UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL

SIEMBRA DE MICROORGANISMOS

SEGUNDO LABORATORIO DEL CURSO MICROBIOLOGIA AMBIENTAL BO-112

ESPINOZA QUIÑONES FRANKLIN-20171233D

SANCHEZ CHAVEZ MIGUEL- 20174535A

DE LA CRUZ OSORIO DANIEL -20172621H

DOCENTE: MSc. Blgo. ALVARO MARTÍN MARTÍNEZ VILA

Lima, Perú
27 de abril de 2018
1. RESUMEN
Para efectuar el estudio de los microorganismos, se han diseñado diversos métodos
que permiten cultivarlos bajo condiciones artificiales, en los que es posible
cultivarlos bajo condiciones experimentales y manejar un solo tipo de
microorganismo. Una de las técnicas más usadas en el laboratorio de microbiología
consiste en transferir una muestra microbiológica de un ambiente determinado a un
medio de cultivo, lo que permite obtener cultivos microbianos. Al efectuar este
procedimiento, es necesario considerar que, en el área de trabajo, existen muchos
otros microorganismos debido a esto, es necesario tomar precauciones para impedir
que éstos penetren y contaminen los cultivos en estudio.
2. INTRODUCCION
La técnica más usada en el laboratorio de microbiología es probablemente la
transferencia de microorganismos de un ambiente a otro con el propósito de
cultivarlos. Una vez que el medio de cultivo está debidamente preparado se procede
a inocular la muestra deseada. Si se desea aislar o separar los diferentes tipos
microbianos que se encuentran en una muestra (agua, materias primas, alimentos,
etc.) se pueden utilizar distintas técnicas de siembra. Sembrar o inocular es
introducir artificialmente una porción de la muestra (inóculo) en un medio de cultivo
adecuado con el fin de iniciar un cultivo microbiano; y se realizan diferentes
metodologías de acuerdo al fin que se persiga. Luego de sembrado, el medio de
cultivo se incuba a una temperatura adecuada para el crecimiento.
Dependiendo del estado físico del medio de cultivo (líquido, sólido o semisólido) la
siembra se puede realizar con: ansa en anillo, ansa en punta, varilla de vidrio
(espátula de Drigalsky), hisopo o pipeta estéril.
3. OBJETIVO GENERAL

Aprender las técnicas de siembra en medios de cultivos dispensados en tubos y en

placas Petri.
Objetivos específicos:
 Aprender a sembrar en medios de cultivo sólidos y líquidos.
 Reconocer la importancia del plaqueado y el flameado durante el proceso de
siembra.
 Aplicar la técnica adecuada para preparar el área de trabajo y evitar
contaminaciones.
4. MARCO TEORICO
Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo)
en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su
desarrollo y multiplicación. Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a una
temperatura adecuada para el crecimiento.
Las reglas fundamentales para efectuar la siembra exigen:
 Que se efectúen asépticamente
 Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estén esterilizados
 Que se realicen solo los manipuleos indispensables
 Que se trabaje fuera de toda corriente de aire. De ser posible utilizando un
mechero o bien Flujo laminar.
SIEMBRA EN MEDIOS SÓLIDOS:

Se realiza en tubos de ensayo o en placas de Petri, tiene distintos usos, según el

objetivo del cultivo a realizar.

Siembra en picadura o punción

Se introduce el ansa en punta con el

inóculo en un tubo conteniendo agar en
columna, sin tocar las paredes del tubo
y en forma paralela asegurándose que
el inóculo quede distribuido a lo largo de
toda la punción. Se retira el ansa y se
quema. Esta técnica permite conocer el
comportamiento de los
microorganismos frente al oxígeno y su
movilidad.

Siembra en estrías

Se toma el material con ansa en anillo y

se siembra en estrías en un tubo que
contiene agar pico de flauta o agar
inclinado, respetando las indicaciones
señaladas anteriormente. Esta técnica
constituye un medio adecuado para el
cultivo de microorganismos aerobios y
aerobios facultativos.

Siembra por agotamiento en estrías

Con el ansa en anillo cargada de material se realiza una serie de estrías paralelas
no superpuestas, sobre una tercera parte de la superficie de la placa de Petri
conteniendo el medio de cultivo. Se esteriliza el ansa y se efectúan una serie de
estrías en dirección perpendicular a la anterior, comenzando en la zona donde
termina la última estría. Este procedimiento se repite varias veces.

El esterilizar el ansa de siembra disminuye la cantidad de microorganismos que se

extiende en una superficie determinada. Una vez inoculadas las placas se incuban
en estufa durante 24 – 48 h, a la temperatura adecuada según el microorganismo
a cultivar. Utilizando esta metodología de siembra se obtienen colonias aisladas
en las últimas estrías, separadas unas de otras, permitiendo a partir de las mismas
la obtención de cultivos puros mediante resiembra en otro medio de cultivo.

Siembra con espátula de Drigalsky

Se pipetea un volumen de inóculo

(generalmente 0,1 ml) y se deposita
sobre la superficie de la placa de Petri
que contiene el medio de cultivo
solidificado. Con una espátula de
Drigalsky estéril (previamente embebida
en alcohol, flameada y enfriada) se
disemina la muestra por toda la
superficie, efectuando movimientos de
rotación hasta su completa absorción.

Esta técnica permite sembrar inóculos sobre superficies grandes, para obtener un
crecimiento confluente que nos permite estudiar el efecto de antimicrobianos
(antibióticos, antisépticos, desinfectantes, etc.). También se utiliza para realizar
recuento de colonias; para cumplir con este último objetivo, previamente se deben
realizar diluciones seriadas de la muestra.

SIEMBRA EN MEDIOS LÍQUIDOS:

Se lleva el material con ansa en anillo o

pipeta a un recipiente (frasco Erlenmeyer
o tubo) conteniendo el medio de cultivo
líquido.

Generalmente este tipo de siembra se

utiliza para aumentar el número de
microorganismos.

El crecimiento se observa por la turbidez

del medio, por la formación de velo o
película superficial, o por acumulación de microorganismos en el fondo del tubo
5. RESULTADOS
Por medio de esta práctica se logró utilizar las técnicas aprendidas durante el
transcurso del curso, además aprender a realizar algunos de los métodos que
existen para cultivar bacterias y de esta manera observar sus características tanto
macroscópicas como microscópicas e interpretación de las mismas, con lo que se
observó que para cada bacteria existen características diferentes que son las que
las identifican y diferencian de otras bacterias, por lo que de esta manera se le
puede llegar a identificar con su correcta siembra y observación para análisis
posteriores o simplemente para la identificación de una bacteria en algún medio u
organismo.
6. CONCLUSIONES
7. RECOMENDACIONES
8. FUENTE DE INFORMACION
9. ANEXO