AISLAMIENTO DE PATÓGENOS EN INFECCIÓN URINARIA

Introducción:
La infección urinaria (IU) es la existencia de gérmenes e infecciones patógenos
en la orina por infección de la uretra, la vejiga, el riñón o la próstata. Los
síntomas que acompañan a una infección de orina son los que componen el
síndrome miccional, teniendo en cuenta que las infecciones de orina también
pueden ser asintomáticas.
Desde el punto de vista microbiológico, cuando se detecta un crecimiento de
10.000 unidades formadoras de colonia por mililitro (ufc/ml) en una muestra
de orina bien recogida, puede existir una infección urinaria. Cuando existen
síntomas urinarios o piuria se considera ITU con valores muchos menores
(hasta 100 ufc/ml). Cuando el recuento de colonias es superior a 10.000 ufc/ml
y hay más de dos especies de gérmenes indica contaminación de la muestra.
Se considera bacteriuria asintomática cuando, en ausencia de síntomas, hay
más de 10.000 ufc/ml de un microorganismo en cultivo puro en dos muestras
diferentes.
Ante un síndrome miccional en el que se excluyen otras causas del mismo
(vaginitis, uretritis, prostatitis) y se confirma la presencia de leucocitos en orina
se puede hacer el diagnóstico de infección urinaria sin necesidad de realizar
urocultivo. Las infecciones del tracto urinario pueden ser tratadas con éxito
con antibióticos. En casos no complicados, a menudo la enfermedad cede sin
medicamentos.
Objetivos
• Que los alumnos conozcan los patógenos causantes de infección
urinaria.
• Presenciar la técnica que se utiliza para el urocultivo.
• Interpretar dicha técnica
Materiales
• Muestra de orina
• Tubos con solución salina fisiológica estéril (9 ml)
• Agar Tripticase Soya
• Agar Eosina Azul de Metileno (EMB)
• Agar Mac Conkey
• Pipetas de 1 ml estériles
• Placas Petri estériles
• Asa de Kolle
• Mechero
Marco teórico
 Examen cuantitativo
Método de conteo en placa o recuento de colonias. Introducido por Kass para
evitar los riesgos del cateterismo vesical y diferenciar bacteriuria verdadera de
contaminación, se realiza de la siguiente manera:
•Homogeneiza la muestra mediante agitación.
•Diluye al 1:10, colocando 1 ml. de orina en 9 ml. de suero fisiológico estéril.
•Prepara diluciones al 1:100; 1: 1000 y 1:10 000, a partir de la dilución al 1:10.
•Deposita 1 ml. de cada dilución en placas Petri esterilizadas, sobre las cuales
vacía un tubo de agar tripticase soya, fundido y enfriado a 45°. Mediante
rotación suave, distribuye homogéneamente la siembra.
•Lleva a incubar todas las siembras a 37ºC durante 24 a 48 horas.
Para calcular el número de colonias elige placas que contengan entre 30 y 300
colonias. Contadas éstas, basta multiplicar su número por la dilución
respectiva para obtener la cuenta total.
Los resultados del estudio cuantitativo se informan de la siguiente manera:
• No hubo desarrollo microbiano.
• Menos de 10 000 colonias por ml.
• Entre 10 000 y 100 000 colonias por ml.
• Más de 100 000 colonias por ml.
Por lo general, las muestras contaminadas tienden a mostrar cuentas
inferiores a 10 000 colonias/ml. Cuando el recuento revela valores
intermedios, entre 10 0000 y 100 000 colonias/ml, el examen debe repetirse.
Conviene advertir que pueden pasar inadvertidas infecciones urinarias
verdaderas, si no se toman en cuenta cuentas inferiores a 100 000 colonias por
ml, ya que existen diversos factores que pueden explicar recuentos bajos en
infecciones urinarias verdaderas, diuresis acentuada, obstrucción uretral,
infecciones crónicas e infecciones por cocos Gram positivos
Examen cualitativo
El estudio cualitativo, que conduce a la identificación del agente, se realiza
mediante la siembra de la muestra homogeneizada, en placas con agar eosina
azul de metileno (EMB) o MacConkey.
La identificación final de los agentes se hace mediante el estudio de sus
propiedades bioquímicas y características serológicas. Esto permite establecer
relaciones de identidad entre microorganismos aislados en cultivos sucesivos
o de control, y definir el estado de revivida o de reinfección. De esto deriva el
valor que tiene el conocimiento del biotipo, del serotipo (particularmente en
E. coli), del piocinotipo (en especial cuando es de Ps. aeruginosa) y del
antibiótico. Éste último se obtiene al comparar el antibiograma de cepas
aisladas de muestras obtenidas de diferentes oportunidades en un mismo
paciente Si existe correspondencia, se concluye que se trata de una misma
cepa.
Parte experimental
 La muestra de orina antes de abrirlo tenemos que agitarlo

 Se saca la pipeta y con la pipeta se coge un mililitro de orina

 1° tubo de ensayo : se agarra el tubo de ensayo que está en la gradilla y tapado con
algodón se saca el algodón y con el mechero se calienta la boca del tubo de ensayo se
mezcla con el suero que está en el tubo de ensayo se homogeniza quedando una solución
diluida al (1/10)
 Segundo tubo : mismo procedimiento se saca el algodón y se calienta la boca del tubo y
se coloca se coloca nuevamente al solución de primer tubo quedando una solución de
(1/100)

 Tercer tubo : mismo procedimiento al anterior se

coloca la nuevamente la solución del segundo tubo quedando una solución diluida
(1/1000)

 Cuarto tubo : igualmente se coloca nuevamente la solución del tercer tubo de un mililitro
se mezcla homogenizándose quedando una solución diluida (1/10000)
 A continuación se saca las cuatro placas Petri

 Se coloca la disolución del cuarto tubo a la primera placa de Petri y así sucesivamente se
va colocando las disoluciones hasta llegar al primer tubo

 Antes de tapar la muestra de orina con la asa de kolle que posteriormente se calienta en
el mechero se coge una gotita de la muestra de orina para posteriormente sembrarlo en
al agar (EMB) luego se tapa la muestra de orina
 Luego a continuación se trae el agar tripticase soya que está caliente el cual no se puede
echar ya que mataría a las bacterias y se deja enfriar por un rato

 Hay de agar 60 mililitros de media en el matraz y por ende en cada placa tendría 15
mililitros hay que calcular y mover la placa en forma de ocho calmadamente y luego
dejar que solidifique y luego envolver para llevar a refrigeración a 35 grados
Conclusión:
Recomendaciones
Cuestionario