AGARGRANULADO
Recuento total en alimentos (FIL, IDF, AOAC, APHA, ICMSF, UNE 34-
553:1983, ISO 2293:1983, UNE-EN ISO 4833:2003)
Composición
Triptona 5,00 g
Extracto de levadura 2,50 g
Glucosa 1,00 g
Agar-agar 15,00 g
(Fórmula por litro)
pH final: 7.0 ± 0,2
Preparación
Fundamento
En el medio de cultivo, las peptonas,
aportan los nutrientes necesarios para
el desarrollo bacteriano, la lactosa es el
hidrato de carbono fermentable, y la
mezcla de sales biliares y el cristal
violeta son los agentes selectivos que
inhiben el desarrollo de gran parte de la
flora Gram positiva.
Por fermentación de la lactosa,
disminuye el pH alrededor de la colonia.
Esto produce un viraje del color del
indicador de pH (rojo neutro), la
absorción en las colonias, y la
precipitación de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores
de lactosa producen colonias incoloras.
Siembra
- Sembrar en superficie.
- Utilizando la técnica de Pour Plate: sembrar 1 ml de muestra y
agregar aproximadamente 15 ml de medio de cultivo fundido y enfriado
a 45-50 ºC.
Incubación
Durante 18-48 horas, a 35-37 ºC, en atmósfera aeróbica
Resultados
Microorganismos Colonias
Escherichia coli ATCC 25922 Rojas con halo turbio
Klebsiella pneumoniae ATCC
Rosadas mucosas
700603
Salmonella typhimurium ATCC Incoloras,
14028 transparentes
Incoloras,
Shigella flexneri ATCC 12022
transparentes
Incoloras,
Proteus mirabilis ATCC 43071
transparentes
Enterococcus faecalis ATCC Diminutas, incoloras,
29212 opacas
Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.
Presentación
x 100g :Código: B02-114-05 x 500g :Código: B02-114-06
MUELLER HINTON AGAR
Fundamento
El Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), ex National
Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), recomendó su
uso en forma rutinaria para la realización del antibiograma en medio
sólido, debido a una serie de factores que se detallan a continuación:
presenta buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de
sensibilidad, su contenido en inhibidores de sulfonamidas,
trimetoprima y tetraciclina es bajo, la mayoría de los patógenos crece
satisfactoriamente y una gran cantidad de datos han sido evaluados y
avalados usando este medio de cultivo.
Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, es útil para
realizar las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en especies
de estreptococos.
Siembra
Consultar en la sección “prueba de sensibilidad a los antimicrobianos”,
la metodología apropiada.
Notas:
1-Los lotes de agar Mueller Hinton Britania cumplen con las normas
descriptas en el documento M6 - P del NCCLS: ¨Evaluating production
lots of dehydrated Mueller Hinton agar¨. Esto es muy importante pues
algunos lotes pueden variar significativamente y si las bacterias no
crecen adecuadamente, las zonas de inhibición en las pruebas de
difusión son generalmente más grandes, quedan fuera de los límites
de control de calidad y pueden dar resultados erróneos.
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.
Presentación
x 100 g Código: x 500 g Código:
B02-137-05 B02-137-06
6 x 50 ml Código: 12 x 100 ml Código:
B04-137-84 B04-137-06
E.M.B. AGAR.
Fundamento
Este medio combina las fórmulas de Holt-Harris y Teague con la de
Levine, para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo
de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. La
diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o
sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por los
indicadores eosina y azul de metileno; éstos ejercen un efecto
inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. Muchas cepas de
Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un característico brillo
metálico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con
periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son
incoloras. Este medio permite el crecimiento de Candida spp. como
colonias rosadas y puntiformes; la siembra en profundidad permite el
desarrollo de clamidosporas en C. albicans. Enterococcus spp. crece en
este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras que
Acinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de
color azul lavanda; esto puede ocurrir aunque las cepas no sean
capaces de acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la
incorporación de azul de metileno a sus membranas. En este medio se
obtiene además, un buen desarrollo de especies de Salmonella y
Shigella.
Siembra
En superficie, por estriado a partir de un inóculo poco denso, para
obtener colonias aisladas.
En profundidad, para favorecer el desarrollo de clamidosporas.
Incubación
De 24 a 48 horas a 35-37 °C, en aerobiosis.
Resultados
Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.
Presentación
x 100g :Código: B02- x 500g :Código: B02-
6 x 50 ml: B04-101-84
101-05 101-06
AGAR BAY PARKER
Fundamento
Incubación
Resultados
Almacenamiento:
Presentación
x 100g :Código: B02- x 500g :Código: B02-
141-05 141-06
Precaución
Almacenamiento
Clostridium perfringens
Bueno Negra
ATCC 3624
Clostridium sporogenes
Bueno Negra
ATCC 3584
Clostridium botulinum
Bueno Negra
ATCC 25763
Staphylococcus aureus
Inhibido -
ATCC 25923
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido -
Pseudomonas aeruginosa
Inhibido -
ATCC 9027
Fundamento
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan
los nutrientes necesarios para el crecimiento bacteriano, las sales
biliares y el cristal violeta inhiben el desarrollo de la flora Gram
positiva, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y el rojo
neutro es el indicador de pH.
Los coliformes son bacterias que fermentan la lactosa, acidifican el
medio y producen un viraje del indicador de pH al color rojo intenso.
Debido a esto, se observan como colonias de color rojo púrpura, de 1
a2 mm de diámetro, rodeadas, generalmente, de una zona rojiza de
bilis precipitada.
Siembra
-Para recuento bacteriano: sembrar en profundidad 1ml de la muestra
directa o de la dilución apropiada, agregar aproximadamente 12-15 ml
de medio de cultivo enfriado a 45 ºC, agitar por rotación y dejar
solidificar.
Luego, agregar una sobre capa de medio de cultivo para crear
condiciones anaeróbicas de manera que se evite el crecimiento de
microorganismos Gram negativos no fermentadores de azúcares y el
crecimiento en forma invasiva de Proteus spp.
-Para propósitos generales: sembrar en superficie, una ansada a partir
de los tubos con gas de un medio para coliformes (por ejemplo, de
Verde Brillante Caldo y Bilis 2% ó Mac Conkey Caldo ó Lauril Sulfato
Caldo)
Incubación
Para la detección de Enterobacterias mesófilas, incubar a 30ºC durante
24 horas. Se puede aumentar la selectividad incubando a 42 ºC.
Resultados
Microorganismos Colonias
Enterobacterias Rojas, de 1 a 2 mm de diámetro, con
fermentadoras de lactosa halo de precipitación rojizo
Enterobacterias no
Incoloras
fermentadoras de lactosa
Rosadas como punta de alfiler
Enterococcus spp.
(puntiformes)
Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Presentación
x 100g :Código: B02-143-05 x 500g :Código: B02-143-06
AGAR XLD
El agar XLD (Xilosa, Lisina, Desoxicolato) es un medio selectivo
diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de patógenos
entéricos Gram negativos, especialmente del género Shigella.
Composición
Procedimiento de análisis
Extender las muestras tan pronto como sea posible después de
recibirlas en el laboratorio. La placa de extensión se utiliza
principalmente para aislar los cultivos puros de las muestras que
contienen flora mixta. Si, por el contrario, el material se cultiva
directamente empleando una torunda, hacerla girar en una sección
pequeña cercana al borde, extendiendo luego a partir de esta área
inoculada. También debe inocularse un medio no selectivo tal como el
agar Columbia con sangre de carnero al 5% para proporcionar una
indicación de otros organismos presentes en la muestra.
Incubar las placas a 24 – 48 h a 35 ± 2 °C en una atmósfera aerobia.
Resultados: Después de la incubación, las placas se examinan para
detectar la presencia de colonias de estafilococos La morfología
característica de las colonias en BD Mannitol Salt Agar es la siguiente:
Organismos Resultados de crecimiento
Staphylococcus aureus Colonias amarillas de tamaño medio,
amarillo medio
Staphylococcus epidermidis Colonias blancas de tamaño pequeño a
medio, rojo medio
Estafilococos diferentes de S. aereus y Colonias de tamaño pequeño a grande,
S. epidermidis con zonas de color rojo o amarillo,
según especie.
Micrococos Grandes, de color blanco a anaranjado
Enterococcus. Streptococcus Sin crecimiento a crecimiento muy débil
Fundamento
En el medio de cultivo, el fosfato
monoamónico es la única fuente
de nitrógeno y el citrato de sodio
es la única fuente de carbono.
Ambos componentes son
necesarios para el desarrollo
bacteriano. Las sales de fosfato
forman un sistema buffer, el
magnesio es cofactor enzimático.
El cloruro de sodio mantiene el
balance osmótico, y el azul de bromotimol es el indicador de pH, que
vira al color azul en medio alcalino. El medio de cultivo es diferencial
en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como
única fuente de carbono, usan sales de amonio como única fuente de
nitrógeno, con la consiguiente producción de alcalinidad.
El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras
de citrato permeasa, a través del ciclo del ácido tricarboxílico. El
desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y
piruvato. Este último, en presencia de un medio alcalino, da origen a
ácidos orgánicos que, al ser utilizados como fuente de carbono,
producen carbonatos y bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira
al azul y esto es indicativo de la producción de citrato permeasa.
Agar 15.0
Incubación
A 35-37 ºC, durante 24-48 horas, en aerobiosis.
Algunos microorganismos pueden requerir hasta 4 días de incubación.
Resultados
Limitaciones
-Si se usa un inóculo denso para sembrar el medio de cultivo, puede
variar el color del pico del verde al amarillo-amarronado.
Esto no afecta el color verde del resto del medio de cultivo, pero puede
afectar la visualización azul de un resultado positivo.
-Inóculos muy densos, pueden originar resultados falsos positivos.
-Cuando se siembra una serie de pruebas bioquímicas a partir del
mismo cultivo, se debe esterilizar la aguja de inoculación antes de
inocular la prueba del citrato o sino inocularla primero. Cualquier
arrastre de materia orgánica puede originar resultados falsos positivos.
Fundamento
La infusión de músculo de corazón y la peptona, otorgan al medio un
alto valor nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad
de microorganismos, aún de aquellos nutricionalmente exigentes. El
cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.
El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentración final de 5-
10 %, aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano, y permite
detectar hemólisis.
Peptona 10.0
Agar 15.0
Instrucciones
Suspender 40 g del polvo en un litro de agua destilada. Dejar reposar
5 minutos y mezclar perfectamente hasta obtener una suspensión
homogénea. Calentar con agitación frecuente y hervir 1 minuto.
Esterilizar 20 minutos a 121°C. Enfriar a 45-50°C agregar sangre
desfibrinada al 5%. Homogeneizar y distribuir en placas.
Incubación
El tiempo, temperatura y atmósfera de incubación, dependerán del
microorganismo que se quiera aislar.
Resultados
Limitaciones
-Las reacciones hemolíticas de muchos microorganismos son diferentes
al usar sangre de caballo respecto a la sangre de carnero, tal es el caso
de algunas cepas de estreptococos grupo D, que producen beta
hemólisis en el agar suplementado con sangre de caballo pero no en
agar suplementado con sangre de carnero, y son mal clasificados como
Estreptococos Grupo A al usar sangre de caballo.
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.
SABOURAUD GLUCOSADO AGAR
Fundamento
Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de
hongos, particularmente los asociados con infecciones cutáneas (piel,
pelo, etc.).
En el medio de cultivo, la pluripeptona y la glucosa, son los nutrientes
para el desarrollo de microorganismos. El alto contenido de glucosa, la
presencia de cloranfenicol y el pH ácido, favorecen el crecimiento de
hongos por sobre el de bacterias.
Además, al medio de cultivo, pueden agregarse otros agentes
selectivos de crecimiento.
Siembra
Depende del uso, puede ser tanto en tubo como en placa. Consultar
referencias de métodos recomendados.
Incubación
El tiempo de incubación dependerá del microorganismo que se esté
buscando aislar.
Resultados
Microorganismos Crecimiento
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.
Presentación
Siembra
Sembrar estriando la superficie del medio.
Incubación
Durante 24-48 horas a 35-37 ºC, en atmósfera con 5-10% CO2.
Resultados
Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
Medio preparado: a 2-8 ºC.
Presentación