Guía de
Interpretación
Petrifilm™
Placas para Recuento de E. coli y Coliformes
Esta guía sirve para familiarizarse con los resultados obtenidos en las placas 3M™ Petrifilm™ para Recuento de E. coli
y Coliformes (EC). Para más información, contactar con el distribuidor oficial de Productos 3M Microbiology.
Las placas Petrifilm EC contienen los nutrientes del VRB, un agente gelificante soluble en agua fría, un indicador
de la actividad glucuronidasa BCIG y un indicador de tetrazolio que facilita la enumeración de colonias. El film superior
atrapa el gas producido por la fermentación de la lactosa por los Coliformes y E.coli.
Coliformes :
Las Placas para Recuento de E. coli y Coliformes pueden usarse también para la investigación de Coliformes.
• La ISO define los Coliformes por su capacidad de crecer en medios específicos y selectivos. El método ISO 4832,
que enumera los Coliformes por la técnica del recuento de colonias, define los Coliformes por el tamaño de las colonias
y la producción de ácido en el Agar VRB con lactosa (VRBL). En las placas Petrifilm EC, estos coliformes productores
de ácido se muestran como colonias rojas con o sin gas (dentro de aproximadamente el diámetro de una colonia).
Ver Círculo 3. El método ISO 4831, que enumera los Coliformes por el método del Número Más Probable (NMP),
define los Coliformes por su capacidad de crecer y producir gas a partir de la lactosa en un caldo selectivo. En las placas
Petrifilm EC, estos coliformes se muestran como colonias rojas asociadas a gas (dentro de aproximadamente el diámetro
de una colonia). Ver Círculo 4.
• La AOAC INTERNATIONAL y el U.S. FDA Bacteriological Analytical Manual (BAM) definen los Coliformes como
bacilos Gram negativos que producen ácido y gas a partir de la lactosa durante la fermentación metabólica. Las colonias
de Coliformes que crecen en las placas Petrifilm EC producen ácido que oscurece el color del gel. El gas atrapado
alrededor de las colonias de Coliformes (dentro de aproximadamente el diámetro de una colonia) indica Coliformes
confirmados. Ver Círculo 4.
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Incubación :
24h +/- 2h a 42°C +/- 1°C.
Interpretación :
• E. coli : Contar todas las colonias azules con o sin gas.
1A
53 E. coli.
Incubación :
• Coliformes en todos los alimentos : incubar 24h +/- 2h
a 35ºC +/- 1ºC.
• Enumeración de E. coli en todos los productos, excepto
los abajo mencionados : incubar 48h +/- 2h a 35°C +/- 1°C.
Incubación :
• Enumeración de E. coli en Carne, Volatería y Productos
del Mar, y Coliformes en todos los productos : incubar
24h +/- 2h a 35°C +/- 1°C.
Incubación :
37°C +/- 1°C.
Interpretación :
• E. coli : Contar todas las colonias azules, con y sin gas
tras 48h +/- 2h de incubación.
• Coliformes : Contar las colonias rojas con gas y todas las
colonias azules con o sin gas después de 24 h +/- 2h
de incubación.
1C
53 E. coli, método NMKL.
95 Coliformes totales, método NMKL.
Incubación :
48h +/- 2h a 37°C +/- 1°C.
Interpretación :
• E. coli : Contar todas las colonias azules con y sin gas.
Es aconsejable confirmar las colonias azules sin gas, en especial
cuando estén presentes en una alta proporción.
1D
53 E. coli, método evaluado EMMAS.
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2 3
No crecimiento Recuento de E. coli = 13
Recuento de E. coli = 0 Recuento de Coliformes productores de gas =28
Las burbujas de fondo son una característica del gel Al igual que las placas de Agar VRB, el intervalo óptimo de
y no resultado del crecimiento de E. coli o Coliformes. recuento (colonias totales) en las placas Petrifilm EC es 15-150.
Las burbujas de fondo son pequeñas o puntiformes, No contar las colonias que aparecen sobre la zona blanca
de forma regular y no tienen una colonia asociada. ya que no están bajo la influencia selectiva del medio.
Ver Recuadro 1. Ver Círculo 1.
Iluminación Iluminación
de fondo frontal
1 2
4 5
Recuento E. coli = 3 Recuento E. coli = 20
Toda coloración azul presente en una colonia (azul a rojo-azul) Recuento total estimado = 150
indica la presencia de E. coli. Utilizando una iluminación El área de crecimiento circular de la placa Petrifilm EC
frontal puede facilitar la visualización del precipitado azul es de aproximadamente 20 cm2. Se pueden hacer estimaciones
formado por una colonia. en placas con más de 150 colonias contando el número de
• El Círculo 1 muestra una colonia rojo-azul usando una colonias en uno o varios cuadrados representativos y obteniendo
iluminación de fondo el promedio. Multiplicar dicho número por 20 para obtener
• El Círculo 2 muestra la misma colonia con iluminación el recuento total por placa.
frontal. El precipitado azul en este caso se visualiza mejor.
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6 7
Recuento real ~ 106 Recuento real ~ 108
Las placas Petrifilm EC con colonias TNTC tienen Altas concentraciones de E. coli causarán que el área
una o más de las características siguientes: muchas colonias de crecimiento se vuelva azul-púrpura.
pequeñas, muchas burbujas de gas, y un oscurecimiento
del color del gel de rojo a azul-púrpura.
8 9
Recuento real ~ 108 Recuento real ~ 108
Altas concentraciones de Coliformes (no E. coli) causarán Cuando un alto número de microorganismos no-Coliformes,
que el área de crecimiento se vuelva rojo oscuro. tales como Pseudomonas, están presentes en las placas
Cuando ésto ocurra, realizar diluciones adicionales para Petrifilm EC, el gel puede virar a amarillo.
determinar la presencia de E. coli.
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Burbujas
1 3
1 2
10 11
Las partículas alimentícias tienen forma irregular y no están La Figura 11 muestra como la forma de las burbujas puede
asociadas a burbujas de gas. Ver Figura 10. variar.
Algunas veces el gas deforma la colonia y hace
que la colonia “perfile” la burbuja. Ver Círculos 1 y 2.
Pueden aparecer burbujas como artefactos debidas a una
inoculación inadecuada de la placa Petrifilm EC o de aire
atrapado en la muestra. En este caso, las burbujas tienen
forma irregular y no están asociadas a una colonia.
Ver Círculo 3.
No contar las colonias que aparecen en la zona blanca
ya que no están bajo la influencia selectiva del medio.
1 2 3
4 5 6
7 8 9
12
A continuación se muestran varios ejemplos de burbujas
asociadas a una colonia. Todos ellos se deben tener
en cuenta.
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3M™ Petrifilm™
Placas para Recuento de E. coli y Coliformes
Para Advertencias, Precauciones, Responsabilidad del Usuario, Garantía Limitada,
Instrucciones
Almacenamiento y Eliminación, e Instrucciones de Uso, ver el folleto del producto. de uso
Almacenamiento
Petrifilm
Petrifilm
Petrifilm
Preparación
Inoculación
Incubación Interpretación
<70°F
Comentarios adicionales
• Recordar inocular y repartir el inóculo en cada placa Petrifilm antes de pasar a la siguiente placa.
• El tiempo y temperatura de incubación puede variar según el método utilizado, ver el folleto del producto.
Referencia de documento
Fecha Versión
Marzo 2002 1.0
FP 100111037 - Marzo 2002
Departamento de Microbiología
3M Espana, S.A.
Juan Ignacio Luca de Tena, 19-25
28027 Madrid
Tel : 91 321 6246
3M y Petrifilm son marcas registradas de 3M Company.
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