- 1411 -
dihasilkan dalam 2 larutan perak dietilditiokarbamat
dapat dibandingkan pada panjang gelombang serapan
maksimum antara 535 nm dan 540 nm menggunakan
kolorimeter yang sesuai, dimana pada panjang gelombang
ini gangguan yang disebabkan oleh stibin dapat
diabaikan.
Metode II
Catatan:
(1) Perhatian Lakukan dengan hati-hati. Beberapa zat
dapat bereaksi dengan ledakan yang membahayakan
bila dicampur dengan hidrogen peroksida.
(2) Apabila terdapat campuran mengandung halogen
gunakan suhu lebih rendah pada saat memanaskan
zat uji dengan asam sulfat P, hindari mendidihnya
campuran dan tambahkan hidrogen peroksid dengan
hati-hati sebelum terjadi pengarangan, untuk
mencegah hilangnya arsen trivalen.
(3) Apabila zat uji bereaksi dengan asam sulfat 5 ml
sangat cepat, dan sudah terjadi pengarangan pada
penambahan 5 ml asam sulfat P sebelum pemanasan,
sebagai pengganti gunakan 10 ml asam sulfat encer
dingin (1 dalam 2) dan tambahkan beberapa tetes
hidrogen peroksida P sebelum pemanasan.
Larutan baku Pipet 3,0 ml Larutan baku arsen ke
dalam labu generator, tambah 2 ml asam sulfat, campur
dan tambahkan sejumlah 30% hidrogen peroksida P yang
digunakan dalam pembuatan Larutan uji. Panaskan
campuran hingga terjadi asap putih tebal, dinginkan
tambahkan perlahan-lahan 10 ml air, dan panaskan lagi
sampai terjadi asap putih tebal. Ulangi prosedur dengan
menggunakan 10 ml air untuk menghilangkan sisa
hidrogen peroksida. Dinginkan dan encerkan dengan air
sampai 35 ml.
Larutan uji Jika tidak dinyatakan lain dalam masing-
masing monografi masukkan ke dalam labu generator
sejumlah zat uji, dalam g, dihitung menggunakan rumus:
3,0
L Larutan uji Masukkan sejumlah larutan uji seperti
dimana L adalah batasan arsen dalam ppm. Tambahkan 5
ml asam sulfat P dan beberapa manik kaca, ekstraksi
dalam lemari asam, lebih baik menggunakan lempeng
pemanas dan pada suhu tidak lebih dari 120º hingga
terjadi pengarangan. (Mungkin diperlukan asam sulfat
berlebih untuk membasahkan zat uji secara sempurna,
tetapi jumlah volume yang ditambahkan tidak lebih 10
ml). Tambahkan hati-hati tetes demi tetes 30% hidrogen
peroksida P biarkan reaksi terjadi dan panaskan kembali
diantara penetesan. (Tambahkan dengan sangat hati-hati
beberapa tetes pertama dengan mencampur secukupnya,
untuk menghindari reaksi cepat). Hentikan pemanasan
bila terbentuk busa berlebih. Bila reaksi berkurang,
panaskan hati-hati, goyangkan labu sesekali untuk
mencegah zat melekat pada dinding labu yang kontak
dengan pemanasan. Pertahankan kondisi oksidasi setiap
saat selama ekstraksi dengan menambahkan sedikit demi
sedikit larutan hidrogen peroksida P, jika campuran
menjadi cokelat atau gelap. Lanjutkan ekstraksi hingga
zat organik terurai, naikkan suhu lempeng pemanas
secara bertahap hingga asap dari belerang trioksida
dibebaskan dan larutan menjadi tidak berwarna atau
berwarna kuning pucat. Dinginkan, tambahkan hati-hati
10 ml air, campur dan uapkan sekali lagi hingga terjadi
asap tebal. Ulangi prosedur ini untuk menghilangkan sisa
hidrogen peroksida. Dinginkan, tambahkan hati-hati
10 ml air, bilas dinding labu dengan beberapa ml air, dan
encerkan dengan air hingga 30 ml.
Prosedur Lakukan seperti tertera pada Metode I
Zat Kimia Pengganggu Lakukan seperti tertera pada
Metode I.
UJI BATAS BESI <331>
Uji batas besi digunakan untuk menunjukkan bahwa
kandungan besi, dalam bentuk besi(III) atau besi(II) tidak
lebih dari batas besi yang tertera pada masig-masing
monografi. Penetapan dilakukan dengan membandingkan
secara visual dengan larutan yang dibuat khusus dari
Larutan baku besi.
Pereaksi khusus
Larutan baku besi Larutkan 863,4 mg besi(III)
ammonium sulfat P FeNH4(SO4)2.12H2O] dalam air,
tambahkan 10 ml asam sulfat 2 N dan encerkan dengan
air hingga 100,0 ml. Pipet 10 ml larutan ini ke dalam labu
tentukur 1000-ml, tambahkan 10 ml asam sulfat 2 N,
ecerkan dengan air sampai tanda. Tiap ml larutan ini
mengandung 10 µg Fe.
Larutan ammonium tiosianat Larutkan 30 g ammonium
tiosianat P dalam air hingga 100 ml.
Larutan baku Pipet 1 ml larutan baku besi (10 µg Fe)
ke dalam tabung pembanding warna 50 ml, encerkan
dengan air hingga 45 ml, tambahkan 2 ml asam klorida P
dan campur.
tertera pada masing-masing monografi ke dalam tabung
pembanding warna 50 ml, bila perlu encerkan dengan air
hingga 45 ml; atau larutkan sejumlah g zat dalam air
hingga 45 ml yang dihitung dengan rumus:
1,0
(1000L)
L adalah batas besi dalam persen. Tambahkan 2 ml asam
klorida P dan campur.
Prosedur ke dalam masing-masing tabung yang berisi
Larutan baku dan Larutan uji, tambahkan 50 mg
amonium peroksida sulfat P dan 3 ml Larutan amonium
tiosianat dan campur: warna yang terjadi pada Larutan
uji tidak lebih gelap dari Larutan baku
 - 1412 -
UJI BATAS ETILEN OKSIDA DAN DIOKSAN
<342>
Prosedur berikut ini digunakan untuk menetapkan
jumlah residu etilen oksida dan dioksan dalam sediaan
yang dibuat dari etilen oksida. Kecuali dinyatakan lain
pada masing-masing monografi, gunakan Metode I.
Metode I
[Peringatan Etilen oksida adalah zat toksik dan mudah
terbakar. Siapkan larutan ini dengan hati-hati di dalam
lemari asam berventilasi baik. Lindungi tangan dan
wajah dengan memakai sarung tangan polietilen dan
masker yang sesuai. Simpan semua larutan dalam wadah
kedap udara, pada suhu antara 4 - 8].
[Catatan Sebelum menggunakan polietilen glikol 200 P
pada pengujian ini, hilangkan semua komponen mudah
menguap dengan menempatkan 500 ml polietilen glikol
200 P dalam labu alas bulat 1000 ml dan sambungkan
labu dengan penguap berputar, pertahankan pada suhu
60° dan vakum 10 - 20 mmHg selama 6 jam].
Larutan Asetaldehida Asetaldehida P 10 g per ml
[Catatan Siapkan segera sebelum digunakan].
Larutan persediaan etilen oksida Buat larutan etilen
dioksida 2,5 mg per g yang disiapkan dengan cara sebagai
berikut: Tara Erlenmeyer bersumbat kaca, tambahkan 50
ml polietilen glikol 200 P, dan timbang kembali
Erlenmeyer. Masukkan 5 ml etilen oksida P cair dalam
gelas piala 100 ml dinginkan dalam campuran natrium
klorida P dan es (1:3). Masukkan 300 l (250 mg) etilen
oksida cair P pada polietilen glikol 200 P, aduk perlahan-
lahan sampai tercampur. Sumbat Erlenmeyer, timbang
kembali labu dan tetapkan jumlah etilen dioksida yang
diabsorbsi dengan adanya perbedaan berat. Atur berat
campuran dengan menambahkan polietilen glikol 200 P
sampai 100,0 g, sumbat Erlenmeyer dan goyang hati-hati
sampai tercampur. [Catatan Isi botol pendingin
bertekanan dengan etilen oksida cair dan simpan dalam
lemari pembeku bila tidak digunakan. Gunakan sepotong
kecil film polietilen untuk melindungi cairan dari kontak
dengan karet penutup. Gunakan peralatan yang telah
didinginkan bila diperlukan. Buat larutan persediaan
segera sebelum digunakan, dan simpan dalam lemari
pendingin].
Larutan etilen oksida Tara Erlenmeyer bersumbat
kaca dan dinginkan dalam lemari pendingin. Tambahkan
35 ml polietilen glikol 200 P, dan timbang kembali labu.
Masukkan 1 g Larutan persediaan etilen dioksida dingin
ke dalam Erlenmeyer bersumbat. Atur berat campuran
dengan menambahkan polietilen glikol 200 P sampai 50,0
g, sumbat kembali, goyang hati-hati sampai tercampur.
Pindahkan 10 g larutan ini pada labu tentukur 50-ml.
Tambahkan 30 ml air dan campur. Encerkan dengan air
sampai tanda, dan campuran yang diperoleh mengandung
etilen oksida lebih kurang 10 g per ml. [Catatan
Gunakan peralatan yang telah didinginkan jika
diperlukan. Buat segera sebelum digunakan].
Larutan dioksan 500 g per ml dioksan P.
Larutan Baku A Masukkan 0,1 ml Larutan etilen
oksida ke dalam vial 10-ml “headspace” bertekanan.
[Catatan Vial berukuran lain misalnya vial 22-ml
“headspace” bertekanan dapat digunakan, tergantung
kondisi operasional. Akan tetapi harus digunakan
“headspace” berukuran sama untuk Larutan baku A,
Larutan baku B dan Larutan uji]. Tambahkan 0,1 ml
Larutan Asetaldehida dan 0,1 ml Larutan dioksan, tutup
vial dan campur.
Larutan Baku B Timbang 1,0 g zat uji, masukkan ke
dalam vial “10-ml headspace” bertekanan dan
tambahkan 0,1 ml Larutan etilen oksida; 0,1 ml Larutan
dioksan dan 1,0 ml N,N-dimetilasetamida P. Tutup vial
dan campur.
Larutan uji Timbang 1,0 g zat uji masukkan ke dalam
vial 10-ml “headspace” bertekanan dan tambahkan 1,0
ml N,N-dimetilasetamida P dan 0,2 ml air. Tutup vial dan
campur.
Sistem kromatografi Lakukan penetapan dengan cara
Kromatografi gas seperti tertera pada Kromatografi
<931>. Kromatograf gas “headspace” dilengkapi
detektor ionisasi nyala dan kolom kapiler terbuat dari
kaca atau kuarsa 0,32 mm x 30 m, berisi bahan pengisi
fase G1 dengan tebal lapisan 1,0 m. Gas pembawa
helium P dipertahankan pada kecepatan linier 20 cm per
detik. Suhu injektor dan detektor dipertahankan berturut-
turut pada suhu 150° dan 250°. Suhu kolom diprogram
sebagai berikut:
Suhu Kenaikan Suhu Waktu
awal suhu akhir dipertahankan
(o) (o per menit) (o) pada suhu akhir
(menit)
50 - 50 5
50 5 180 -
180 30 230 5
Lakukan kromatografi terhadap Larutan baku A, rekam
kromatogram dan ukur respons puncak utama seperti
tertera pada Prosedur: resolusi, R, antara aseltadehida dan
etilen oksida tidak kurang dari 2,0; perbandingan “signal
to noise” tidak kurang dari 5,0 ditetapkan dari puncak
dioksan; simpangan baku relatif pada penyuntikan ulang
tidak lebih dari 15,0%. [Catatan Waktu retensi relatif
asetaldehida dan etilen oksida berturut-turut adalah 0,94
dan 1,0].
Sistem “headspace sampler” Atur suhu “transfer line”
150°, suhu pengaturan tekanan 1 menit dan waktu injeksi
12 detik. Waktu untuk kesetimbangan suhu selama 45
menit dan suhu kesetimbangan masing-masing: 70° untuk
Larutan baku A, 90° untuk Larutan baku B dan 90° untuk
Larutan uji.
Prosedur Suntikkan secara terpisah sejumlah volume
sama (lebih kurang 0,51 ml “headspace” gas dengan
 - 1413 -
“split ratio” 20:1) Larutan baku B dan Larutan uji ke
dalam kromatograf, rekam kromatogram dan ukur
respons puncak utama. [Catatan Waktu retensi relatif
untuk etilen oksida dan dioksan berturut-turut adalah 1,0
dan 2,5]. Hitung jumlah etilen dioksida dalam bpj, dalam
zat yang digunakan dengan rumus:
AE xrU
rS xW U   rU xW S 
AE adalah jumlah etilen oksida dalam g yang
ditambahkan dalam Larutan baku B; rU dan rS berturut-
turut adalah respon puncak etilen oksida dari Larutan uji
dan Larutan baku B; WU adalah bobot zat dalam g yang
digunakan untuk membuat Larutan uji; Ws adalah bobot
dalam g yang digunakan untuk membuat Larutan baku B.
Hitung jumlah dioksan dalam bpj, dalam zat yang
digunakan dengan rumus:
A D xrU
rS xW U   rU xW S 
AD adalah jumlah dioksan dalam g yang ditambahkan
dalam Larutan baku B; rU dan rS berturut-turut adalah
respon puncak dioksan dari Larutan uji dan Larutan baku
B; WU adalah bobot zat dalam g yang digunakan untuk
membuat Larutan uji; WS adalah bobot zat dalam g yang
digunakan untuk membuat Larutan baku B.
Metode II
Larutan baku etilen dioksida Encerkan 0,5 ml etilen
oksida dalam metilen klorida P (50 mg per ml)1 dengan
air sampai 50,0 ml. [Catatan Larutan stabil selama
3 bulan jika disimpan dalam vial politetrafluoroetilen
(politef)-dengan tutup berlapis membran silikon pada
suhu -20°]. Biarkan sampai mencapai suhu ruang.
Encerkan 1,0 ml larutan dengan air sampai 250,0 ml
hingga diperoleh larutan dengan kadar etilen dioksida
2 g per ml. [Catatan Buat segera sebelum digunakan].
Larutan baku dioksan 0,05 l per ml dioksan.
Larutan baku aseltadehida Larutan mengandung
asetaldehida 10 g per ml [Catatan Buat segera sebelum
digunakan].
Larutan Resolusi Pipet 2 ml Larutan baku
asetaldehida dan 2 ml Larutan baku etilen oksida ke
dalam vial 10-ml “headspace”. Segera tutup vial dengan
membran silikon berlapis politef dan perkuat dengan
tutup luar aluminium, campur hati-hati.
Larutan baku A Buat larutan etilen oksida dengan
kadar 0,48 g per ml dari Larutan baku etilen oksida dan
dioksan dengan kadar 0,005 g per µl dari Larutan baku
dioksan.
Larutan baku B Timbang 1,0 g zat, masukkan ke
dalam vial 10-ml “headspace”. Tambahkan 2,0 ml
Larutan baku A. Segera tutup vial dengan membran
silikon berlapis politef dan perkuat dengan tutup luar
aluminium, campur hati-hati.
Larutan uji Timbang 1,0 g zat, masukkan ke dalam
vial 10-ml “headspace”. Tambahkan 2,0 ml air. Segera
tutup vial dengan membran silikon berlapis politef dan
perkuat dengan tutup luar aluminium, campur hati-hati.
Sistem kromatografi Lakukan penetapan dengan cara
Kromatografi gas seperti tertera pada Kromatografi
<931>. Kromatograf gas “headspace” dilengkapi
detektor ionisasi nyala dan kolom kapiler terbuat dari
leburan silika 0,53 mm x 50 m, berisi bahan pengisi fase
G27 dengan tebal lapisan 5,0 m. Gas pembawa helium P
dipertahankan pada laju alir 4 mm per menit. Sistem
“headspace sampler” waktu untuk kesetimbangan suhu
selama 30 menit dan suhu kesetimbangan 80°. Suhu
injektor dan detektor dipertahankan berturut-turut pada
suhu 85° dan 250°. Suhu kolom diprogram sebagai
berikut: suhu awal dipertahankan pada 70º selama 10
menit, kemudian diatur kecepatan kenaikan suhu lebih
kurang 10º per menit sampai 250º dan pertahankan suhu
tersebut selama 5 menit. Lakukan kromatografi terhadap
Larutan resolusi, rekam kromatogram dan ukur respons
puncak utama seperti tertera pada Prosedur: resolusi, R,
antara asetaldehida dan etilen oksida tidak kurang dari 2,0
[Catatan Waktu retensi relatif asetaldehida dan etilen
oksida berturut-turut adalah 0,9 dan 1,0].
Prosedur Suntikkan secara terpisah sejumlah volume
sama (lebih kurang 0,51 ml “headspace” gas dengan
“split ratio” 3,5:1) Larutan baku B dan Larutan uji ke
dalam kromatograf, rekam kromatogram dan ukur
respons puncak utama. [Catatan Waktu retensi relatif
untuk etilen oksida dan dioksan berturut-turut adalah 1,0
dan 1,9]. Hitung jumlah etilen dioksida dalam bpj, dalam
zat yang digunakan dengan rumus:
C E xVxr U
rS xW U   rU xW S 
CE adalah kadar etilen oksida dalam g per ml Larutan
baku A; V adalah volume Larutan baku A yang
ditambahkan pada Larutan baku B (2,0 ml); rU dan rS
berturut-turut adalah respon puncak etilen oksida Larutan
uji dan Larutan baku B; WU adalah bobot dalam g zat
yang digunakan untuk membuat Larutan uji; WS adalah
bobot dalam g zat yang digunakan untuk membuat
Larutan baku B.
Hitung jumlah dioksan dalam bpj, dalam zat yang
digunakan dengan rumus:
C D xVx  xFxr U
rS xW U   rU xW S 
 - 1414 -
CD adalah kadar dioksan dalam l per ml Larutan baku A;
V adalah volume Larutan baku A yang ditambahkan pada
Larutan baku B (2,0 ml);  adalah berat jenis dioksan
(1,03 g per ml = 1,03 g per l); F adalah faktor konversi
(1000 g per mg); rU respons puncak dioksan dari
Larutan uji; rS adalah respons puncak etilen oksida dari
Larutan baku B; WU adalah bobot zat dalam g yang
digunakan untuk membuat Larutan uji dan WS adalah
bobot zat dalam g yang digunakan untuk membuat
Larutan baku B.
UJI BATAS KALSIUM, KALIUM DAN
NATRIUM <351>
Fotometer nyala khusus dilengkapi dengan detektor
tabung foto pelipat ganda untuk penetapan kalsium atau
natrium, detektor tabung cahaya peka warna merah untuk
penetapan kalium, mono-kromator, celah keluar yang
mudah diatur, alat kendali yang peka, dan pembakar
oksiasetilena. Pembakar oksihidrogen diperlukan untuk
penetapan kalium di dalam campuran dengan kalsium
jumlah besar.
Larutan baku ion kalsium Masukkan 249,7 mg kalsium
karbonat P yang telah dikeringkan pada suhu 300°
selama 3 jam dan didinginkan dalam eksikator selama
2 jam, ke dalam labu tentukur 100-ml, larutkan dalam
campuran 20 ml air dan 5 ml asam klorida 3 N, encerkan
dengan air sampai tanda. Tiap ml larutan mengandung
1,00 mg ion kalsium (Ca).
Larutan baku ion kalium Masukkan 190,7 mg kalium
klorida P yang telah dikeringkan pada suhu 105° selama
2 jam, ke dalam labu tentukur 100-ml, larutkan dan
encerkan dengan air sampai tanda. Tiap ml larutan
mengandung 1,00 mg ion kalium (K).
Larutan baku ion natrium Masukkan 254,2 mg natrium
klorida P yang telah dikeringkan pada suhu 105° selama
2 jam, ke dalam labu tentukur 100-ml, larutkan dan
encerkan dengan air sampai tanda. Tiap ml larutan
mengandung 1,00 mg ion natrium (Na).
Larutan baku Masukkan 50 ml alikot Larutan uji ke
dalam labu tentukur 100-ml, tambahkan sejumlah volume
Larutan baku ion yang tertera pada masing-masing
monografi, encerkan dengan air sampai tanda. Encerkan
larutan ini secara kuantitatif dengan air secukupnya,
untuk mendapatkan kadar ion yang diuji sesuai dengan
daerah pengukuran yang ideal pada fotometer nyala yang
digunakan.
Larutan uji Kecuali dinyatakan lain pada masing-
masing monografi, masukkan 2,000 g zat uji ke dalam
labu tentukur 100-ml, dinginkan dalam tangas es,
tambahkan 5 ml asam nitrat P, goyang sampai larut dan
biarkan hangat sampai suhu kamar. Jika perlu panaskan
hati-hati untuk mendapatkan campuran yang jernih atau
hanya sedikit keruh. Dinginkan sampai suhu kamar, jika
perlu, encerkan dengan air sampai tanda. Jika perlu,
saring atau sentrifus untuk mendapatkan larutan yang
jernih.
Atur fotometer nyala sampai diperoleh pembacaan
mendekati transmitans 100% dengan Larutan baku pada
panjang gelombang yang memberikan emisi maksimum
yang sesuai dengan panjang gelombang yang spesifik
seperti tertera pada daftar di bawah. Gunakan lebar celah
keluar yang sesuai, sedekat mungkin dengan lebar pita
yang ditentukan. Rekam transmitans yang dibaca (S).
Encerkan alikot Larutan uji dengan air untuk
mendapatkan kadar larutan yang sesuai dengan Larutan
baku. Tanpa mengubah pengaturan kondisi fotometer
nyala, tetapkan emisi larutan sebagai persentase
transmisi, rekam pembacaan (T). Pengaturan kembali
hanya pada monokromator, ke panjang gelombang yang
ditentukan untuk penetapan latar belakang. Tetapkan
emisi larutan pada panjang gelombang tersebut sebagai
persentase transmisi, dan rekam pembacaan (B).
Panjang gelombang (nm) Lebar
Ion pita (nm)
Spesifik Latar belakang
Kalsium 422,7 430 0,8
Kalium 766,5 750 12
Natrium 589 580 0,8
Pengujian ini dinyatakan memenuhi syarat, jika harga
T kurang B, lebih kecil dari atau sama dengan S kurang T.
UJI BATAS KLORIDA DAN SULFAT <361>
Uji batas klorida dan sulfat berikut adalah prosedur
umum untuk menetapkan batas klorida dan sulfat yang
tertera pada masing-masing monografi.
Lakukan pengujian dan pembandingan menggunakan
sepasang tabung kaca dengan diameter sama dan
disetarakan sebaik mungkin seperti tertera pada
pembandingan visual dalam Spektrofotometri dan
Hamburan Cahaya <1191>. Gunakan jumlah dan jenis
pereaksi yang sama pada Larutan uji maupun Larutan
pembanding yang mengandung sejumlah volume tertentu
klorida atau sulfat. Jika setelah diasamkan larutan tidak
jernih, saring melalui kertas saring yang tidak
memberikan reaksi terhadap klorida dan sulfat.
Tambahkan sejumlah larutan pengendap perak nitrat LP
atau barium klorioda LP sejumlah yang diperlukan pada
Larutan uji dan Larutan pembanding pada saat yang
bersamaan.
Jika pada masing-masing monografi, pengujian
dilakukan terhadap volume tertentu Larutan uji, dan batas
klorida atau sulfat sesuai dengan atau kurang dari 0,20 ml
asam klorida 0,02 N atau asam sulfat 0,02 N, lakukan
pengujian tanpa pengenceran lebih lanjut. Dalam hal ini,
pertahankan volume Larutan pembanding sama seperti
pada Larutan uji. Untuk pengujian pada garam logam
berat, yang pada umumnya bereaksi asam, hilangkan
penambahan asam dan larutan tidak boleh dinetralkan.
Larutkan garam bismuth dalam beberapa ml air dan 2 ml
asam nitrat P sebelum penambahan larutan pengendap.
 - 1415 -
Klorida Larutkan sejumlah zat uji dalam 30 - 40 ml air,
atau, jika zat uji adalah larutan, tambahkan air
secukupnya hingga jumlah volume 30 - 40 ml, dan jika
perlu netralkan larutan dengan asam nitrat P terhadap
kertas lakmus P. Tambahkan 1 ml asam nitrat P dan 1
ml perak nitrat LP, dan tambahkan air secukupnya
hingga 50 ml. Campur, diamkan larutan 5 menit
terlindung cahaya matahari langsung. Bandingkan
kekeruhan yang terjadi dengan larutan pembanding yang
mengandung sejumlah volume asam klorida 0,020 N
seperti tertera pada monografi.
Sulfat Larutkan sejumlah zat uji dalam 30 - 40 ml air,
atau, jika zat uji adalah larutan, tambahkan air
secukupnya hingga jumlah volume 30 - 40 ml, dan jika
perlu netralkan larutan dengan asam klorida P terhadap
kertas lakmus P. Tambahkan 1 ml asam klorida 3 N, 3 ml
barium klorida LP dan air secukupnya hingga 50 ml.
Campur, diamkan larutan 10 menit. Bandingkan
kekeruhan yang terjadi dengan larutan pembanding yang
mengandung sejumlah volume asam sulfat 0,020 N
seperti tertera pada monografi.
UJI BATAS DIMETILANILIN <362>
Uji batas berikut digunakan sebagai prosedur umum,
bila dinyatakan pada masing-masing monografi untuk
menetapkan dimetilanilin (sebagai penangkap asam
klorida yang mungkin digunakan selama proses) dalam
suatu zat secara kromatografi gas.
Larutan baku internal Kecuali dinyatakan lain dalam
masing-masing monografi, buat larutan naftalena dalam
sikloheksana P dengan kadar lebih kurang 50 µg per ml.
Larutan baku Kecuali dinyatakan lain dalam masing-
masing monografi, timbang saksama lebih kurang 50 mg
N,N–dimetilanilin masukkan ke dalam labu tentukur
50-ml, tambahkan 25 ml asam klorida 1 N, goyangkan
hingga larut, encerkan dengan air sampai tanda dan
campur. Masukkan 5,0 ml larutan ke dalam labu tentukur
250-ml, encerkan dengan air sampai tanda dan campur.
Pipet 1 ml larutan masukkan ke dalam tabung sentrifuga
yang sesuai, tambahkan 5,0 ml natrium hidroksida 1 N
dan 1,0 ml Larutan baku internal, kocok kuat selama
1 menit, dan sentrifus. Gunakan beningan sebagai
Larutan baku.
Larutan uji Kecuali dinyatakan lain dalam masing-
masing monografi, timbang saksama lebih kurang 1 g zat
uji, masukkan ke dalam tabung sentrifuga yang sesuai,
tambahkan 5,0 ml natrium hidroksida 1 N dan 1,0 ml
Larutan baku internal, kocok kuat selama 1 menit, dan
sentrifus. Gunakan beningan sebagai Larutan uji.
Sistem kromatografi Lakukan penetapan dengan cara
Kromatografi gas seperti tertera pada Kromatografi
<931>. Kromatograf gas dilengkapi dengan detektor
ionisasi nyala dan kolom 2 mm x 2 m berisi bahan
pengisi 3 % fase cair G3 pada partikel penyanggga S1A
tersilanisasi, pertahankan suhu pada 120. Gunakan
nitrogen P sebagai gas pembawa dengan laju alir lebih
kurang 30 ml per menit.
Prosedur Suntikkan secara terpisah sejumlah volume
sama (dengan rentang 2 - 20 µl) Larutan baku dan
Larutan uji ke dalam kromatograf, rekam kromatogram
dan ukur luas puncak utama. Perbandingan respons
puncak dimetilanilin terhadap puncak naftalena yang
diperoleh dari Larutan uji tidak lebih besar dari Larutan
baku (0,002 %).
UJI BATAS LOGAM BERAT <371>
Pengujian ini dimaksudkan untuk menunjukkan
bahwa cemaran logam yang dengan ion sulfida
menghasilkan warna pada kondisi penetapan, tidak
melebihi batas logam berat yang tertera pada masing-
masing monografi, dinyatakan dalam % (bobot) timbal
dalam zat uji, ditetapkan dengan membandingkan secara
visual seperti tertera pada pembandingan visual dalam
Spektrofotometri dan Hamburan Cahaya <1191> dengan
pembanding Larutan baku timbal. [Catatan Senyawa-
senyawa yang memberikan respons pada uji ini adalah
timbal, raksa, bismut, arsen, antimon, timah, kadmium,
perak, tembaga, dan molibdenum].
Tetapkan jumlah logam berat menggunakan Metode I,
kecuali dinyatakan lain dalam masing-masing monografi.
Metode I digunakan untuk zat yang pada kondisi
penetapan memberikan larutan jernih dan tidak berwarna
pada kondisi uji. Metode III digunakan untuk zat yang
pada kondisi Metode I tidak menghasilkan larutan jernih
dan berwarna, atau senyawa yang karena sifatnya
menganggu pengendapan logam oleh ion sulfida atau
minyak lemak dan minyak menguap. Metode V suatu
metode digesti basah, hanya digunakan bila Metode I dan
Metode III tidak dapat digunakan.
Pereaksi khusus
Larutan persediaan timbal(II) nitrat Larutkan 159,8
mg timbal(II) nitrat P dalam 100 ml air yang telah
ditambah 1 ml asam nitrat P, kemudian encerkan dengan
air hingga 1000,0 ml. Buat dan simpan larutan ini dalam
wadah kaca yang bebas dari garam-garam timbal yang
larut.
Larutan baku timbal Buat larutan segar dengan
mengencerkan 10,0 ml Larutan persediaan timbal(II)
nitrat dengan air hingga 100,0 ml. Tiap ml Larutan baku
timbal setara dengan 10 µg timbal. Larutan pembanding
yang dibuat dari 100 µl Larutan baku timbal dalam 1
gram zat uji setara dengan 1 bagian timbal per sejuta.
 - 1416 -
Metode I
Dapar asetat pH 3,5 Larutkan 25,0 g amonium asetat
P dalam 25 ml air dan tambahkan 38,0 ml asam klorida 6
N. Jika perlu atur pH hingga 3,5 dengan penambahan
amonium hidroksida 6 N atau asam klorida 6 N, encerkan
dengan air hingga 100 ml, campur.
Larutan baku Pipet 2 ml Larutan baku timbal (20 µg
Pb) ke dalam tabung pembanding warna 50 ml, dan
encerkan dengan air hingga 25 ml. Atur pH antara 3,0 dan
4,0 dengan penambahan asam asetat 1 N atau amonium
hidroksida 6 N, encerkan dengan air hingga 40 ml, campur.
Larutan uji Ke dalam tabung pembanding warna 50
ml masukkan 25 ml Larutan uji seperti tertera pada
masing-masing monografi atau menggunakan sejumlah
volume asam jika dinyatakan dalam masing-masing
monografi, larutkan dan encerkan dengan air hingga 25
ml. Gunakan sejumlah zat uji dalam g, yang dihitung
dengan rumus :
2,0
1000 L
L adalah batas Logam berat dalam persen. Atur pH antara
3,0 dan 4,0 dengan penambahan asam asetat 1 N atau
amonium hidroksida 6 N, encerkan dengan air hingga 40
ml, campur.
Larutan pembanding Masukkan 25 ml larutan yang
dibuat sama seperti Larutan uji ke dalam tabung
pembanding warna 50 ml, dan tambahkan 2,0 ml Larutan
baku timbal. Atur pH antara 3,0 dan 4,0 dengan
penambahan asam asetat 1 N atau amonium hidroksida
6 N, encerkan dengan air hingga 40 ml, campur.
Prosedur Ke dalam tiap tabung dari 3 tabung yang
masing-masing berisi Larutan baku, Larutan uji dan
Larutan pembanding tambahkan 2 ml dapar asetat pH
3,5 kemudian tambahkan 1,2 ml tioasetamida LP,
encerkan dengan air hingga 50 ml, campur, diamkan
selama 2 menit. Amati permukaan dari atas pada dasar
putih: Warna yang terjadi pada Larutan uji tidak lebih
gelap dari warna yang terjadi pada Larutan baku dan
warna yang terjadi pada Larutan pembanding sama atau
lebih gelap dari warna yang terjadi pada Larutan baku
[Catatan Bila warna pada larutan pembanding lebih
muda dari warna larutan baku gunakan Metode III
sebagai pengganti Metode I untuk zat uji].
Metode II
Larutan uji 12 ml larutan zat uji seperti tertera pada
masing-masing monografi.
Larutan baku Campur 10 ml Larutan baku timbal 1
bpj atau 2 bpj sesuai yang ditetapkan dengan 2 ml
Larutan uji.
Larutan blangko Campur 10 ml air dengan 2 ml
Larutan uji.
Prosedur Ke dalam tiap larutan tambahkan 2 ml dapar
asetat pH 3,5 dan campur. Tambah 1,2 ml tioasetamida
LP, campur dengan cepat dan diamkan 2 menit. Amati
permukaan dari atas pada dasar putih: uji tidak absah bila
Larutan baku tidak menunjukkan warna cokelat
dibanding Larutan blangko, warna cokelat yang terjadi
pada Larutan uji tidak lebih intensif dari warna Larutan
baku. Jika hasil yang diperoleh sulit untuk disimpulkan,
saring larutan melalui penyaring membran (ukuran pori
3 µm); lihat gambar alat tanpa prefilter. Lakukan
penyaringan secara lambat dan menyeluruh menggunakan
tekanan sedang dan konstan. Bandingkan bercak pada
penyaring di antara ketiga larutan.
Metode III
[Catatan Metode ini tidak mencakup merkuri.]
Dapar asetat pH 3,5 Buat seperti tertera pada Metode I.
Larutan baku Buat seperti tertera pada Metode I.
Larutan uji Gunakan sejumlah zat uji dalam g, yang
dihitung dengan rumus :
2,0
1000 L
L adalah batas Logam berat dalam persen. Masukkan
sejumlah zat yang telah ditimbang ke dalam krus yang
sesuai, tambahkan asam sulfat P secukupnya untuk
membasahi, dan pijarkan hati-hati pada suhu rendah
hingga mengarang. Selama pengarangan krus tidak boleh
ditutup rapat. Pada bagian yang telah mengarang,
tambahkan 2 ml asam nitrat P dan 5 tetes asam sulfat P,
panaskan hati-hati sampai asap putih tidak terbentuk lagi.
Pijarkan, sebaiknya dalam tanur, pada suhu 500º - 600º,
sampai arang habis terbakar. Dinginkan, tambahkan 4 ml
asam klorida 6 N, tutup, digesti di atas tangas uap selama
15 menit, buka dan uapkan perlahan-lahan di atas tangas
uap hingga kering. Basahkan sisa dengan 1 tetes asam
klorida P, tambahkan 10 ml air panas, dan digesti selama
2 menit. Tambahkan amonium hidroksida 6 N tetes demi
tetes, hingga larutan bereaksi basa terhadap kertas
lakmus, encerkan dengan air hingga 25 ml, dan atur pH
antara 3,0 dan 4,0 dengan penambahan asam asetat 1 N,
menggunakan kertas indikator pH rentang pendek sebagai
indikator eksternal. Saring jika perlu, bilas krus dan
penyaring dengan 10 ml air. Kumpulkan filtrat dan air
cucian dalam tabung pembanding warna 50 ml, encerkan
dengan air hingga 40 ml, dan campur.
Prosedur Ke dalam tiap tabung yang masing-masing
berisi Larutan baku dan Larutan uji tambahkan 2 ml
 - 1417 -
dapar asetat pH 3,5 kemudian tambahkan 1,2 ml
tioasetamida LP, encerkan dengan air hingga 50 ml,
campur, diamkan selama 2 menit. Amati permukaan dari
atas pada dasar putih: Warna yang terjadi pada Larutan
uji tidak lebih gelap dari warna yang terjadi pada Larutan
baku.
Metode IV
Larutan uji Masukkan sejumlah zat (tidak lebih dari
2 g) ke dalam krus silika dan 4 ml larutan magnesium
sulfat P 25% dalam asam sulfat 2 N. Aduk dengan batang
pengaduk kaca kecil dan panaskan hati-hati. Jika
campuran berbentuk cairan, uapkan perlahan-lahan di
atas tangas air hingga kering. Pijarkan dengan cepat, suhu
tidak lebih dari 800º, dan lanjutkan pemanasan hingga
sisa berwarna putih atau keabu-abuan. Biarkan dingin,
basahkan sisa dengan 0,2 ml asam sulfat 2 N, uapkan,
pijarkan kembali dan biarkan dingin. Lama pemijaran
tidak boleh lebih dari 2 jam. Larutkan residu dalam 5 ml
asam klorida 2 N, dan tambahkan lagi 5 ml asam klorida
2 N. Tambahkan 0,1 ml fenolftalein LP dan amonium
hidroksida 13 N tetes demi tetes hingga terjadi warna
merah muda. Dinginkan, tambahkan asam asetat glasial
P hingga larutan tidak berwarna, dan tambahkan lagi 0,5
ml asam asetat glasial P. Saring jika perlu dan encerkan
larutan dengan air hingga 20 ml.
Larutan baku Buat seperti tertera pada larutan uji
menggunakan sejumlah Larutan timbal yang ditentukan
(10 bpj Pb) untuk mengganti zat yang diuji. Pada 10 ml
larutan yang diperoleh tambahkan 2 ml Larutan uji.
Larutan blangko Campur 10 ml air dengan 2 ml
Larutan uji.
Prosedur Ke dalam masing-masing 12 ml larutan
tambahkan 2 ml dapar asetat pH 3,5 dan campur.
Tambahkan 1,2 ml tioasetamida LP, campur dengan
cepat, diamkan 2 menit. Amati permukaan dari atas pada
dasar putih: Uji tidak absah bila Larutan baku tidak
menunjukkan warna cokelat dibanding Larutan blangko,
warna cokelat yang terjadi pada Larutan uji tidak lebih
intensif dari warna Larutan baku. Jika hasil yang
diperoleh sulit untuk disimpulkan, saring larutan melalui
penyaring membran (ukuran pori 3 µm); lihat gambar alat
tanpa prefilter. Lakukan penyaringan secara lambat dan
menyeluruh menggunakan tekanan sedang dan konstan.
Bandingkan bercak pada penyaring di antara ketiga
larutan.
Metode V
Dapar asetat pH 3,5 Buat seperti tertera pada Metode I
Larutan baku Masukkan campuran 8 ml asam sulfat
P dan 10 ml asam nitrat P ke dalam labu Kjeldahl 100 ml
yang bersih dan kering, tambahkan sejumlah volume
asam nitrat P yang sama dengan jumlah yang
ditambahkan pada Larutan uji. Panaskan larutan hingga
terbentuk asap putih tebal, dinginkan, tambahkan dengan
hati-hati 10 ml air; dan jika digunakan hidrogen
peroksida pada pembuatan Larutan uji, tambahkan
sejumlah volume yang sama hidrogen peroksida P 30%
yang digunakan pada Larutan uji, didihkan perlahan-
lahan hingga terbentuk asap putih tebal. Dinginkan lagi,
tambahkan hati-hati 5 ml air, campur dan didihkan hati-
hati hingga terbentuk asap putih tebal, hingga volume
2 ml sampai 3 ml. Dinginkan, encerkan hati-hati dengan
beberapa ml air, tambahkan 2,0 ml Larutan baku timbal
(20 µg Pb) dan campur. Pindahkan ke dalam tabung
pembanding warna 50 ml, bilas labu dengan air,
tambahkan air bilasan ke dalam tabung hingga 25 ml dan
campur.
Larutan uji Kecuali dinyatakan lain pada masing-
masing monografi, gunakan sejumlah zat uji dalam g,
yang dihitung dengan rumus :
2,0
1000 L
L adalah batas Logam berat dalam persen.
Jika zat uji berbentuk padat Masukkan sejumlah zat uji
ke dalam labu Kjeldahl 100 ml yang bersih dan kering.
[Catatan Labu 300 ml dapat digunakan jika reaksi
membentuk busa berlebihan]. Klem labu dengan sudut
45º, dan tambahkan campuran 8 ml asam sulfat P dan
10 ml asam nitrat P secukupnya untuk membasahi zat.
Hangatkan perlahan-lahan hingga terjadi reaksi, biarkan
reaksi mereda. Tambahkan sejumlah sama campuran
asam, panaskan pada setiap penambahan, sampai jumlah
campuran asam yang ditambahkan 18 ml. Naikkan suhu
dan didihkan perlahan-lahan hingga larutan menjadi
gelap. Dinginkan, tambahkan 2 ml asam nitrat P dan
panaskan lagi hingga larutan menjadi gelap. Lanjutkan
pemanasan, diikuti dengan penambahan asam nitrat P
sampai tidak lagi gelap, kemudian panaskan kuat sampai
terbentuk asap putih tebal. Dinginkan, tambahkan hati-
hati 5 ml air, didihkan perlahan-lahan sampai terbentuk
asap putih, dan lanjutkan pemanasan sampai volume
berkurang hingga beberapa ml. Dinginkan, tambahkan
dengan hati-hati 5 ml air dan amati warna larutan. Jika
berwarna kuning, tambahkan dengan hati-hati 1 ml
hidrogen peroksida 30% dan uapkan lagi sampai
terbentuk asap putih tebal dan volume menjadi 2 hingga 3
ml. Jika warna larutan masih kuning, ulangi penambahan
5 ml air dan peroksida seperti di atas. Dinginkan,
encerkan hati-hati dengan beberapa ml air, pindahkan ke
dalam tabung pembanding warna 50 ml, dan bilas. Jaga
kumpulan volume bilasan tidak lebih dari 25 ml.
Jika zat berbentuk cair Masukkan sejumlah zat uji ke
dalam labu Kjeldahl 100 ml yang bersih dan kering.
[Catatan Labu 300 ml dapat digunakan jika reaksi
membentuk busa berlebihan]. Klem labu pada sudut 45
dan tambahkan dengan hati-hati beberapa ml campuran 8
ml asam sulfat P dan 10 ml asam nitrat P. Hangatkan
perlahan-lahan hingga terjadi reaksi, biarkan reaksi
 - 1418 -
mereda dan lanjutkan seperti tertera pada Jika zat uji diperoleh sulit untuk disimpulkan, saring larutan melalui
berbentuk padat dimulai dengan “Tambahkan lagi penyaring membran (ukuran pori 3 µm); lihat gambar alat
sejumlah campuran asam yang sama...”. tanpa prefilter. Lakukan penyaringan secara lambat dan
menyeluruh menggunakan tekanan sedang dan konstan.
Larutan pembanding Lakukan digesti menggunakan Bandingkan bercak pada penyaring di antara ketiga
sejumlah sama sampel dengan prosedur yang sama larutan.
seperti tertera pada Larutan uji sub bagian Jika zat
berbentuk padat sampai langkah “Dinginkan, tambahkan
dengan hati-hati dengan beberapa ml air”. Tambahkan
2,0 ml Larutan baku timbal (20 µg Pb), campur.
Pindahkan ke dalam tabung pembanding warna 50 ml,
cuci labu dengan air, tambahkan air cucian ke dalam
tabung sampai 25 ml dan campur.

Prosedur Perlakukan Larutan uji, Larutan baku dan

Larutan pembanding sebagai berikut: Atur pH larutan
antara 3,0 dan 4,0 dengan penambahan amonium
hidroksida P (amonia LP dapat digunakan jika diinginkan
pada saat mendekati jarak pH yang ditetapkan), encerkan
dengan air hingga 40 ml, campur. Ke dalam tiap tabung
tambahkan 2 ml dapar asetat pH 3,5 kemudian 1,2 ml
tioasetamida LP, encerkan dengan air hingga 50 ml,
campur dan diamkan 2 menit. Amati permukaan dari atas
pada dasar putih: Warna yang terjadi pada Larutan uji
tidak lebih gelap dari warna yang terjadi pada Larutan
baku dan warna yang terjadi pada Larutan pembanding
sama atau lebih gelap dari warna yang terjadi pada
Larutan baku. Alat untuk Uji Batas Logam Berat

Metode VI

Larutan uji Campur sejumlah zat uji dengan 50 mg

UJI BATAS RAKSA <381>
magnesium oksida P dalam krus silika. Pijarkan di atas
Metode I
nyala api sampai terbentuk masa homogen berwarna
putih atau putih keabu-abuan. Jika setelah 30 menit
[Catatan Raksa(II) ditizonat peka terhadap cahaya.
campuran masih berwarna, biarkan dingin, aduk dengan
Lakukan pengujian dalam cahaya lemah].
batang pengaduk kaca kecil dan ulangi pemijaran.
Panaskan pada suhu 800 selama lebih kurang 1 jam,
Pereaksi Larutan persediaan ditizon Larutkan 40 mg
larutkan residu dalam 5 ml asam klorida 5 N, tambahkan
ditizon P dalam 1000 ml kloroform P.
lagi 5 ml asam klorida 5 N dan lanjutkan prosedur
Titran ditizon Encerkan 30,0 ml Larutan persediaan
seperti tertera pada Metode IV, mulai dengan
ditizon dengan kloroform P hingga 100,0 ml. Larutan ini
“Tambahkan 0,1 ml ...”.
mengandung lebih kurang 12 mg ditizon P per liter.
Larutan persediaan raksa Masukkan 135,4 mg
Larutan baku Buat seperti tertera pada Larutan uji
raksa(II) klorida P ke dalam labu tentukur 100-ml,
menggunakan Larutan baku timbal yang ditetapkan
encerkan dengan asam sulfat 1 N sampai tanda. Larutan
(10 bpj) untuk menggantikan zat yang diuji dan keringkan
ini mengandung setara dengan 100 mmHg per 100 ml.
dalam oven pada suhu 100º - 105º. Pada 10 ml larutan
Larutan raksa untuk pembakuan titran ditizon
yang diperoleh, tambahkan 2 ml Larutan uji.
Masukkan 2,0 ml Larutan persediaan raksa ke dalam
labu tentukur 100-ml, encerkan dengan asam sulfat 1 N
Larutan blangko Campur 10 ml air dan 2 ml Larutan
sampai tanda. Tiap ml larutan ini mengandung setara
uji.
dengan 20 µg Hg.
Larutan-larutan berikut digunakan untuk uji batas raksa
Prosedur Ke dalam masing-masing 12 ml larutan
yang tertera pada monografi: Besi(II) Fumarat dan
tambahkan 2 ml dapar asetat pH 3,5 dan campur.
Besi(II) Sulfat.
Tambahkan 1,2 ml tioasetamida LP, campur dengan
cepat, diamkan 2 menit. Amati permukaan dari atas pada
Larutan hidroksilamina hidroklorida Buat seperti
dasar putih: Uji tidak absah bila Larutan baku tidak
tertera pada Uji Batas Timbal <401>.
menunjukkan warna cokelat dibanding Larutan blangko,
warna cokelat yang terjadi pada Larutan uji tidak lebih
intensif dari warna Larutan baku. Jika hasil yang
 - 1419 -
Larutan baku raksa Buat larutan segar dengan
mengencerkan secara kuantitatif 1,0 ml Larutan
persediaan raksa dengan asam sulfat 1 N sampai 1000
ml. Tiap ml larutan ini setara dengan 1 µg Hg.
Larutan pengekstraksi ditizon Buat seperti tertera
pada Uji Batas Timbal <401>.
Larutan pengekstraksi ditizon encer Buat larutan
segar, encerkan 5 ml Larutan pengekstraksi ditizon
dengan 25 ml klorofrom P.
Pembakuan titran ditizon Masukkan 1,0 ml Larutan
raksa untuk pembakuan titran ditizon ke dalam corong
pisah 250 ml, tambahkan 100 ml asam sulfat 1 N, 90 ml
air, 1 ml asam asetat glasial P dan 10 ml larutan
hidroksilamina hidroklorida P (1 dalam 5). Titrasi larutan
dengan Titran ditizon menggunakan buret mikro 10 ml,
kocok campuran 20 kali setiap penetesan dan biarkan
lapisan kloroform memisah, kemudian buang lapisan
kloroform. Lanjutkan sampai penambahan Titran ditizon
terakhir berwarna hijau setelah dikocok. Hitung jumlah
dalam µg kesetaraan Hg untuk tiap ml Titran ditizon
dengan rumus:
 20 
 
V 
V adalah volume, dalam ml Titran ditizon yang
ditambahkan.
Larutan uji Timbang saksama lebih kurang 2 g,
masukkan ke dalam labu Erlenmeyer 250 ml bersumbat
kaca, tambahkan 20 ml campuran asam nitrat P dan asam
sulfat P volume sama, hubungkan dengan pendingin yang
sesuai, refluks campuran selama 1 jam, dinginkan,
encerkan hati-hati dengan air dan didihkan sampai uap
asam nitrit habis. Dinginkan larutan, encerkan hati-hati
dengan air, pindahkan ke dalam labu tentukur 200-ml,
encerkan dengan air sampai tanda, campur dan saring.
Prosedur Masukkan 50,0 ml Larutan uji ke dalam
corong pisah 250 ml, ekstraksi beberapa kali dengan
sedikit kloroform P, sampai ekstrak kloroform terakhir
tidak berwarna. Buang ekstrak kloroform dan pada
larutan tambahkan 50 ml asam sulfat 1 N, 90 ml air, 1 ml
asam asetat glasial P dan 10 ml larutan hidroksilamina
hidroklorida P (1 dalam 5). Lakukan seperti pada
Pembakuan titran ditizon, mulai dengan “Titrasi larutan
dengan Titran ditizon”. Hitung jumlah raksa.
Metode II
Instrumen deteksi raksa Gunakan spektrofotometer
serapan atom yang sesuai, dilengkapi dengan perekam
respons cepat dan dapat mengukur radiasi yang diserap
oleh uap raksa pada garis resonansi raksa pada 253,6 nm.
[Catatan Cuci semua peralatan kaca yang digunakan
dengan asam nitrat P, dan bilas seaksama dengan air
sebelum digunakan].
Alat aerasi (Lihat gambar) Terdiri dari pengukur laju
aliran yang dapat mengukur laju aliran dari 500 ml
hingga 1000 ml per menit, yang dihubungkan kran
bertutup politef tiga aliran ke bejana aerasi (botol pencuci
gas 250 ml), labu perangkap; tabung pengering berisi
magnesium perklorat P dan sel 10 cm x 25 mm dengan
jendela kuarsa, yang dihubungkan ke lemari asam.
Pereaksi
Larutan kalium permanganat Larutkan 5 g kalium
permanganat P dalam 100 ml air.
Larutan hidroksilamina hidroklorida Larutkan 10 g
hidroksilamina hidroklorida P dalam 100 ml air.
Larutan timah(II) klorida Larutkan 10 g timah(II)
klorida, SnCl2.2H2O dalam 20 ml asam klorida P hangat,
tambahkan 80 ml air. Buat segar setiap minggu.
Larutan baku raksa Buat dari Larutan persediaan
raksa seperti pada Metode I. Tiap ml Larutan baku raksa
mengandung setara dengan 1 µg Hg.
Larutan uji Kecuali dinyatakan lain dalam masing-
masing monografi, timbang dalam g, zat uji yang dihitung
dengan rumus:
 2,0 
 
 L 
L adalah batas raksa dalam bpj.
Metode IIa
Larutan baku Pipet 2,0 ml Larutan baku raksa ke
dalam gelas piala 100 ml, tambahkan 35 ml air, 3 ml
asam sulfat P, dan 1 ml Larutan kalium permanganat.
Tutup gelas piala dengan kaca arloji, didihkan beberapa
detik, dinginkan.
Larutan uji Masukkan sejumlah zat uji ke dalam gelas
piala 100 ml, dan tambahkan 35 ml air. Aduk dan
hangatkan jika perlu untuk melarutkan. Tambahkan 2
tetes fenolftalein LP, dan perlahan-lahan netralkan
seperlunya sambil terus diaduk, dengan natrium
hidroksida 1 N atau asam sulfat 1 N. Tambahkan 3 ml
 - 1420 -
asam sulfat P dan 1 ml Larutan kalium permanganat.
Tutup gelas piala dengan kaca arloji, didihkan beberapa
menit, dan dinginkan.
Prosedur Pasang alat aerasi seperti pada gambar,
dengan bejana aerasi dan labu perangkap dalam keadaan
kosong, dan kran pada posisi langsung ke labu perangkap.
Hubungkan alat dengan sel penyerap, dan atur laju aliran
udara atau nitrogen P sehingga dalam prosedur berikut
diperoleh penyerapan dan reprodusibilitas maksimum,
tanpa busa berlebih dalam Larutan uji. Usahakan
pembacaan garis dasar yang lurus pada 253,6 nm, sesuai
buku petunjuk penggunaan alat. Perlakukan Larutan baku
dan Larutan uji dengan cara yang sama sebagai berikut:
Hilangkan kelebihan permanganat dengan penambahan
tetes demi tetes Larutan hidroksilamina hidroksida,
sampai larutan tidak berwarna. Segera masukkan larutan
ke dalam bejana aerasi, bilas dan encerkan dengan air
hingga 100 ml. Tambahkan 2 ml Larutan timah(II)
klorida, dan segera hubungkan kembali bejana aerasi
dengan Alat aerasi, putar kran dari posisi langsung ke
labu perangkap ke posisi aerasi, dan teruskan aerasi
sampai puncak serapan telah terlampaui dan pena
pencatat kembali ke garis dasar. Lepaskan bejana aerasi
dari alat, dan cuci alat setelah digunakan. Setelah
dikoreksi dengan blangko pereaksi, serapan Larutan uji
tidak lebih dari Larutan baku.
Metode IIb
[Perhatian Beberapa zat pada waktu didigesti dengan
hidrogen peroksida dapat menimbulkan ledakan hebat.
Perhatikan keamanan selama bekerja].
Larutan baku Pipet 2 ml Larutan baku raksa ke
dalam Erlenmeyer 125 ml, tambahkan masing-masing 3
ml asam nitrat P dan asam sulfat P, campur, dan
tambahkan sejumlah hidrogen peroksida P sejumlah yang
sama seperti yang digunakan pada pembuatan Larutan
uji. Hubungkan labu dengan kondensor air dingin yang
sesuai, dan refluks di dalam lemari asam selama 1 jam.
Hentikan sirkulasi air yang melewati kondensor, dan
panaskan hingga terjadi uap putih di dalam labu.
Dinginkan, dan secara hati-hati tambahkan 10 ml air
melalui pendingin, sambil goyangkan labu. Panaskan
kembali hingga terjadi uap putih, dinginkan dan
tambahkan lagi 15 ml air. Lepaskan kondensor dan bilas
dinding labu hingga diperoleh volume 35 ml. Tambahkan
1 ml Larutan kalium permanganat, didihkan selama
beberapa detik, dan dinginkan.
Larutan uji Masukkan sejumlah zat uji yang telah
dihitung ke dalam labu Erlenmeyer 125 ml. Tambahkan
masing-masing 5 ml asam nitrat P dan asam sulfat P dan
beberapa manik kaca. Hubungkan labu dengan kondensor
air dingin dan digesti dalam lemari asam, sebaiknya
dengan lempeng pemanas pada suhu tidak lebih dari 120
sampai mulai pengarangan. (Jika diperlukan penambahan
asam sulfat P untuk membasahi spesimen secara
sempurna, tambahkan hati-hati melalui kondensor, tetapi
jumlahnya tidak boleh lebih dari 10 ml). Setelah zat uji
terurai oleh asam, tambahkan hati-hati melalui pendingin,
tetes demi tetes hidrogen peroksida P, biarkan reaksi reda
dan panaskan lagi di antara penetesan (tambahkan
beberapa tetes pertama dengan sangat hati-hati dengan
pencampuran yang cukup, untuk mencegah reaksi yang
cepat; hentikan pemanasan jika terjadi buih berlebihan).
Jika reaksi telah reda, panaskan hati-hati, goyang labu
sesekali untuk mencegah zat melekat pada dinding dasar
labu yang kontak dengan pemanas. Pertahankan kondisi
oksidasi selama digesti dengan penambahan sedikit
hidrogen peroksida apabila campuran menjadi cokelat
atau hitam. Lanjutkan digesti sampai zat organik terurai,
dan kemudian refluks campuran selama 1 jam. Hentikan
sirkulasi air pendingin, dan panaskan hingga terjadi asap
putih belerang trioksida berlebih dan larutan menjadi
tidak berwarna atau sedikit kekuningan. Dinginkan, dan
tambahkan 10 ml air hati-hati melalui kondensor, sambil
menggoyangkan labu. Panaskan kembali hingga terjadi
uap putih. Dinginkan, tambahkan 15 ml air hati-hati.
Lepaskan pendingin, bilas dinding labu sebelah dalam
dengan beberapa ml air hingga diperoleh volume 35 ml.
Tambahkan 1 ml Larutan kalium permanganat, didihkan
selama beberapa detik, dan dinginkan.
Prosedur Lakukan seperti tertera pada Prosedur dalam
Metode IIa.
UJI BATAS SELENIUM <391>
Larutan persediaan Larutkan 40,0 mg selenium P
dalam 100 ml larutan asam nitrat P (1 dalam 2) dalam
labu tentukur 1000-ml, jika perlu hangatkan hati-hati di
atas tangas uap hingga larut, tambahkan air sampai tanda.
Pipet 5 ml larutan ke dalam labu tentukur 200-ml,
tambahkan air sampai tanda. Tiap ml larutan mengandung
setara dengan 1 µg selenium (Se).
Larutan diaminonaftalena Larutkan 10 mg 2,3-di-
aminonaftalena P dan 500 mg hidroksilamin hidroklorida
P dalam asam klorida 0,1 N hingga 100 ml. Larutan
dibuat segar.
Larutan baku Pipet 6 ml Larutan persediaan ke
dalam gelas piala 150 ml, tambahkan 25 ml larutan asam
nitrat P (1 dalam 30) dan 25 ml air.
Larutan uji Faktor penting dalam pengujian adalah
pembakaran sempurna zat uji. Untuk senyawa yang
pembakarannya kurang sempurna dan menghasilkan
jelaga, penambahan magnesium oksida P biasanya
menghasilkan pembakaran lebih sempurna dan
mengurangi pembentukan jelaga. Penambahan
magnesium oksida yang diperlukan tertera pada masing-
masing monografi. Gunakan labu pembakar 1000 ml dan
25 ml larutan asam nitrat P (1 dalam 30) sebagai cairan
penjerap, dan lakukan seperti tertera pada Pembakaran
dengan Labu Oksigen <501>, jika tidak dinyatakan lain
dalam masing-masing monografi, gunakan contoh
pengujian 100 - 200 mg. Setelah pembakaran sempurna,
 - 1421 -
basahi mulut labu dengan beberapa ml air, longgarkan
sumbat, dan bilas sumbat, tempat contoh, dan dinding
labu dengan lebih kurang 10 ml air. Masukkan larutan
dengan bantuan lebih kurang 20 ml air ke dalam gelas
piala 150 ml dan panaskan hati-hati sampai suhu didih.
Didihkan selama 10 menit dan biarkan dingin pada suhu
kamar.
Prosedur Perlakukan Larutan baku, Larutan uji dan
blangko pereaksi yang mengandung 25 ml larutan asam
nitrat P (1 dalam 30) dan 25 ml air, secara bersamaan
sebagai berikut: Tambahkan larutan amoniumm
hidroksida P (1 dalam 2) hingga pH 2,0 ± 0,2. Encerkan
dengan air hingga 60,0 ml dan pindahkan ke dalam
corong pisah aktinik rendah dengan bantuan 10,0 ml air,
tambahkan 10,0 ml air bilasan ke dalam corong.
Tambahkan 200 mg hidroksilamina hidroklorida P,
goyang hingga larut, tambahkan segera 5,0 ml larutan
diaminonaftalena, tutup labu, goyang. Diamkan larutan
pada suhu kamar selama 100 menit. Tambahkan 5,0 ml
sikloheksana P, kocok kuat selama 2 menit, biarkan
lapisan memisah. Buang lapisan air, dan sentrifus ekstrak
sikloheksana untuk menghilangkan air yang terdispersi.
Tetapkan serapan ekstrak sikloheksana Larutan uji dan
Larutan baku pada panjang gelombang serapan
maksimum lebih kurang 380 nm, gunakan ekstrak
sikloheksana dari blangko pereaksi sebagai blangko.
Serapan Larutan uji tidak lebih besar dari Larutan baku,
menggunakan 200 mg contoh pengujian atau jika
digunakan 100 mg contoh pengujian, tidak lebih besar
dari setengah kali serapan Larutan baku.
UJI BATAS TIMBAL <401>
Ketatnya batas jumlah timbal yang diperbolehkan
dalam sediaan farmasi mengakibatkan penggunaan dua
metode yang salah satunya adalah metode berikut ini
yang bergantung pada ekstraksi timbal dengan larutan
ditizon. Untuk penetapan kadar logam berat secara
umum, dihitung sebagai timbal, dapat dilihat pada Uji
Batas Logam Berat <371>.
Untuk uji berikut ini, gunakan pereaksi yang
mempunyai kandungan timbal serendah mungkin dan
simpan semua pereaksi dalam wadah kaca borosilikat.
Bilas semua alat kaca dengan larutan asam nitrat P
(1 dalam 2) hangat, kemudian bilas dengan air.
Pereaksi khusus
Larutan amonia sianida Larutkan 2 g kalium sianida P
dalam 15 ml amonium hidroksida P dan encerkan dengan
air hingga 100 ml.
Larutan amonium sitrat Larutkan 40 g asam sitrat P
dalam 90 ml air. Tambahkan 2 tetes atau 3 tetes merah
fenol LP dan secara hati-hati tambahkan amonium
hidroksida P hingga berwarna kemerahan. Hilangkan
timbal yang masih ada dengan cara mengekstraksi larutan
beberapa kali, tiap kali dengan 20 ml Larutan
pengekstraksi ditizon, hingga tinggal larutan ditizon yang
berwarna jingga-hijau.
Enceran larutan baku timbal Encerkan sejumlah
volume Larutan baku timbal yang diukur saksama seperti
tertera pada Uji Batas Logam Berat <371> (mengandung
10 g Pb per ml), dengan 9 bagian volume larutan asam
nitrat P (1 dalam 100) hingga kadar timbal 1 g per ml.
Larutan pengekstraksi ditizon Larutkan 30 mg ditizon
P dalam 1000 ml kloroform P dan tambahkan 5 ml etanol
P. Simpan larutan dalam lemari pendingin.
Sebelum digunakan, kocok sejumlah volume Larutan
pengekstraksi ditizon dengan lebih kurang setengah
volume larutan asam nitrat P (1 dalam 100), buang
bagian asam nitrat.
Larutan hidroksilamina hidroklorida Larutkan 20 g
hidroksilamina hidroklorida P dalam air secukupnya
hingga lebih kurang 65 ml, pindahkan ke dalam corong
pisah, tambahkan 5 tetes biru timol LP kemudian
tambahkan amonium hidroksida P hingga terjadi warna
kuning. Tambahkan 10 ml larutan natrium
dietilditiokarbamat P (1 dalam 25), campur dan diamkan
selama 5 menit. Ekstraksi larutan beberapa kali, tiap kali
dengan 10 - 15 ml kloroform P hingga 5 ml ekstrak
kloroform tidak menghasilkan warna kuning apabila
dikocok dengan tembaga(II) sulfat LP. Tambahkan asam
klorida 3 N sampai larutan berwarna merah muda (jika
perlu, tambahkan lagi 1 tetes atau 2 tetes biru timol LP)
dan encerkan dengan air hingga 100 ml.
Larutan kalium sianida Larutkan 50 g kalium sianida P
dalam air secukupnya hingga 100 ml. Hilangkan timbal
dengan cara mengekstraksi larutan beberapa kali, tiap kali
menggunakan Larutan pengekstraksi ditizon seperti
tertera pada Larutan amonium sitrat di atas, kemudian
ekstraksi sisa ditizon dengan kloroform P. Encerkan
Larutan sianida dengan air secukupnya hingga kadar 10 g
kalium sianida per 100 ml.
Larutan baku ditizon Larutkan 10 mg ditizon P dalam
1000 ml kloroform P. Simpan larutan dalam botol bebas
timbal bersumbat kaca, lindungi terhadap cahaya
menggunakan pelindung yang sesuai, simpan dalam
lemari pendingin.
Larutan uji [Catatan Apabila dalam pembuatan
larutan uji berikut ini, zat uji sangat cepat bereaksi dan
mulai mengarang dengan 5 ml asam sulfat P sebelum
dipanaskan, gunakan 10 ml larutan asam sulfat sulfat P
(1 dalam 2) dingin dan tambahkan beberapa tetes
hidrogen peroksida P sebelum dipanaskan]. Apabila
dalam monografi tidak dicantumkan pembuatan larutan
uji secara khusus, buat Larutan uji sebagai berikut.
[Perhatian Lakukan prosedur ini dengan hati-hati, sebab
beberapa zat mudah meledak apabila bereaksi dengan
hidrogen peroksida]. Masukkan 1,0 g zat uji ke dalam
labu yang sesuai, tambahkan 5 ml asam sulfat P dan
beberapa manik kaca, dan ekstraksi di atas lempeng
pemanas dalam lemari asam hingga mulai mengarang.
Pemanasan dapat dilakukan dengan cara lain yang sesuai
(jika perlu tambahkan asam sulfat P lagi, agar basah
sempurna, tetapi penambahan jangan lebih dari 10 ml).
Tambahkan hidrogen peroksida P 30% tetes demi tetes
dengan hati-hati, biarkan reaksi mereda dan panaskan lagi
diantara penetesan. Tambahkan beberapa tetes pertama
 - 1422 -
secara sangat pelan, campur hati-hati supaya reaksi tidak
terlalu cepat, dan hentikan reaksi jika terbentuk busa
berlebih. Goyang larutan dalam labu untuk mencegah zat
yang tidak bereaksi menempel pada dinding labu
[Catatan tambahkan peroksida jika campuran menjadi
cokelat atau menjadi gelap]. Lanjutkan ekstraksi hingga
zat terurai sempurna, timbul asap belerang trioksida dan
larutan menjadi tidak berwarna. Dinginkan, tambahkan
hati-hati 10 ml air, panaskan hingga belerang trioksida
timbul lagi, dan dinginkan. Ulangi prosedur ini
menggunakan 10 ml air lagi untuk menghilangkan sisa
hidrogen peroksida, encerkan hati-hati dengan 10 ml air
dan dinginkan.
Prosedur Pindahkan Larutan uji, bilas dengan 10 ml
air, atau sejumlah volume larutan uji khusus seperti
tertera pada monografi, ke dalam corong pisah, dan
apabila tidak dinyatakan lain dalam monografi,
tambahkan 6 ml Larutan amonium sitrat dan 2 ml
Larutan hidroksilamina hidroklorida. (Untuk penetapan
timbal dalam garam besi gunakan 10 ml Larutan
amonium sitrat). Tambahkan 2 tetes merah fenol LP dan
basakan dengan amonium hidroksida P, hingga berwarna
merah. Dinginkan larutan jika perlu, tambahkan 2 ml
Larutan kalium sianida. Ekstraksi segera larutan ini
beberapa kali, tiap kali dengan 5 ml Larutan
pengekstraksi ditizon, alirkan tiap ekstrak ke dalam
corong pisah lain hingga larutan ditizon tetap berwarna
hijau. Kocok kumpulan larutan ditizon selama 30 detik
dengan 20 ml larutan asam nitrat P (1 dalam 100) dan
buang lapisan kloroform. Ke dalam larutan asam,
tambahkan 5,0 ml Larutan baku ditizon dan 4 ml Larutan
amonia-sianida dan kocok selama 30 detik: warna
lembayung lapisan kloroform tidak lebih tua dari pada
larutan pembanding yang dibuat dari sejumlah volume
Enceran larutan baku timbal yang setara dengan batas
timbal zat uji, menggunakan pereaksi yang sama dan
diperlakukan sama seperti zat uji.
UJI ZAT MUDAH TERARANGKAN <411>
Pada uji zat mudah terarangkan, kecuali dinyatakan
lain, tambahkan sejumlah tertentu zat yang telah di
serbuk halus jika berbentuk padat, sedikit demi sedikit ke
dalam wadah banding, yang terbuat dari kaca tak
berwarna, tahan asam sulfat dan berisi sejumlah volume
tertentu asam sulfat LP.
Aduk campuran dengan batang pengaduk kaca sampai
larut, diamkan selama 15 menit. Kecuali dinyatakan lain,
bandingkan warna larutan dengan larutan padanan, yang
terdapat dalam wadah banding terbuat dari kaca tak
berwarna dan mempunyai ukuran sama bagian dalam dan
penampang melintang. Amati kedua cairan dari atas
dengan latar belakang porselen atau kaca putih.
Jika pemanasan diperlukan untuk mempercepat
pelarutan zat dalam asam sulfat LP, campur zat dengan
asam sulfat LP dalam tabung reaksi, panaskan seperti
yang ditentukan, pindahkan ke dalam wadah banding
untuk membandingkan dengan Larutan padanan yang
telah ditentukan seperti tertera pada Warna dan
Akromisitas <1291>.
Perlu diperhatikan kadar asam sulfat yang digunakan.
Pereaksi yang berkadar 95,0 % ± 0,5 % H2SO4 ditetapkan
sebagai Larutan uji.
KADAR ZINK OKSIDA DALAM MASSA
PEREKAT <421>
Panaskan 1 g contoh yang telah dipotong-potong
dengan 75 ml kloroform P, 6 ml asam asetat 6 N dan
40 ml air dalam labu Erlenmeyer hingga lapisan
kloroform mendidih, lanjutkan pemanasan selama
4 menit sambil sering digoyang, biarkan agak dingin,
tutup labu, kocok kuat-kuat selama 2 menit, bilas tutup
dengan air dan kumpulkan bilasan dalam labu.
Tambahkan 10 ml larutan dapar amonia pH 10,9 dan
titrasi selagi hangat dengan dinatrium edetat 0,1 M LV
sambil terus digoyang, menggunakan 0,2 ml campuran
indikator larutan hitam eriokrom P 0,5% dan larutan
hidroksilamin hidroklorida P 4,5% dalam metanol P.
Tiap ml dinatrium edetat 0,1 M setara dengan 8,137 mg
ZnO. Enaptuangkan cairan titrasi melalui penyaring
berukuran 106 µm, kembalikan serat yang terkumpul
pada kain ke dalam labu, cuci beberapa kali dengan
sedikit kloroform P dan keringkan pada suhu 105°.
Biarkan bahan yang sudah kering pada suhu dan
kelembaban seperti tertera pada Penyiapan sediaan dalam
Identifikasi Serat <841> dan timbang. Bobot massa
perekat adalah selisih dalam bobot. Hitung persentase
kandungan zink oksida dalam massa perekat.
KANDUNGAN ANTISEPTIK DALAM
PEMBALUT <431>
Aminakrin hidroklorida Ekstraksi 25 gr potongan-
potongan kecil pembalut yang telah diimpregnasi dengan
eter P menggunakan alat Soxhlet hingga lemak
terekstraksi sempurna. Kocok ekstrak eter dengan 20 ml
air, biarkan memisah dan simpan lapisan air. Keringkan
bahan yang terekstraksi dalam aliran udara hangat dan
ekstraksi kembali dengan metanol P yang mengandung 1
ml asam klorida 2 N sampai bahan antiseptik terekstraksi
sempurna, uapkan ekstrak di atas tangas air sampai lebih
kurang 10 ml, tambahkan lapisan air yang diperoleh dari
ekstraksi dengan eter, kemudian tambahkan 100 ml air,
didihkan untuk mengurangi volume hingga lebih kurang
60 ml, dinginkan dan atur pH hingga 5,0 dengan larutan
natrium asetat P 10%. Sambil diaduk tambahkan 5 ml
kalium heksasianoferat(III) 0,04 M, biarkan selama 30
menit, saring dan cuci residu dengan 50 ml air. Pada
kumpulan filtrat dan air cucian, tambahkan berturut-turut
1 ml asam klorida P, 1 g natrium klorida P, 5 ml larutan
kalium iodida P 2,0% dan 2 ml larutan zink sulfat P
15,0%, sambil diaduk setelah setiap penambahan.
Biarkan selama 3 menit dan titrasi dengan natrium
 - 1423 -
tiosulfat 0,04 M LV menggunakan indikator natrium
amilum glikolat LP. Lakukan penetapan blangko.
1 ml natium tiosulfat 0,04 M
setara dengan 29,85 mg C13H10N2.HCl.H2O
Klorheksidin hidroklorida Larutan uji Timbang
seksama 30 g pembalut yang telah diimpregnasi,
tambahkan 140 ml air dan 60 ml asam klorida 1 N, kocok
selama 30 menit, enaptuangkan. Kocok residu selama
15 menit dua kali, tiap kali dengan 100 ml campuran
7 volume air dan tiga kali volume asam klorida 1 N,
enaptuangkan setiap ekstrak. Encerkan kumpulan ekstrak
dengan air hingga 1000 ml. Pada 40,0 ml larutan ini
tambahkan 45 ml air dan 5 ml larutan setrimida P 20%,
basakan dengan natrium hidroksida 5 N, terhadap kertas
lakmus P, tambahkan 2 ml brom P 1,0% dalam natrium
hidroksida 10 N dan kocok. Tambahkan 1 ml isopropanol
P untuk menghilangkan buih, encerkan dengan air hingga
100 ml dan biarkan pada suhu 18° - 22° selama 25 menit.
Ukur serapan dari larutan yang dihasilkan pada panjang
gelombang serapan maksimum lebih kurang 480 nm.
Kurva kalibrasi Buat kurva kalibrasi serapan
menggunakan larutan yang mengandung 0,001% sampai
0,005% Klorheksidin Hidroklorida BPFI dalam
campuran 5 volume asam klorida 1 N dan 95 volume air.
Lakukan seperti tertera pada Larutan uji, mulai dari
“Pada 40,0 ml larutan ini tambahkan...”. Hitung
kandungan C22H30Cl2N10.2HCl menggunakan kurva
kalibrasi.
Klorheksidin glukonat Lakukan penetapan seperti
tertera pada Klorheksidin Hidroklorida, menggunakan
larutan Klorheksidin Glukonat BPFI untuk membuat
kurva kalibrasi. Hitung kandungan C22H30Cl2N10.2C6H12O7.
Domifen bromide Gunakan Metode I atau Metode II.
Metode I umumnya segera digunakan, tetapi pada
pembalut tertentu, zat warna yang digunakan pada
pembuatan pembalut dapat mengganggu warna biru
normal lapisan kloroform pada waktu titrasi. Dalam hal
ini gunakan Metode II.
Metode I Keringkan 5 g (w g) potongan-potongan kecil
pembalut yang telah diimpregnasi pada suhu 105° sampai
bobot tetap. Celupkan bahan yang telah kering dalam 100
ml asam klorida P-metanol 1 N yang dibuat dengan
mengalirkan gas hidrogen klorida P ke dalam metanol P,
kocok selama 30 menit, enaptuangkan larutan; masukkan
50 ml ke dalam labu bulat alas datar, ,uapkan hingga 5 ml
sampai 10 ml diatas tangas air dan biarkan dingin.
Tambahkan 40 ml air dan 0,2 ml biru bromofenol LP.
Titrasi dengan natrium hidroksida 2 N LV sampai
berwarna biru atau hijau dan tambahkan berlebih 5 ml.
Tambahkan 3,0 g natrium asetat anhidrat P dan 10 ml
kloroform P, kocok dan titrasi dengan larutan natrium
dodesil sulfat P 0,014% hingga warna lapisan kloroform
berubah menjadi tidak berwarna atau kuning (V1 ml).
Ulangi pengujian menggunakan 5 g kain pembalut dasar
tanpa diimpregnasi dan tidak diberi zat perwarna yang
telah diberi larutan 5,0 ml domifen bromida P 0,140%
dalam metanol P dan telah didispersikan dan dikeringkan
pada suhu 105° (V2 ml). Hitung persentase C22H40BrNO,
dengan rumus:
0,7V1
wV 2
Metode II Buat kolom kromatografi sebagai berikut:
Suspensikan sejumlah resin penukar anion basa kuat
(Amberlit IRA-400, Deasidit FF-IP atau Zerolit FF)
dalam asam klorida 2 N dan biarkan selama 10 menit.
Masukkan suspensi secukupnya ke dalam tabung
kromatografi yang sesuai, dilengkapi gumpalan wol kaca
pada ujungnya yang menyempit, hingga tinggi kolom
lebih kurang 15 cm, cuci kolom dengan air hingga pH
eluat 6 - 7, kemudian cuci beberapa kali dengan metanol P.
Keringkan 5 g potongan-potongan kecil bahan
pembalut yang akan diuji pada suhu 105° hingga bobot
tetap, celupkan ke dalam labu Erlenmeyer 250 ml yang
berisi 100 ml metanol P dan kocok selama 30 menit.
Enaptuangkan cairan bagian atas yang jernih. Masukkan
50 ml ke dalam kolom melalui corong pisah dengan
kecepatan lebih kurang 3 ml per menit, kumpulkan eluat
dalam labu alas datar, cuci kolom dengan 40 ml metanol
P, uapkan kumpulan eluat dan cucian di atas tangas air
hingga volume 5 ml sampai 10 ml, biarkan dingin dan
lakukan seperti tertera pada Metode I, mulai dari
“Tambahkan 40 ml air dan ...”.
KANDUNGAN ZAT ANTIMIKROBA <441>
Komponen penting dalam injeksi yang dikemas dalam
wadah dosis ganda adalah zat atau zat-zat yang dapat
mengurangi bahaya cemaran mikroba. Farmakope
mensyaratkan pencantuman nama dan jumlah zat
antimikroba pada etiket. Metode di bawah ini adalah
untuk zat-zat yang paling umum digunakan untuk
menunjukkan bahwa zat yang tertera memang ada tetapi
tidak lebih dari 20% dari jumlah yang tertera pada etiket.
Kadar pengawet antimikroba yang ditambahkan ke
dalam sediaan parenteral dosis ganda atau dosis tunggal,
sediaan telinga, hidung dan mata dapat berkurang selama
masa berlakunya suatu produk. Karena diketahui bahwa
kadar pengawet dalam sediaan dapat berkurang selama
masa berlakunya produk, produsen hendaknya
menentukan kadar pengawet terendah yang masih efektif
dan produk tersebut harus diformulasikan sedemikian
untuk meyakinkan bahwa kadar terendah ini dilampaui
selama masa berlakunya produk. Pada saat pembuatan,
produk harus mengandung sejumlah pengawet
antimikroba seperti tertera pada etiket (dalam rentang
± 20%). Pencantuman jumlah pengawet yang tertera pada
etiket bukan berarti bahwa jumlah tersebut tetap selama
masa berlaku produk, tetapi merupakan pernyataan
tentang jumlah yang ditambahkan, dalam batas proses,
dan tidak melampaui 20%. Contoh pernyataan pada etiket
“..... (unit) ditambahkan sebagai pengawet”. [Catatan
 - 1424 -

 C  p  P 
.......(unit) berupa angka yang diikuti dengan satuan
ukuran, misalnya 0,015 mg per ml atau 0,1%]. 100  1  2 
Zat-zat yang paling lazim digunakan adalah 2 senyawa  V  p 2  P1 
raksa: fenil raksa(II) nitrat dan timerosal; dan 4 homolog
ester asam p-hidroksibenzoat, fenol, benzil alkohol, dan
klorobutanol. Cara penetapan fenil raksa(II) nitrat dan C adalah kadar benzil alkohol dalam mg per ml Larutan
timerosal dengan metode polarografi, sedangkan yang baku; V adalah volume zat uji dalam ml tiap 100 ml
lainnya secara kromatografi gas. Larutan uji.

METODE UMUM KROMATOGRAFI GAS Klorobutanol

Prosedur umum berikut ini dapat digunakan untuk Larutan baku internal Larutkan lebih kurang 140 mg
penetapan kuantitatif benzil alkohol, klorobutanol, fenol benzaldehida P dalam 10 ml metanol P dalam labu
dan ester metil, etil, propil dan butil asam tentukur 100-ml, goyang sampai larut, dan encerkan
p-hidrobenzoat, yang disebut terakhir dianggap sebagai dengan air sampai tanda.
satu kelompok, dan masing-masing, jika ada, dapat
ditetapkan secara terpisah. Buat Larutan baku internal Larutan baku Timbang saksama lebih kurang 125 mg
dan Larutan baku untuk tiap senyawa seperti berikut ini. klorobutanol P, masukkan ke dalam labu tentukur 25-ml.
Kecuali dinyatakan lain, buat Larutan uji dengan cara Tambahkan 2 ml metanol P, goyang sampai larut.
mencampur sejumlah Larutan baku internal dan sejumlah Encerkan dengan air sampai tanda. Pipet 5 ml larutan ini
zat uji yang diukur saksama, hingga kadar zat dan 5,0 ml Larutan baku internal, masukkan ke dalam
antimikroba dan komposisi pelarutnya mendekati kadar labu tentukur 25-ml, campur hingga kadar klorobutanol
dan komposisi Larutan baku. Parameter operasional lebih kurang 2,5 mg per ml.
kromatograf gas disarankan seperti tertera pada tabel
dibawah ini; sebagai gas pembawa helium P atau nitrogen Larutan uji Ukur saksama sejumlah volume zat uji,
P; tipe detektor ionisasi nyala. jika perlu encerkan dengan metanol P hingga
mengandung klorobutanol tidak lebih dari 5,0 mg per ml.
Tabel Parameter Operasional Campur 3,0 ml larutan ini dengan 3,0 ml Larutan baku
Kromatograf Gas internal.
Sistem kromatografi Lakukan penetapan dengan cara
laju
Ukuran kolom Isi kolom/
aliran, suhu kromatografi gas seperti tertera pada Kromatografi <931>
Zat fase
Diameter penyangga
ml per kolom [Catatan lihat Tabel Parameter Operasional
panjang menit
dalam Kromatograf Gas]. Pertahankan suhu injektor dan
Benzil Alkohol 1,8 m 3 mm 5% G16/SIA 50 140o detektor masing-masing pada suhu 180 dan 220.
Klorobutanol 1,8 m 2 mm 5% G16/SIA 20 110o
Fenol 1,2 m 3 mm 5% G16/SIA 50 145o Lakukan kromatografi terhadap Larutan baku, rekam
Paraben 1,8 m 2 mm 5% G2/SIA 20 150o kromatogram dan ukur respons puncak seperti tertera
pada Prosedur: resolusi, R, antara puncak benzaldehida
Benzil Alkohol dan klorobutanol tidak kurang dari 2,0 dan simpangan
baku relatif pada penyuntikan ulang tidak lebih dari 2,0%.
Larutan baku internal Larutkan lebih kurang 380 mg Prosedur Suntikkan secara terpisah sejumlah volume
fenol P dalam 10 ml metanol P dalam labu tentukur 200- sama (lebih kurang 1 µl) Larutan baku dan Larutan uji ke
ml, tambahkan air sampai tanda. dalam kromatograf, ukur respons puncak utama. Waktu
retensi relatif benzaldehida dan klorobutanol masing-
Larutan baku Timbang saksama lebih kurang 180 mg masing lebih kurang 0,8 dan 1,0. Hitung jumlah dalam
benzil alkohol P, larutkan dalam 20,0 ml metanol P mg C4H7Cl3O, per ml zat uji yang digunakan dengan
dalam labu tentukur 100-ml. Tambahkan Larutan baku rumus :
internal sampai tanda.
 L  R 
Prosedur Suntikkan secara terpisah sejumlah volume C   u 
sama (lebih jurang 5 µl) Larutan baku dan Larutan uji,  D  Rs 
gunakan parameter operasional kromatograf gas yang
tertera pada Tabel. Ukur luas puncak benzil alkohol dan C adalah klorobutanol dihitung terhadap zat anhidrat
fenol Larutan baku, tandai masing-masing dengan P1 dan dalam mg per ml Larutan baku; L adalah jumlah
P2, dan luas puncak p1 dan p2 dari Larutan uji. Hitung klorobutanol yang tertera pada etiket dalam mg per ml zat
jumlah dalam mg C7H8O, per ml zat uji yang digunakan uji; D adalah kadar klorobutanol dalam mg per ml
dengan rumus : Larutan uji dihitung terhadap volume zat uji yang telah
diencerkan; Ru dan Rs berturut-turut adalah perbandingan
puncak klorobutanol dan benzaldehida dalam Larutan uji
dan Larutan baku.
 - 1425 -
Fenol
Larutan baku internal Pipet 1 ml benzil alkohol P,
masukkan ke dalam labu tentukur 500-ml, tambahkan
metanol P sampai tanda.
Larutan baku Timbang saksama lebih kurang 75 mg
fenol P, larutkan dalam 7,5 ml metanol P dalam labu
tentukur 100-ml. Tambahkan 20,0 ml Larutan baku
internal dan tambahkan air sampai tanda.
Prosedur Suntikkan secara terpisah sejumlah volume
sama (lebih kurang 3 µl) Larutan baku dan Larutan uji,
gunakan parameter operasional kromatograf gas seperti
tertera pada Tabel. Ukur luas puncak fenol dan benzil
alkohol dari Larutan baku, tandai masing-masing dengan
P1 dan P2, dan puncak p1 dan p2 dari Larutan uji. Hitung
jumlah dalam mg C6H6O, dalam per ml zat uji yang
digunakan dengan rumus:
 C  p  P 
100  1  2 
 V  p 2  P1 
C adalah kadar fenol dalam mg per ml Larutan baku; V
adalah volume zat uji dalam ml per 100 ml Larutan uji.
Metilparaben dan Propilparaben
Larutan baku internal Timbang lebih kurang 200 mg
benzofenon P, masukkan ke dalam labu tentukur 250-ml,
tambahkan eter P sampai tanda.
Larutan baku Timbang saksama masing-masing 100
mg metilparaben P dan 10 mg propilparaben P,
masukkan ke dalam labu tentukur 200-ml, tambahkan
Larutan baku internal sampai tanda. Pipet 10 ml larutan
ini, masukkan ke dalam labu Erlenmeyer 25 ml dan
lanjutkan seperti tertera pada Larutan uji, mulai dari
“Tambahkan 3 ml piridina P....”.
Larutan uji Pipet 10 ml zat uji dan 10 ml Larutan
baku internal, masukkan ke dalam corong pisah kecil.
Kocok kuat-kuat, biarkan lapisan memisah, pindahkan
lapisan air ke dalam corong pisah kedua, dan pindahkan
lapisan eter ke dalam labu kecil melalui corong yang
berisi natrium sulfat anhidrat P. Ekstraksi lapisan air
dua kali, tiap kali dengan 10 ml eter P, saring ekstrak
melalui natrium sulfat anhidrat P. Uapkan kumpulan
ekstrak dengan aliran udara kering hingga volume lebih
kurang 10 ml, dan masukkan residu ke dalam labu
Erlenmeyer 25 ml. Tambahkan 3 ml piridina P, uapkan
eter hingga sempurna dan didihkan di atas lempeng panas
hingga volume lebih kurang 1 ml. Dinginkan, dan
tambahkan 1,0 ml zat sililasi yang sesuai, seperti
heksametildisilazana P yang sebelumnya telah
ditambahkan trimetilklorosilana P, bis(trimetilsilil)
asetamida P, atau bis(trimetilsilil)trifluoroasetamida P.
Campur, dan biarkan tidak kurang dari 15 menit.
Prosedur Suntikkan secara terpisah sejumlah volume
sama (lebih kurang 2 µl) Larutan baku dan Larutan uji
masing-masing yang telah disilanisasi, gunakan
parameter operasional kromatograf gas seperti tertera
pada Tabel. Ukur luas puncak metil paraben, propil
paraben dan benzofenon Larutan baku, tandai masing-
masing dengan P1, P2 dan P3, dan luas puncak p1, p2 dan
p3 dari Larutan uji. Hitung jumlah dalam µg C8H8O3, per
ml zat uji dengan rumus:
C  p1  P3 
100 M   
 V  p 3  P1 
CM adalah kadar metilparaben dalam µg per ml Larutan
baku; V adalah volume zat uji dalam ml. Dengan cara
yang sama, hitung jumlah dalam µg propilparaben,
C10H12O3 per ml zat uji dengan rumus:
 C  p  P 
10 p  2  3 
 V  p3  P2 
Cp adalah kadar propilparaben dalam µg per ml Larutan
baku. Etilparaben dan Butilparaben dapat ditetapkan
dengan cara yang sama.
METODE POLAROGRAFI
Fenil Raksa(II) Nitrat
Larutan baku Timbang saksama lebih kurang 100 mg
fenil raksa(II) nitrat P, larutkan dalam larutan natrium
hidroksida P (1 dalam 250) dalam labu tentukur 1000-ml,
jika perlu dihangatkan, tambahkan larutan natrium
hidroksida P sampai tanda. Pipet 10 ml larutan ini,
masukkan ke dalam labu tentukur 25-ml dan lanjutkan
seperti tertera pada Larutan uji, mulai dari “tambahkan 2
ml larutan kalium nitrat P (1 dalam 100)…”.
Larutan uji Pipet 10 ml zat uji, masukkan ke dalam
labu tentukur 25-ml, tambahkan 2 ml larutan kalium
nitrat P (1 dalam 100) dan 10 ml Larutan dapar borat
basa dan atur pH hingga 9,2 jika perlu dengan
penambahan asam nitrat 2 N. Tambahkan 1,5 ml larutan
segar gelatin P (1 dalam 1000), kemudian tambahkan
Larutan dapar borat basa pH 9,2 sampai tanda.
Prosedur Masukkan sejumlah Larutan uji ke dalam sel
polarograf, hilangkan udara dengan mengalirkan gas
nitrogen ke dalam larutan selama 15 menit. Masukkan
elektrode tetes raksa pada polarograf yang sesuai
(Lakukan polarografi seperti tertera pada Polarografi
<1161> dan rekam polarogram dari -0,6 volt hingga -1,5
volt terhadap elektrode kalomel jenuh. Tetapkan arus
difusi (id)u dari Larutan uji, sebagai selisih antara arus
 - 1426 -
sisa dan arus batas. Dengan cara yang sama dan
bersamaan, lakukan penetapan arus difusi (id)s dari
Larutan baku. Hitung jumlah dalam µg, C6H5HgNO3, per
ml zat uji dengan rumus:
 i  
2,5C  d u 
 id s 
C adalah kadar fenil raksa(II) nitrat dalam µg per ml
Larutan baku.
Timerosal
Larutan baku Buat larutan segar dengan menimbang
saksama lebih kurang 25 mg timerosal P, masukkan ke
dalam labu tentukur 250-ml, tambahkan air sampai tanda.
Lindungi dari pengaruh cahaya. Pipet 15 ml larutan ini ke
dalam labu tentukur 25-ml, tambahkan 1,5 ml larutan
gelatin P (1 dalam 1000), kemudian tambahkan larutan
kalium nitrat P (1 dalam 100) sampai tanda.
Larutan uji Pipet 15 ml zat uji ke dalam labu dalam
labu tentukur 25-ml, tambahkan 1,5 ml larutan gelatin P
(1 dalam 1000) tambahkan larutan kalium nitrat P (1
dalam 100) sampai tanda.
Prosedur Masukkan sejumlah Larutan uji ke dalam sel
polarograf, hilangkan udara dengan mengalirkan gas
nitrogen ke dalam larutan selama 15 menit. Masukkan
elektrode tetes raksa pada polarograf yang sesuai
(Lakukan polarografi seperti tertera pada Polarografi
<1161>) dan rekam polarogram dari -0,2 volt sampai -1,4
volt terhadap elektrode kalomel jenuh. Tetapkan arus
difusi (id)u dari Larutan uji sebagai selisih antara arus sisa
dan arus batas. Dengan cara yang sama dan secara
bersamaan, lakukan penetapan arus difusi (id)s dari
Larutan baku. Hitung jumlah dalam µg C6H9HgNaO2S,
per ml zat uji dengan rumus:
 i  
1,667C  d u 
 id s 
C adalah kadar timerosal dalam µg per ml Larutan baku.
KAPASITAS PENETRALAN ASAM <451>
[Catatan Seluruh pengujian dilakukan pada suhu
37º ± 3º].
Standardisasi pH meter Lakukan kalibrasi pH meter
menggunakan Larutan dapar baku kalium biftalat
0,05 M dan kalium tetraoksalat 0,05 M seperti tertera
pada Penetapan pH <1071>.
Pengaduk magnetik Masukkan 100 ml air ke dalam
gelas piala 250 ml yang berisi batang pengaduk magnetik
40 mm x 10 mm yang dilapisi perfluorokarbon padat dan
mempunyai cincin putaran pada pusatnya. Atur daya
pengaduk magnetik hingga menghasilkan kecepatan
pengadukan rata–rata 300 ± 30 putaran per menit, bila
batang pengaduk terpusat dalam gelas piala, seperti yang
ditetapkan oleh takometer optik yang sesuai.
Larutan uji
Serbuk Timbang saksama sejumlah zat uji seperti yang
tertera dalam masing-masing monografi, masukan ke
dalam gelas piala 250 ml, tambahkan 70 ml air dan
campur menggunakan Pengaduk magnetik selama 1
menit.
Padatan efervesen Timbang saksama sejumlah zat uji
setara dengan dosis terkecil dari yang tertera pada etiket,
masukkan ke dalam gelas piala 250 ml, tambahkan 10 ml
air dan goyang perlahan-lahan biarkan reaksi mereda.
Tambahkan lagi 10 ml air dan goyang perlahan-lahan.
Cuci dinding bagian dalam gelas piala dengan 50 ml air
dan campur menggunakan Pengaduk magnetik selama 1
menit.
Suspensi dan Cairan lain Kocok wadah sampai isinya
homogen dan tetapkan bobot jenisnya. Timbang saksama
sejumlah campuran tersebut yang tertera pada etiket
masukkan ke dalam gelas piala 250 ml, tambahkan air
hingga jumlah volume lebih kurang 70 ml dan campur
menggunakan Pengaduk magnetik selama 1 menit.
Tablet Timbang dan serbukkan tidak kurang dai 20
tablet, hitung bobot rata-rata. Timbang saksama sejumlah
serbuk setara dengan dosis terkecil dari yang tertera pada
etiket, masukkan ke dalam gelas piala 250 ml. Jika perlu
pembahasan, tambahkan tidak lebih 5 ml etanol P (yang
telah dinetralkan sampai pH 3,5), dan campur sampai
semuanya basah. Tambahkan 70 ml air dan campur
menggunakan Pengaduk magnetik selama 1 menit.
Tablet kunyah Lakukan penyiapan seperti tertera pada
Tablet.
Tablet wajib kunyah Masukkan 1 tablet ke dalam gelas
piala 250 ml tambahkan 50 ml air dan campur
menggunakan Pengaduk magnetik selama 1 menit.
Kapsul Timbang saksama tidak kurang dari 20 kapsul,
keluarkan semua isi kapsul, jika perlu bersihkan dengan
kapas. Timbang saksama cangkang kapsul dan hitung
bobot rata-rata isi kapsul. Campur homogen semua isi
kapsul, dan lakukan penetapan seperti tertera pada Tablet,
dimulai dari “Timbang saksama sejumlah serbuk setara
dengan dosis terkecil dari yang tertera pada Tablet,
dimulai dari “Timbang saksama sejumlah serbuk setara
dengan dosis terkecil dari yang tertera pada etiket,
masukkan...”
Prosedur untuk Serbuk, Padatan Efervesen,
Susupensi dan Cairan lain, Tablet, Tablet kunyah dan
Kapsul Pipet 30 ml asam klorida 1,0 N LV ke dalam
Larutan uji sambil diaduk terus menggunakan Pengaduk
magnetik. [Catatan Bila kapasitas penetralan asam zat
uji lebih besar dari 25 mEq, gunakan 60,0 ml asam
klorida 1,0 N LV). Setelah penambahan asam, aduk
selama 15 menit tepat, segera titrasi. Titrasi kelebihan
asam klorida dengan natrium hidroksida 0,5 N LV dalam
waktu tidak lebih dari 5 menit sampai dicapai pH 3,5
 - 1427 -
yang stabil (selama 10 detik sampai 15 detik). Hitung
jumlah mEq asam yang digunakan dengan rumus:
Total mEq = (30 x NHCl) – (VNaOH x NNaOH)
NHCl dan NNaOH berturut-turut adalah normalitas dari
asam klorida LV dan natrium hidroksida LV; VNaOH
adalah volume dari natrium hidroksida LV yang
digunakan untuk titrasi. Hasil dinyatakan dalam mEq
asam yang digunakan tiap g zat uji.
Prosedur untuk tablet kunyah Pipet 30 ml asam
klorida 1,0 N LV ke dalam Larutan uji sambil diaduk
terus menggunakan Pengaduk magnetik selama 10 menit
tepat, setelah penambahan asam. Hentikan sebentar
pengadukan dan segera keluarkan zat yang lengket dari
gelas piala menggunakan jarum panjang. Segera cuci
jarum menggunakan 20 ml air, kumpulkan air cucian
dalam gelas piala, dan lanjutkan kembali pengadukan
selama 5 menit tepat. Segera titrasi kelebihan asam
klorida dengan natrium hidroksida 0,5 N LV dalam waktu
tidak lebih dari 5 menit sampai dicapai dengan pH 3,5
yang stabil (selama 10 detik sampai 15 detik). Hitung
jumlah mEq asam yang digunakan oleh tablet yang diuji
dengan rumus:
Total mEq = (30 x NHCI) – (VNaOH x NNaOH)
NHCl dan NNaOH berturut-turut adalah normalitas dari
asam klorida LV dan natrium hidroksida LV; VNaOH
adalah volume dari natrium hidroksida LV yang
digunakan untuk titrasi. Hasil dinyatakan dalam mEq
asam yang digunakan tiap g zat uji.
KELARUTAN DALAM ETANOL <461>
Timbang 1 ml minyak dalam gelas ukur bersum-bat
kaca 25 ml atau 30 ml dan masukkan ke dalam alat yang
mempunyai suhu tetap yang dipertahankan pada suhu
19,8º - 20,2º. Dengan menggunakan buret berkapasitas
tidak kurang dari 20 ml tambahkan etanol dengan kadar
seperti dinyatakan pada monografi, tiap kali dengan 0,1
ml sampai larut sempurna kemudian tiap kali dengan 0,5
ml sampai jumlah 20 ml dan sering dikocok kuat. Catat
volume etanol yang diperlukan untuk mendapatkan
larutan jernih. Lanjutkan penambahan jumlah etanol
dengan cara yang sama. Jika larutan menjadi berkabut
atau keruh sebelum penambahan 20 ml etanol, catat
volume pada saat terjadi kabut atau kekeruhan, dan juga
volume pada saat kabut atau kekeruhan hilang. Jika tidak
diperoleh larutan jernih dengan penambahan 20 ml
etanol, ulangi pengujian dengan kadar etanol yang lebih
tinggi.
Ketentuan yang digunakan
Larut dalam n bagian volume etanol (a%) atau lebih;
jika larutan jernih dalam n bagian volume etanol, setelah
penambahan selanjutnya dengan etanol berkekuatan sama
hingga berjumlah 20 bagian volume, tetap jernih
dibandingkan terhadap minyak yang tidak diencerkan.
Larut dalam n bagian volume etanol (a%), menjadi
berkabut jika diencerkan; jika larutan jernih dalam n
bagian volume manjadi berkabut dalam n1 bagian volume
(n1 kurang dari 20) dan tetap berkabut setelah
penambahan bertahap berjumlah 20 bagian volume
etanol.
Larut dalam n bagian volume etanol (a%), menjadi
berkabut dalam n1 bagian volume (n1 kurang dari 20);
jika larutan jernih dalam n bagian volume menjadi
berkabut dan tetap berkabut setelah penambahan bertahap
hingga jumlah n2 bagian volume (n2 kurang dari 20),
kemudian menjadi jernih. Maka kelarutan minyak
menguap dalam etanol (a%) adalah 1 bagian volume
dalam n bagian volume dan berkabut antara n1 dan n2
bagian volume.
Larut dengan kekeruhan; jika larutan etanol berwarna
sedikit kebiruan sama dengan yang ditimbulkan dengan
penambahan 0,5 ml perak nitrat 0,1 N dan 0,1 ml asam
nitrat P pada 50 ml larutan natrium klorida P 0,0012%,
campur, biarkan selama 5 menit.
CEMARAN SENYAWA ORGANIK MUDAH
MENGUAP <471>
Metode berikut diberikan untuk penetapan cemaran
senyawa organik mudah menguap dalam bahan
Farmakope. Metode khusus yang digunakan dan jenis
metode yang diperlukan diuraikan di dalam masing-
masing monografi.
Pengujian yang tidak perlu dapat diabaikan jika
produsen memberikan jaminan, berdasarkan data yang
jelas dari proses pembuatan dan penanganan terkendali
dan penyimpanan bahan, bahwa tidak ada kecenderungan
adanya pelarut beracun spesifik, dan bahan jika diuji,
akan memenuhi persyaratan yang ditetapkan, seperti
tertera pada Ketentuan dan Persyaratan Umum. [Catatan
Air bebas senyawa organik seperti tertera pada metode
berikut, jika dilakukan kromatografi tidak memberikan
puncak ikutan yang berarti].
Etilen Oksida Pengujian etilena oksida dilakukan hanya
jika disebutkan dalam masing-masing monografi.
Parameter larutan baku dan metode penetapan diuraikan
dalam masing-masing monografi. Batas kadar tidak lebih
dari 10 bpj.
Metode I
Lakukan kromatografi gas seperti tertera pada
Kromatografi <931>.
Pada prosedur berikut digunakan kromatograf gas yang
dilengkapi dengan program suhu, dengan kolom tabuler
terbuka berlubang lebar dengan dinding bersalut dan
detektor ionisasi nyala.
Larutan baku Buat larutan, dalam air bebas senyawa
organik atau pelarut seperti tertera pada monografi, yang
 - 1428 -
mengandung 1,0 µg kloroform P dan masing-masing
2,0 µg benzen P, 1,4-dioksan P, metilen klorida P dan
trikloroetilena P per ml.
Sistem kromatografi Kromatograf gas dilengkapi
dengan detektor ionisasi nyala, sistem injeksi tanpa celah,
kolom analitik leburan silika 0,53 mm x 30 m, diameter
dalam disalut dengan fase diam G27 sambung silang
secara kimia setebal 5 µm dan kolom pelindung silika
0,53 mm x 5 m, diameter dalam dideaktivasi dengan
fenilmetil siloksan. Gunakan helium P sebagai gas
pembawa dengan kecepatan linier lebih kurang 35 cm per
detik [Catatan Dapat digunakan nitrogen P].
Pertahankan suhu injektor dan detektor masing-masing
pada 70° dan 260°. Atur suhu kolom sebagai berikut:
pertahankan suhu 35° selama 5 menit, kemudian naikkan
suhu hingga 175° dengan kecepatan 8° per menit, diikuti
dengan kenaikan suhu hingga 260° dengan kecepatan 35°
per menit dan pertahankan suhu paling sedikit 16 menit.
Suntikkan Larutan baku, rekam kromatogram dan ukur
respons puncak seperti tertera pada Prosedur: sistem
dinyatakan sesuai jika menghasilkan kromatogram yang
semua komponen dalam Larutan baku terpisah, resolusi,
R, antara dua komponen tidak kurang dari 1,0 dan
simpangan baku relatif dari respons puncak masing-
masing pada penyuntikan ulang tidak lebih dari 15%.
Prosedur Suntikkan secara terpisah sejumlah volume
sama (lebih kurang 1 µl) Larutan baku dan Larutan uji ke
dalam kromatograf, ukur respons puncak. Identifikasi
setiap puncak pada kromatogram Larutan uji,
berdasarkan waktu retensi, dan hitung jumlah cemaran
senyawa organik mudah menguap yang tertdeteksi.
Kecuali dinyatakan lain dalam masing-masing monografi,
jumlah masing-masing cemaran senyawa organik mudah
menguap dalam zat uji tidak lebih dari batas seperti
tertera pada Tabel 1.
Tabel 1
Cemaran senyawa organik Batas (bpj)
Mudah menguap
Benzen 100
Kloroform 50*
1,4-Dioksan 100
Metilen klorida 100
Trikloroetilen 100
*Batas kurang dari 100 bpj berdasarkan toksisitas yang
relatif lebih besar.
Metode II
Lakukan kromatografi gas seperti tertera pada
Kromatografi <931>.
Gunakan kromatograf gas dengan teknik dinamika
ruang kosong di bagian atas untuk prosedur berikut.
Cemaran senyawa organik mudah menguap ditangkap
dalam penangkap jerap dan gas pendorong dilepaskan.
Cemaran senyawa organik mudah menguap yang
terperangkap dibebaskan dari perangkap dengan
memanaskan perangkap dan mengaliri kembali
perangkap dengan gas pembawa ke dalam kromatograf.
Larutan baku Lakukan seperti tertera pada Larutan
baku dalam Metode I.
Larutan uji Lakukan seperti tertera pada Larutan uji
dalam Metode I.
Alat perangkap dan pendorong Alat ini terdiri dari 3
bagian yang terpisah: pendorong zat uji, perangkap dan
alat pembebas. Pendorong zat uji dirancang agar dapat
menerima 5 ml zat uji dengan kolom air yang
kedalamannya tidak kurang dari 3 cm. Ruang kosong di
bagian atas yang berisi gas antara kolom air dan
perangkap mempunyai jumlah volume kurang dari 15 ml.
Gas pendorong yang dilewatkan melalui kolom air
membentuk gelembung udara yang terbagi halus dengan
diameter kurang dari 3 mm pada waktu keluar pertama
kali. Gas pendorong yang dialirkan tidak lebih dari 5 mm
dari dasar kolom air.
Perangkap mempunyai panjang tidak kurang dari 25
cm dan diameter dalam tidak kurang dari 2,67 mm.
Perangkap dikemas dengan zat penjerap dengan panjang
minimal seperti yang tertera di bawah ini, mulai dari
tempat masuk gas pada perangkap dengan urutan sebagai
berikut: 7,7 cm polimer 2,6-difenilena oksida; 7,7 cm
silika gel dan 7,7 cm arang tempurung kelapa.
Alat pembebas harus tahan pada pemanasan perangkap
yang cepat sampai 250°. Perangkap tidak boleh
dipanaskan lebih dari 250°. Kondisikan perangkap
terpasang pada awal penggunaan, pada suhu 225° selama
semalam dengan gas inert dengan laju aliran tidak kurang
dari 20 ml per menit. Pada penggunaan sehari-hari,
kondisikan perangkap lebih dahulu pada suhu 225°
selama 15 menit.
Sistem kromatografi Alat perangkap dan pendorong
dihubungkan dengan kromatograf gas yang dilengkapi
dengan detektor ionisasi nyala, dan kolom kaca 2 mm x
2,44 m diameter dalam berisi bahan pengisi 1% fase diam
G25 pada partikel penyangga S12. Gunakan helium P
sebagai gas pembawa dengan laju alir yang dipertahankan
40 ml per menit. Atur suhu kolom sebagai berikut;
pertahankan pada suhu 45° selama 3 menit, kemudian
naikkan hingga 220° dengan kecepatan 8° per menit dan
pertahankan suhu pada 220° selama 15 menit.
Prosedur Atur gas pendorong nitrogen P hingga laju
aliran 40 ml per menit, masukkan secara terpisah masing-
masing 5,0 ml Larutan baku dan Larutan uji ke dalam
pendorong zat uji dan dorong selama 10 menit (lebih
kurang 0,1 menit) pada suhu ruang. Setelah 10 menit,
hubungkan perangkap dengan kromatograf. Atur alat ke
posisi desorpsi dan mulai atur suhu kolom. Alirkan
senyawa organik mudah menguap yang terperangkap ke
dalam kromatograf dengan pemanasan perangkap secara
cepat sampai pada suhu 180° dan pertahankan suhu ini
selama 4 menit sambil aliri kembali perangkap dengan
 - 1429 -
nitrogen dengan laju aliran 40 ml per menit. Rekam
kromatogram dan ukur respons puncak. Sistem
dinyatakan sesuai jika menghasilkan kromatogram
dengan semua komponen dalam Larutan baku terpisah:
resolusi, R, antara dua komponen tidak kurang dari 1,5
dan simpangan baku relatif dari respons puncak masing-
masing tidak lebih dari 10%. Identifikasi setiap puncak
pada kromatogram Larutan uji, berdasarkan waktu
retensi. Hitung jumlah cemaran senyawa organik mudah
menguap dalam zat uji yang digunakan. Kecuali
dinyatakan lain dalam masing-masing monografi, jumlah
setiap cemaran senyawa organik mudah menguap tidak
lebih dari batas seperti tertera pada Tabel 1.
Metode III
Gunakan kromatograf gas dengan teknik dinamik ruang
kosong di bagian atas seperti tertera pada Metode II,
kecuali untuk deteksi dan penetapan kadar, gunakan
spektrometer massa.
Larutan baku, Larutan uji dan Alat perangkap dan
pendorong Buat seperti tertera pada Metode II.
Sistem kromatografi Lakukan seperti tertera pada
Metode II kecuali kromatograf dihubungkan dengan
spektrometer massa sebagai penganti detektor ionisasi
nyala. Spektrometer massa harus mampu mencacah dari
20 unit hingga 260 unit massa atom tiap 7 detik atau
kurang, menggunakan energi elektron 70 volt (nominal)
secara ionisasi impak elektron. Penghubung antara
kromatograf dan spektrometer massa sebaiknya
seluruhnya terbuat dari kaca atau bahan sejenis kaca.
Kaca dapat dideaktivasi dengan cara silanisasi
menggunakan diklorodimetilsilan.
Sistem komputer yang dapat mengakuisisi secara terus-
menerus dan menyimpan seluruh spektrum massa yang
diperoleh selama proses kromatografi harus dihubungkan
dengan spektrometer massa.
Komputer harus mempunyai perangkat lunak yang
dapat mencari setiap arsip data kromatograf
gas/spektrometer massa untuk ion-ion dengan massa yang
spesifik dan membuat kurva kumpulan ion-ion terhadap
waktu atau nomor cacah. Cara ini disebut sebagai Profil
Arus Ion Terekstraksi (PAIT). Perangkat lunak juga harus
tersedia untuk integrasi antara waktu tertentu atau batas
nomor cacah dari kumpulan tiap PAIT.
Metode IV
Larutan baku Lakukan seperti tertera pada Larutan
baku dalam Metode I. Pipet 5 ml larutan ini ke dalam vial
dengan septum dan tutup bergerigi, berisi 1 g natrium
sulfat P, dan disegel. Panaskan vial bersegel pada suhu
80° selama 60 menit.
Larutan uji Lakukan seperti tertera pada Larutan uji
dalam Metode I. Jika bahan tidak larut dalam air, suspensi
dapat digunakan sebagai pengganti larutan jernih. Pipet 5
ml larutan ke dalam vial dengan septum dan tutup
bergerigi, berisi 1 g natrium sulfat P, dan disegel.
Panaskan vial bersegel pada suhu 80° selama 60 menit.
Sistem kromatografi dan Prosedur Lakukan seperti
tertera pada Metode V, kecuali pada penyuntikan,
gunakan alat suntik kedap gas yang dipanaskan, dengan
ruang kosong di bagian atas 1 ml.
Metode V
Lakukan Kromatografi gas seperti tertera pada
Kromatografi <931>.
Larutan baku dan Larutan uji Lakukan seperti
tertera pada Metode I.
Sistem kromatografi Kromatograf gas dilengkapi
detektor ionisasi nyala, kolom analitik leburan silika 0,53
mm x 30 m diameter dalam yang disalut fase diam G43
setebal 3,0 µm, kolom pelindung silika 0,5 mm x 5 m
diameter dalam yang dideaktivasi dengan fenilmetil
siloksan dan sistem injeksi tanpa celah. Gunakan helium
P sebagai gas pembawa dengan kecepatan linier lebih
kurang 35 cm per detik. Suhu injektor dan suhu detektor
masing-masing dipertahankan pada 140° dan 260°. Atur
suhu kolom sebagai berikut: Pertahankan suhu pada 40°
selama 20 menit, kemudian naikkan dengan cepat hingga
suhu 240° dan pertahankan selama 20 menit.
Suntikkann Larutan baku, rekam kromatogram dan
ukur respons puncak seperti tertera pada Prosedur: sistem
dinyatakan sesuai jika menghasilkan kromatogram
dengan semua komponen dalam Larutan baku terpisah,
resolusi, R, antara dua komponen tidak kurang dari 3 dan
simpangan baku relatif masing-masing respons puncak
pada penyuntikan ulang tidak lebih dari 15%.
Prosedur Lakukan seperti tertera pada Metode I,
volume injeksi lebih kurang 1 µl.
Metode VI
Lakukan Kromatografi gas seperti tertera pada
Kromatografi <931>.
Larutan baku dan Larutan uji Lakukan seperti
tertera pada Metode I.
Sistem kromatografi Kromatograf gas dilengkapi
detektor ionisasi nyala. Kondisi kolom dan suhu kolom,
dipilih dari Tabei 2, yang ditetapkan dalam masing-
masing monografi. Gas pembawa, kecepatan linier atau
laju alir, suhu detektor, dan suhu injektor disesuaikan
dengan dimensi kolom dan suhu kolom yang dipilih
dalam Tabel 2. Suntikkan Larutan baku, rekam
kromatogram dan ukur respons puncak seperti tertera
pada Prosedur: sistem sesuai jika menghasilkan
kromatogram dengan semua komponen dalam Larutan
baku terpisah, resolusi; R, antara dua komponen tidak
kurang dari 1,0 dan simpangan baku relatif masing-
masing respons puncak pada penyuntikan ulang tidak
lebih dari 15%.
Prosedur Lakukan seperti tertera pada Metode I,
volume injeksi lebih kurang 1 µl.
 - 1430 -
Metode untuk Melilena Klorida
dalam Tablet Salut
Lakukan Kromatografi gas seperti tertera pada
Kromatografi <931>. Batas metilen klorida adalah 500
µg per hari, berdasarkan dosis maksimum per hari yang
tertera pada penandaan.
Larutan persediaan Masukkan saksama 3,8 µl (setara
5 mg) metilen klorida P ke dalam labu tentukur 1000-ml,
encerkan dengan air bebas senyawa organik sampai
tanda.
Larutan baku [Catatan Untuk penyiapan larutan,
hilangkan terlebih dahulu selaput dari tablet salut].
Masukkan sejumlah tablet utuh, setara dengan lebih
kurang 1 g, ke dalam labu bersumbat kaca. Pipet 20 ml
Larutan persediaan ke dalam labu tersebut, tutup rapat,
letakkan dalam tangas ultrasonik sampai semua tablet
hancur sempurna dan sentrifus. Pipet 2 ml beningan ke
dalam vial yang dilengkapi dengan septum dan tutup
logam bergerigi, dan segel. Letakkan vial dalam tangas
air dengan suhu yang dipertahankan pada 85°, biarkan
selama lebih kurang 20 menit.
Tabel 2
Kondisi Penentuan
kromatografi kolom
A S3
B S2
C G16
D G39
E G16
F S4
H G14
I G27
J G16
Larutan uji Lakukan seperti tertera pada Larutan baku
dengan menggunakan 20 ml air bebas senyawa organik
sebagai pengganti 20 ml Larutan persediaan.
Larutan kesesuaian sistem Buat larutan dalam air
bebas senyawa organik berisi masing-masing 5 µg etanol
P dan metilen klorida P per ml. Pindahkan 2,0 ml larutan
ke dalam vial yang dilengkapi dengan septum dan tutup
logam bergerigi, dan segel. Letakkan vial dalam tangas
air pada suhu 85°, biarkan selama 20 menit.
Sistem kromatografi Kromatograf gas dilengkapi
detektor ionisasi nyala dan kolom kaca 2 mm x 1,8 m
berisi bahan pengisi 0,2% fase diam G39 pada pertikel
penyangga S7. Gunakan nitrogen P sebagai gas pembawa
dengan laju alir lebih kurang 20 ml per menit. Suhu
injektor dan suhu detektor dipertahankan pada 200°. Atur
suhu kolom sebagai berikut: pertahankan suhu pada 80°
selama 2 menit, kemudian naikkan sampai suhu 150°
dengan kecepatan 30° per menit, kemudian pertahankan
suhu 150° selama 5 menit. Suntikkan 1 ml fase gas dari
Larutan kesesuaian sistem seperti tertera pada Prosedur:
resolusi, R, antara etanol dan metilen klorida tidak kurang
dari 1,5, dan waktu retensi relatif puncak etanol lebih
kurang 0,8 terhadap puncak metilen klorida. Simpangan
baku relatif pada penyuntikan ulang Larutan baku tidak
lebih dari 5,0%.
Ukuran kolom Suhu kolom
3 mm x 2 m 190°
3 mm x 2,1 m 160°
0,53 mm x 30 m 40°
3 mm x 2 65°
3 mm x 2 70°
2 mm x 2,5 Pertahankan 120° (35 menit),
Gradien 120° - 200° (2°/menit)
Pertahankan 20 menit
2 mm x 2,5 Pertahankan 45° (3 menit),
Gradien 45° - 120° (8°/menit)
Pertahankan 15 menit
0,53 mm x 30 m Pertahankan 35° (5 menit),
35° - 175° (8°/menit)
175° - 260° (35°/menit)
Pertahankan 16 menit
0,33 mm x 30 m Pertahankan 50° (20 menit),
50° - 165° (6°/menit)
Pertahankan 20 menit
 - 1431 -
Prosedur Gunakan alat suntik kedap gas, suntikkan
secara terpisah sejumlah volume sama (lebih kurang 1
ml) gas dari ruang kosong di bagian atas Larutan baku
dan Larutan uji ke dalam kromatograf. Rekam
kromatogram dan ukur respons puncak. Tetapkan,
berdasarkan perbandingan waktu retensi, adanya metilen
klorida dalam Larutan uji. Tetapkan jumlah metilen
klorida yang terdeteksi, dalam µg per tablet. Hitung
jumlah maksimum metilen klorida, dalam µg per tablet
per hari yang diperbolehkan dalam unit dosis dengan
rumus:
Jumlah maksimum yang diperbolehkan (µg/hari/tablet) =
500 (µg/hari) kekuatan tablet seperti
X yang tertera pada
Dosis maksimum etiket (mg/tablet)
per hari (mg)
Jumlah metilen klorida yang terdeteksi per tablet tidak
boleh lebih dari jumlah maksimum yang diperbolehkan
menurut hasil perhitungan.
CEMARAN UMUM <481>
Uji cemaran umum yang tertera pada masing-masing
monografi digunakan untuk menilai profil cemaran suatu
bahan. Cemaran umum didefenisikan sebagai adalah
bahan yang ada dalam senyawa obat dan/atau sediaan
obat dalam jumlah tertentu yang tidak mempunyai efek
yang diinginkanyang mempunyai aktivitas biologi dengan
jumlah yang ada, aktivitas biologi tidak diinginkannya
tidak bermakna.yang tidak diinginkan. Cemaran ini dapat
timbul akibat sintesa, proses pembuatan sediaan, atau
peruraian bahan. Dalam beberapa kasus, cemaran yang
berisiko terhadap kesehatan dapat diidentifikasi. Karena
padaPada Lbab ampiran ini masing-masing cemaran ini
tidak akan diidentifikasi masing-masing pada Lampiran
ini, uji terpisah penting mungkin diperlukan untuk
meyakinkan memastikan bahwa cemaran yang
diidentifikasi telah memenuhi persyaratan batas seperti
tertera dalam definisi cemaran umum. Pemilihan uji dan
penetapan kadar memperbolehkan
diperbolehkanmemungkinkan untuk menetapkan jumlah
cemaran yang dapat diterima yang tidak menggangu
penggunaan bahanpada penggunaan biasapada suatu
bahan untuk digunakan.
Laporan dan persyaratan Jumlah cemaran umum
tidak lebih dari 2,0%, kecuali dinyatakan lain pada
masing-masing monografi.
Jika pada monografi tertera batas komponen tertentu
dan/atau cemaran atau produk terurai yang dapat
diidentifikasi, cemaran ini umum tidak termasuk dalam
perhitungan total cemaran kecuali dinyatakan lain dalam
monografi. Komponen yang ada bersama-sama dalam
bahan didefinisikan sebagai bahan tertentu dari sediaan
obat yang tidak dianggap sebagai
cemaran dalam konteks farmakope. Contoh komponen Formatted: Indonesian (Indonesia)
yang ada bersama-sama dalam bahan ini adalah campuran
isomer geometrik dan optik (atau rasemat) dan antibiotik.
Komponen lain yang dianggap toksik karena efek
biologis tertentu yang tidak diinginkan tidak disebut
sebagai komponen yang ada bersama-sama dengan
bahan.
Metode Kecuali dinyatakan lain dalam masing-masing Formatted ... [4]
monografi, perhitungan persentase dan jumlah cemaran
umum ditetapkanntukan dengan metode relatif daripada
umum daripada membandingkan dengan dengan masing-
masing baku pembanding, . Deteksi cemaran lain yang
tidak spesifik teridentifikasi juga sesuai dengan metode
ini.
Uji umum khas untuk cemaran umum menggunakan Formatted ... [5]
teknik Kromatografi lapis tipis. Lakukan seperti tertera
pada Kromatografi <931>. Uji untuk senyawa sejenis
atau kemurnian kromatografi dapat juga digunakan untuk
evaluasi cemaran umum. Metode lain (seperti
Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, HPTLCKromatografi
Lapis Tipis Kinerja Tinggi) dapat juga digunakan sebagai
metode alternatif dengan alasan yang jelas. Jika tidak
dicantumkan pada masing-masing monografi, gunakan
metode berikut.
Formatted: Font: 11 pt, Indonesian
Larutan uji Buat Larutan uji secarasaksama dalam (Indonesia)
pelarut seperti tertera pada monografi, hingga diperoleh Formatted: Justified
kadar akhir lebih kurang 10 mg per ml.[Catatan
Formatted ... [6]
Pemanasan atau sonikasi dapat digunakan untuk
melarutkan jika hal ini tidak merusak bahan. Formatted ... [1]
Larutan baku Buatsecara seaksama larutanzat Baku Formatted ... [7]
Pembanding FI dalam pelarut seperti tertera pada
monografi hingga diperolehkadar 0,01;0,05;0,1 dan 0,2
mg per ml. [Catatan pPemanasan atau sonifikasi dapat
digunakan untuk melarutkan jika hal ini tidak
merusakdapat mempengaruhi bahan].
Prosedur lLakukan kKromatografi lapis tipis Formatted ... [8]
menggunakan lempeng silicka gel P setebal 0,25 mm dan
fFase gerak seperti tertera pada monografi. Totolkan
secara terpisah sejumlah volume sama (lebih kurang
20 µl) Larutan uji dan Larutan baku, gunakan aliran gas
nitrogen P untuk mengeringkan bercak. Masukkan
lempeng ke dalam bejana kromatografi yang telah
dijenuhkan dengan Fase gerak hingga merambat lebih
kurang tiga per empat tinggi lempeng. Angkat lempeng,
keringkan diudara. Amati lempeng menggunakan teknik
penampakan bercak yang tertera. Tentukan intensitas
relatif bercak lain selain bercak utama Larutan uji dengan Formatted ... [2]
membandingkan terhadap kromatogram Larutan baku.
Formatted: Swedish (Sweden)
Petunjuk Teknik Penampak Bercak Formatted: Justified
(1.) Gunakan cahaya ultra violet pada 254 nm dan
366 nm. Formatted ... [3]
(2). Gunakan iodoplatinat LP. Formatted ... [9]
(3). Larutan A Buat Ccampuran 850 mg bismut Formatted ... [10]
subnitrat P dengan 40 ml air dan 10 ml asam asetat
glasial P. Formatted ... [11]
 - 1432 -
Larutan B Larutkan 8 g kalium iodida P dalam 20 (20. ) Pereaksi penampak bercak o-tolidina Larutkan Formatted ... [29]
ml air. Campur Larutan A dan B hingga diperoleh 160 mg o-tolidina P dalam 30 ml asam asetat glacsial P.
lLarutan persediaan yang dapat disimpan beberapa bulan Encerkan dengan air hingga 500 ml, tambahkan 1 g Formatted ... [12]
dalam botol gelap. Campur 10 ml Larutan persediaan kalium iodida P, aduk hingga larut.
dengan 20 ml asam asetat glasial P, encerkan dengan air (21. ) Campur 3 ml larutan asam kloroplatinat P (1 Formatted ... [30]
hingga sampai 100 ml, untuk larutan penampak bercak. dalam 10), dengan 97 ml air, kemudian tambahkan 100
(4). Pereaksi penampak bercak ninhidrin Larutkan ml larutan kalium iodida P (6 dalam 100) untuk membuat
200 mg ninhidrin P dalam 100 ml etanol P,. panaskan pereaksi penampak bercak.
lempeng setelah penyemprotan. (22. ) Pereaksi penampak bercak metanol-iodium Buat Formatted: Font: Italic
(5). Pereaksi penampak bercak asam Dalam tangas es, campuran iodium LP dan metanol P (1:1).
Formatted ... [31]
tambahkan perlahan-lahan dan hati-hati sambil diaduk,
10 ml asam sulfat P ke dalam 90 ml etanol P. sSemprot Formatted: Font: Italic, (Asian) Korean
lempeng dan panaskan sampai timbul bercak. (Korea), (Other) Indonesian (Indonesia)
(6). Pereaksi penampak bercak dikromat-asam LEMAK DAN MINYAK LEMAK <491> Formatted: Italian (Italy)
Tambahkan kalium dikromat P secukupnya ke dalam 100
ml asam sulfat P hingga diperoleh larutan jenuh. Definisi dan prosedur umum berikut digunakan
Semprot lempeng dan panaskan sampai timbul bercak. untuk lemak, minyak lemak, malam, resin, balsam dan Formatted: Font: (Asian) Korean (Korea),
(7). Vanilin Larutkan 1 g vanilin P dalam 100 ml asam zat-zat sejenis. (Other) Swedish (Sweden)
sulfat P. Formatted ... [13]
(8.) Kloramin T-asam trikloroasetat cCampur 10 ml Penyiapan Sampel
Formatted ... [14]
dalam larutan dalam larutan kloramin tT 3 % dalam air
dengan 40 ml larutan asam trikloroasetat P 25% dalam Bila contoh minyak menunjukkan kekeruhan yang
etanol P. bBuat larutan segar sebelum digunakan. disebabkan oleh pemisahan stearin, hangatkan wadah
(9.) Folin-C Tambahkan 10 g natrium tungstat P dan dalam tangas air pada suhu 50° sampai minyak jernih, Formatted ... [15]
2,5 g natrium moblidat P ke dalam 70 ml air, tambahkan atau bila minyak pada penghangatan tidak menjadi jernih,
5 ml larutan asam fosfat P 85% dan 10 ml larutan asam saring melalui kertas saring kering pada corong yang
klorida P 36%, refluks larutan ini selama 10 jam. terletak di dalam mantel air panas. Campur dengan baik,
(10). KMnO4 lLarutkan 100 mg kalium permanganat P dan timbang sekaligus sebanyak yang diperlukan untuk Formatted ... [16]
dalam 100 ml air. berbagai penetapan, sebaiknya menggunakan botol
(11). DAB Campur 1 g p-dimetilamoino-benzaldehida berpipet tetes, atau buret timbang. Jaga contoh tetap Formatted ... [17]
P dalam 100 ml asam klorida 0,6 N. meleleh, jika pada suhu kamar berupa padatan, sampai
(12). DAC Campur 100 mg p-dimetilamino- diperoleh sejumlah yang diperlukan. Formatted ... [18]
sinamaldehida P dalam 100 ml asam klorida 1 N.
(13.) Besi(III) sianida cCampur sejumlah volume yang Bobot Jenis Formatted ... [19]
sama larutan besi(III) klorida P 1% dan larutan kalium
besi (II) sianida P 1%. Gunakan segera. Tetapkan bobot jenis lemak atau minyak lemak seperti
(14). Fast blue Blue B - Pereaksi A larutkan 500 mg tertera pada Penetapan Bobot Jenis <981>. Formatted ... [20]
garam fFast bBlue B dalam 100 ml air.
Pereaksi B Nnatrium hidroksida 0,1 N. Suhu Lebur Formatted ... [21]
Semprot mula-mula dengan Pereaksi A, kemudian
Formatted ... [22]
dengan Pereaksi B. Tetapkan suhu lebur seperti tertera pada Penetapan Jarak
(15). Besi(III) sianida basa Encerkan 1,5 ml larutan Lebur atau Suhu Lebur <1021> Metode lV. Formatted ... [23]
kalium besi(III) sianida P 1% dengan air hingga 20 ml,
tambahkan 10 ml larutan natrium hidroksida P 15%. Bilangan Asam (Asam Lemak Bebas)
16(16. ) Pereaksi penampak bercak iodiu Buat larutan Formatted ... [24]
iodium P 0,5 % dalam kloroform P. Keasaman lemak dan minyak lemak dinyatakan sebagai
(17. ) Letakkan lempeng selama 10 menit dalam bejana jumlah ml alkali 0,1 N yang diperlukan untuk Formatted ... [25]
tertutup yang telah dijenuhkan dengan uap iodium dan menetralkan asam bebas dalam 10,0 g zat. Keasaman
pada dasar bejana terdapat hablur iodium P. sering dinyatakan sebagai Bilangan asam, yaitu jumlah
18(18. ) Larutan A Larutkan kalium iodida P dalam air 50 mg kalium hidroksida yang diperlukan untuk menetralkan Formatted ... [26]
ml air. asam bebas dalam 1,0 g zat. Kecuali dinyatakan lain
Larutan B buat larutan 500 mg pati larut P dalam 50 dalam masing-masing monografi, gunakan Metode I. Formatted: Indent: Left: 0"
ml air panas.
Formatted: Italian (Italy)
Segera sebelum digunakan, campur sejumlah volume Metode I
sama Larutan A dan Larutan B. Formatted ... [27]
(19. ) PTSS lLarutkan 20 g asam p-toluensulfonat P Prosedur Kecuali dinyatakan lain, timbang saksama Formatted ... [28]
dalam 100 ml etanol P, semprot lempeng, keringkan lebih kurang 10,0 g zat, larutkan dalam labu yang berisi
selama 15 menit pada suhu 110°o, amati dibawah cahaya 50 ml campuran sama banyak etanol P-eter P dan telah
ultra violet pada 366 nm. dinetralkan terhadap fenoftalein LP dengan kalium
hidroksida 0,1 N atau natrium hidroksida 0,1 N, kecuali
 - 1433 -
dinyatakan lain. Bila contoh tidak larut dalam pelarut
dingin, hubungkan labu dengan pendingin yang sesuai
dan hangatkan perlahan-lahan, sambil sering dikocok
sampai contoh larut. Tambahkan 1 ml fenolftalein LP,
dan titrasi dengan kalium hidroksida 0,1 N LV atau
natrium hidroksida 0,1 N LV sampai larutan berwarna
merah muda lemah yang tetap setelah dikocok selama 30
detik. Hitung Bilangan asam atau jumlah ml alkali 0,1 N
yang diperlukan untuk menetralkan 10,0 g contoh (asam
lemak bebas). Hitung Bilangan asam dengan rumus:
56,11 adalah bobot molekul kalium hidroksida; V adalah
volume, dalam ml; N adalah normalitas larutan kalium
hidroksida atau larutan natrium hidroksida; W adalah
bobot dalam g zat yang digunakan.
Jika volume kalium hidroksida 0,1 N LV atau natrium
hidroksida 0,1 N LV yang diperlukan untuk titrasi kurang
dari 2 ml, dapat digunakan titran lebih encer, atau jumlah
contoh disesuaikan. Hasil dapat dinyatakan dalam
volume titran yang digunakan atau dalam kesetaraan volume
kalium hidroksida 0,1 N atau natrium hidroksida 0,1 N.
Jika minyak telah dijenuhkan dengan karbon dioksida
untuk tujuan pengawetan, refluks perlahan-lahan
larutan etanol-eter selama 10 menit sebelum titrasi.
Minyak juga dapat dibebaskan dari karbon dioksida
dengan menempatkannya pada cawan dangkal di
dalam desikator vakum selama 24 jam sebelum
contoh ditimbang.
Metode II
Prosedur Buat 125 ml campuran sama banyak
isopropanol P dan toluen P. Sebelum digunakan,
tambahkan 2 ml larutan fenoftalein P 1% dalam
isopropanol P dan netralkan dengan basa sampai
berwarna merah muda lemah. Timbang saksama sejumlah
contoh cair, yang telah tercampur baik, seperti tertera
pada tabel di bawah ini dan larutkan dalam campuran
larutan yang sudah dinetralkan. Bila contoh tidak larut
dalam pelarut dingin, hubungkan labu dengan
pendingin yang sesuai dan hangatkan perlahan-lahan,
sambil sering dikocok sampai contoh larut. Kocok kuat
selama titrasi dengan kalium hidroksida 0,1 N LV atau
natrium hidroksida 0,1 N LV sampai berwarna merah
muda dengan intensitas yang sama dengan pelarut yang
sudah dinetralkan. Hitung jumlah asam lemak seperti
tertera pada Metode I.
Bilangan Asam Bobot contoh (g)
0-1 20
1-4 10
4-15 2,5
15-74,9 0,5
≥ 75,0 0,1
Bilangan Ester
Bilangan ester adalah jumlah mg kalium hidroksida yang
diperlukan untuk menyabunkan ester dalam 1,0 g zat.
Jika Bilangan penyabunan dan Bilangan asam telah
ditetapkan, selisih antara keduanya menunjukkan
Bilangan ester, Bilangan ester = Bilangan penyabunan –
Bilangan asam.
Prosedur Timbang saksama sejumlah 1,5 - 2 g zat
dalam labu 250 ml yang telah ditara, tambahkan 20 ml
hingga 30 ml etanol P yang telah dinetralkan, kocok.
Tambahkan 1 ml fenolftalein LP, dan titrasi dengan
kalium hidroksida-etanol 0,5 N LV sampai asam bebas
dinetralkan. Tambahkan 25,0 ml kalium hidroksida-
etanol 0,5 N LV, lakukan seperti tertera pada Bilangan
penyabunan mulai dengan "Panaskan labu ..." dan
penambahan fenolftalein LP dapat diabaikan. Hitung
Bilangan ester dengan rumus :
56,11N
VT  V B 
W
56,11 adalah bobot molekul kalium hidroksida; VT dan
VB berturut-turut adalah volume dalam ml dari asam
klorida 0,5 N yang diperlukan dalam penetapan contoh
dan penetapan blangko; N adalah normalitas larutan
asam klorida; W adalah bobot dalam g zat yang
digunakan.
Bilangan Hidroksil
Bilangan Hidroksil adalah jumlah mg kalium
hidroksida yang setara dengan kandungan hidroksil dalam
1,0 g zat.
Pereaksi piridina-anhidrida asetat Buat campuran
segar, 3 bagian volume piridina P yang baru dibuka atau
baru didestilasi dengan 1 bagian volume anhidrida asetat
P yang baru dibuka atau baru didestilasi.
Prosedur Timbang saksama sejumlah zat sesuai
dengan tabel di bawah ini, masukkan ke d ala m labu
Erlenmeyer bersumbat kaca 250 ml, dan tambahkan 5,0
ml Pereaksi piridina-anhidrida asetat. Masukkan 5,0 ml
Pereaksi piridina-anhidrida asetat, sebagai blangko ke
dalam labu Erlenmeyer bersumbat kaca 250 ml kedua.
Hubungkan kedua labu dengan pendingin refluks dengan
sambungan asah yang sesuai, panaskan di atas tangas
uap selama 1 jam, pada masing-masing labu
tambahkan 10 ml air melalui pendingin, dan
panaskan lagi di atas tangas uap selama 10 menit.
Dinginkan, dan ke dalam masing-masing labu
tambahkan 25 ml butanol P, yang telah dinetralkan
terhadap fenolftalein LP dengan kalium hidroksida-etanol
0,5 N, dengan menuangkan 15 ml melalui masing-
masing pendingin dan setelah pendingin dilepas, cuci
dinding kedua labu dengan 10 ml sisanya. Ke dalam
masing-masing labu tambahkan 1 ml fenolftalein LP, dan
titrasi dengan kalium hidroksida-etanol 0,5 N LV. Catat
volume dalam ml, yang diperlukan pada penetapan
larutan uji sebagai T dan yang diperlukan oleh blangko
 - 1434 -
sebagai B. Dalam labu Erlenmeyer 125 ml, campur
lebih kurang 10 g zat yang ditimbang saksama, dengan 10
ml piridina P yang baru didestilasi, dan telah dinetralkan
terhadap fenolftalein LP, tambahkan 1 ml fenolftalein
LP, dan titrasi dengan kalium hidroksida-etanol 0,5 N
LV, catat volume dalam ml, yang digunakan oleh asam
bebas dalam contoh sebagai A. Hitung Bilangan
hidroksil dengan rumus:
 56,11N    WA  
  B    T
 W   C   diserap oleh contoh, ulangi penetapan dengan
W dan C berturut-turut adalah bobot dalam g zat yang
digunakan untuk asetilasi dan untuk penetapan asam bebas; N
adalah normalitas kalium hidroksida-etanol; 56,11 adalah
bobot molekul kalium hidroksida. Jika Bilangan asam dalam
zat sudah diketahui, hitung Bilangan hidroksil dengan rumus:
W adalah bobot dalam g zat yang digunakan dalam
asetilasi; N adalah normalitas kalium hidroksida-etanol;
56,11 adalah bobot molekul kalium hidroksida.
Perkiraan bilangan hidroksil Bobot contoh (g)
0 sampai 20 10
20 sampai 50 5 sampai tanda. Simpan dalam wadah terlindung cahaya.
50 sampai 100 3 Indikator Larutan Kanji Campur 1 g kanji larut P
100 sampai 150 2 dengan air agak dingin untuk membuat pasta.
150 sampai 200 1,5
200 sampai 250 1,25
250 sampai 300 1,0
300 sampai 350 0,75
Bilangan lodum
Bilangan lodum adalah jumlah g iodum yang diserap
oleh 100 g zat, pada kondisi yang ditetapkan. Kecuali
dinyatakan lain dalam masing-masing monografi,
tetapkan Bilangan iodum dengan Metode I.
Metode I (Metode Hanus)
Prosedur Timbang saksama sejumlah zat sesuai
dengan tabel di bawah ini, masukkan ke dalam labu
iodum 250 ml, larutkan dalam 10 ml kloroform P,
tambahkan 25,0 ml iodo-bromida LP, tutup rapat,
biarkan selama 30 menit di tempat terlindung cahaya,
dengan sesekali dikocok. Tambahkan berturut-turut 30
ml kalium iodida LP dan 100 ml air, dan titrasi iodum
yang dibebaskan dengan natrium tiosulfat 0,1 N LV,
kocok kuat-kuat setelah setiap penambahan tiosulfat.
Bila warna iodum menjadi agak pucat, tambahkan 3 ml
kanji LP, dan lanjutkan titrasi dengan natrium tiosulfat
0,1 N LV hingga warna biru hilang. Lakukan penetapan
blangko. Hitung Bilangan iodum dengan rumus:
126,9 adalah bobot atom Iodum, VB dan VS berturut-turut
adalah volume natrium tiosulfat 0,1 N LV yang
digunakan untuk penetapan blangko dan penetapan
contoh, dalam ml; N adalah normalitas kalium
hidroksida-etanol; W adalah bobot contoh yang
digunakan, dalam g.
[Catatan Bila lebih dari setengah iodobromida LP
menggunakan contoh dalam jumlah lebih kecil].
Bobot Sampel
Perkiraan bilangan Iodum Bobot dalamg, ± 0,1
<5 3,0
5-20 1,0
21-50 0,4
51-100 0,2
101-150 0,13
151-200 0,1
Metode II (Metode Wijs)
Larutan Kalium Iodida Timbang saksama lebih
kurang 10 g kalium iodida P masukkan ke dalam labu
tentukur 100-ml, larutkan dan encerkan dengan air
Tambahkan air mendidih sampai dengan 100 ml sambil
diaduk. Campur dan dinginkan. Gunakan hanya bagian
yang jernih.
Prosedur Lelehkan contoh, jika tidak dalam bentuk
cair. [Catatan Suhu selama pelelehan tidak boleh lebih
10° dari titik leleh zat]. Saring melalui dua buah kertas
saring untuk memisahkan cemaran padat dan sisa
lembab. Penyaringan dapat dilakukan dalam oven pada
100° tetapi harus selesai dalam 5 menit ± 30 detik.
Contoh harus benar-benar kering. Semua alat gelas harus
benar-benar bersih dan kering. Setelah penyaringan,
filtrat contoh dikondisikan pada suhu 68° - 71° ± 1°
sebelum ditimbang. Setelah suhu 68° - 71° ± 1° tercapai,
contoh segera ditimbang, masukkan ke dalam labu iodum
500-ml, timbang saksama seperti tertera pada tabel.
[Catatan Penimbangan contoh harus sedemikian rupa
sehingga terdapat kelebihan iodoklorida LV 50% sampai
60% dari jumlah yang ditambahkan, yang berarti, 100%
sampai 150% dari jumlah yang diabsorbsi]. Tambahkan
15 ml campuran segar sikloheksan P dan asam asetat
glasial P (1:1), dan aduk untuk melarutkan contoh.
Tambahkan 25 ml iodo klorida LP, tutup rapat dan
goyang hingga tercampur. Biarkan sampai suhu
mencapai 25° ± 5º, lindungi dari cahaya, dengan sesekali
dikocok, selama 1 - 2 jam, tergantung dari Bilangan
Iodum contoh; Bilangan Iodum kurang dari 150, 1 jam;
Bilangan Iodum kurang lebih sama atau lebih dari 150, 2
jam. Kemudian dalam waktu 3 menit setelah waktu
 - 1435 -
reaksi yang ditentukan, tambahkan secara berturut-turut
20 ml Larutan kalium iodida dan 150 ml air bebas
karbondioksida P, campur. Dalam waktu 30 menit, titrasi
iodum yang dibebaskan dengan natrium tiosulfat 0,1 N
LV sambil diaduk secara mekanik setiap penambahan
tiosulfat. Ketika warna kuning iodum hampir hilang,
tambahkan 1 - 2 ml Indikator larutan kanji, dan
lanjutkan titrasi sampai warna biru hilang. Lakukan
titrasi blangko. Hitung Bilangan iodum dengan rumus
yang sama pada perhitungan Metode I.
Bilangan Peroksida
Bilangan Peroksida adalah jumlah yang menunjukkan,
dalam miliekivalen, oksigen aktif, yaitu jumlah peroksida
yang terkandung dalam 1000 g zat [Catatan Uji harus
segera dilakukan setelah sampling untuk mencegah
oksidasi dari zat yang diuji].
Prosedur Jika tidak dinyatakan lain, timbang saksama
lebih kurang 5 g zat ke dalam labu Erlenmeyer bersumbat
kaca 250 ml. Tambahkan 30 ml campuran asam asetat
glasial P dan kloroform P (3:2), kocok untuk melarutkan,
dan tambahkan 0,5 ml larutan jenuh kalium iodida P.
Kocok selama 1 menit tepat dan tambahkan 30 ml air.
Titrasi dengan natrium tiosulfat 0,01 N LV secara
perlahan dengan pengocokan terus menerus sampai warna
kuning hampir hilang. Tambahkan 5 ml Indikator larutan
kanji LP, dan lanjutkan titrasi dengan pengocokan kuat
sampai warna biru hilang. Lakukan penetapan blangko.
[Catatan Volume titran yang digunakan untuk blangko
tidak lebih dari 0,1 ml]. Hitung Bilangan peroksida
dengan rumus:
VT dan VB berturut-turut adalah volume dalam ml natrium
tiosulfat 0,01 N LV yang digunakan untuk penetapan
contoh dan penetapan blangko; N adalah normalitas
natrium tiosulfat; W adalah bobot contoh yang digunakan
dalam g.
Bilangan Penyabunan
Bilangan Penyabunan adalah jumlah mg kalium hidroksida
yang diperlukan untuk menetralkan asam lemak bebas dan
menyabunkan ester yang terkandung dalam 1,0 g zat.
Prosedur Timbang saksama 1,5 g hingga 2 g zat, dalam
labu 250 ml yang telah ditara dan tambahkan 25,0 ml kalium
hidroksida-etanol 0,5 N LV. Panaskan labu diatas tangas uap,
refluks dengan pendingin yang sesuai, selama 30 menit,
sambil sering diputar. [Catatan Waktu refluks bisa mencapai
90 menit untuk memastikan sempurnanya proses
penyabunan, tergantung dari tipe ester yang ditetapkan].
Kemudian tambahkan 1 ml fenolftalein LP, dan titrasi
kelebihan kalium hidroksida dengan asam klorida 0,5 N LV.
Lakukan penetapan blangko. Titrasi dapat juga dilakukan
dengan titrasi potensiometri. Hitung Bilangan penyabunan
dengan rumus:
56,11 adalah bobot molekul kalium hidroksida; VT dan
VB berturut-turut adalah volume dalam ml asam klorida
0,5 N LV yang digunakan dalam penetapan contoh dan
penetapan blangko; N adalah normalitas asam klorida; W
adalah bobot contoh yang digunakan dalam g.
Jika minyak telah dijenuhkan dengan karbondioksida
dengan tujuan pengawetan, tempatkan minyak tersebut
pada cawan dangkal dalam desikator vakum selama
24 jam sebelum contoh ditimbang.
Zat Tak Tersabunkan
Zat tak tersabunkan dalam minyak atau lemak adalah
zat yang tidak tersabunkan oleh alkali hidroksida, tetapi
larut dalam pelarut umum lemak, dan hasil penyabunan
yang larut dalam pelarut tersebut.
Prosedur Timbang saksama 5,0 g minyak atau lemak
dalam labu Erlenmeyer 250 ml, tambahkan 50 ml larutan
kalium hidroksida-etanol yang dibuat dari 12 g kalium
hidroksida P dalam 10 ml air, dan encerkan dengan
etanol sampai 100 ml, refluks di atas tangas uap, selama
1 jam, kocok secara berkala. Dinginkan sampai suhu
dibawah 25º, pindahkan larutan ke dalam corong pisah
dengan kran terbuat dari politetrafluoroetilena, bilas labu
dua kali, tiap kali dengan 50 ml air yang dimasukkan ke
dalam corong pisah (jangan gunakan lemak pada kran).
Ekstraksi tiga kali, tiap kali dengan 100 ml eter P,
masukkan kumpulan ekstrak eter ke dalam corong pisah
lain yang berisi 40 ml air. Putar perlahan atau kocok
corong pisah selama beberapa menit. [Catatan
Pengocokan keras menyebabkan terbentuk emulsi yang
sukar dipisahkan]. Biarkan campuran memisah dan
buang lapisan bawah fasa air. Cuci ekstrak eter sebanyak
dua kali, tiap kali dengan 40 ml air, dan buang lapisan
bawah fasa air. Cuci ekstrak eter berturut-turut dengan 40
ml larutan kalium hidroksida P (3 dalam 100) dan 40 ml
air. Ulangi pencucian menggunakan larutan kalium
hidroksida-air sebanyak tiga kali. Cuci kembali
kumpulan ekstrak dengan 40 ml air sampai cucian
terakhir tidak memberikan warna merah pada
penambahan 2 tetes fenolftalein LP. Masukkan ekstrak
eter ke dalam gelas piala yang telah ditara, dan bilas
corong pisah dengan 10 ml eter P, tambahkan bilasan ke
dalam gelas piala. Uapkan eter di atas tangas uap hingga
hampir kering, dan tambahkan 6 ml aseton P pada residu.
Uapkan aseton dengan udara mengalir dan keringkan
residu pada suhu 105° sampai antar penimbangan
berbeda tidak lebih dari 1 mg.. Hitung persentase dari zat
tak tersabunkan dalam minyak atau lemak dengan rumus
:
 WR 
 100
 WS 
WR adalah bobot, dalam g, residu; WS adalah bobot,
dalam g, minyak atau lemak dari zat uji.
 - 1436 -
Larutkan residu dalam 20 ml etanol P, yang telah 3,0 metil stearat 18 0
dinetralkan terhadap fenoftalein LP, tambahkan 3,0 metil arakidat 20 0
fenoftalein LP dan titrasi dengan natrium hidroksida- 3,0 metil behenat 22 0
etanol 0,1N LV, sampai larutan berwarna merah muda 3,0 metil lignoserat 24 0
yang tetap selama tidak kurang dari 30 detik. Jika volume 45,0 metil oleat 18 1
natrium hidroksida-etanol 0,1 N LV yang diperlukan 15,0 metil linoleat 18 2
untuk titrasi lebih dari 0,2 ml, pemisahan lapisan belum 3,0 metil linolenat 18 3
lengkap; bobot residu tidak dapat dinyatakan sebagai zat 20,0 metil erukat 22 1
tak tersabunkan, dan pengujian harus diulang.
Komposisi campuran lain yang tersedia secara komersial
Suhu Pemadatan Asam Lemak adalah sebagai berikut :

Penyiapan asam lemak Panaskan 75 ml Larutan Panjang Jumlah

gliserin-kalium hidroksida (dibuat dengan melarutkan 25 Persen Ester Asam Lemak Rantai Ikatan
g kalium hidroksida P dalam 100 ml gliserin P) dalam Karbon Rangkap
gelas piala 800 ml hingga suhu 150°, dan tambahkan 50 7,0 metil kaprilat 8 0
ml lemak yang telah dijernihkan, dan jika perlu 5,0 metil kaprat 10 0
dilelehkan. Panaskan campuran selama 15 menit sambil 48,0 metil laurat 12 0
sering diaduk, tetapi hindarkan suhu lebih dari 150°. 15,0 metil miristat 14 0
Penyabunan sempurna bila campuran menjadi homogen, 7,0 metil palmitat 16 0
tanpa ada partikel yang melekat pada meniskus gelas 3,0 metil stearat 18 0
piala. Pindahkan ke dalam gelas piala atau cawan 800 ml 12,0 metil oleat 18 1
berisi 500 ml air yang hampir mendidih, tambahkan 3,0 metil linoleat 18 2
perlahan-lahan 50 ml asam sulfat P (3:1), dan panaskan
larutan, sambil sering diaduk, sampai asam lemak Larutan uji [Catatan Jika dalam contoh terdapat
memisah dengan baik sebagai lapisan jernih. Cuci asam lemak yang mengandung lebih dari 2 ikatan
dengan air mendidih sampai bebas dari asam sulfat, rangkap, hilangkan udara dari labu menggunakan gas
kumpulkan asam lemak dalam gelas piala kecil, letakkan nitrogen selama beberapa menit]. Timbang lebih kurang
di atas tangas uap sampai air memisah dan asam lemak 100 mg contoh, masukkan ke dalam labu 50 ml yang
jernih, saring dalam keadaan panas ke dalam gelas piala terhubung dengan refluks-kondesor pendingin yang
kering, dan keringkan pada suhu 105° selama 20 menit. sesuai dan pengaduk magnet. Tambahkan 4 ml larutan
Masukkan asam lemak hangat ke dalam wadah yang natrium hidroksida metanolik 0,5 N LP dan refluks
sesuai, dan dinginkan dalam tangas es sampai membeku. sampai letupan lemak hilang (biasanya 5 - 10 menit).
Uji kesempurnaan penyabunan Masukkan 3 ml asam Tambahkan 5 ml larutan yang dibuat dari 14 g boron
lemak yang telah kering ke dalam tabung reaksi, dan trifluorida P dalam metanol P untuk membuat 100 ml,
tambahkan 15 ml etanol P. Panaskan larutan hingga goyang untuk mencampur dan refluks selama 2 menit.
mendidih, dan tambahkan volume sama amonium Tambahkan 4 ml heptana untuk kromatografi P, melalui
hidroksida 6 N. Diperoleh larutan jernih. kondensor dan refluks selama 1 menit. Dinginkan dan
Prosedur Gunakan alat yang sama seperti pada pindahkan kondensor, tambahkan lebih kurang 15 ml
Alat penetapan suhu beku dan lakukan penetapan seperti larutan natrium klorida P jenuh, kocok dan biarkan
tertera pada Prosedur dalam Penetapan Suhu Beku lapisan memisah. Masukkan lapisan heptana ke dalam
<1101>, "suhu beku" dibaca sebagai "suhu pemadatan". labu yang sesuai melalui 0,1 g natrium sulfat anhidrat P
Suhu pemadatan asam lemak diperoleh yang telah dibilas dengan heptana untuk kromatografi P.
dari harga rata-rata tidak kurang dari empat pembacaan Pipet 1 ml larutan tersebut ke dalam labu tentukur 10-ml,
berturut-turut titik tertinggi pada waktu suhu naik. encerkan dengan heptana untuk kromatografi P sampai
tanda.
Komposisi Asam Lemak
Larutan kesesuaian sistem Timbang lebih kurang
Larutan baku Buat campuran ester sesuai dengan 20 mg masing-masing asam stearat, asam palmitat dan
komposisi kandungan ester pada masing-masing asam oleat, masukkan ke dalam labu 25 ml yang
monografi. Larutan baku dapat mengandung komponen terhubung dengan refluks-kondensor pendingin yang
lain [Catatan Campuran ester tersedia secara sesuai dan pengaduk magnet dan lakukan sesuai prosedur
komersial]. Komposisi campuran yang tersedia secara pada larutan uji, mulai dari “Tambahkan 5,0 ml larutan
komersial adalah sebagai berikut : yang dibuat dengan melarutkan”.

Panjang Jumlah Sistem kromatografi Lakukan penetapan dengan cara

Persen Ester Asam Lemak Rantai Ikatan Kromatografi gas seperti tertera pada Kromatografi
Karbon Rangkap <931>. Kromatograf gas dilengkapi dengan detektor
1,0 metil miristat 14 0 ionisasi nyala yang dipertahankan pada suhu 260º, sistem
4,0 metil palmitat 16 0 injeksi “splitless” dan kolom kapiler leburan silika 0,53