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UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD


CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOPATOLÓGICO

Asignatura:
MICROBIOLOGÍA I
Práctica N° 13

Ensayo de Investigación Basado en la Práctica de Laboratorio

Tema:
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO GENERAL

Elaborado por:
ROMERO ERIKA

Docente: MsC. FÉLIX FALCONI

PRIMER SEMESTRE

Fecha de la práctica: Miercoles,11 de julio del 2018

Fecha de entrega: Miércoles, 19 de julio del 2018

MARZO - AGOSTO 2018

RIOBAMBA – ECUADOR
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO GENERAL Por: Romero E.

RESUMEN

El presente ensayo aborda la preparación de medios de cultivo general. Un medio de


cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean
las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos
En la práctica se utilizó muestras de microrganismos, mechero, cajas Petri, frasco,
Trypticase Soy Agar, Hisopos largos, toalla y el equipo de autoclave. Se realizó la
preparación del medio de cultivo Trypticase Soy Agar en un frasco adecuado, para luego
ser llevado a ebullición y posteriormente al equipo de autoclave junto con los hisopos.
Luego se dejó enfriar el medio de cultivo para ser colocado en las cajas Petri y
posteriormente la muestra de microorganismos a cultivar, todo esto es importante realizarlo
en un ambiente estéril junto al mechero. Finalmente se encuba el cultivo y se realiza las
debidas observaciones. Obteniendo como resultado un medio de cultivos de cualquier tipo
de microorganismo con el medio de cultivo Trypticase Soy Agar. La conclusión de la
práctica fue que un medio de cultivo general es aquel permite el desarrollo de una gran
variedad de microorganismos. Por ejemplo el caldo nutritivo que contiene peptona, extracto
de carne, extracto de levadura y cloruro sódico, es un medio rico en nutrientes y que no
contiene ningún agente selectivo. Algunos medios generales son: Trypticase Soy Agar,
Nutrient Agar, BD Triple Sugar Iron Agar etc.

INTRODUCCIÓN

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros


componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. La diversidad metabólica de estos es tan grande que la variedad de
medios de cultivo es enorme, no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para
todos ellos, ni siquiera refiriéndonos a las bacterias con exclusividad (1).

Muchos de los microorganismos son necesarios para su estudio y el medio general es de


gran utilidad ya que permite el crecimiento de cualquiera.

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar


su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El

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material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el


crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios
de cultivo diferentes.

El propósito de esta práctica fue comprender el fundamento y aplicación de un determinado


medio de cultivo en función del propósito que tengamos y el tipo de crecimiento que
necesitemos y en este caso utilizamos en medio de cultivo general.

DESARROLLO

CONSTITUYENES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

A continuación se da una idea general sobre algunos de los constituyentes habituales de los
medios de cultivo.

AGAR. Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. En el
agar bacteriológico el componente dominante es un polisacárido que se obtiene de ciertas
algas marinas y que presenta la indudable ventaja de que a excepción de algunos
microorganismos marinos, no es utilizado como nutriente. Un gel de agar al 1-2% se licua
alrededor de los 100ºC y se gelifica alrededor de los 40ºC, dependiendo de su grado de
pureza.

EXTRACTOS. Su preparación consiste en que ciertos órganos o tejidos animales o


vegetales (p.e. carne, hígado, cerebro, semillas, etc.) son extraídos con agua y calor y
posteriormente concentrados hasta la forma final de pasta o polvo. Estos preparados
deshidratados son a menudo empleados en la elaboración de los medios de cultivo. Los más
utilizados son el extracto de carne, de levadura y el de malta (2).

PEPTONAS. Son mezclas complejas de compuestos orgánicos, nitrogenados y sales


minerales, que se obtienen por digestión enzimática o química de proteínas animales o
vegetales (soja caseína carne, etc.). Las peptonas son muy ricas en pépticos y aminoácidos,
pero pueden ser deficientes en determinadas vitaminas y sales minerales.

FLUIDOS CORPORALES. Con frecuencia es necesario añadir a los medios de cultivo de


algunos patógenos sustancias como sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero

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sanguíneo, sobre todo para conseguir el primer aislamiento a partir del hospedador. La
sangre no puede ser esterilizada, y por tanto debe de ser obtenida en condiciones asépticas
directamente de un animal sano, y adicionada al medio de cultivo después de que este haya
sido auto clavado. Los fluidos corporales no solo aportan factores de crecimiento sino que
también aportan sustancias que neutralizan a inhibidores del crecimiento de algunas
bacterias. Un ejemplo podría ser la catalasa presente en las células sanguíneas destruye el
peróxido de hidrógeno que algunas bacterias que no poseen este enzima acumulan como
producto del metabolismo del oxígeno.

Imagen 1: Preparación de medio de cultivo general

SISTEMAS AMORTIGUADORES. Para mantener el pH dentro del rango optimo del


crecimiento bacteriano a veces, es necesario añadir algunos componentes al medio de
cultivo. Debido a que la mayoría de las bacterias son neutrófilas, se suelen emplear sales
del tipo de los fosfatos bisodicos ò bipotásicos u otras sustancias como las peptonas para
prevenir la desviación del pH.

INDICADORES DE PH. Con el objeto de poder detectar variaciones en el pH debido a


fermentaciones u otros procesos, se hace necesario a veces añadir indicadores acido-base
que nos lo indiquen.

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AGENTES REDUCTORES. Con el objetivo de crear en los medios de cultivo


condiciones que permitan el desarrollo de los gérmenes microaerofilos ò anaerobios se
añaden estos agentes reductores siendo, los más empleados la cisteina y el tioglicolato entre
otros.

AGENTES SELECTIVOS. La adición de determinadas sustancias a un medio de cultivo


puede convertirlo en selectivo. Así, por ejemplo, la adición de cristal violeta, sales biliares,
azida sodica, telurito potasico, antibióticos, etc., a la concentración adecuada hará que
actúen como agentes selectivos frene a determinados microorganismos.

 TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO:

Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mínimos para que pueda
producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos especiales. El medio
más conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar común, que resulta de la adición de
agar al caldo nutritivo. Otros representantes de este grupo son el agar tripticase de soja, el
agar Columbia, etc (3).

Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, además de las sustancias nutritivas


normales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de
microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por adición de sangre u otros
productos biológicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis, etc.) que aportan dichos factores.

Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias
contenidas en una población polimicrobiana. El fundamento de estos medios consiste en
facilitar nutricionalmente el crecimiento de una población microbiana específica. Un
ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento
de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias.

Medios inhibidores: Los medios inhibidores podrían considerarse como una variante más
restrictiva de los medios selectivos. Los medios inhibidores se consiguen habitualmente por
adición de sustancias antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba completamente el
desarrollo de una población determinada. Un medio inhibidor es el MacConkey que

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permite el crecimiento de los gérmenes Gram negativos e impide el crecimiento de los


Gram positivos.

Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia características bioquímicas que


ayuden a 11 diferenciar géneros o especies. La adición de un azúcar fermentable o un
sustrato metabolizable se utilizan para este fin. El medio MacConkey es un medio
diferencial porque permite distinguir los gérmenes que fermentan la lactosa de aquellos que
no lo hacen. También lo son el C.L.E.D, el SS (4).

En la práctica se utilizó muestras de microrganismos, mechero, cajas Petri, frasco,


Trypticase Soy Agar, Hisopos largos, toalla y el equipo de autoclave. Se realizó la
preparación del medio de cultivo Trypticase Soy Agar en un frasco adecuado, para luego
ser llevado a ebullición y posteriormente al equipo de autoclave junto con los hisopos.
Luego se dejó enfriar el medio de cultivo para ser colocado en las cajas Petri y
posteriormente la muestra de microorganismos a cultivar, todo esto es importante realizarlo
en un ambiente estéril junto al mechero. Finalmente se encuba el cultivo y se realiza las
debidas observaciones. Obteniendo como resultado un medio de cultivos de cualquier tipo
de microorganismo con el medio de cultivo Trypticase Soy Agar (5).

Imagen 2: Preparación para la siembra en medio de cultivo general

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PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO GENERAL Por: Romero E.

CONCLUSIONES
1. Se comprendió que un medio de cultivo general es aquel permite el desarrollo de
una gran variedad de microorganismos. Por ejemplo el caldo nutritivo que contiene
peptona, extracto de carne, extracto de levadura y cloruro sódico, es un medio rico
en nutrientes y que no contiene ningún agente selectivo. Algunos medios generales
son: Trypticase Soy Agar, Nutrient Agar, BD Triple Sugar Iron Agar etc.
2. Se determinó que un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de
crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el
desarrollo de los microorganismos. La diversidad metabólica de estos es tan grande
que la variedad de medios de cultivo es enorme, no existiendo un medio de cultivo
universal adecuado para todos ellos, ni siquiera refiriéndonos a las bacterias con
exclusividad.
3. Se analizó que Agar triptona-soja (TSA) Medio rico de uso general para el
crecimiento de una amplia variedad de microorganismos. Se produce por digestión
enzimática de la soja y de la caseína. Con frecuencia se utiliza como agar base para
otros tipos de medios, como agar sangre, por ejemplo. En este medio pueden crecer
algunos microorganismos exigentes como ciertas especies de Brucella,
Corynebacterium, Listeria, Neisseria y Vibrio.

BIBLIOGRAFÍA

1. Krikorian, A. D. (1991). Medios de cultivo: generalidades, composición y


preparación. Cultivo de tejidos en la agricultura: fundamentos y aplicaciones.
Cali: CIAT, 41-77.
2. Abdelnour-Esquivel, A., & Vincent, J. (1994). Conceptos básicos del cultivo de
tejidos vegetales. Editorial Bib. Orton IICA/CATIE.
3. García-Martos, P., García-Agudo, R., Hernández-Molina, J. M., Marín, P., Tallero,
E., & Mira, J. (1998). Identificación de levaduras de interés clínico en el medio de
cultivo CHROMagar Candida. Rev Iberoam Micol, 15(3), 131-5.

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PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO GENERAL Por: Romero E.

4. Olivera Ortega, V. Z., Gutiérrez Espinosa, M. A., Gutiérrez Espinosa, J. A., &
Andrade Rodríguez, M. (2000). Cultivo un vitro de Gerbera (Gerbera jamesonii H.
Bolus) y su aclimatación en invernadero. Bioagro, 12(3).
5. Resh, H. M. (1997). Cultivos hidropónicos: nuevas técnicas de producción: una
guía completa de los métodos actuales de cultivo sin suelo para técnicos y
agricultores profesionales, así como para los aficionados especializados (No.
631.585). Mundi-Prensa,.