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•• 1
Virus
Of1Cllni.1ación de los virus. Una partícula vírica, también denommada
irión. e~ta compuesta por ácido nucleico (DNA o RNA), rodeado por una
vubicrw proteica. Esta cubierta proteica se denomina cápsido. El ácido
~udc1co rodeado por el cápsido, el nucleocáp sido, puede presentarse des-
nudo o mcluido en una membrana (Fig. 4.2 y 4.3) Nucleocápsido.., de..,1w-
dos ,on. por eje~plo, el viru., del mosaico del tabaco, el virus de la<., verru-
gas y d adcnov1ru~. Rodeado-. por membrana-. c-.tán el virus de la gripe y
el del herpes. Por su parte, un cápsido e~tá compuesto por subunidadcs, los
c:aps6meros. El cápsido llene generalmente una organización !.imétnca.
Se diferencian dos tipos de simetría, la simetría helicoidal y la simetría
cúbica. La tabla 4. 1 da una visión general de los virus de acuerdo con su
constitución estructural.
Cl~ificación de los virus. Lo-. virus son extraordinariamente específicos
en cuanto a su hospedador, y dentro de él se e-.pecializan en determinados
aejido"> o célula-;. Por ejemplo, entre los vim'> animales se habla de virus
neurotrópicos, cuando se desarrollan en células neuronales, viru'> linfotró-
picos (en linfocitos), vin1-. mixotrópicos (en el glucocáliz de epitelios,
membranas mucosa<>).
Los virus que afectan a los vegetales se denominan de acuerdo a lo.., -.ín-
tomas de la enfermedad y a su-. hospedadore!.. Es muy bajo el número de
virus de hongos, algas y proto1oos que se han investigado. Los bactenó-
e: l·l
1 mocrometro (µm)
Estructura helicoidal
Cápsido desnudo Cápsido envuelto
ANA Virus del mosaico del tabaco ANA Myxovirus: virus de la
y otros muchos virus vegetales gripe y parainfluenza
DNA Colifago fd (paperas y sarampión)
Estructura poliédrica (icosaédrica)
Cápsido desnudo Cápsido envuelto
ANA Picornavirus: ANA Aetrovirus':
MKS, ECHO, polio sarcoma, leucemia
reovirus carcinoma
DNAc Papovavirus•: ANA Togavirus: SFV
papiloma, polioma, SV40 encefalitis, fiebre amarilla
DNAsc Colifago <t>X174, M13 DNA Herpes simplex
Varicela
Virus EB (mononucleosis
infecciosa)
Virus compuestos (cabeza icosaédrica + cola helicoidal)
DNA Bacteriófagos grandes (T2, T4, T6)
Virus complejos
DNA Varicela, vacuna
• Virus oncogénicos
4.1 Virus 147
nucleocáps1do
nucleo.
cápsido
- - con
envuelta
Hay muchos tipos de virus de la gripe. El tipo de tejido que resulte afec-
tado depende de la especificidad de hospedador por parte del virus y de las
características receptoras de las células. El virus puede conducir a un
entorpecimiento del metabolismo o a una lesión de la célula. Tiene acción
antigénica y determina en el hospedador la formación de anticuerpos. Los
virus responsables de las grandes epidemias de gripe se diferencian por su
virulencia y patogenicidad.
Virus poliédricos sin envuelta. Muchos virus de apariencia esferoidal
son poliédricos. La forma poliédrica preferida es el icosaedro, un cuerpo
delimitado por 20 triángulos equiláteros con 12 esquinas (Fig. 4.5C y 4.6).
El cápsido de un virus icosaédrico está compuesto por dos tipos de capsó-
meros: en los vértices se sitúan pentágonos (pentones) constituidos por
cinco monómeros proteicos (protómeros); las caras y los vértices están
6
A
Fig. 4.4 Virus del mosaico del tabaco. A Micrografía electrónica de un sombrea·
do con carbón y platino; 65 000 aumentos (Foto H. FRANK); B Modelo (de KAALSoN·
Kurzes Lehrbuch der Biochemie, Thieme, Stuttgart 1980).
4.1 Virus 149
@
protómero de un hexón
@
protómero de un pentón
donde haya habido un fago y haya atacado a una bacteria tiene lugar ráp¡.
damente la lisis de un número cada vez mayor de bacterias, hasta que el
área infectada por los fagos se hace visible macroscópicamente, como una
mancha sin bacterias que sobresale del fondo del cultivo continuo de bac.
terias (Fig. 4.1 C). Mediante métodos apropiados se pueden reproducir
rápidamente a los bacteriófagos sobre ~ultivos conti.nuos .~e bact~rias en
medios sólidos o en suspensiones bacterianas. A cont111uac1on se aislan los
fagos por centrifugación, se mata con cloroformo a las bacte~ias residua-
les y se obtiene un lisado de fagos, que por lo general conllene de 10 10
hasta 1013 fagos por mililitro.
Morfología de los bacteriófagos. La morfología de los bacteriófagos se
aclaró predominantemente en los fagos de la serie T de Escherichia coli.
El colifago T2 está compuesto por una cabeza poliédrica de 100 nm de largo
sobre la que se adosa una cola de aproximadamente la misma longitud. Se
habla por ello de virus compuestos (Tab. 4.1 ). La cabeza está constituid~ por
capsómeros y encierra al DNA. Proteína y DNA se encuentran aproxima-
damente en la misma proporción. La cola del T2 es compleja y se compone
por lo menos de tres partes: un cilindro hueco está rodeado por una envol-
tura contráctil, en cuyo extremo distal se localiza una placa basal con espí-
culas y tentáculos de adsorción específicos del hospedador. Las micrografí-
Fig. 4.7 Modelo de un fago T2. A Fago con la vaina extendida antes de la ads?r·
ción; B Fago con la vaina contraída después de la adsorción y la inyecc1on.
Explicación: (a) Sección transversal de la cola extendida: 6 subunidades proteicas de
5
la vaina en un plano; (b) Sección transversal de la cola contraída: 12 subunidade
proteicas de la cola en un mismo plano; (c) Visión frontal de una placa basal de un
fago antes de la adsorción con las fibras de la cola libres.
4.2 Virus bacterianos (Bacteriófagos) 153
protelna total
ONA l ágico
___ - - proteina l ágica
, ,, partículas inlecctOSas
, __ __ __
I
enzimas fágicos tempranos
_, J. • __ • __ • - - • enzimas bacterianos
ANA total
DNA bacteriano
o 20 30min
La maduración final consiste en la reu nión del DNA fágico con la proteí-
na de la envuelta para dar el fago maduro infeccioso. La maduración de
los fagos Tes un proceso complicado que se realiza por etapas. En primer
lugar, la<> numerosas moléculas de DNA se contraen en partículas que tie-
nen la forma de cabezas de fagos. Después de recubrirse por el dpsido se
añaden los componentes de la cola. La sucesión de estos procesos pudo
determinarse mediante mutantes letales condicionales, en los que a una
temperatura de 25ºC todos los procesos sintéticos se desarrollan normal-
mente, pero que a 43ºC se bloquea uno u otro proceso de síntesis.
Por último, la pared celular se ablanda por acción de la liso::,ima fágica y
tiene lugar la liberación de los fagos. Esta rotura explosiva de las célula~
puede observarse en el microscopio de campo oscuro. La duración del
período de latencia y e l tamaño de la explosión varían entre unos amplios
márgenes, dependiendo del tipo de fago. bacteria y condiciones ambienta-
les (Fig. 4. 1 l). También se ha conseguido infectar bacterias como
Haemophilus injluen::.ae y Bacillus subrilis con DNA nativo aislado de
bacteriófagos. Esta transformación genética correspondiente a la in fección
fágica se denomina también transfección.
J
~
200 = número de lagos libera-
dos por bactena infectada
~
~ 50
~
~
e
·:>
z 10 20 30 40 min Tiempo transcurrido después de la infección
flg. 4.11 Estudio del período de latencia y del tamaño de explosión. Basado en
experimentos realizados acerca de I¡¡ multiplicación del fago T2 en E. coli B. A un cul-
tiVO joven de bacterias se le añadió una suspensión de fagos. Después de la infec-
ción los fagos no absorbidos fueron inactivados añadiendo un antisuero fágico. Tras
una fuerte dilución se tomaron muestras a intervalos regulares de tiempo y se sem-
braron en agar junto con un exceso de bacterias sensibles a los fagos. Durante 25
minutos el número de unidades capaces de formar placas continuó siendo 5 {perío-
do de latencia) pero entonces subió hasta 235 {meseta). Por término medio se han
lberado, pues, 47 fagos por bacteria infectada (tamaño de explosión).
Fig. 4.12 Calvas (placas) formadas sobre un cultivo continuo de bacterias por
bacterias lisógenas y fagos libres. Sobre la superficie del agar se sembró una sus-
pensión densa de bacterias no lisogénicas sensibles (Bacillus megatherium) que
contenía también unas pocas células de una cepa lisogénica de la misma especie
así como unos cuantos fagos libres. Los agujeros claros son el resultado de la acción
lítica de un fago libre; las colonias centrales se han formado por crecimiento de las
bacterias lisogénicas.
inserción
escisión
Flg. 4.13 Ciclos vital es de un fago atemperado, representado por el fago lamb-
dll. Si Escherichia coli es infectada por el fago lambda puede darse una reproduc-
ción del fago y una lisis (ciclo lítico) o bien se puede lisogenizar la bacteria. El DNA
del fago se presenta como una doble cadena lineal. En el interior de la bacteria se
cierra en un anillo. Este anillo puede permanecer autónomo o integrarse en el DNA
bacteriano. En el primer caso se desarrolla un ciclo lítico. El DNA circular cerrado se
replica. Según el proceso del círculo rodante ("rolling circle") se establece una cade-
na con muchas copias del DNA fágico. Los genes del fago determinan la síntesis y
ensamblaje de proteínas de la cabeza y la cola, y la inclusión de una copia de DNA
en la cabeza del fago. Las cabezas y las colas se acoplan de forma espontánea. Al
lsarse la célula hospedadora se liberan aproximadamente 100 fagos maduros, que
pueden a su vez infectar otras células. Sin embargo, el DNA fágico circular y cerra-
do ~uede también perder su autonomía e incluirse en DNA del hospedador. En lugar
de 1ncl~sión se habla de inserción o integración del DNA fágico. La célula es enton-
ces hsogena para el fago lambda. El fago latente, o profago, se replica junto al ero·
mosoma del hospedador. La bacteria lisógena puede dividirse de forma ilimitada, sin
que se produzca la lisis. De forma espontánea o por irradiaciones o tratamientos con
~~tes mutágenos puede inducirse la liberación (escisión) y multiplicación lítica del
...,"" fágico.
En el fago libre el DNA se presenta como una doble cadena lineal (véa~e
Fig. 4. 14 ); no obstante, cada una de las cadenas sobresale en los extremos
en un total de 12 nucleótidos. Estos dos extremos de una sola cadena son
complementarios entre sí; por apareamiento de bases pueden quedar uni-
dos. Se habla por este motivo de extremos "cohesivos" (sticky). Cuando
se mantienen moléculas de DNA de este tipo in vitro en disolución, se
establece un equilibrio entre DNA circular y lineal debido a la interacción
entre las bases complementarias de los extremos de una sola cadena. fata
misma forma circular se presenta también cuando el fago lambda ha infec-
tado a la célula. Las dos aberturas en las cadenas se cierran mediante una
polinucleótido-quinasa; este enzima bacteriano tiene la función de reparar
cortes en una de las cadenas de una molécula de doble cadena por unión
de los nucleótidos. Por ello, para pasar de la forma lineal del DNA fágico
al estado circular cerrado no hace falta la participación de ningún enzima
del fago.
~-~
~e:;(
bacteriófago
.. 11111111111111111111· ... _
DNA virico inyectado cerramiento
:
00
Jigasa
~ ~D
--
-- ---
-- --- ~
. gal ... gal ... gal ...
enfrentamiento rotura entrecruzamiento
D
fágica. Este retomo puede ser espontáneo o tener lugar por inducción (p.
ej. irradiación con UV). La escisión del DNA fágico del DNA bacteriano
se realiza probablemente siguiendo a la inversa los pasos de la inserción.
La escisión del DNA fágico es por lo general muy precisa: más del 99%
de las partículas fágicas producidas por células lisógenas son idénticas al
fago infeccioso original. Esto significa, que el DNA del fago al escindir-
se se rompe exactamente en el mismo punto de la integración. Sólo en
raras ocasiones (una entre 100 000) tiene lugar una escisión anormal
(véase Transducción).
i,os tumores típicos (Fig. 4. 15) se provocan por la infección con Agro-
b<JCteri11111 tumefac1ens, una bactena del suelo de flagelación peritrica,
oram negativa, semejante al género Rhiwhiwn. La infección tiene lugar
r Ja penetración de las bacterias a través de heridas o lesiones; las bac-
::ia~ se reproduce~ en los espacios intercelulares. Existen cepas bacteria-
nas virulentas y av1rulentas. Las cepas virulentas de A. tumefaciens con-
tienen un plásmido grande, el llamado Ti (inductor de tumores).
El verdadero agente infeccioso es el DNA plasmidico. Penetra en la célu-
la vegetal y se incorpora al genoma de la planta. A este proceso se le deno-
rnina transformación oncogénica. Por transferencia de las células trans-
formadas mediante estaquillas a tejidos sanos pudo demostrarse que las
bacterias no son imprescindibles en la comunicación de esta propiedad.
No se integra todo el plásmido, sino tan sólo una parte del DNA plasmí-
dico. en el DNA del hospedador. Este fragmento lleva la información para
la síntesis de las opinas. Son compuestos derivados de la arginina. Los
sintetiza la célula vegetal, pero no los puede utilizar, sino que los utiliza
A. tumefaciens. Así Agrobacterium, con ayuda del plásmido Ti, adquiere
un acceso exclusivo a los productos fotosintéticos del vegetal. Otros genes
Ti afectan a la formación de auxinas y citoquinina, que escimulan la divi-
sión de la célula vegetal y el crecimiento del tumor.
La capacidad natural del plásmido Ti para introducir en la célula vegecal
DNA bacteriano heterólogo, abrió la posibilidad de utilizar este plásmido
como vector para incorporar DNA exógeno en los vegetales. Mediante
mecanismos de recombinación de DNA (apartado 15.5, Técnica de clona-
ción) puede integrarse en e l plásmido Ti DNA exógeno en lugar de los
genes de virulencia, transferirlo, recombinarlo con el genoma de la célula
vegetal y por último, expresarlo. De esta forma se consiguieron, por ejem-
plo, plantas recombinantes de tabaco que sintetizan el sistema de la luci-
ferasa y que emiten luz. A otras plantas se les han transmitido caracterís-
ticas de resistencia frente a antibióticos, herbicidas o insectos perjudicia-
les. Los intentos de transferencia con mayor éxito se han conseguido con
solanáceas (tabaco, patata, Rauwolfia, Petunia, Datura, entre otras). No
obstante. la rápida investigación indica ya resultados positivos de la tec-
nología genética en las monocotiledóneas. El que pueda conseguirse por
esta vía la transferencia a plantas de cultivo de la capacidad para fijar N 2
~pende en primer lugar de la extremada sensibilidad del sistema de la
1111roge11asa frente al oxígeno.
general 'ólo crecen h<l\ta que entran en contacto: \e da una inh1h1c1ón Por
contacto ) \e fonna linicamente una monocapa celular. Si e<,l<\<, célu ü\
sana\ \e infectan con un \ irw. tumoral se pierde la inhibición de contat 0
y las célulm, se superponen. Este crecimiento en varias capas se da sólo en
célula' cancerosa<.,. La<., célula<., pueden aislarse fácilmente y obtcncn.c a\j
línea\ pura<. (clones) de células "oncogénica' transformada<."'. El ere· 1.
miento incontrolado de la' celula-. puede conducir en el cuerpo an11na a
la formación de tumores. S1 el cuerpo encap,ula a e\tO\ nuevo' tejido .... se
habla de un tumor benigno. pero si crecen incontroladamentc ) 'e di •C·
minan a otras parte\ del cuerpo o tejidos ) dctenninan una metü\ta '·
entonce\ se habla de tumores m a lign os o de cáncer.
Introducimos aquí al vin1<, de simios 40 (Simian Virus 40, SY40) como
ejemplo de la formación de tumores en animalc' por virus DNA de dohlc
cadena. Afecta a 'arios ho'>pcdadores y tejido': a ello se refiere la der o.
mmac1ón del grupo pohoma\ irus (-oma indica tumor). Pertenece a lo,
vm" tumorales mejor e\tud1ados > se comprobó también \U capacidad
para utll11arlo como vector en la modificación genética de célula-. an11 J·
les. El SY40 es un' iru-, icosaédrico sencillo. desnudo (72 capsómcro'l y
contiene una molécula circular cerrada de DNA de doble cadena. El v1 ru~
puede transferirse de su hospedador (hám-;tcr, rata) a cultivos de tejidos y
en ellos se multiplica. En algunas líneas celulares (células pcrmi ... iva\) se
mul11pltca de forma lítica } la\ célula' mueren durante la multiphcac )n
celular En otras línea' cclulare<. (no pcnni\iva ... ) el viru-. puede C\tahlc·
cer'e en forma li'>ógcna ) no '>e multiplica. Ln algunos casos ( 10 ) el
DNA del \ irus se integra C\tablemente en el DNA de la célula hospeda-
dora. La célula modificada genéticamente puede transformarse en onro-
génica. y como consecuencia de un crecimiento descontrolado conducir a
la formación de un tumor. En la célula transformada se sintcti1a una pro-
teína (antígeno T) que dirige la replicación del DNA celular. La inyección
en animalc' de esta<, célula-, transformada" conduce a la rápida formación
de tumore .... La transformación oncogénica por un viru<. como el S\ .W
tiene muchos puntos en común con la integración del fago lambda er el
genoma bacteriano de L. co!t (establecimiento de la lisogenia). No on-.-
tantc. la in'>erción de SY40 puede tener lugur en muchos lugares del DNA
de la célula, y no e., por tunto una recombinación específica de lugar.
Exi..,tcn también otro\ mccani-;mos de oncogéne\is por virus DNA.
Formación d e tumores por retrovirus. En la formación de tumore.., en
arnm.11c ... también pueden participar' iru.., R'\IA. Los rctro\iru<. pcncncl.'cn
a lo'> '1rus RNA con em uclta. Contienen un genoma de RNA (+ ). e ... to C' ·
RNA de una cadena. Como v1ru<, oncogénico..,, de..,encadenan por CJcmplo
el sarcoma de Rou\ en ave\ o la leucemia en ratones. La denominacmn de
retroviru\ se basa en que en su multiplicación participa la tra11scripw1t1
inversa (re1·erse 1ra11.1·criptase) (véase pág. 43). La multiplicación del
~~~~~~~~~~~~~~~~
4.3 Relación entre virus y plásmidos 165
RN1\ de e'tos \irus no puede dar...e '>implemente por replicación del RNA.
sino que primero tiene que darse una tram.cripción en DNA > 6tc lllte-
gr.1r,c en el ~ro~o..,oma de la c~lu.la h?,"Pel!~dora; La integraci6n C\ un
pas1) 1mpresc1,n?1bl~ para la mult1phcac10~ vmca: ~1n1came_n,te se tran ... cri-
be el DNA vmco llltcgrado. La frecuencia de la llltegrac1011 es también
ptU) alta porque la integración en el DNA del ho..,pcdador forma parte del
ciclo \·itJI del \ iru<.,. Prohahlemente la integración se puede dar en cual-
quier lugar del D A ho ... pcd.1dor. La replicación de un RNA de una cade-
na. un RNA (+)se rcal11a en lo\ siguiente\ Pª"º" (hg. 4.16): trarl\crip-
ción reversa mediante la transcripiasa im·cr.w propia del \ iru.., en una
caMna de DNA complementaria, copia del DNA por la DNA-poli111era·
stJ celular a una molécula de doble cadena lineal, circularización de la
dohlc cadena (así se e!>tahlcce la forma llamada covalente, cerrada y cir-
glucoprote1na ~
,- + RNA
~~ transcnptasa inversa
capstdo
~ envuelta
,,-; ·:\ ~
{/
\1
'1 / ®
1 ~
~. '/dsONA
ANA1
Pllmer 5' 3º
~ !@
,_ DNA
30 60 90 120 150
Son, por tanto. die1 veces menores que el DNA infeccioso del ,¡ru., r1 1J~
pequeño conocido. y por eso los patógenos má'> pequeños. Cau-,an enkr·
medadcs en la patata, en cítricos, pepinos, crisantemos, lúpulo. cocotero)
olras planlas.
~~~~~~~~~
4.4 Virus patógenos humanos importantes 167