7 “Año del Diálogo y la Reconciliación Nacional”.

UNIVERSIDAD NACIONAL
JOSÉ FAUSTINO SÁNCHEZ CARRIÓN

Escuela Académico Profesional de Biología con mención en Biotecnología

CURSO:
TEMA: UsoEnzimologia
de miel asociada con Ananas comosus (Bromelina)
en el tratamiento de la tos irritativa aguda.
DOCENTE: Ruben Guerrero
CICLO: V
ALUMNOS: Feria Rivera Jahira
Francia Vega Danny
Mena Garcia Angel
Origuela Iparraguirre Gerardo
Ramirez Eguizabal Adriana
INTRODUCCION
HUACHO – PERÚ
Los procesos virales de las vías respiratorias suelen ser auto limitados y se caracterizan
principalmente por fiebre y tos, que son dos predictores independientes de la presencia
del virus y tienden a desaparecer en aproximadamente una semana. Sin embargo, la tos
es el síntoma más común en los consultorios médicos de atención primaria y es una causa
frecuente de visitas a la atención de emergencia; este síntoma puede volverse tan intenso
que lleve al paciente y a sus familiares al agotamiento.

En tales casos, los medicamentos sintomáticos a menudo son utilizados por los pacientes
que se auto medican, a menudo en respuesta a la publicidad y al hecho de que no requieren
receta médica. Disponible en farmacias y farmacias, con diferentes formulaciones, las
sustancias para el alivio de la tos pueden traer riesgos, especialmente en el grupo de edad
pediátrica.

El dextrometorfano y la difenhidramina se usan a menudo como agentes antitusivos,

especialmente en niños. Un estudio clínico comparó estos dos principios terapéuticos con
la miel, con respecto al control de la tos nocturna y la calidad del sueño en niños con tos
irritativa, y descubrió que la miel (2.5 ml) administrada antes de dormir, mostró mejores
resultados con respecto al alivio de los síntomas en comparación con estos dos fármacos.6
Una revisión reciente de la Cochrane Library, realizada con estudios clínicos con
estándares de calidad metodológicos aceptables, no informó ninguna evidencia a favor o
en contra de la eficacia de estos alivio de los pacientes con tos. Por lo tanto, una estrategia
terapéutica ideal para el control sintomático de la tos sigue siendo incierta hasta la fecha.

En consecuencia, el individuo y los familiares angustiados por el buscar medidas que

consideren seguras para el alivio de la tos, cuando este síntoma es intenso. En este
aspecto, la terapia empírica basada en productos naturales y / o a base de hierbas ha sido
empleada cada vez más y muchas personas la usan libremente, con o sin receta médica,
secundaria a la sugerencia de los familiares y / o las propias creencias del paciente.

En este contexto, los productos derivados del extracto de Ananas comosus (rico en
Bromelina) y la miel han mostrado resultados prometedores, ya que contienen enzimas
proteolíticas como la tripsina, la quimo tripsina y la Bromelina.7 La bromelina es el
nombre genérico de la familia de enzimas proteolíticas que contienen sulfhídrico radical
derivado de A. comosus, la planta de piña, que también tiene enzimas no proteolíticas,
con acción tópica significativa en la mucosa respiratoria.7,8 Libres de efectos tóxicos,
estos productos derivados de la piña han demostrado propiedades prometedoras en
estudios in vitro: interfieren con el crecimiento de células malignas, inhiben la agregación
plaquetaria y la coagulación y tienen principalmente una acción antiinflamatoria y
mucolítica. Estas son acciones potencialmente beneficiosas; La bromelina ha demostrado
tener una acción significativa en la disolución de la secreción bronquial, con la ventaja de
ser un componente alimenticio y, por lo tanto, una sustancia segura para el uso de los
niños.

La Organización Mundial de la Salud indica que la miel es un tratamiento potencial contra

la tos en las infecciones de las vías respiratorias superiores en los niños, y se considera
un tratamiento sintomático, económico, popular y seguro. Los estudios han atribuido
antioxidantes, antibacterianos, antimicóticos, antivirales, antiinflamatorios, acciones
conjuntas y antitumorales para la miel, así como propiedades inmunomoduladoras. Un
ensayo aleatorizado, doble ciego, evaluó la efectividad de tres tipos de miel (eucalipto,
cítricos y labiata) en el control de la tos nocturna y la calidad del sueño en los niños con
infecciones del tracto respiratorio superior y las comparó con placebo. Los tres regímenes
de tratamiento activo con miel mostraron una mejora significativa de los parámetros
evaluados en comparación con la noche anterior.

La combinación de extracto de A. comosus con miel puede representar un avance en el

tratamiento sintomático, posiblemente bloqueando los mecanismos desencadenantes de
la tos debido a condiciones virales o irritativas. Por lo tanto, este estudio tuvo como
objetivo evaluar el efecto sobre la inhibición inmediata de la tos irritativa en pacientes
tratados con una combinación de A. comosus (piña) y miel (Bromelin) y compararlos con
aquellos tratados solo con miel (placebo) en una ambiente de atención de emergencia
pediátrica.

I. Planteamiento del problema

Por lo general, las vías respiratorias son auto limitados y se caracteriza principalmente
por fiebre y tos, que son dos independientes predictores en presencia de virus y tienden a
desaparecer en Aproximadamente una semana. Sin embargo, la tos es la más común en
médicos de atención primaria y causa frecuente de visitas a los servicios de emergencia;
este síntoma puede llegar a ser tan intensa que conduce al paciente y parientes hasta el
punto de agotamiento menudo, los fármacos sintomáticos son utilizados por los pacientes
a auto medicarse. Ellos no requieren receta médica. Disponible en farmacias, con
diferentes formulaciones, sustancias para el alivio de la tos. Sin embargo pueden traer
riesgos, especialmente en el grupo de edad pediátrica.

1.1 .Planteamiento del problema

Es una infección vírica de vías altas, sumamente común durante la infancia, su
duración está restringida a sus características, de manera que el tiempo de curación
de ésta no se puede acortar, pero sí se puede aliviar el proceso con remedios
naturales para niños y productos farmacológicos. No es raro que la tos infantil
empeore por la noche o al levantarse por la mañana, ya que la postura horizontal
hace que las secreciones se acumulen, pero una tos irritativa nocturna, persistente,
en un niño sin antecedentes recientes de infección respiratoria, puede ser
indicativo de asma y debe valorarse médicamente.

1.2 .Formulación del problema de investigación

Esta investigación fue realizada en pacientes pediátricos con tos irritativa
haciendo un estudio clínico usando tratamientos con agentes intuitivos que son el
 dextrometorfano y la difenhidramina, comparado con el tratamiento usando la
combinación de extracto de miel y el Ananas comosus en la cual cuenta con la
presencia de bromelina.

2. Problema general
La reducción de la tos irritativa en un tiempo límite menor a la que
normalmente se estima utilizando los tratamientos ya establecidos

2.1 Problema especifico

Acelerar el mejoramiento del paciente con tos irritativa dada que comúnmente
se logra en 3 semanas a más con riesgo a complicaciones.

3 Objetivos
3.1 Objetivo Generale
Dar a conocer a la población universitaria los usos y aplicaciones médicas de la
enzima bromelina de ananas comosus para el aprovechamiento clínico para
realizar investigaciones futuras.
3.2 Objetivo Especifico
Aprovechamiento de dicha enzima en fármacos para tratamientos para síntomas
y enfermedades respiratorias.

3.3 Justificación
La bromelina descompone la proteína. Esto tiene beneficios bastante obvios al
considerar que muchos de los alimentos que usted consume contienen grandes
cantidades de proteína y al cocerlos bien destruye la mayoría de las enzimas que
se dan de forma natural. Al ser una enzima proteolítica apoya los mecanismos
digestivos del cuerpo reduciendo moléculas complejas de proteína para formar
unidades péptidas más pequeñas o aminoácidos individuales. Los componentes
más pequeños son cruciales para la producción de músculos, neurotransmisores y
otras moléculas con base proteínica que su cuerpo produce. Sin embargo, muchos
de los beneficios de la bromelina se basan de hecho en la absorción intacta de la
enzima en el intestino delgado; esta absorción hace posible sus efectos sistémicos
como reducir la inflamación.

3.4 Delimitación del problema

 La presente investigación tiene como finalidad utilizar un tratamiento natural
clínico de rápido resultado a los pacientes infectados con tos irritativa en niño
Llevada a cabo en el hospital San Juan Bautista de Huaral en la área de pediatría,
en la temporada de invierno-primavera 27/05/18

4 Marco Teórico

4.1 Antecedentes
En los últimos años se ha efectuado trabajos investigativos a nivel mundial que
tienen mucha relación con el tema propuesto. Así, CARBAJAL y otros (2010),
indica que la piña se utilizó como planta medicinal por varias culturas nativas. La
bromelina es una cisteíno-proteasa, aislada y purificada a partir de diferentes
órganos de plantas de la familia Bromeliaceae. Como resultado de su
investigación mencionan que los sistemas de purificación batch y semi-batch
ofrecen simplicidad, factibilidad de escalado, alta capacidad de procesamiento de
muestra, y reproducibilidad del procedimiento cromatográfico. El preparado
obtenido por cromatográfia de intercambio ionico es un producto heterogéneo en
actividades proteolíticas, con una actividad específica alta y comparable con la de
otros preparados utilizados en la terapéuticas (0,5 U/mg)). La determinación de la
masa molar por espectroscopia de masa mostró un valor de 24,500 Da. Esta
identificación constituye un control de calidad de los preparados enzimáticos, lo
que demuestra sus potencialidades de uso en la industria y la biomedicina.
 GAUTAM y otros (2010), mencionan que la bromelina es una proteinasa
principal, aislada de la piña (Ananas comosus). El objetivo del estudio fue
comparar la cantidad y actividad de la bromelina presente en el tallo y la fruta de
la planta. La bromelina fue aislada de los tallos y los frutos de las plantas de piña
madura por extracción con solución de buffer acuosa amortiguada. La
purificación de la enzima se llevó a cabo por centrifugación, técnica de
precipitación de sales, diálisis, cromatografía de intercambio ionico y la
estimación por el método de Lowryus. La bromelina fue ensayada por su actividad
mediante la hidrolisis de la gelatina, representado mediante el uso de unidad de
digestión de gelatina.
En la investigación realizada en la Habana Cuba, denominada “Nueva tecnología
para la obtención de un preparado de bromelina de tallo de piña” HERNÁNDEZ
y otros (2003) mencionan que la bromelina es una proteasa aislada de órganos de
planta de piña con un amplio espectro de de acciones farmacológicas y
alimenticias. Se diseñó y patento un procedimiento de extracción de bromelina en
el que se utilizaron protectores del centro activo de la enzima a un pH cercano al
fisiológico de la planta y alejado del óptimo.
El perfeccionamiento de la tecnología demostró que se alcanzan rendimientos de
20,8 g de producto/kg de tallos y 3,9 g de proteínas/kg de tallos con una actividad
especifica de 1,36 U/mg. El procedimiento de extracción se puede escalar y tanto
en planta piloto como a escala industrial se logran rendimientos en términos de
actividad superiores al 72% de los obtenidos en el laboratorio. La purificación
mediante la combinación de métodos cromatograficos hizo factible el aislamiento,
a partir del preparado crudo del tallo.
A nivel de América Latina también se han realizado estudios de la enzima
bromelina, es asi que en Brasil, FRATTINI y otros (s.f)) en su investigación sobre
la optimización de extracción de bromelina por micelas invertidas a base de frutas
de piña, indican que la bromelina de la fruta (EC 3.4.22.5) se obtuvo a partir de
extracto de frutas de la piña de las especies perola. Con el fin de evitar la
desnaturalización de la enzima en el proceso de purificación, el presente trabajo
estaba por la optimización de las condiciones para la extracción liquido-liquido
de micelas invertidas.
En el diseño factorial fraccionados de experimentos se encontró que el factor de
purificación máximo obtenido fue de aproximadamente 3 y los mejores valores
de la variable independientes: agente tensoactivo, co-solventes y concentraciones
de sal, el pH de las extracciones, fueron respectivamente: 100 mm, 10% v/v, 1 M,
3,5 y 8.

En términos de factor de purificación los resultados mostraron la gran eficacia de

los impulsos en el equipo de micro-columna, en comparación con la extracción de
lotes y la fase dos que corresponde a la extracción acuosa de la bromelina.

4.2 Bases teóricas

 La extracción de bromelina a partir de residuos de piña concluye que las mejores
condiciones para la extracción de bromelina fueron con el solvente etanol,
temperatura de – 10°C y durante un tiempo de reposo de 7 dias. La mayor cantidad
de proteínas se encuentran en la cascara sin embargo esta tiene la menos actividad
enzimática y especifica. La bromelina extraida de cascara de piña tiene un menor
costo con respecto a las demás partes del fruto ya que es un residuo agroindustrial.
Los resultados obtenidos son prometedores para que con un mayor grado de
purificación sea factible aplicar esta enzima en tratamientos biomédicos.
3. Metodologia
3.1 Metodo especifico
El fruto de Ananas comosus, será conseguida en el mercado Atahualpa (Huacho). La
fruta tendra un estado de madurez, verde y con edades entre un año y un año y medio.
respectivamente. La fruta sera cortada, seleccionando la pulpa de la misma y
desmenuzándola suavemente por medio de un macerado hasta obtener la mayor
cantidad de extracto posible. Seguidamente se llevó a refrigeración (temperatura ≤
4ºC), agregando benzoato de sodio ( Erba, 2012) como conservante en relación 0,5 g
por cada litro de extracto. Pasados quinces días de este tratamiento se pasó al proceso
de extracción.
3.2 Proceso de extraccion
La extracción del enzima se realizarasiguiendo el proceso utilizado por Alonso., A.
et al., (2007) con algunas modifi caciones. A partir del extracto de piña (Ananas
Comosus) anteriormente tratado, se hicieron extracciones con dos solventes: etano y
acetona, trabajando en cada caso concentraciones de solvente de 75% y 50% v/v en
agua; esto con el fin de realizar una comparación de rendimientos entre estos solventes
y estas concentraciones.

3.3 Cuantificación proteica del extracto

Se realizara la cuantificación de proteína del extracto trabajado para la extracción de
la misma utilizando el método de Biuret (XXI Congreso de investigación CUAM-AC
Mor, 2010). Éste proceso resulta de vital importancia para tener una certeza de la
cantidad de proteína presente en el extracto y calcular nuestro rendimiento durante la
extracción, teniendo en cuenta la cantidad de precipitado final obtenido.
3.4 Electroforesis
La electroforesis se llevara a cabo con el objetivo de encontrar el peso molecular
aproximado de la proteína extraída, y poder realizar una comparación con el registrado
en la literatura, más específicamente el reportado por Yamada, F. et al. (1975), el cual
tiene un valor de 31000 Dalton.
3.5 Actividad proteolítica
Se trabajó una solución de enzima con una concentración de 4,5e-5 M. Se prepararan
100mL de una solución acuosa de caseína α (MERCK CHEMICALS) al 2% en peso,
la cual teniendo en cuenta el peso molecular de la caseína es aproximadamente 25.000
Dalton (Boné, J., 2005), nos daría una concentración de 8e-4 M. Lo más relevante para
esta medición es que la concentración de sustrato sea significativamente mayor que la
concentración de enzima. Se prepara además una solución de buffer fosfato 0,1M pH
6 y una solución de ácido acético (CARLO ERBA REAGENTS) 1M. Se realizaran
pequeñas mezclas de las soluciones de enzima y sustrato en presencia de buffer, 3mL
de cada una y 1,5mL de Buffer. Se adicionara a la mezcla 3mL de la solución de ácido
acético 1M con el objetivo de parar la reacción. La adición de este último componente
a la primera mezcla se realizara a los 30 segundos, la segunda a los 60 segundos, y así
sucesivamente cada medio minuto hasta completar cuatro minutos para un total de 8
muestras. Se usara una mezcla de caseína y buffer como blanco y se midira la
absorbancia de cada una de las muestras a 280nm en un espectrofotómetro. Ya con las
medidas anteriores, se determina el tiempo necesario para que la reacción alcance la
velocidad máxima, éste se da cuando las medidas de absorbancia empiezan a ser
constantes. Dado este tiempo, se procedera a medir la influencia de la concentración
del sustrato en la reacción; para esto se trabajó la misma concentración de enzima
(4,5e-5 M), ante soluciones acuosas de caseína de concentración 0.5, 1, 2, 3, 4 y 5%
peso a peso. Estas medidas se hacen por supuesto, en presencia del Buffer fosfato 0,1M
pH 6 y deteniendo la reacción con ácido acético 1M.

3.6 Materiales
Ananas Comosus de 1 año, reactivo biuret, fosfato, caseína.

3.7 Equipos

Equipo de electroforesis.
 4.Diseño experimental

Se realizó un proceso experimental utilizando dos grupos de niños entre 2 y 10 años

con tos irritativa aplicando la bromelina con miel de abeja y otro aplicando fármacos
comunes en un lapso de 24 horas de tratamiento. La evaluación de “doble ciego” de
tos fue a través del número de episodios de tos, durante un periodo de 10 minutos de
observación. La disminución de los síntomas fue considerada como un efecto
terapéutico.

Tratamientos Grupos Tiempo

Bromelina 1 24 hrs

Fármaco 2 24 hrs

Observación de 10 minutos por episodios en el tiempo de tratamiento (cada hora)

Se considera el uso de la bromelina asociada con la miel para estas enfermedades siendo
un tratamiento menos riesgoso a complicaciones de alergias de fármacos como
normalmente es aplicado, señalando también el fácil uso y administración a las personas
afectadas en este caso con tos irritativa ya sea por su efecto antinflamatorio y expectorante