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REVISION PRELIMINAR DE MEDIOS DE CULTIVO EMPLEADOS EN
ESTUDIOS DE MICROORGANISMOS DE LOS PHYLUMS ASCOMYCETES,
DEUTEROMYCETES Y OOMYCETES COMO AGENTES CAUSANTES DE
ENFERMEDADES EN PLANTAS
TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito parcial para optar los títulos de
Microbiólogo Agrícola y Veterinario y Microbiólogo Industrial
DIRECTORA
MARIA CLEMENCIA FORERO DE LA ROTTA
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NOTA DE ADVERTENCIA
3
RECOPILACION DE MEDIOS DE CULTIVO EMPLEADOS EN ESTUDIOS DE
MICROORGANISMOS DE LOS PHYLUMS ASCOMYCETES,
DEUTEROMYCETES, OOMYCETES COMO AGENTES CAUSANTES DE
ENFERMEDADES EN PLANTAS
APROBADO
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REVISION PRELIMINAR DE MEDIOS DE CULTIVO EMPLEADOS EN
ESTUDIOS DE MICROORGANISMOS DE LOS PHYLUMS ASCOMYCETES,
DEUTEROMYCETES, OOMYCETES COMO AGENTES CAUSANTES DE
ENFERMEDADES EN PLANTAS
APROBADO
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TABLA DE CONTENIDO
RESUMEN.................................................................................................................... 7
1. INTRODUCCION ................................................................................................... 8
2. JUSTIFICACION .................................................................................................... 10
3. MARCO TEORICO ................................................................................................. 11
3.1. LOS HONGOS FITOPATOGENOS .......................................................................... 11
3.1.1. CARACTERISTICAS GENERALES ................................................................... 12
3.1.1.1. NUTRICION Y CRECIMIENTO ....................................................................... 13
3.1.1.2. ESTRUCTURAS SOMATICAS ........................................................................ 15
3.1.1.3. REPRODUCCION.............................................................................................. 17
3.2. CLASIFICACION TAXONOMICA .............................................................................. 19
3.2.1. CLASIFICACION DE LOS HONGOS FITOPATOGENOS ............................. 20
3.2.1.1. HONGOS INFERIORES ................................................................................... 20
3.2.1.2. HONGOS SUPERIORES ................................................................................. 21
3.3. Características y estructuras de los hongos inferiores ........................................... 25
3.3.1. Phylums, Oomycetes y Zygomycetes ................................................................ 25
3.4. Características y estructuras de los hongos superiores ......................................... 25
3.4.1. Subdivisión DEUTEROMYCOTINA .................................................................... 25
3.4.2. Subdivisión ASCOMYCOTINA ............................................................................ 26
3.5.1. CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO.......................................... 26
4. OBJETIVOS ........................................................................................................ 29
4.1. Objetivo General ........................................................................................................... 29
4.2. Objetivos Específicos ................................................................................................... 29
5. METODOLOGIA.................................................................................................. 30
6. RESULTADOS .................................................................................................... 31
7. MEDIOS PARA EL AISLAMIENTO DE HONGOS A PARTIR DE SEMILLAS .... 31
8. MEDIOS PARA EL AISLAMIENTO DE HONGOS A PARTIR DE SUELO Y
AGUA ......................................................................................................................... 32
9. MEDIOS DE USO GENERAL.............................................................................. 38
10. MEDIOS SELECTIVOS ....................................................................................... 41
10.1. PHYLUM Oomycetes ........................................................................................... 42
10.2. PHYLUM Ascomycetes ...................................................................................... 52
10.3. PHYLUM Deuteromycetes .................................................................................. 58
11. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ....................................................... 79
12. BIBLIOGRAFIA ................................................................................................... 81
6
13. ANEXOS ............................................................................................................. 84
RESUMEN
7
recopilar, complementar y mantener actualizada la información sobre los
diferentes medios de cultivo que son de uso común y específicos en estudios
sobre los agentes causantes de enfermedades en las plantas.
Se espera que este documento sea el punto partida para una herramienta de
gran utilidad, tanto para el investigador, docente que se dedica al estudio de
enfermedades de cultivos de importancia económica en Colombia quienes
actúan como observadores para atender las necesidades del productor.
1. INTRODUCCION
Entre las causas principales de enfermedades en las plantas están los factores
entre otras.
8
A diferencia del trabajo con las bacterias, sólo mediante la observación directa
laboratorio.
muchos organismos no deseados que ejercen una actividad negativa sobre los
9
documento realiza una revisión bibliográfica de manera que logra compilar
económica en Colombia.
importancia económica.
2. JUSTIFICACION
10
análisis, ya que permiten el aislamiento y el cultivo de los agentes causales de
enfermedades.
orientación y que sea material de consulta sobre los medios de cultivo que
importancia en Colombia.
3. MARCO TEORICO
Los hongos y las bacterias son los dos principales grupos de organismos cuya
esas barreras y pueden atacar a plantas o animales vivos. Los hongos, con su
11
en las plantas, mientras que las bacterias, la mayoría de las cuales muestran
como patógenos de animales. Los hongos son quizá aún los fitopatógenos más
resistentes están adquiriendo una importancia similar a los virus, que rara vez
pero recuerdan a las plantas verdes ya que generalmente tienen una pared
vascular desarrollado como tienen las plantas superiores. Los hongos son
pueden ser observados con facilidad. Sus estructuras somáticas, con algunas
por crecimiento apical, lo que los diferencia de las bacterias. Estos filamentos
constituyen el micelio.
12
celulosa, pectosa, callosa, quitina, etc. los cuales pueden presentarse solos o
parte exterior de la célula, los cuales deben disolverse primero, como sucede
de los hongos conocidos, sean estos parásitos o no, son capaces de vivir sobre
Los hongos que viven sobre materia orgánica muerta y que son incapaces de
13
según prevalezca un estado u otro, y los que solo pueden vivir de protoplasma
seremos capaces de idear medios sintéticos sobre los cuales crezcan los
orgánica; otros son más estrictos en su dieta y unos pocos –los parásitos
obligados- no solo requieren protoplasma vivo para alimentarse sino que son
Las superficies de las hojas y otras partes de las plantas portan trazas de
capaces de crecer sobre estas porciones se dice que son epifilos, los cuales
Padrón, 1983).
14
Un gran número de plantas en condiciones naturales presenta esta última
sustancias minerales deficitarias en el suelo con más eficacia que las raíces de
ver muchas hifas intercelulares y micelios externos bien desarrollados que son
interior de las células como por ejemplo, Rhizoctonia sp. en las orquídeas,
masas muy ramificadas con vesículas en las células corticales más viejas
los cuales se ramifican en todas las direcciones. Cada uno de estos filamentos
es conocido como hifa, la cual es tubular y esta hecha de una pared fina,
dividen la hifa en células. Las paredes trasversales son llamadas septos. En las
por medio de un poro central. Las hifas que no tienen septos son llamadas
15
gotitas de grasa y otras inclusiones en el citoplasma. La masa de hifas que
superiores puede dar lugar a cuerdas gruesas, los rizomorfos, donde las hifas
del trabajo. Esta masa en forma de cuerda, tiene una corteza gruesa, dura y un
(Manners, 1996).
Las hifas de los hongos saprófitos se ponen en íntimo contacto con el sustrato
y obtienen los alimentos por difusión directa a través de las paredes hifales, y
16
Durante ciertos estados del ciclo de vida de muchos hongos, el micelio se
plecténquima para designar todos los tejidos fungosos y, dentro de él, existen
plantas superiores. En este tipo de tejidos fungosos las hifas han perdido su
3.1.1.3. REPRODUCCION
17
En los hongos inferiores, las esporas asexuales se forman en el interior de un
rompe esta estructura o a través de una abertura que posee. Algunas de esas
están rodeadas por una pared densa y se separan para formar clamidosporas.
sexuales en el interior del cigoto (el asca) y a esas esporas se les denomina
descubrir en ellos.
18
La fusión de los núcleos sexuales del cigoto genera un núcleo diploide (2N), las
primeras divisiones de este núcleo son de tipo meióticas, de ahí que el hongo
(Agrios, 2005).
bueno aclarar que no todo esta establecido en micología, y que las diferencias
19
interpretaciones de los datos fragmentarios de que se dispone sobre la
sobre determinados hongos; segundo, indicar, tanto como sea posible, las
(Alexopoulos, 1996).
20
Familia: Pythiaceae
Orden: Sphaeriales sp. los peritecios poseen paredes firmes y colores oscuros.
Diaporthe sp. produce el tizón de la vaina del frijol, la melanosis de los cítricos y
la pudrición del fruto de la berenjena.
21
Orden: Hypocreales. Los peritecios son de colores claros, rojos o azules.
Gibberella sp. ocasiona la pudrición del pie o tallo del maíz y de pequeños
granos.
Nectria sp. produce el cáncer del tallo y rama de los arboles. (Alexopoulos,
1996).
Orden: Dothideales sp.. Con cavidades dispuestas en una capa basal, las
cuales contienen muchas ascas. Los peritecios carecen de pseudoparafisas.
Orden: Pleosporales. Con cavidades dispuestas en una capa basal, las cuales
contienen muchas ascas. Los peritecios presentan pseudoparafisas.
Orden: Helotiales. Las ascas liberan sus esporas a través de una perforación
apical y circular. (Alexopoulos, 1996).
22
Lophodermium sp. produce el tizón de las agujas del pino.
Cytospora sp. ocasiona el cáncer del durazno y otros arboles (Valsa representa
su etapa sexual).
Marssonina sp. ocasiona el tizón de las ramas y hojas del álamo, la quemadura
de las hojas de fresa y la antracnosis de los nogales.
23
Sphaceloma sp. produce la antracnosis de la vid y de la frambuesa.
Cercospora sp. una especie de este género produce el tizón temprano del apio.
Pyricularia sp. produce el tizón del arroz y la mancha gris foliar de los
céspedes.
Sclerotium sp. produce las pudriciones de la raíz y del tallo de muchas plantas
(su etapa perfecta corresponde a Pellicularia sp.).
24
3.3. Características y estructuras de los hongos inferiores
de dos tipos, uno tipo látigo y el otro tipo pincel. Las esporas sexuales de
25
hongos no presentan conidias, ellos son Rhizoctonia y Sclerotium. El tipo de
encuentran:
26
También pueden ser necesarias algunas vitaminas y otras sustancias
2008)
usando autoclave.
medio de cultivo.
27
fácilmente sin necesidad de luz artificial o aun en plena oscuridad, pero
vegetales con calor u otro método. Aunque se usan poco, pueden ser
esporulación.
dextrosa , agar V8, agar harina de maíz, son los más usados.
28
a) Sólidos. Contienen agentes solidificantes principalmente el agar,
agente solidificante.
4. OBJETIVOS
causantes de enfermedades.
29
Determinar la composición, preparación y empleo de cada uno de
5. METODOLOGIA
manual usado como guía fue el publicado por Tuite en 1989, que incluye gran
(Buriticá, 1998) como flores, frutales, hortalizas, arroz, palma africana, caña de
30
6. RESULTADOS
patógenos específicos.
AGAR PDTA
COMPOSICION CANTIDAD
Papa-Dextosa 100 g
Tergitol 200 ppm
Neomicina 30 ppm
Agar-Agar 10 g
Agua Destilada 1L
31
AGAR TCV
COMPOSICION CANTIDAD
Agar PDA 1L
Metil Tiofanato 0.02 g
Vancomicina 0.1 g
Tween 2 ml
Preparación: Autoclavar 1 l de Agar PDA y dejarlo enfriar hasta alcanzar una
temperatura de 60°C y agregar 5 ml de la solucion de metil tiofanato,
vancomicina y 4 gotas de Tween.
AGAR GUAYACOL
COMPONENTES CANTIDAD
Guaiacol 125 g
Estreptomicina 0.5 g
Agar-agar 5.0 g
Agua 1 L
SUELO Y AGUA
32
Usado como medio selectivo para el aislamiento de Aspergillus flavus de suelo.
COMPOSICION CANTIDAD
Peptona 5g
KH2PO4 1g
NaCl 30 g
Glucosa 10 g
MgSO4 x 7 H2O 0.5 g
Agar - agar 20 g
Agua destilada 1L
COMPOSICIÓN CANTIDAD
Dextrosa 5g
KH2PO4 1g
Peptona 1g
MgSO4 x 7 H2O 0,5 g
NH4NO3 1g
Extracto de Levadura 2g
Propionato de Sodio 1g
Agar-Agar 20 g
Preparación: Disolver todos los componentes en agua destilada y calentar
suavemente hasta disolverlos por completo llevar a autoclavar por 15 min a
121°C/15 Lbs de presión, después agregar 30 mg de estreptomicina y servir.
AGAR KRIGSVOLD Y GRIFFIN
33
Medio de cultivo semiselectivo para aislamientos de Cylindrocladium spp. del
suelo.
COMPOSICION CANTIDAD
Sucrosa 10 g
KH2PO4 1 g
MgSO4.7H2O 0.5 g
Bacto oxgall 1.0 g
Peptona 15.0 g
Sulfato de estreptomicina 50.0 mg
Tetraciclina HCl 50.0 mg
Quintozene (PCNB) 75.0 mg
Agar 20.0 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Disolver la sucrosa, el oxgall, la peptona, las sales y el agar en
un litro de agua destilada. Mezclar bien, esterilizar en autoclave, posteriormente
adicionar el sulfato de estreptomicina, la tetraciclina HCI y el quintozene y servir
(Plant Dis. Rep. 59:543).
COMPOSICION CANTIDAD
K2HPO4 4g
Extracto de suelo 25 ml
KH2PO4 1.5 g
Acido poligalacturonico 10 g
Agua destilada 1L
Agar - agar 17 g
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AGAR MARTIN
Usado para el aislamiento de hongos de muestras de suelo y agua.
RB - O RB - M1
COMPONENTES
Agua destilada 1000 ml 1000 ml
Agar - agar 20 g 18 g
KH2PO4 1g 0,5 g
K2HPO4 0,5 g
MgSO4 x 7H2O 0,5 g 0,5 g
Peptona 5g 5g
Dextrosa 10 g 10 g
Extracto de levadura 0,5 g
Rosa bengala 0,033 g 0,05 g
sulfato de
estreptomicina 0,03 g 0,03 g
COMPOSICION CANTIDAD
Glucosa 5g
Extracto de levadura 2g
NaNO3 1g
MgSO4 x 7 H2O 0.5 g
KH2PO4 1g
Propionato de sodio 1g
Agar - agar 20 g
35
Agua destilada 1000 ml
Preparación: Agregar todos los componentes en agua destilada y calentar
suavemente hasta disolverlos por completo llevar a autoclavar por 15 min a
121°C/15 Lbs de presión y servir.
AGAR PCNB
Aislamiento de Fusarium spp. a partir de muestras de suelo.
COMPONENTES CANTIDADES
Peptona 15 g
KH2PO4 1,0 g
MgSO4 x 7H2O 0,5 g
Terraclor 0,5 g
Agar - agar 20 g
Clorotetraciclina HCL 50 mg
Sulfato de estreptomicina 100 mg
Preparación: Agregar todos los componentes en agua destilada y calentar
suavemente hasta disolverlos por completo llevar a autoclavar por 15 min a
121°C/15 Lbs de presión, después agregar la estreptomicina y servir.
36
AGAR SUCROSA - PEPTONA - DICLORAN
Usado para el aislamiento y recuento de Aspergillus flavus del suelo.
COMPOSICION CANTIDAD
K2HPO4 0.5 g
Peptona 0.5 g
Sucrosa 20 g
Estreptomicina 50 mg
MgSO4 x 7 H O 0.5 mg
Extracto de levadura 0.5 mg
Rosa bengala 25 mg
Agar - agar 17 g
Agua destilada 1000 ml
Preparación: Agregar todos los componentes en agua destilada y calentar
suavemente hasta disolverlos por completo llevar a autoclavar por 15 min a
121°C/15 Lbs de presión, después agregar la estreptomicina y servir. Ajustar el
pH 5.5 usando HCl 1 N o NaOH 1 N.
CALDO FRIES
Usado para aislamiento de hongos a partir de muestras de suelo
COMPONENTES CANTIDAD
Tartrato NH4 5g
NH4NO3 1g
MgSO4 x 7 H2O 0,5 g
KH2PO4 1,3 g
K2HPO4 2,6 g
Sucrosa 30 g
Extracto de levadura 1g
Solucion Stock elementos traza 2 ml
Agua destilada 1000 ml
Solucion Stock de elementos traza
37
Li Cl 167 mg
CuCl2 x H2O 107 mg
H2MoO2 34 mg
MnCl2 x 4H2O 72 mg
CoCl2 x 4H2O 80 mg
Agua destilada 1000 ml
Preparación: Agregar todos los componentes en agua destilada y calentar
suavemente hasta disolverlos por completo, luego agregar la solución de
elementos traza disolver, llevar a autoclavar por 15 min a 121°C/15 Lbs de
presión y servir.
AGAR RB-M2
Usado para aislamiento de Thielaviopsis basicola de suelo. Este medio de
cultivo se siembra casi siempre por el método de estrías en superficie, a partir
de muestras de material vegetal o muestras de suelo contaminado.
COMPOSICION CANTIDAD
Glucosa 10.0 g
Extracto de levadura 0.5 g
KH2PO4 0.5 g
Peptona 0.5 g
K2HPO4 0.5 g
MgSO4.7 H2O 0.5 g
Sulfato de estreptomicina 30.0 mg
Quintozene 500.0 mg
Nistatina 30.0 g
Agar-agar 20.0 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Disolver la peptona, la glucosa, el extracto de levadura, las
sales y el agar en un litro de agua destilada. Mezclar bien, esterilizar en
autoclave, luego añadir el sulfato de estreptomicina, el quintozene y la
nistatina, ajustar el pH 7.4 y servir (Phytophatology, 54, 1475).
38
Estos medios de cultivos son los más usados a nivel general para el
39
Fosfato de potasio (KH2PO4) 0.5 g
Sulfato de potasio penta hidratado (MgSO4.7H2O) 0.5 g
Agar 20.0 g
Agua destilada 1000 ml
40
luego usar medios que permitan el desarrollo reproductivo del microorganismo
en estudio.
COMPOSICION CANTIDAD
Papa 200 g
Dextrosa 20 g
Agar-Agar 20 g
Agua destilada 1000 ml
Preparación: Lavar las papas, cortarlas en cubos y hervirlas en agua destilada
por 10 a 20 minutos, colar, agregar el agar-agar y completar a 1 litro,
autoclavar a 121°C por 15 min a 15 lbs de presión y servir.
AGAR JUGO V8
COMPOSICION CANTIDAD
Jugo V8 200 ml
CaCO3 3g
Agar 15 g
Agua destilada 100 ml
Preparación: Agregar el jugo V8, el CaCO3, el agar-agar en el agua destilada
calentar hasta disolver completamente, autoclavar a 121°C por 15 min a 15 lbs
de presión y servir.
41
relativamente reciente presenta algunos grupos que se han mantenido unidos
Esta phylum se caracteriza por poseer unas estructuras que permiten que sean
formas de vida acuática. Otras especies han ido adquiriendo con el tiempo la
o espora sexual. Esta estructuralmente cuenta con una pared gruesa lo cual le
42
influenciada por temperatura inferiores a 12°C y humedad suficiente en el.
(Alexopoulos, J. 1996.)
AGAR REISHER
COMPOSICION CANTIDAD
Sucrosa 0.1 g
L–asparagina 0.12 g
KH2PO4 30 mg
MgSO4. 7 H2O 20 mg
CaCl2 0,56 mg
MnCl2 2,88 mg
ZnCl2 1,67 mg
FeCl2 0,10 mg
43
EDTA 11,60 mg
Tiamina HCl 0,04 mg
Endomicina 5 mg
Sulfato de estreptomicina 50 mg
Agar-agar 20 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Disolver en un litro de agua destilada la sucrosa, la asparagina,
el EDTA, la tiamina, los antibióticos y las sales. Mezclar bien y hervir,
autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión y servir. Ajustar el pH 7.4.
AGAR MRA
COMPOSICION CANTIDAD
KH2PO4 30 mg
MgSO4 .7 H2O 20 mg
MnCl2 2.68 mg
FeCl2 0.1 mg
Sucrosa 410.0 mg
Tiamina HCl 40.0 mg
K2HPO4 30.0 mg
CaCl2 0.56 mg
ZnCl2 1.67 mg
EDTA 11.0 mg
L-asparagina 120 mg
Agar-agar 20 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Disolver todos los componentes con el agar en agua destilada.
Mezclar bien, autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión y servir.
.
CALDO SCHIMITTHENNER'S.
COMPOSICION CANTIDAD
Sucrosa 2.5 g
44
KH2PO4 150.0 mg
MgSO4.7 H2O 100.0 mg
Tiamina-HCl 2.0 mg
ZnSO4.7H2O 4.4 mg
MnCl2.4H2O 0.07 mg
CaCL2 55.0 mg
FeSO4.7 H2O 1.0 mg
Asparagina 270.0 mg
Colesterol 10.0 mg
Agua destilada 1 L
Preparación: Disolver todos los componentes en agua destilada. Mezclar bien,
autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión y servir.
MEDIO 3P
COMPOSICION CANTIDADES
Extracto de Papa 5g
Agar-Agar 10 g
Pimaricina 100 ppm
Penicilina 50 ppm
45
Polimixina 50 ppm
Agua Destilada 1L
Preparación: Adicionar el extracto de papa, el agar-agar en agua destilada.
Mezclar bien, autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión, agregar los
antibioticos y servir. (Medina, FAO 2008)
MEDIO PV
COMPOSICION CANTIDADES
Extracto de Papa 5g
Agar-Agar 10 g
Pimaricina 100 ppm
Vancomicina 200 ppm
Agua Destilada 1L
Preparación: Adicionar el extracto de papa, el agar-agar en agua destilada.
Mezclar bien, autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión, agregar los
antibioticos y servir. (Medina, FAO 2008)
MEDIO BNPRA + Hymexazol
COMPOSICION CANTIDADES
PDA – Agar 1%
Benomyl (50%) 10 μg/mL
Nistatina (2000 U/mg) 25 μg/mL
PCNB 25 μg/mL
Rifampicina 10 μg/mL
Ampicillin 500 μg/mL
Hymexazol 25 ó 50 μg/mL
Preparación: Adicionar el PDA en agua destilada. Mezclar bien, autoclavar a
121°C 15 min 15 lbs de presión, agregar los antibioticos el benomyl y servir.
(Medina, FAO 2008)
MEDIOS SELECTIVOS PARA P. cinnamomi
COMPOSICION CANTIDADES
Extracto de Papa 5g
Agar-Agar 10 g
Nistatina 100 U/mL
PCNB 100 ppm
Estreptomicina 50 ppm
Rosa bengala 60 ppm
Agua Destilada 1L
Otras Concentraciones
Extracto de Papa 5g
46
Agar-Agar 10 g
Nistatina 50 ppm
Vancomicina 100 ppm
PCNB 10 ppm
Agua Destilada 1L
Preparación: Adicionar el PDA en agua destilada. Mezclar bien, autoclavar a
121°C 15 min 15 lbs. de presión, agregar los antibióticos, el PCNB y servir.
(Medina, FAO 2008)
AGAR Mc INTOSH'S
COMPOSICION CANTIDAD
KH2PO4 1 g
CaSO4.7 H2O 1 g
L–treonina 1 g
Sucrosa 20 g
MgSO4. 7 H2O 1.0 g
Tiamina HCl 0.02g
Micostatina 10.0 mg
Agar-agar 20.0 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Disolver la sucrosa, la treonina, las sales y el agar en el agua
destilada. Mezclar bien, autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión. Agregar
la tiamina HCl, DL – treonina y micostatina luego servir. La micostatina primero
deber ser disuelta en dimetil sulfoxido (DMSO) (10 ug/ml DMSO al 0.5).
AGAR FRIJOL
COMPOSICION CANTIDAD
Semillas de fríjol (Phaseolus vulgaris) 30 g
Agar 20 g
Agua 1 L
Preparación: Tomar las semillas de fríjol colocarlas en el aguas detilada a
calentar por 10 a 20 minutos, filtar con gasa y agregar el extracto de las
semillas en el litro de agua destilada con el agar, calentar hasta disolver
autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión y servir.
AGAR FRIJOL BLANCO
47
COMPOSICION CANTIDAD
Frijol blanco 50.0 g
Glucosa 2.5 g
Agar-agar 20.0 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Tomar las semillas de fríjol colocarlas en el aguas detilada a
calentar por 10 a 20 minutos, filtar con gasa y agregar el extracto de las
semillas en el litro de agua destilada con el agar y la glucosa, calentar hasta
disolver autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión y servir.
AGAR GLUCOSA–NITRATO–ESTEROL
COMPOSICION CANTIDAD
Glucosa 5.4 g
NaNO3 1.5 g
MgSO4 x 7H2O 0.5 g
KH2PO4 1.0 g
Tiamina HCl * 2.0 ml
Agar-agar 17.0 g
Esterol 0.8 g
Agua destilada 1 L
* Preparar una solución stock de 1000 ppm.
Preparación: Disolver en el agua destilada la glucosa, la tiamina, las sales, el
esterol y el agar–agar, mezclar bien, hervir hasta disolver totalmente,
autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión y servir.
AGAR HENDRIX
COMPOSICION CANTIDAD
Glucosa 5.4 g
KH2PO4 1.0 g
NaNO3 1.5 g
MgSO4.7H2O 0.5 g
Tiamina HCl 2.0 g
48
Agar-agar 17.0 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Disolver todos los reactivos en un litro de agua destilada.
Mezclar y hervir hasta disolver completamente. Ajustar el pH a 6.0. Autoclavar
a 121°C 10 min 15 lbs de presión y servir. Una vez solidificado el agar, colocar
2 ml de una solución de esterol (20 g de esterol en 2 ml de eter) y extender
sobre toda la superficie.
AGAR KLEMMER Y LENNY
COMPOSICION CANTIDAD
KH2PO4 680.0 mg
MnCl2.4H2O 0.07 mg
MgSO4.7H2O 250.0 mg
NaMoO4.2H2O 0.05 mg
CuSO4.5H20 0.08 mg
MnCl2.4H2O 0.07 mg
CaCl2 50.0 mg
ZnSO4.7H2O 4.4 mg
FeSO4.7H2O 1.0 mg
Na2HPO4.7H2O 1.34 mg
L-asparagina 708.0 mg
Tiamina HCl 100.0 mg
Glucosa 15.0 mg
Agar 15.0 g
Agua 1 L
Preparación: Mezclar todos los componentes calentando hasta disolverlos en
agua autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión, y luego adicionar 60 ml de
lípidos de aceite de germen de trigo, servir.
AGAR ASPARAGINA-ACIDO CASAMINO-PECTINA
COMPOSICION CANTIDAD
Asparagina 1 g
Acido casamino 2 g
Pectina de manzana 10 g
49
MgSO4.7 H2O 0.25 g
Extracto de levadura 5.0 g
Glucosa 25.0 g
KH2PO4 0.5 g
Tiamina HCl 0.001g
Agar-agar 20.0 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Disolver el extracto de levadura, la glucosa, la asparagina, la
tiamina HCl, la caseína, la pectina, las sales y el agar en el agua destilada.
Mezclar bien, autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión y servir.
AGAR FLOWER-HENDRIX´S
COMPOSICION CANTIDAD
NaNO3 2 g
KH2PO4 1 g
MgSO4.H2O 0.5 g
Sucrosa 30 g
Acido galico 425 mg
Quintozene 25 mg
Extracto de levadura 0.5 mg
Tiamina HCl 2.0 mg
Rosa de bengala 0.5 mg
Agar-agar 20 gr
Agua destilada 1 L
Preparación: Disolver todos los reactivos y el agar en agua destilada
calentando hasta disolverlos. Mezclar bien, autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs
de presión y servir
AGAR GARBANZO
COMPOSICION CANTIDAD
Semillas de garbanzo 250 g
Sucrosa 20 g
Agar 15 g
50
Preparación: Lavar las semillas de garbanzo (Cicer arietinum) en agua potable
por una hora, remojarlas en agua destilada de la noche a la mañana. Eliminar
el agua y triturar las semillas. Agregar 500 ml de agua y llevar a ebullición por
una hora, filtrar a través de una gasa. Separadamente disolver el agar y la
sucrosa, y añadirlos al filtrado. Ajustar el volumen a 1 litro. Mezclar bien,
autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión y servir.
AGAR HARINA DE MAIZ
COMPOSICION CANTIDAD
Agar harina de maíz 1000 ml
Piramicina 100 ppm
Penicilina G* 50 ppm
Sulfato de polimixina B 50 ppm
*Termo labil
Preparación: Disolver la harina de maíz, en un litro de agua destilada,
adicionar el agar, mezclar bien, autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión.
Disolver los antibióticos en agua destilada estéril y añadir después de
autoclavar el medio.
AGAR HENDRIX Y KUHLMAN
COMPOSICION CANTIDAD
NaNO3 2.00 g
FeSO4 0,01 g
KCI 0,50 g
MgSO4.7H2O 0.05 g
KH2PO4 1.00 g
Sucrosa 30.00 g
Extracto de levadura 0.50 g
Rosa de bengala 60.00 mg
PCNB 10.00 mg
Sulfato de estreptomicina 4.8 mg
Agar 15.00 g
Agua 1 L
Preparación: Disolver la sucrosa, el extracto de levadura, la rosa de bengala,
las sales y el agar en un litro de agua destilada. Mezclar bien, autoclavar a
51
121°C 15 min 15 lbs de presión; adicionar el PCNB, la micostatina, y el sulfato
de estreptomicina, ajustar el pH a 4.8 con acido láctico al 50%.
Los hongos que pertenecen a este phylum se reproducen por medio de ascas
como anteridio y ascogonio, los cuales llevan consigo uno o varios núcleos los
cuales se fusionan para formar un cuerpo fructífero. Este cuerpo fructífero está
conformado por pequeños sacos los cuales tienen en su interior las ascosporas
que caracterizan este phylum. Las formas más comunes de los cuerpos
(Alexopoulos, J. 1996.)
AGAR LEONIAN
COMPOSICION CANTIDAD
Peptona 0.625 g
52
Maltosa 6.25 g
Extracto de malta 6.25 g
KH2PO4 1.25 g
MgSO4.7 H2O 0.625 g
Agar-agar 20.0 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Agregar todos los componentes y el agar-agar en el agua
destilada calentar hasta disolver completamente, autoclavar a 121°C 15 min 15
lbs de presión y servir.
GENERO: Botryotinia
MEDIO DE CRECIMIENTO Botryotinia fuckeliana
COMPOSICION CANTIDAD
Arveja Verde 160 g
Sacarosa 5g
Agar-agar 15g
Disolver los componentes en 1 L de Agua Destilada.
Preparación: Disolver todos los componentes en agua destilada. Mezclar bien,
autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión y servir. (Hilber, Maja, 1998)
COMPOSICION CANTIDAD
Jugo de Zanahoria 50 ml
Agar-agar 18g
Agua Destilada 1L
53
COMPOSICION CANTIDAD
Glucosa 15 g
KNO3 0.5 g
MgSO4.7H2O 0.5 g
KH2PO4 1.0 g
Extracto de levadura 0.5 g
Tergitol 1.0 ml
Tiabendazol 1.0 g
Cloranfenicol 100.0 mg
Clorotetraciclina 40.0 mg
Agar-agar 15.0 g
Agua destilada 1 L
Preparación: disolver la glucosa, extracto de levadura, las sales y el agar en
un litro de agua destilada. Mezclar bien, esterilizar en autoclave, dejar enfriar
(50°C-45°C), y añadir el tergitol, el tiabendazol, el cloranfenicol y la
clorotetraciclina (Phytophatology, 66, 1255).
GENERO: Ceratocystis
AGAR MALTOSA–ACIDO CASAMINO
Para cultivar e inducir la esporulación de Ceratocystis fagacearum (anamorfo,
Chalara quercina).
COMPOSICION CANTIDAD
Maltosa 5.0 g
Acido casamino 1.0 g
KH2PO4 1.0 g
MgSO4.7H2O 0.5 g
FeSO4 0.2 mg
MnSO4 0.2 mg
ZnSO4 0.2 mg
Biotina 0.5 µg
Agua 1 L
54
Preparación: Agregar todos los componentes y el agar-agar en el agua
destilada calentar hasta disolver completamente ajustar el pH entre 5.2-6.5,
autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión y servir.
AGAR RB-M2
COMPOSICION CANTIDAD
Glucosa 10.0 g
Extracto de levadura 0.5 g
KH2PO4 0.5 g
Peptona 0.5 g
K2HPO4 0.5 g
MgSO4.7 H2O 0.5 g
Sulfato de estreptomicina 30.0 mg
Quintozene 500.0 mg
Nistatina 30.0 g
Agar-agar 20.0 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Disolver la peptona, la glucosa, el extracto de levadura, las
sales y el agar en un litro de agua destilada. Mezclar bien, esterilizar en
autoclave, luego añadir el sulfato de estreptomicina, el quintozene y la
nistatina, ajustar el pH 7.4 y servir.
COMPOSICION CANTIDAD
Cicloheximida 200 ppm
Sulfato de estreptomicina 10 ppm
PDA 20 g
Agar-agar 10 g
Agua destilada 1L
Preparación: Agregar todos los componentes a excepción de los antibióticos
en el agua destilada calentar hasta disolver completamente ajustar el pH entre
55
5.2-6.5, autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión, agregar los antibióticos y
servir.
GENERO: Diaporthe
MEDIO DE AISLAMIENTO
COMPOSICIÓN CANTIDAD
Malta 1%
Cloranfenicol 0,1 %
Agar-agar 1,5 %
Preparación: Agregar todos los componentes y el agar-agar en el agua
destilada calentar hasta disolver completamente, autoclavar a 121°C 15 min 15
lbs de presión y servir. ( Lesage, et.al, 2002).
GENERO: Glomerella
56
Sulfato de magnesio heptahidratado (MgSO4.7H2O) 0.75g
Agar 20.0 g
Água destilada 1000 ml
Preparación: Agregar todos los componentes y el agar-agar en el agua
destilada calentar hasta disolver completamente, autoclavar a 121°C 15 min 15
lbs de presión y servir.
GENERO: Nectria
AGAR GLUCOSA–ISOLEUCINA
COMPOSICION CANTIDAD
Glucosa 10 g
L-isoleucina 20 g
KH2PO4 5 g
MgSO4 .7H2O 0.75 g
Agar-agar 20 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Disolver la glucosa, el agar y las sales en un litro de agua
destilada. Mezclar bien, ajustar el pH a 5.5, autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs
de presión y servir.
GENERO: Venturia
AGAR INFUSIÓN DE MANZANA
COMPOSICION CANTIDAD
Dextrosa 5 g
Papa 40 g
Tallos de manzana al vapor 450 ml
Agar-agar 17 g
Agua destilada 550 ml
Preparación: Disolver todos los componentes en agua destilada calentando
hasta disolver completamente, autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión y
servir. Incubar a una temperatura entre 16–26°C por espacio de 10 a 14 días,
posteriormente pasar a refrigerar a 8 °C, hasta que los peritecios maduren
(generalmente cerca de 3-4 meses).
57
10.3. PHYLUM Deuteromycetes
ORDEN Moniliales
Esta conformado por mas de 7000 especies y son de gran importancia por ser
GENERO: Acroclylindrium
58
Agar-Agar 10 g
pH 5.6
Preparación: Agregar todos los componentes y el agar-agar en el agua
destilada calentar hasta disolver completamente ajustar el pH entre 5.2-6.5,
autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión y servir. Incubar a 30°C por 72
Horas. (H. Kimura et.al, 1973)
GENERO: Alternaria
59
INDREDIENTES CANTIDAD
Hojas de zanahoria 300 g
Agar 12 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Triturar finamente las hojas, mezclar con medio litro de agua
destilada, hervir por una hora y filtrar a través de gasa, adicionar el filtrado al
otro medio litro agua, junto con el agar disuelto; ajustar volumen a 1 L
autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión y servir. (Xue, 2006)
60
Agua destilada 1 L
Preparación: Disolver la caseína hidrolizada, el extracto de levadura, glicerol,
el sorbitol, las sales y el agar en un litro de agua destilada calentando
constantemente. Mezclar bien, esterilizar en autoclave a 121°C 15 min 15 lbs
de presión y servir.
61
Medio X: Disolver en un litro de agua las sales, la dextrosa, la peptona, la
caseína hidrolizada, la levadura y el agar-agar; mezclar y hervir hasta disolver
completamente, esterilizar en autoclave a 121°C 15 min 15 lbs de presión.
Medio Y: Disolver en un litro de agua las sales, la dextrosa, la peptona y el
agar-agar; mezclar y hervir hasta disolver completamente, pasar por autoclave
a 121°C 15 min 15 lbs de presión.
AGAR-BOTRYTIS
COMPOSICION CANTIDAD
Extracto de levadura 2.5 g
Extracto de malta 7.5 g
Caseína hidrolizada 0.25 g
Sodio 0,01 g
Microelementos * 1.00 ml
Caldo Czapec-Dox 35.0 g
Agar 15.0 g
Agua destilada 1 L
*Solución de Microelementos:
Fe(NO3).9H2O 723.5 mg
ZnSO4.4H2O 203.0 mg
H3BO3 2.0 mg
H3MoO3 2.0 mg
Sulfato de cobre (CuSO4) 2.0 mg
Agua destilada 1 L
Preparación: Agregar todos los componentes y el agar-agar en el agua
destilada calentar hasta disolver completamente agregar por ultimo la solución
de micronutirentes, autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión y servir.
AGAR EB
COMPOSICION CANTIDAD
Salvado de arroz 20 g
Sucrosa 5 g
Agar-agar 20 g
62
Agua destilada 1 L
Preparación: Agregar todos los componentes y el agar-agar en el agua
destilada calentar hasta disolver completamente, autoclavar a 121°C 15 min 15
lbs de presión y servir.
GENERO: Cladosporium
AGAR Sabouraud Dextrosa + Glucosa
COMPOSICION CANTIDAD
Dextrosa 40 g
Glucosa 40 g
Peptona de Caseína 5g
Digerido Pancreático de Tejido Animal 5g
Agar Bacteriológico 15 g
GENERO: Cylindrocladium
AGAR GLUCOSA-EXTRACTO DE LEVADURA
COMPOSICION CANTIDAD
Glucosa 15 g
KNO3 0.5 g
MgSO4.7H2O 0.5 g
KH2PO4 1.0 g
Extracto de levadura 0.5 g
Tergitol 1.0 ml
Tiabendazol 1.0 g
Cloranfenicol 100.0 mg
Clorotetraciclina 40.0 mg
Agar-agar 15.0 g
Agua destilada 1 L
Preparación: disolver la glucosa, extracto de levadura, las sales y el agar en
un litro de agua destilada. Mezclar bien, esterilizar en autoclave, dejar enfriar
(50°C-45°C), y añadir el tergitol, el tiabendazol, el cloranfenicol y la
clorotetraciclina (Phytophatology, 66, 1255).
63
GENERO: Fusarium sp.
AGAR JOFFE
COMPOSICION CANTIDAD
64
KH2PO4 1.0 g
MgSO4.7H2O 0.5 g
KNO3 1.0 g
KCI 0.5 g
Almidón en polvo 0.2 g
Sucrosa 0.2 g
Glucosa 0.2 g
Agar 15.0 g
Agua 1 L
Preparación: Disolver todos los componentes en agua destilada calentando
hasta disolverlos completamente, autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión
y luego servir.
65
NaNO3 2 g
KH2PO4 1 g
MgSO4.7 H2O 0.5 g
K2S2O5 0.3 g
Galactosa 10 g
Agar-agar 15 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Disolver la galactosa, sales y agar en un litro de agua destilada.
Mezclar bien, autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión y servir.
AGAR KOMADA
COMPOSICION CANTIDAD
66
K2HPO4 1.0 g
KCL 0.5 g
MgSO4.7H2O 0.5 g
F3Na EDTA 0.01g
L-asparagina 2.0 g
D-galactosa 20.0 g
Agar 15.0 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Diluir los COMPOSICION en agua, autoclavar a 121°C 15 min 15
lbs de presión y dejar enfriar entre 45 y 50 °C. Añadir los siguientes
COMPOSICION:
PCNB (75%) 1 g
Bilis de bovino (Oxgall) 0.5 g
Na2B4O7.10H2O 1.0 g
Sulfato de estreptomicina 0.3 g
Ajustar el pH a 3,8 con una solución de ácido fosfórico al 10%.
COMPOSICION CANTIDAD
Lactosa 37.5 g
Caseína hidrolizada 3.0 g
MgSO4.7H2O 0.5 g
Microelementos* 2.0 ml
Agar-agar 15.0 g
Agua destilada 1 L
* Solución común
67
COMPOSICION CANTIDAD
ZnSO4.7H2O 439.8 mg
Fe(NO3).9H2O 723.5 mg
MnSO4 x 4H2O 203.0 mg
Preparación: Antes de añadir los microelementos ajustar el pH a 6.0. Disolver
cada una de las sales en forma individual en el agua, agregar la lactosa, la
caseína hidrolizada, 2 ml de la solución de microelementos y finalmente el
agar-agar. Autoclavar a 121°C por 15 min a 15 lbs de presión. Para que la
solución se aclare, agregar H2SO4, gota por gota, mientras se disuelve la
solución.
CALDO LUKENS–SISLER
Para inducir la esporulación de Helminthosporium vagans y Alternaria solani.
COMPOSICION CANTIDAD
Glucosa 20.0 g
Sulfato de amonio 3.0 g
Sulfato de Magnesio 0.25 g
Fosfato monobásico de potasio 3.0 g
Glicina 1.0 g
Biotina 1.0 mg
Piridoxin 10.0 mg
Acido fólico 10.0 mg
Boro 0.01 ppm
Mn 0.01 ppm
Zn 0.07 ppm
Cu 0.001 ppm
Mo 0.001 ppm
Fe 0.05 ppm
Agua destilada 1 L
68
GENERO: Phialophora
MEDIO SM
COMPOSICION CANTIDAD
Glucosa 5g
Peptona 5g
NaH2PO4 1g
MgSO4 0,5 g
PCNB 0,5 g
Na2B4O7·10H2O 0,5 g
Estreptomicina 0,2 g
Tetraciclina 0,5 g
69
Agar- Agar 20 g
AGAR FITONA–DEXTROSA
COMPOSICION CANTIDAD
Fitona (BBL) 15.0 g
Extracto de levadura 1.0 g
Dextrosa 15.0 g
Agar-agar 17.0 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Disolver los compuestos y el agar en un litro de agua destilada.
Mezclar bien, hervir, esterilizar en autoclave a a 121°C 15 min 15 lbs de presión
y servir. (Hernandez, 2006)
ORDEN Melanconiales
GENERO: Colletotrichum
AGAR NEOPEPTONA–GLUCOSA
COMPOSICION CANTIDAD
Glucosa 2.80 g
Neopeptona 2.00 g
KH2PO4 2.72 g
70
MgSO4.7H2O 1.23 g
Agar 20.00 g
Agua 1 L
Preparación: Agregar todos los componentes y el agar-agar en el agua
destilada calentar hasta disolver completamente ajustar el pH entre 5.2-6.5, La
glucosa puede ser reemplazada por galactosa, sucrosa o xilosa, autoclavar a
121°C 15 min 15 lbs de presión y servir. (Sugar, 2006)
AGAR ALFALFA
COMPOSICION CANTIDAD
Hojas de alfalfa 150.0 g
Dextrosa 10.0 g
Agar-agar 12.0 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Hervir las hojas de alfalfa, colar, agregar los demás
componentes y el agar-agar en el agua destilada calentar hasta disolver
completamente, autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión y servir. (Moral,
2009)
AGAR EXTRACTO CASCARAS DE MANI
COMPOSICION CANTIDAD
Cascaras de maní 180 g
Agar 20 g
Agua 1 L
Preparación: Calentar las cascaras de maní por 10 minutos en 1700 ml de
agua potable, filtrar a través de una gasa, llevar el volumen a un litro de agua,
agregar el agar, mezclar y hervir, autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión y
servir.
AGAR FRIJOL VERDE
COMPOSICION CANTIDAD
Frijol verde 400 g
Agar-agar 20 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Disolver los frijoles en 500 ml de agua destilada, cocinar hasta
obtener un extracto, filtrar en varias capas de gasa; obtener el filtrado y agregar
71
el agar, llevar el volumen a un litro con agua destilada. Mezclar bien, esterilizar
en autoclave a 121°C 15 min 15 lbs de presión y servir. (Moral, 2009)
AGAR JUGO DE ZANAHORIA
COMPOSICION CANTIDAD
Jugo de zanahoria 125-750 ml
Estreptomicina o penicilina 100 mg
Agar 15 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Disolver en el jugo de zanahoria y el Agar-agar en el litro de agua.
Ajustar el pH entre 5.1 ± 5.5. Mezclar bien, esterilizar en autoclave a 121°C 15
min 15 lbs de presión, agregar la penicilina disolverla y servir
AGAR GLUCOSA–PEPTONA
COMPOSICION CANTIDAD
Glucosa 10.0 g
Bacto peptona 2.0 g
MgSO4.7H2O 0.5 g
KH2PO4 0.5 g
Agar 15.0 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Disolver la glucosa, la peptona bacteriológica, las sales y el agar
en el agua destilada, mezclar bien, esterilizar en autoclave a 121°C 15 min 15
lbs de presión y servir.
ORDEN Sphaeropsidales
pared interna del picnidio, produciendo los conidios en el ápice. (Marchin, 1991)
GENERO: Ascochyta
72
Medio para Crecimiento de Ascochyta lentis
COMPOSICION CANTIDAD
Harina de Lenteja 2g
Dextrosa 2g
Agar-Agar 2g
Agua Destilada 1L
Preparación: Agregar todos los componentes y el agar-agar en el agua
destilada calentar hasta disolver completamente ajustar el pH entre 5.2-6.5,
autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión y servir. Incubar a 30°C por 72
Horas.
MEDIO PARA CRECIMIENTO DE Ascochyta fabae
COMPOSICION CANTIDAD
Harina de frijol 2g
Dextrosa 2g
Agar-Agar 2g
Preparación: Agregar todos los componentes y el agar-agar en el agua
destilada calentar hasta disolver completamente ajustar el pH entre 5.2-6.5,
autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión y servir.
GENERO: Botryodiplodia
73
Medio para la esporulación de Botryodiplodia theobromae
COMPOSICION CANTIDAD
Sucrosa 20 g/l
K2HPO4 1g/l
NaNO3 3g/l
MgSO4.7H2O 0,5 g/l
Preparación: Agregar todos los componentes y el agar-agar en el agua
destilada calentar hasta disolver completamente ajustar el pH entre 5.2-6.5,
autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión y servir. (Ekundayo, 1973)
GENERO: Cytospora
MEDIO SINTETICO
COMPOSICION CANTIDADES
Dextrosa 10 g
L-asparagine, 2g
KH2PO4 1g
MgSO4.7H20 0.5 g
FeCl3 0.2 mg
ZnSO4 0.2mg
Mn2+ 0.1 mg
Biotina 5 µg
Tiamina 100 µg
Agar 20 g
Preparación: Disolver todos los componentes en agua destilada. Mezclar bien,
autoclavar a 121°C 20 min 10 lbs de presión y servir.( Helton, Konicek, 1962)
GENERO: Phoma
AGAR Phoma betae
COMPOSICION CANTIDAD
K2HPO4 4 g
KH2PO4 1.5 g
Extracto de suelo 25 ml
74
Sucrosa 10 g
Acido bórico 100 mg
Estreptomicina 100 mg
Clorotetraciclina 100 mg
Benomyl 100 mg
Agar-agar 20 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Disolver el extracto de suelo, la sucrosa, las sales y el agar en
un litro de agua destilada. Mezclar bien, ajustar el pH usando HCl a 6,5 y
esterilizar en autoclave. Añadir después de enfriar el acido bórico, la
estreptomicicna, la clorotetraciclina y el benomyl (Phytophatology 64, 706).
GENERO: Pyrenochaeta
AGAR VERDE DE MALAQUITA–CAPTAN
COMPOSICION CANTIDAD
NaNO3 20.0 g
MgSO4.7H2O 0.50 g
FeSO4 0,01 g
K2HPO4 1.00 g
KCI 0,5 g
Sucrosa 30,0 g
Agar 20.0 g
Pasar por autoclave, dejar enfriar entre 45-50°C y adicionar:
Verde de malaquita 50 mg
Sulfato de estreptomicina 50 mg
Penicilina G 5 mg
Preparación: Disolver los componentes en el agua destilada calentando hasta
disolverlos a excepción del verde malaquita y los antibióticos, autoclavar
esterilizar en autoclave a 121°C 15lbs de presión por 15 minutos agrgar los
demás componentes, disolver y servir. (Plant Dis. Rep. 49:114; Phytopathology
56:908).
75
GENERO: Septoria
AGAR ESN
COMPOSICION CANTIDAD
Sucrosa 20 g
MgSO4.7 H2O 0.5 g
Zn 0.2 mg
Mn 0.1 mg
Agar-agar 20.0 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Agregar todos los componentes y el agar-agar en el agua
destilada calentar hasta disolver completamente, autoclavar a 121°C 15 min 15
lbs de presión y servir.
GENERO: Sordaria
AGAR EXTRACTO DE LEVADURA–PAPEL DE FILTRO
COMPOSICION CANTIDAD
Extracto de levadura 4 g
Agar-agar 24 g
Papel de filtro 12 g
Agua 1 L
Preparación: Disolver el papel de filtro en agua potable, el extracto de
levadura y el agar-agar. Mezclar y hervir hasta disolver completamente los
componentes, autoclavar a 121°C 15 min 15 lbs de presión y servir.
GENERO: Stigmina
AGAR MELOCOTÓN
COMPOSICION CANTIDAD
Melocotón 200 g
Agar 40 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Homogenizar el melocotón (Prunus persica), adicionar el agua
destilada, el agar-agar, mezclar bien y esterilizar en autoclave a 121°C 15lbs de
presión por 15 minutos y servir.
76
GENERO: Verticillium
AGAR ALCOHOL
COMPOSICION CANTIDAD
Etanol Absoluto 0,5 ml
Estreptomicina 100 ppm
Agar-agar 7.5 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Autoclavar a 15 lbs de presión, 15 minutos a 121°C el agua
destilada con el agar- agar disuelto, después de autoclavar a una temperatura
de 40°C agregar 0.5 ml de etanol absoluto y la estreptomicina, servir. Ajustar el
pH 7.4.
AGAR GLUCOSA–SAL MINERAL
COMPOSICION CANTIDAD
Glucosa 60.0 g
KH2PO4 1.0 g
MgSO4.7H2O 0.5 g
MnSO4.H2O 0,5 mg
Na2MoO4.2H2O 10.0 µg
KNO3 2.00 g
K2HPO4 0.90 g
ZnSO4.7H2O 0.5 g
CuSO4.5H2O 0.16 g
Agar-agar 20.0 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Disolver la glucosa, las sales y el agar en el agua destilada,
mezclar bien, esterilizar en autoclave a 121°C por 15 min y 15 Lbs de presión y
servir (Can. J. Bot. 50:2097).
ORDEN Agonomycetales
géneros de este orden más conocidos son Rhizoctonia sp. y Sclerotium sp., los
77
cuales tienen amplia distribución. Rhizoctonia sp. es comúnmente encontrado
GENERO: Rhizoctonia
AGAR RHIZOCTONIA
COMPOSICION CANTIDAD
K2HPO4 1 g
KCl 0.5 g
NaNO2 0.2 g
MgSO4.7H2O 0.5 g
FeSO4 .7H2O 10 mg
Fenaminoulf 90 mg
Cloranfenicol 50 mg
Estreptomicina 50 mg
Acido gálico 0.4 g
Agua destilada 1 L
Agar-agar 20 g
Preparación: Disolver las sales y el acido gálico y el agar en el litro de agua
destilada. Mezclar bien, esterilizar en autoclave a a 121°C 15 min 15 lbs de
presión, dejar enfriar y añadir el fenaminoulf, el cloranfenicol y la
estreptomicina.
78
Levadura 0.1 g
Suelo 1 lb
Agar-agar 25.0 g
Agua destilada 1 L
Preparación: Mezclar el suelo con un litro de agua potable y mantenerla en
agitación por uno o dos días; filtrar a través de varias capas de gasa y llevar el
volumen a un litro de agua. Agregar la sucrosa, la levadura, el KH 2PO4 y el
agar–agar. Mezclar y hervir hasta disolver completamente, pasar por autoclave
a a 121°C 15 min 15 lbs de presión y servir.
AGAR LUTZ
COMPOSICION CANTIDAD
Extracto de malta 10.0 g
Nitrato de amonio 1.0 g
Fosfato de amonio 1.0 g
Sulfato de magnesio 0.5 g
Sulfato férrico 0.1 g
Sulfato de manganeso 0.025 g
Agar-Agar 25.0 g
Agua 1 L
Preparación: Agregar todos los componentes y el agar-agar en el agua
destilada calentar hasta disolver completamente, autoclavar a 121°C 15 min 15
lbs de presión y servir.
CONCLUSIONES
79
• Las revisiones de los medios encontrados en las referencia
vegetales.
RECOMENDACIONES
80
provenientes de trabajos de investigación provenientes de universidades
cuando sea del caso, los medios antiguos por nuevos sustratos.
forestales.
12. BIBLIOGRAFIA
Mengistu, A., Tachibana, H., and Grau, C. R. 1991. Selective medium for
81
isolation and enumeration of Phialophora gregata from soybean straw
and soil. Plant Dis. 75:196-199.
82
resistance response of Peruvian apple cactus against Glomerella
cingulata. Phytopathology 92:964-969.
Moral, J., Oliveira, R., and Trapero, A. 2009. Elucidation of the disease
cycle of olive anthracnose caused by Colletotrichum acutatum.
Phytopathology 99:548-556.
83
Departamento de Parasitología Rama de Fitopatología Universidad
Autonoma De Sinaloa Escuela Superior De Agricultura Del Valle Del
Fuerte Sinaloa (2008), Disponible en: <
http://www.slideshare.net/jloveuas/manual-micologia> Consulta en
Línea: 11 de Diciembre de 2010.
13. ANEXOS
1. Acrocylindrium
2. Alternaria
3. Armillaria
4. Armillariella
5. Ascochyta
6. Asperisporium
7. Athelia
8. Bipolaris (Helminthosporium, Dreshlera)
9. Botryodiplodia
10. Botryosphaeria
11. Botryotinia
12. Botrytis
13. Ceratocystis
14. Ceratostomella (Thielaviopsis)
15. Cercospora
16. Chalara (Ceratostomela)
17. Cladosporium
18. Colletotrichum
19. Coniothyrium
20. Corticium
21. Corynespora
22. Coryneum
23. Crinipellis
24. Cytospora
25. Dematophora
26. Diapleella
27. Diaporthe
84
28. Didymella (Mycosphaerella)
29. Diothiorella
30. Diplodia
31. Diplotheca
32. Drechslera (Helminthosporium)
33. Elsinoe
34. Endothia
35. Entosmosporium
36. Fusarium
37. Fusicladium
38. Ganoderma
39. Geotrichum
40. Gibberella
41. Gloeosporium (Colletotrichum)
42. Glomerella
43. Helminthosporium (Dresclalera, Bipolaris)
44. Heterosporium (Cladosporium)
45. Irene
46. Isariopsis
47. Leptosphaeria
48. Leptosphaerulina
49. Macrophoma
50. Macrophomina
51. Magnaporthe
52. Marasmius
53. Microcyclus
54. Microdochium
55. Monilia
56. Monilinia
57. Moniliophthora
58. Mycena
59. Nectria
60. Paracercospora
61. Paraphaeosphaeria
62. Pellicularia (Thanetephorus-Corticium)
63. Phaeoisariopsis
64. Phialophora
65. Phoma
66. Phomopsis
67. Phyllachora
68. Phyllosticta (Phoma)
69. Phytophthora
70. Pseudocercospora (Cercospora)
71. Pythium
72. Ramularia
73. Rhizoctonia
74. Rosellinia
75. Sordaria
85
76. Sclerotinia
77. Sclerotium
78. Sphaceloma
79. Sphaeropsis
80. Spilocaea (Fusicladium)
81. Stevensea
82. Thielaviopsis (Ceratocystis)
83. Venturia (Ramularia-Fusicladium)
86