dell'Ambiente, Italia,
Revista Brasileira de Farmacognosia Revista 4 Universidad Técnica Particular de Loja, Instituto de Química Aplicada, Loja, Ecuador.
palabras clave:
actividad antimicrobiana Abstracto: El aceite esencial de la especie nubigenum Clinopodium ( Kunth) Kuntze, Lamiaceae, se
mayo de 2011 Disponible No en línea del 12 Ago 2011
nubigenum Clinopodium analizó mediante GC-MS y GC-FID, teniendo en cuenta la literatura más reciente. Entre los compuestos
aceite esencial identificados setenta, la mayoría son monoterpenoides oxigenados. El aceite esencial, probado para la
GC-MS actividad antimicrobiana, resultó eficaz in vitro contra Candida albicans. Desde el extracto acuoso MeOH
schizonepetoside tipo de las partes aéreas de la planta de dos compuestos no volátiles, schizonepetoside llamado A y
Recibido el 27 de Dic de 2010 Aceptado el 25 de de
de cerro schizonepedoside C, han sido aislados. Son terpenoides glicosilo raras, que previamente fueron aisladas
de una sola planta, pero nunca encontrados antes en el género Clinopodium.
ISSN 0102-695X
http://dx.doi.org/10.1590/S0102- 695X2011005000139
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investigaciones fitoquímicos y la actividad antimicrobiana de Clinopodium
nubigenum Kunth (Kuntze) extractos crudos
Gianluca Gilardoni et al.
RP-18 LiChroprep (25-40 micras) y gel de sílice Kieselgel 60 (malla MeOH acuoso. Después de la extracción, cada mezcla se filtró y los
230-400) se adquirieron de Merck. filtrados se evaporaron por separado bajo vacío a 40 ° C para
proporcionar tres residuos, pesando 3,6 g ( norte- hexano), 16,0 g
destilación de aceite esencial y el análisis (MeOH), y 1,4 g (90% de MeOH), respectivamente. El último extracto
se sometió a cromatografía preparativa de líquido en una columna
Dos muestras (200 g cada una) de las partes aéreas se secó con aire y C-18, se eluyó con un gradiente creciente de MeOH en H 2 O. Dos
frescas de la planta se hydrodistilled por separado, la producción de dos aceites fracciones de esta separación se purificaron adicionalmente por
esenciales, A y B, respectivamente, separando espontáneamente de las capas cromatografía líquida preparativa sobre gel de sílice. La elución con
acuosas recogidas, con un rendimiento de aproximadamente el 1% w / w. El lote un gradiente creciente de MeOH en diclorometano dio dos
planta fresca se destiló en Loja (Ecuador) inmediatamente después de la recogida; monoterpenoides glicosiladas puros. Los compuestos se identificaron
el lote seco se separó por destilación en Pavia (Italia) después de cuatro semanas. por
gama de 41 a 350 amu; retraso del disolvente: 2 min. E. coli y S. aureus, Los otros microorganismos se cultivaron a 28 ° C. Esta
El instrumento GC-FID estaba equipado con una columna temperatura fue elegido para T. mentagrophytes en consecuencia para
capilar HP-5 (longitud: 25 m, diámetro interno: Fernández-Torres et al. (2002). Los controles se prepararon con medio de
0,25 mm, espesor de la fase estacionaria: 0,25 m), utilizando nitrógeno como cultivo o medio de cultivo con el disolvente.
gas portador a 1 ml / min; el inyector fue operado en el modo de división, con
una relación de división de 25 y a la temperatura de 250 ° C, temperatura del La actividad petrolera estaba en primera detectada cualitativamente
detector se fijó en 280 ° C; el análisis GC se realizó con el siguiente programa en placas de Petri (140 mm) por medio del método de difusión en agar Las
de temperatura del horno: temperatura inicial se mantuvo a 60 ° C durante 1 suspensiones madre se prepararon a partir de cultivos que crecen en medios
min, después se aumentó a 200 ° C con una tasa de gradiente de 5 ° C / min, sólidos de 5 cm de placas Petri. Los cultivos de C. albicans, S. aureus, E. coli, y B.
luego a 280 ° C con una tasa de gradiente de 15 ° C / min. y se mantuvo a subtilis fueron de 48 h de edad, mientras que los cultivos de A. niger y
280 ° C durante 5 min adicionales.
T. mentagrophytes eran 7 días de edad. Para hongos filamentosos, es
decir, T. mentagrophytes y A. niger, suspensiones previas Se
prepararon transfiriendo parte de la colonia en un tubo que contiene
Disolvente de extracción y purificación glucósidos NaCl 0,85% de agua con toboganes cubierta rota y después se agitó
durante 1 min por vórtice. Se prepararon suspensiones de inóculo
partes aéreas secos (300 g) se sometieron a la extracción transfiriendo microorganismos en 2 ml de agua estéril con 0,85% de
del disolvente por maceración durante 1 h a temperatura ambiente; la NaCl (api bioMérieux) ajustado a 0,5 McFarland por medición
operación se repitió con tres disolventes de polaridad creciente: norte- hexano,
nefelométrica; 1 ml de la suspensión
MeOH, 90%
para cada microorganismo se distribuyó uniformemente sobre la casi ausente en el aceite B, con isopulegona que ocurre en una
superficie de agar de 9 cm placas de Petri. Los resultados se registraron cantidad relativamente alta (Figura 2). La comparación GC-MS de los
después de 24 y 48 h para todos los microorganismos, con la excepción dos aceites esenciales A y B se muestra en la Figura 3. Se sabe que
de T. mentagrophytes que se examinó después de cinco días. La la biosíntesis de producto mentofurano de isopulegona a través de
actividad del aceite contra hongos y bacterias se evaluó midiendo el citocromo P-450 oxidación dependiente de 9-hydroxypulegone
diámetro de la zona de inhibición usando discos de papel de filtro (Dewick, 2009;. Mc Clanahan et al, 1988); aislamiento de los dos
(diámetro de 0,5 cm) impregnadas con 9 l de aceite esencial y 1 l de compuestos glicosilados 1 y 2 de C. nubigenum
DMSO (Sigma-Aldrich). La penicilina G sal de Na y anfotericina B (ambos
de Sigma-Aldrich) fueron los compuestos de referencia para las bacterias ( vide infra) es una prueba más de la vía. Por lo tanto, algunas división de
y hongos, respectivamente. Se determinó la concentración inhibitoria glucosa a partir de 1 y 2 probablemente ocurrió durante el proceso de secado
mínima (MIC) solamente para los microorganismos que mostraron una de la planta, el almacenamiento y el transporte de Ecuador a Italia,
inhibición de halo> 1 cm. El aceite esencial se añadió al medio de cultivo explicando las diferencias entre los dos aceites.
líquido en placas de 24 micropocillos a una concentración final de 1,5 a
20! l / ml. Tween 80
h, respectivamente.
Tabla 1. El análisis químico del aceite esencial de C. nubigenum. LRI: Lineal Índice de Retención (Van den Dool y Kratz, 1963). COMPUESTOS
1-Butanol-2-acetato de metilo * 0,01 <0,01 876 acetato de isobornilo 0,1 <0,01 1288
-pineno 0.85 0,45 934 trans- acetato Sabinyl 0.23 0.10 1294
pag- Mentha-1 (7), 8-dieno 0.05 0.03 1005 α-copaeno 7.03 2 0,09 1.381
limoneno 6.46 2.07 1030 trans- acetato mirtanol 0.22 0.08 1387
pag- Mentha-3,8-dieno 0.02 0.02 1071 Elemene <β-> 0,32 <0,01 1395
El ácido acético, no 3-enil éster * 0.80 0.13 1209 Mostakone 0.59 0,01 1,687
Coahuilensol, éter de metilo 0.30 0,01 1,226 10- ni- Calamenen-10-ona 1711
A: de partes aéreas secadas al aire. B: a partir de partes aéreas frescas. * Identificado sólo por las bibliotecas Wiley y NIST MS.
hydrodistillate de M. nubigena HBK, mientras que estos fenoles no se planta en el período de no floración, mientras que el aceite esencial
detectaron como componentes importantes de los aceites A y B en este anterior se obtuvo por hidrodestilación de hojas y flores (El-Seedi et
estudio. Además de las diferencias entre especies o la existencia de al., 2008).
variedades botánicas, otros factores, entre los que importantes son el Además del aceite esencial, schizonepetoside A ( 1) y C ( 2) fueron
clima, el suelo, el período de cosecha y el ciclo vegetativo, y el método aislados del extracto acuoso MeOH de las partes aéreas de secado al
de la planta y la preservación aceite esencial, puede explicar los aire de C. nubigenum.
diferentes contenidos químicos de los aceites. Por otra parte, vale la Estos compuestos son monoterpenoides glicosilada raras, aislado
pena señalar que recogimos la previamente, a lo mejor de nuestro conocimiento, sólo desde la planta tenuifolia
schizonepeta Briq. (Kubo et
al., 1986; Lee et al., 2008), después de lo cual han sido nombrados. Ellos El microorganismo más sensible era DO.
fueron identificados por datos de RMN idénticos con los reportados en la albicans con una inhibición de halo> 1 cm. El MIC de los aceites esenciales A
literatura. y B contra C. albicans se mostró en la Tabla 3. La actividad fungicida (MFC)
de la levadura se detectó después del tratamiento 48 h con una
concentración de 8 l / ml y 5! l / ml de aceite de A y B, respectivamente.
Curiosamente, sólo actividad fungistática dio como resultado después del
O O
tratamiento 24 h.
OH OH
HOHO HOHO Los datos de actividad informados en este documento son
OO OO
coherentes con la actividad antimicrobiana se muestra por muchos géneros y
OH OH
especies pertenecientes a la familia Lamiaceae (De Martino et al., 2009).
1 2 Propiedades antimicrobianas del género
Clinopodium Se investigaron principalmente para especies del Viejo Mundo. La
La Tabla 2 muestra los datos de actividad de la DO. mayoría de ellos demostraron ser antimicrobiano o bien contra diferentes
nubigenum aceites esenciales A y B contra los microorganismos bacterias u hongos (Stojanović et al, 2006;.. Castilho et al, 2007;. Stojanović et
ensayados. No hay diferencias entre los datos replicados fueron al, 2009). Casi sesenta especies del género Clinopodium crecen en América
detectables a simple vista. Diferencia entre A y B era detectable tropical (Harley, 2000), pero las actividades biológicas de muy pocos de ellos
sólo contra A. niger se han probado hasta ahora (El-Seedi et al, 2008;. Estrada-Reyes et al.,
después de 24 h de incubación, pero ambos aceites no mostró actividad después de 48 2010). La actividad antimicrobiana de la
h.
Figura 3. comparación GC-MS del aceite esencial A, a partir de las partes aéreas de secado al aire, con aceite esencial de B, a partir de las partes aéreas frescas de C. nubigenum.
Tabla 2. La actividad de los aceites A y B de la esencial C. nubigenum frente a microorganismos bacterianos y fúngicos, tal como se muestra por el diámetro de la zona de inhibición (cm).
aceite esencial de nubigena Micromeria HBK fue detectado por El-Seedi et nubigena HBK y su actividad antimicrobiana. J Essent aceite Res 20: 452-456.
al. (2008), y los datos relativos a C. albicans
y S. aureus son comparables con los reportados en este documento para C. Estrada-Reyes R, Martínez-Vázquez M, Gallegos-Solís A, Heinze
G, Moreno J 2010. efectos depresores de Clinopodium mexicanum Benth.
nubigenum. Además, se presenta por primera vez los anticandidiales valores de
Govaerts (Lamiaceae) en el sistema nervioso central. J Ethnopharmacol
MIC y MFC del aceite esencial, al tiempo que demuestra su actividad fungicida.
130: 1-8. Fernández-Torres B, Cabanes FJ, Carrillo-Munoz AJ, Esteban A,
Este resultado es muy importante para encontrar un nuevo remedio contra C.
albicans, que es la especie predominante que causan infecciones fúngicas Inza I, Abarca L, Guarro J 2002. Evaluación de Colaboración de la condición
de la prueba de susceptibilidad antifúngica óptima para dermatofitos. J Clin
Microbiol 40: 3.999 a 4003. Gadd GM 1986. Toxicidad cribado utilizando hongos y
levaduras. En
Tabla 3. Concentración inhibitoria mínima (MIC) y la concentración
“Toxicidad pruebas utilizando microorganismos”, vol. II, Dutka BJ & Bitton
fungicida mínima (MFC) de los aceites A y B esencial de C. nubigenum.
G (Eds.), CRC Press, Florida: p. 43-77. Harley RM, Paucer AG 2000. Lista de
especies de América tropical
Candida albicans Clinopodium (Labiatae) con la nueva combinación. Kew Bulletin 55: 917-927.
Muestra MIC después de 24 h MFC después de 48 h
l / mL l / mL Índice Kewensis 2010. http://www.ipni.org/, el acceso en otoño
de Ciencias Biológicas de la Universidad de Aarhus. De Martino L, De gas-líquido de temperatura lineal. J Chromatogr 11: