cultivo discontinuo permanece casi constante e igual a 𝜇𝑚𝑎x durante la mayor
parte mayor parte del periodo de crecimiento.

x = x𝑜 𝑒 𝜇𝑚𝑎x∗t EC (17)

Si la x𝑓 es la concentración final de biomasa tras un tiempo de cultivo en discontinuo t 𝑏 ,

considerando que la velocidad de muerte celular es despreciable en comparación con la de
crecimiento la ecuación es.

1 x𝑓
t 𝑏 = 𝜇𝑚𝑎x 𝑙𝑛 x EC (18)
𝑜

Para aquellos productos asociados independientemente o no asociados en absoluto con el

metabolismo energético, si no se forma producto o está asociada al metabolismo energético la
ecuación queda.

𝑌x
1
t𝑏 = 𝑙𝑛 [1 + s (s0 − 𝑠𝑓 )] EC (19)
𝜇𝑚𝑎x x0

2.19.-Operación del reactor Fed-Batch

En este tipo de operación la alimentación de nutrientes se realiza de manera intermitente o

continua con el fin de controlar la concentración de sustrato existente en el reactor, de esta manera
se evita elevadas velocidades de crecimiento. Este hecho es importante en cultivos donde la
demanda de oxígeno durante el crecimiento rápido es demasiado elevado para la capacidad de
transferencia de materia del reactor, el reactor debe disponer de espacio libre para la adición de
nuevo sustrato.

Definimos la velocidad de dilución D con dimensiones [1/T]

𝐹
𝐷=𝑉 EC (20)

En los sistemas de alimentación intermitente V aumenta con el tiempo por lo que si F es constante
D disminuye a medida que avanza la reacción

𝑑x
𝑑𝑡
= x(μ − D) EC (21)

Examinamos la situación donde el reactor opera en discontinuo hasta que alcanza una densidad
de células elevada y el sustrato desaparece casi por completo. Cuando se alcanza esta situación
comienza la operación de alimentación intermitente con un caudal F. Como resultado, la
𝑑x
concentración de células x se mantiene alta y aproximadamente constante por lo que 𝑑𝑡 = 0.

Por lo tanto (μ = D) sustituyendo esto en la ecuación de Monod queda

11
 𝜇𝑚𝑎x ∗𝑆
𝐷= 𝐾𝑠 +𝑆
EC (22)

Reordenando la anterior ecuación obtenemos

𝐷𝐾𝑠
𝑆=𝜇 EC (23)
𝑚𝑎x −𝐷

Cuando existe elevadas densidades celulares en el reactor prácticamente todo el sustrato que
ingresa al reactor se consume instantáneamente por lo que

x = 𝑌x ∗ 𝑆𝑖 EC (24)
s

Para obtener la concentración de células final utilizamos esta ecuación

X = X 𝑜 + (𝑌x ∗ 𝑆𝑖 ∗ 𝐹)𝑡𝑓𝑏 EC (25)

s

Donde 𝑡𝑓𝑏 es el tiempo transcurrido desde el comienzo de la alimentación, esta ecuación indica
que la alimentación aumenta linealmente con el tiempo.

Cuando se producen condiciones de alta densidad de biomasa y casi completa desaparición de

sustrato en los reactores Fed-Batch prevalece un estado pseudoestacionario, en este estado las
velocidades de crecimiento celular, de consumo de sustrato y de generación de productos es 0,
además las constantes de muerte celular y mantenimiento son despreciables.

En este estado pseudoestacionario la velocidad de crecimiento específico es igual a la velocidad

de difusión.

12
3.- DESARROLLO DEL CASO
3.1.- Datos Experimentales
Tabla 3. Datos experimentales

TIEMPO Concentración Concentración

Biomasa [g/L] glucosa[g/L]
0 0,64 30
5 1,95 27,4
10 4,21 23,6
15 5,54 21
20 6,98 18,4
25 9,5 14,8
30 10,3 13,3
35 12 9,7
40 12,7 8
45 13,1 6,8
50 13,5 5,7
55 13,7 5,1
Fuente: Caso práctico para el examen complexivo febrero 2018
3.2.- Cálculo del Peso molecular de la Bacteria

Bacteria Termófila de fórmula

Tabla 4. Pesos atómicos

Cálculo del Pm
C= 12
H= 1
O= 16
N= 14
PM= 99,89
Fuente: Tabla periódica de los elementos químicos
El peso molecular de esta bacteria termófila es PM= 99,89 [g/mol]
3.3.-Cálculo de la formación de células (Rc)
Como en el caso no nos especifica cual es la fuente de nitrógeno debemos efectuar cálculos con
ambas posibilidades, con amonio y con nitrato.

Cuando la fuente es amoníaco

Partimos de la ecuación química para determinar los coeficientes Estequeométricos

13
 d= 17,31
Tabla 5. Coeficientes Estequeométricos cuando la fuente es amonio

coeficientes coeficientes
Compuestos en decimales en fracción
datos 0,183 76/415
n= 4,17 0,058 29/502
a= 7,21 0,058 29/502
b= 1,79 0,058 29/502
c= 1 0,436 41/94

Fuente: elaboración propia

La ecuación queda de la siguiente forma:
76/415 29/502 29/502 29/502 41/94

Cuando la fuente es nitrato

Partimos de la ecuación química para determinar los coeficientes Estequeométricos

d= 25,31
Tabla 6. Coeficientes Estequeométricos cuando la fuente es amonio

coeficientes coeficientes
Compuestos en decimales en fracción
datos 0,165 115/698
n= 4,17 0,040 29/734
a= 7,21 1,040 1 29/734
b= 1,79 0,040 29/734
c= 1 0,377 183/485

Fuente: elaboración propia

La ecuación queda de la siguiente forma

115/698 29/734 1 29/734 29/734 183/485

Resultado de los cálculos.

RESULTADO

NH4 76/415 29/502 29/502 29/502 41/94

115/698 29/734 1 29/734 29/734 183/485

#

14
3.4.-Cálculo de los coeficientes de rendimiento y energía de reacción
Fuente
Aceptor
35,09 KJ/e-eq
41,35 KJ/e-eq
78,72 KJ/e-eq
ξ= 0,6
3,33 KJ/g (células)

CÁLCULO DEL

FÓRMULA

-6,26 KJ/e-eq

DETERMINACIÓN DE n

n= -1

CÁLCULO DE

PM*n(células)*3,33
19,2162738 KJ/e-eq

CÁLCULO
FÓRMULA

-120,07 KJ/e-eq

CÁLCULO DE A

FÓRMULA

A= 0,392425572

CÁLCULO DE fs Y fe

FÓRMULA

0,71817124

FÓRMULA

0,28182876

15
Existen 4 posibilidades por lo tanto hacemos cálculos con todas, esta es la tabla resumen.
Los otros cálculos encontramos en los anexos
Tabla 7. Cuadro resumen de los coeficientes de rendimiento y energía de reacción

RESUMEN
0,7182 0,2818
0,7067 0,2933
0,7988 0,2012
0,7897 0,2103

Fuente: Elaboración propia

3.5.- Cálculo del rendimiento teórico

FUENTE
ACEPTOR
0,71817124
0,28182876

FÓRMULA

0,2818

0,0705 0,2818 0,2818 0,1409

0,7182

0,1315 0,0415 0,0415 0,7182 0,7182 0,0415 0,3132

0,04167 0,25 0,25 1 1

R= 0,04167 0,0415 0,0705 0,0415 0,0415 0,1185 0,2042

0,5526

Existen 4 posibilidades por lo tanto hacemos cálculos con todas, esta es la tabla resumen.
Los otros cálculos encontramos en los anexos
Tabla 8: Cuadro resumen de los rendimientos teóricos

RESUMEN
0,5526
0,5438
0,4203
0,4155

Fuente: elaboración propia

3.6.- Cálculo del rendimiento observado
Con ayuda de los datos experimentales calculamos el rendimiento experimental y comparamos
con los resultados que obtuvimos en las 4 posibilidades que nos plantea el caso.
Para esto vamos a utilizar el método de la pendiente en el punto medio

16
Primero vamos a determinar la velocidad de crecimiento específico µ

Gráfico 1: Diagrama CB vs t

CB vs t
16
14
12
10
CB

8
6
4
2
0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
tiempo

Tabla 9: Resultados de la velocidad especifica de crecimiento

Concentración
Biomasa (CB)
TIEMPO [g/L] Δ CB (g/l) Δ t (h) Δ CB/Δ t [g/l*h] e CBM-CBm r CB=dCB/dt [g/l*h]µ=(1/CB*rCB(1/h)
0 0,64 1,31 5 0,262 5 0 0
5 1,95 2,26 5 0,452 5 3,57 0,357 0,183
10 4,21 1,33 5 0,266 5 3,59 0,359 0,085
15 5,54 1,44 5 0,288 5 2,77 0,277 0,050
20 6,98 2,52 5 0,504 5 3,96 0,396 0,057
25 9,5 0,8 5 0,16 5 3,32 0,332 0,035
30 10,3 1,7 5 0,34 5 2,5 0,25 0,024
35 12 0,7 5 0,14 5 2,4 0,24 0,020
40 12,7 0,4 5 0,08 5 1,1 0,11 0,009
45 13,1 0,4 5 0,08 5 0,8 0,08 0,006
50 13,5 0,2 5 0,04 5 0,6 0,06 0,004
55 13,7 0

Fuente: Elaboración propia

Determinamos la velocidad de consumo de sustrato.

17
Gráfico 2: Diagrama Cs vs t

CS vs t
35

30

25

20
CS

15

10

0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60
tiempo

Y con ayuda de la ecuación 15 obtenemos el rendimiento

𝑟x 𝑣𝑒𝑙𝑜𝑐𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑐𝑟𝑒𝑐𝑖𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜
𝑌x/s = =
𝑟𝑠 𝑣𝑒𝑙𝑜𝑐𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑜 𝑑𝑒 𝑠𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜
Tabla 10 : Cuadro de resultados de los rendimientos experimentales
TIEMPO CS[g/L] Δ S (g/l) Δ t (t) Δ S/Δ t [g/l*h] e CSM/CSm r S=dS/dt Y=rCB/rS
0 30 -2,6 5 0,52 5 0
5 27,4 -3,8 5 0,76 5 -6,4 0,64 0,56
10 23,6 -2,6 5 0,52 5 -6,4 0,64 0,56
15 21 -2,6 5 0,52 5 -5,2 0,52 0,53
20 18,4 -3,6 5 0,72 5 -6,2 0,62 0,64
25 14,8 -1,5 5 0,3 5 -5,1 0,51 0,65
30 13,3 -3,6 5 0,72 5 -5,1 0,51 0,49
35 9,7 -1,7 5 0,34 5 -5,3 0,53 0,45
40 8 -1,2 5 0,24 5 -2,9 0,29 0,38
45 6,8 -1,1 5 0,22 5 -2,3 0,23 0,35
50 5,7 -0,6 5 0,12 5 -1,7 0,17 0,35
55 5,1 0

Fuente: elaboración propia

Realizamos la curva entre rendimiento en función del tiempo 𝑌x/s 𝑣𝑠 𝑡.

18
Gráfico 3. Diagrama Y vs t

Calculamos el promedio de los datos más cercanos [0,56 al 0,45]

Y el resultado es 𝑌x/s = 0,5548

Ahora comparamos nuestro rendimiento experimental con los rendimientos teóricos que
obtuvimos a través de cálculos.

Tabla 11: Cuadro comparativo entre el rendimiento teórico y experimental

RESUMEN observado
0,5526 0,55488
0,5438
0,4203
0,4155

Fuente : elaboración propia

El más cercano es donde la fuente es el amoníaco y el aceptor de electrones es el oxígeno.

3.7.- Cálculo de 𝝁𝒎𝒂𝐱 𝒚 𝑲𝒔

Realizamos una curva entre 𝝁 𝒗𝒔 𝑪𝑺

19
Gráfico 4. Diagrama u vs CS

u vs CS
0,200
0,180
0,160
0,140
0,120
0,100
u

0,080
0,060
0,040
0,020
0,000
0 5 10 15 20 25 30 35
CS

A partir de esta gráfica determinamos 𝝁𝒎𝒂𝐱

𝝁𝒎𝒂𝐱 = 0,183 [g/l*h] o [1/h]

𝝁𝒎𝒂𝐱 /𝟐= 0,091538 [g/l*h] o [1/h]

Con el valor de ( 𝜇𝑚𝑎x /2) determinamos 𝐾𝑠

𝑔 𝑠𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜
𝐾𝑠 = 23,85 [ ]
𝑙

20
Utilizando POLYMATH (MONOD)

Figura 6. Captura de pantalla de los resultados en polymath con Monod

21
Gráfico 5. Regresión Monod

UTILIZANDO POLIMATH (MOSER)

22
Figura 7. Captura de pantalla de los resultados en polymath con Moser

Gráfico 6. Regresión Moser (regresión)

3.8.- Cálculo del tiempo de cultivo discontinuo

Datos

V0= 650 l
umax= 0,183076923 1/h
Y x/s= 0,55488 gcel/gsoluto
So= 30 g sus/l
xo= 0,64 g cel/l
Sf= 0 g sus/l
ms= 0,18 gsus/gcel*h

23
Consideramos que el sustrato se termina completamente 𝑠𝑓 = 0

1 (s0 − 𝑠𝑓 )
t𝑏 = 𝑙𝑛 [1 + ]
𝜇𝑚𝑎x 1 𝑚𝑠
(𝑌 + 𝜇𝑚𝑎x) x0
x/𝑆

t 𝑏 = 15,735579 [ℎ]

3.9.- Cálculo de la concentración final de la biomasa es esta primera parte.

x = x𝑜 𝑒 𝜇𝑚𝑎x∗tb
𝑔
x = 11,41050[ ⁄𝑙 ]

Nos pide obtener 1 tonelada al año de biomasa

EN EL AÑO 2018 SE VA A TRABAJAR 249 DIAS (11 FERIADOS Y 105 FINES DE

SEMANA)

Consideramos que en los tiempos de saneamiento, desalojo se va a utilizar 24 horas, además

consideramos que el tiempo en el reactor Fed-Batch va a ser de 50[h]

3.10.- Cálculo del tiempo y número de corridas

El tiempo total es igual a la suma de los tiempos en la parte Batch más la parte Fed-Batch más el
tiempo de parada

𝒕𝑻 = 𝟏𝟓, 𝟕𝟕𝟓𝟓 + 𝟓𝟎 + 𝟐𝟒

𝒕𝑻 = 𝟖𝟗, 𝟕𝟕𝟓𝟓[𝒉] = 𝟑, 𝟕𝟑𝟖𝟗[𝒅í𝒂𝒔]

3.11.- Cálculo del número de corridas

249
𝑛= = 66,5956
3,7389

3.12.- Determinamos la cantidad de biomasa que debemos generar por cada corrida
𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑎𝑛𝑢𝑎𝑙 1000
= = 15,016[𝐾𝑔]
𝑛 66,5956

24
3.13.- Determinamos la cantidad de biomasa que se produce por cada corrida

𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑒 = 𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑔𝑒𝑛𝑒𝑟𝑎𝑑𝑎 + 𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑖𝑛𝑜𝑐𝑢𝑙𝑎𝑑𝑎

𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑝𝑟𝑜𝑑𝑢𝑐𝑒 = 15,016 +0,416 = 15,432[Kg]

3.14.- Determinamos D (dilusión)

𝑫 = 𝟎, 𝟐𝟏𝟕𝟔𝟔[𝟏⁄𝒉]

3.15.- Determinamos Xo
𝑥o=xf(b)*V
𝑥o=11,4105*650=7416,8281[g]

3.16.- Determinamos el flujo F

𝑙
𝐹 = 9,6299[ ]
ℎ
3.17.- Determinamos el volumen [V]

X𝑓 15431,9939
𝑉= = = 1352,4374[𝑙]
𝑥 11,4105049

3.18.- Determinar la formulación del medio de crecimiento

Para la formulación del medio de crecimiento para una corrida necesitamos:

especies masa [kg]

glucosa 27,8604389
amonio 2,77467774
ion carbonato 9,40307458
oxígeno 8,37974965
fosforo 0,3079584

El fósforo normalmente representa el 2% del peso seco de la bacteria, además debe estar en un
pH entre 5-7 si se altera el pH se lo puede regular con cal o ácido sulfúrico depende del caso.
Además se debe tomar en cuenta que el oxígeno entra con un exceso del 20%.

25
3.21. Qué tipo de reactor se propone.

Por mayor eficiencia y mejor mezcla propongo el

reactor de tiro de aire externo.

Estos reactores se utilizan en la producción de

proteínas de origen animal, tratamiento de aguas y
cultivo de células animales y vegetales.

Estos reactores de aire se utilizan para la producción

de biomasa debido a que no lastiman las células
como en un reactor de tanque agitado.

Este reactor de tiro de aire externo la separación del

gas es más efectiva, así mismo en el downcomer se
arrastra pocas burbujas lo que provoca que la
diferencia de densidades entre los fluidos sea mayor
y la circulación del líquido sea más rápida.

Los reactores de tiro de aire proporcionan mejores

mezclas que los de columna de burbuja (excepto
cuando se opera a velocidades bajas de fluido).

Puede utilizar menores caudales de gas sin que esto

afecte al mezclado.

Figura 9: Reactor de tiro de aire exterior

Cuando se empieza a retirar el gas aumenta la velocidad del líquido y disminuye el contenido de
gas en el tubo.

26
4.- ANEXOS
4.1. ANEXO 1
Fórmulas empíricas para células procariotas

Fuente: Rittmann y McCarty pag 119

27
4.2. ANEXO 2
Semirreacciones orgánicas y sus energías libres de Gibbs

Fuente: Rittmann y McCarty /pag 126-127

28
4.3.- ANEXO 3
Cálculo de los coeficientes de los coeficientes de rendimiento y energía de reacción

Fuente
Aceptor
35,09 KJ/e-eq
41,35 KJ/e-eq
72,2 KJ/e-eq
ξ= 0,6
3,33 KJ/g (células)

CÁLCULO DEL

FÓRMULA

-6,26 KJ/e-eq

DETERMINACIÓN DE n

n= -1

CÁLCULO DE

PM*n(células)*3,33
19,2162738 KJ/e-eq

CÁLCULO
FÓRMULA

-113,55 KJ/e-eq

CÁLCULO DE A

FÓRMULA

A= 0,41495851

CÁLCULO DE fs Y fe

FÓRMULA

0,70673451

FÓRMULA

0,29326549

29
Fuente
Aceptor
35,09 KJ/e-eq
41,35 KJ/e-eq
78,72 KJ/e-eq
ξ= 0,6
3,33 KJ/g (células)

CÁLCULO DEL

FÓRMULA

-6,26 KJ/e-eq

DETERMINACIÓN DE n

n= -1

CÁLCULO DE

PM*n(células)*3,33
13,1423825 KJ/e-eq

CÁLCULO
FÓRMULA

-120,07 KJ/e-eq

CÁLCULO DE A

FÓRMULA

A= 0,2519082

CÁLCULO DE fs Y fe

FÓRMULA

0,79878061

FÓRMULA

0,20121939

30
Fuente
Aceptor
35,09 KJ/e-eq
41,35 KJ/e-eq
72,2 KJ/e-eq
ξ= 0,6
3,33 KJ/g (células)

CÁLCULO DEL

FÓRMULA

-6,26 KJ/e-eq

DETERMINACIÓN DE n

n= -1

CÁLCULO DE

PM*n(células)*3,33
13,1423825 KJ/e-eq

CÁLCULO
FÓRMULA

-113,55 KJ/e-eq

CÁLCULO DE A

FÓRMULA

A= 0,26637268

CÁLCULO DE fs Y fe

FÓRMULA

0,78965696

FÓRMULA

0,21034304

31
4.4.- ANEXO 4
Cálculo de los rendimientos teóricos
FUENTE
ACEPTOR
0,79878061
0,20121939

FÓRMULA

0,2012

0,0503 0,2012 0,2012 0,1006

0,7988

0,1316 0,0316 0,8303 0,7988 0,0316 0,3014

0,04167 0,25 0,25 1 1

R= 0,04167 0,0316 0,0503 0,0316 0,0316 0,1184 0,1520

0,4203

32
FUENTE
ACEPTOR
0,7067
0,2933

FÓRMULA

0,2933

0,0587 0,3519 0,2933 0,0293 0,1760

0,7067

0,1294 0,0408 0,0408 0,7067 0,7067 0,0408 0,3083

0,04167 0,25 0,25 1 1

R= 0,04167 0,0408 0,0587 0,0587 0,0408 0,0408 0,1206 0,2342 0,0293

0,5438

33
FUENTE
ACEPTOR
0,7897
0,2103

FÓRMULA

0,2103

0,0421 0,2524 0,2103 0,0210 0,1262

0,7897

0,1301 0,0312 0,8209 0,7897 0,0312 0,2980

0,04167 0,25 0,25 1 1

R= 0,04167 0,0733 0,0733 0,0312 0,1199 0,0210 0,1742

0,4155

34
5.- BIBLIOGRAFÍA
(1) Biotecnología / segunda edición/ María Antonia Muños de Malajovich/ Universidad Nacional
de Quilmes/ Bernal /2012 pag 29
(2) Biotecnología y alimentación/ Gloria Morillo Ortega/ Universidad Nacional de Educación a
distancia/ Madrid/ 2013
(3) Biotecnología Panorámica de un sector/ Juan Duque/Madrid/ pag 58
(4) Medioambiente Calidad Ambiental/ Pedro Ramos Castellano/ Universidad Salamanca/
2002/pag (15-17)
(5) Biotecnología del medio ambiente, principios y aplicaciones/ McCarty &Rittmann/ editorial
S.A. MCGRAW-HILL / INTERAMERICANA DE ESPAÑA / pag( 121)
(6) Principios de Ingeniería para Bioprocesos/ Pauline M Doran/ Editorial Acribia/ 1998

35