PERBEDAAN UJI DISK CEFOXITIN DAN UJI DISK OXACILIN UNTUK

DETEKSI MRSA (Metisilin Resisten Staphylococcus aureus)

SECARA IN VITRO
Studi experimental pada laboratorium Mikrobiologi FK UNISSULLA

Karya Tulis Ilmiah

untuk memenuhi sebagian persyaratan
mencapai gelar Sarjana Kedokteran

Oleh :
Hana Tiyas Mustikawati
01.210.6171

FAKULTAS KEDOKTERAN
UNIVERSITAS ISLAM SULTAN AGUNG
SEMARANG
2014
ii
iii
 PRAKATA

Assalamu’alaikum warahmatullahi wabarokaatuh

Alhamdulillah, dengan memanjatkan puji syukur kehadirat Allah SWT yang

telah memberikan rahmat dan inayah-nya sehingga penulis dapat menyelesaikan

Karya Tulis Ilmiah (KTI) berjudul “PERBEDAAN UJI DISK CEFOXITIN

DAN UJI DISK OXACILIN UNTUK DETEKSI MRSA (Metisilin Resisten

Staphylococcus aureus) SECARA IN VITRO ” ini dengan baik. Shalawat serta

salam semoga tetap tercurah atas junjungan kita Nabi Muhammad SAW, beserta

keluarga, sahabat dan pengikutnya. Penulis melaksanakan penelitian ini untuk

memenuhi sebagian persyaratan untuk mencapai gelar Sarjana Kedokteran dan

untuk menambah wawasan dan ketrampilan di bidang kedokteran.

Penulis menyadari bahwa tulisan ini masih jauh dari sempurna karena

keterbatasan yang penulis miliki. Namun atas berkat izin Allah SWT, bimbingan,

motivasi, bantuan, serta dorongan dari keluarga dan para dosen, maka tulisan ini

dapat terwujud. Maka kiranya tidaklah berlebihan apabila pada kesempatan ini

penulis menghaturkan rasa terima kasih dan penghormatan yang setinggi-

tingginya kepada:

1. dr. H. Iwang Yusuf, M. Si selaku Dekan Fakultas Kedokteran Universitas

Islam Sultan Agung Semarang yang telah mengijinkan penyusunan Karya

Tulis Ilmiah ini.

iv
2. dr. Ridha Wahyutomo, Sp. MK selaku dosen pembimbing I dalam penelitian

ini, penulis menyampaikan ucapan terima kasih dan penghargaan yang

setinggi-tingginya atas segala ketulusannya dalam memberikan bimbingan,

wawasan, arahan, motivasi, dan meluangkan waktu sehingga penulis dapat

menyelesaikan penelitian ini

3. dr. Qothrunnada Djam’an, M. Si, Med., selaku dosen pembimbing II dalam

penelitian ini, penulis menyampaikan ucapan terima kasih dan penghargaan

yang setinggi-tingginya atas segala ketulusannya dalam memberikan

bimbingan, wawasan, arahan, motivasi, dan meluangkan waktu sehingga

penulis dapat menyelesaikan penelitian ini

4. dr. Suryani Yulianti, M.Kes., selaku dosen penguji I yang telah meluangkan

waktu, tenaga, pikiran, ilmu, serta kesabarannya dalam memberikan

bimbingan, nasehat dan saran sehingga karya tulis ini dapat terselesaikan

5. dr. H. Muhtarom, M.Kes., selaku dosen penguji II yang telah meluangkan

waktu, tenaga, pikiran, ilmu, serta kesabarannya dalam memberikan

bimbingan, nasehat dan saran sehingga karya tulis ini dapat terselesaikan.

6. Ayahku H. Sutarmo, ibuku Hj. Susmiatun dan kakak tercinta (Eka Wijayanti

dan Rusyanto S.T), beserta keluarga besar atas dukungan, semangat dan doa

yang tiada henti sehingga karya tulis ilmiah ini dapat terselesaikan.

7. Keluarga besar Laboratorium Mikrobiologi yang telah memberikan

dukungan.

v
8. Teman – teman di Fakultas Kedokteran Universitas Islam Sultan Agung,

angkatan 2010, sahabat penulis (Happy, Vera, Nia, Lelly, Ramya, Memey,

Farah, Laras, Surya, Conita) dan semua pihak yang telah ikut membantu

terselesainya karya tulis ilmiah ini yang tidak dapat disebutkan satu persatu

Akhir kata, penulis ingin menyampaikan permohonan maaf kepada semua

pihak yang mungkin telah mengalami hal yang kurang berkenan dalam interaksi

penulis selama pembuatan Karya Tulis Ilmiah ini. Kritik dan saran yang bersifat

membangun sangat penulis harapkan untuk menyempurnakan karya tulis ilmiah

ini. Semoga penelitian ini dpat bermanfaat bagi pengembangan ilmu pengetahuan

para pembaca pada umumnya dan khususnya mahasiswa kedokteran.

Wassalamu’alaikum Wr.Wb.

Semarang, Februari 2014

Penulis

vi
 DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL........................................................................................ i

HALAMAN PENGESAHAN ......................................................................... ii

SURAT PERNYATAAN................................................................................. iii

PRAKATA ....................................................................................................... iv

DAFTAR ISI …. .............................................................................................. vii

DAFTAR SINGKATAN ................................................................................. x

DAFTAR TABEL ............................................................................................ xi

DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... xii

DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... xiii

INTISARI......................................................................................................... xiv

BAB I PENDAHULUAN .......................................................................... 1

1.1. Latar Belakang ...................................................................... 1

1.2. Rumusan Masalah ................................................................. 3

1.3. Tujuan Penelitian ................................................................... 3

1.4. Manfaat Penelitian ................................................................ 4

BAB II TINJAUAN PUSTAKA ................................................................. 5

2.1. MRSA (Metisilin Resisten Staphylococcus aureus) .............. 5

2.1.1. Definisi ....................................................................... 5

2.1.2. Epidemiologi .............................................................. 7

2.1.3. Mekanisme Resistensi… ............................................ 8

2.2. Uji Kepekaan Terhadap Antimikroba .................................... 9

2.2.1. Faktor lingkungan yang berpengaruh terhadap tes

kepekaan ..................................................................... 10

2.2.2. Tujuan pengendalian faktor lingkungan ..................... 12

vii
 2.2.3. Dasar pemeriksaan uji kepekaan ................................ 13

2.2.4. Metode- metode pengukuran aktifitas antimikroba ... 14

2.3. Disk Cefoxitin……… ............................................................ 23

2.3.1. Definisi…… ............................................................... 23

2.3.2. Strukur Kimia ............................................................. 23

2.3.3. Aktivitas Antimikroba ................................................ 24

2.3.4. Mekanisme Resistensi ................................................ 24

2.3.5. Farmakokinetik........................................................... 25

2.3.6. Efek Samping ............................................................. 25

2.3.7. Iindikasi Klinik ........................................................... 25

2.3.8. Deteksi MRSA Metode difusi diks cefoxitin…… ..... 25

2.4. Disk Oxacilin ......................................................................... 26

2.4.1. Definisi ....................................................................... 26

2.4.2. Sejarah dan sumber .................................................... 26

2.4.3. Struktur Kimia ............................................................ 26

2.4.4. Aktivitas Antimikroba ................................................ 27

2.4.5. Mekanisme Resistensi ................................................ 27

2.4.6. Farmakokinetik........................................................... 28

2.4.7. Efek Samping ............................................................. 29

2.4.8. Deteksi MRSA Metode difusi diks oxacilin…… ...... 30

2.5. Kerangka Teori ...................................................................... 31

2.6. Kerangka Konsep .................................................................. 32

2.7. Hipotesis ................................................................................ 32

viii
BAB III METODE PENELITIAN ............................................................... 33

3.1 Jenis Penelitian ....................................................................... 33

3.2 Variabel dan Definisi Operasional ......................................... 33

3.3 Populasi dan Sampel Penelitian ............................................. 35

3.4 Instrumen dan Bahan Penelitian ............................................ 36

3.5 Cara Penelitian ....................................................................... 37

3.6 Tempat dan Waktu Penelitian ................................................ 38

3.7 Analisis Hasil ........................................................................ 39

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN ....................................................... 40

4.1. Hasil penelitian....................................................................... 40

4.2. Pembahasan ............................................................................ 44

BAB V SIMPULAN DAN SARAN............................................................. 47

5.1. Simpulan ................................................................................ 47

5.2. Saran ....................................................................................... 47

DAFTAR PUSTAKA .................................................................... ………….. 48

ix
 DAFTAR SINGKATAN

CA- MRSA : community-associated MRSA

CDC : Centers for Disease Control and Prevention

CLSI : Clinical Laboratory Standards Institute

DDT : Disk Difusi Test

HA- MRSA : Healthcare-associated MRSA

MBC : minimum bactericidal concentration

MH : Mueller Hinton

MIC : minimum inhibitory concentration

MRSA : Metisilin Resisten Staphylococcus aureus

MSSA : Metisilin Sensitif Staphylococcus aureus

NCCLS : National Committee for Clinical Laboratory Standards

NPV : negative predictive value

PBP : penicillin binding protein

PPV : positive predictive value

WHO : World Health Organization

x
 DAFTAR TABEL

Tabel 3.1. Uji Diagnostik ............................................................................... 39

Tabel 4.1. Tabulasi silang uji disk terhadap MRSA… ................................... 40

Tabel 4.2. Tabulasi silang uji disk terhadap MRSA… ................................... 41

xi
 DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1.Struktur Kimia cefoxiin................................................................ 24

Gambar 2.2.Struktur Kimia Oxacillin Sodium ............................................... 27

Gambar 2.3.Kerangka Teori ............................................................................. 31

Gambar 2.4.Kerangka konsep .......................................................................... 32

xii
 DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1 Surat penelitian .......................................................................... 52

Lampiran 2 Surat keterangan penggunaan laboratorium ............................... 53

Lampiran 3 Surat Hasil Penelitian ................................................................. 54

Lampiran 4 Hasil Uji SPSS ........................................................................... 55

Lampiran 5 Ethical Clearance ...................................................................... 59

Lampiran 6 Gambar penelitian ...................................................................... 60

xiii
 INTISARI

Deteksi fenotipik MRSA masih menjadi masalah sejak pertama kali

ditemukannya MRSA pada tahun 1962, pada beberapa penelitian menyebutkan
dalam mendeteksi MRSA dapat menggunakan metode difusi uji disk cefoxitin
maupun oxacilin. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui adakah perbedaan uji
disk cefoxitin dan uji disk oxacilin untuk deteksi MRSA.
Penelitian eksperimental laboratorium dengan rancangan uji diagnostik
dilaksanakan di laboratorium FK UNISSULA menggunakan 24 cawan petri, 12
cawan petri dengan bakteri MRSA (Metisilin Resisten Staphylococcus aureus)
dan 12 lainnya dengan bakteri MSSA (Metisilin Sensitive Staphylococcus
aureus), dimana masing-maing cawan berisi disk cefoxitin dan disk oxacilin
sehingga sampel berjumlah 48. Selanjutnya hasil yang didapat dimasukkan dalam
kategori sensitif ataupun resisten berdasarkan standart CLSI (Clinical Laboratory
Standards Institute). Uji hipotesis menggunakan uji fisher.
Hasil penelitian dari 48 sampel didapatkan deteksi MRSA dengan
menggunakan disk cefoxitin menghasilkan 12 sampel resisten dan tidak ada yang
sensitif, pada disk oxacilin menunjukkan 9 sampel resisten dan 3 sampel sensitif.
Deteksi MSSA dengan menggunakan disk cefoxitin tidak ada yang resisten dan
12 sampel sensitif , pada disk oxacilin menunjukkan tidak ada yang resisten dan
12 sampel sensitif. Uji diagnostik dilakukan dengan EBM statistic calculator
didapatkan sampel MRSA dengan disk cefoxitin nilai Sensitifitas, Spesifisitas,
PPV (positive predictive value), NPV(negative predictive value) adalah 96,2%,
sedangkan dengan disk oxacilin didapatkan nilai Sensitifitas 73,1%,Spesifisitas
96,2%, PPV 95,0%, NPV 73,8%. Hasil uji fisher untuk disk cefoxitin dan oxacilin
didapatkan nilai p=0,000, artinya ada perbedaan uji disk cefoxitin dengan uji disk
oxacilin untuk deteksi MRSA.
Disimpulkan bahwa ada perbedaan bermakna antara uji disk cefoxitin dan
uji disk oxacilin pada deteksi MRSA.

Kata Kunci: MRSA, difusi, MSSA, resisten, sensitif, Sensitifitas, Spesifisitas,

PPV, NPV.

xiv
 BAB I

PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang

Staphylococcus aureus yang telah resisten terhadap antibiotik metisilin

disebut Metisilin Resisten Staphylococcus aureus (MRSA) (Juuti, 2004).

Stapyhlococcus aureus tersebut resisten terhadap antibiotik metisilin karena

dapat memproduksi enzim β-laktamase, enzim ini akan menghilangkan daya

antibakteri terutama pada golongan penisilin seperti metisilin, oksasilin,

penisilin G dan ampisilin (Juuti, 2004). Pendeteksian resistensi MRSA dapat

dilakukan menggunakan metode difusi oxacilin maupun cefoxitin (Van

Leeuwen WB, 2003; Broekema NM, et al., 2009). Oxacilin sebagai

antibiotik yang satu golongan dengan metisilin, lebih murah dan mudah

didapatkan (Van Leeuwen WB, 2003; David Velasco et al., 2004). Hasil

sensitifitas oxacillin dapat diterapkan pada golongan penisilinase-stabil

penisilin yang lain. Zona oxacillin sering berkabut, sehingga disalahartikan

sebagai bukti kepekaan oksasilin (Pottumarthy, S., T. R. Fritsche, dan R. N.

Jones, 2005). Cefoxitin dapat digunakan untuk deteksi MRSA baik secara

difusi maupun pengenceran agar(Clarence J. Fernandes, et al., 2005). Hasil

Cefoxitin lebih mudah untuk ditafsirkan dan lebih mudah dibaca (Felten, A.,

2002; Mimica, 2007 Pottumarthy, S., T. R. Fritsche, dan R. N. Jones, 2005).

Cefoxitin peka mendeteksi MRSA yang resistensinya hanya diperantarai gen

mec-A (Swenson, J. M., et al.,. 2007).

1
 2

Deteksi fenotipik MRSA menjadi masalah sejak pertama kali

ditemukannya MRSA pada tahun 1962 (Madhusudhan NS, et al., 2011).

Penegakan diagnosis MRSA merupakan hal yang penting karena akurasi dan

ketepatan dalam mendeteksi resistensi meticillin merupakan kunci penting

dalam memastikan pengobatan antibiotik yang tepat pada pasien yang

terinfeksi dan pengendalian MRSA staphylococci di lingkungan rumah sakit

(Velasco, et al., 2005), karena Insiden infeksi MRSA terus meningkat di

berbagai belahan dunia. Per-sentase galur Staphylococcus aureus yang telah

resisten terhadap metisilin (MRSA) cukup tinggi di Asia, seperti di Taiwan

mencapai 60%, Cina 20%, Hong Kong 70%, Filipina 5%, dan Singapura

60%(Mulholland et. al, 2005), sementara di Indonesia pada tahun 2006

prevalensinya berada pada angka 23,5% (Sulistyaningsih, 2010). Alat

diagnostik yang baik dapat dilihat dari nilai sensitifitas,spesifitas, PPV, NPV

yang tinggi.

Penelitian yang dilakukan Madhusudhan NS et.al pada tahun 2011

dengan menggunakan 100 sampel MRSA menunjukkan hasil deteksi dengan

disk cefoxitin sebesar 84 yang resisten, nilai positif palsunya sebesar 11% dan

Positive Predictive Value of Cefoxitin DDT is 86.90%. Positive Predictive

Value sendiri memiliki arti nilai duga alat diagnostik dalam mendeteksi

MRSA yang dapat digunakan sebagai bahan pertimbangan pemilihan alat

diagnostik yang baru. Akan tetapi Jana M. Swenson et.al melakukan

penelitian deteksi MRSA dengan metode dilusi memberikan hasil bahwa

cefoxitin memiliki nilai sensitifitas dan spesifitas 99,7% dan 100%.

 3

Sensitifitas memiliki arti kemampuan alat diagnostik baru dalam mendeteksi

MRSA. Spesifitas memiliki arti kemampuan alat diagnostik baru dalam

mendeteksi yang tidak MRSA.

Berdasarkan perbedaan penggunaan disk untuk deteksi MRSA antara

oxacilin dan cefoxitin, maka dilakukan penelitian tentang perbedaan uji disk

cefoxitin dengan uji disk oxacilin untuk deteksi MRSA dengan metode difusi.

1.2. Rumusan Masalah

Berdasarkan uraian pada latar belakang di atas maka dapat dirumuskan

suatu permasalahan sebagai berikut : “apakah terdapat perbedaan uji disk

cefoxitin dan uji disk oxacilin untuk deteksi MRSA (metisilin resisten

staphylococcus aureus) ?”

1.3. Tujuan Penelitian

1.3.1. Tujuan Umum

Untuk membedakan antara uji disk cefoxitin dan uji disk

oxacilin dalam mendeteksi MRSA dengan metode difusi

1.3.2. Tujuan Khusus

1.3.2.1. Mengetahui sensitifitas uji disk cefoxitin dalam mendeteksi

MRSA.

1.3.2.2. Mengetahui sensitifitas uji disk oxacilin dalam mendeteksi

MRSA.

1.3.2.3. Mengetahui spesifitas uji disk cefoxitin dalam mendeteksi

MRSA.
 4

1.3.2.4. Mengetahui spesifitas uji disk oxacilin dalam mendeteksi

MRSA

1.3.2.5. Mengetahui ppv (positive predictive value) uji disk cefoxitin

dalam mendeteksi MRSA.

1.3.2.6. Mengetahui npv (negative predictive value) uji disk cefoxitin

dalam mendeteksi MRSA.

1.3.2.7. Mengetahui ppv (positive predictive value) uji disk oxacilin

dalam mendeteksi MRSA.

1.3.2.8. Mengetahui npv (negative predictive value) uji disk oxacilin

dalam mendeteksi MRSA.

1.4. Manfaat Penelitian

1.4.1. Manfaat teoritis

1.4.1.1. Sebagai data dasar dan bahan pertimbangan dalam

mendeteksi MRSA

1.4.1.2. dapat digunakan sebagai masukan pada perkembangan

penelitian selanjutnya mengenai kedua antibiotik tersebut.

1.4.2. Manfaat praktis

Landasan pemilihan antibiotik yang sesuai dalam mendeteksi strain

MRSA.
 BAB II

TINJAUAN PUSTAKA

2.1. MRSA (Metisilin Resisten Staphylococcus aureus )

2.1.1. Definisi

MRSA adalah Staphylococcus aureus yang resisten terhadap

antibiotik β-laktam, termasuk penicillinase-resistant penicillins

(methicillin, oxacillin, nafcillin) dan cephalosporin (Dellit, et al.,

2004).

Untuk mengidentifikasi Methicillin Resistent Staphylococcus

aureus bisa dilakukan beberapa metode antara lain dengan metode

dilusi dan difusi. Dilusi agar (agar dilution) menggunakan media

Mueller-Hinton (MH) atau agar Columbia dengan 2% NaCl dan

inokulum 104 cfu/mL akan terlihat jelas perbedaan resistensi diantara

strain-strain S. aureus (Brown et al., 2005). Menurut British Society

for Antimicrobial Chemotherapy (BSAC), kedua media ini dapat

digunakan kemudian dilakukan inkubasi pada 30ºC selama 24 jam.

Pada metode BSAC ini, minimum inhibitory concentration (MIC)

methicillin ≤4 mg/L mengindikasikan bahwa strain Staphylococcus

aureus ini masih rentan/sensitif terhadap methicillin, sedangkan MIC

> 4 menunjukkan resisten.

5
 6

Sedangkan menurut National Committee for Clinical

Laboratory Standards (NCCLS), yang sekarang dikenal sebagai

Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI), metode ini hanya

menggunakan Muller Hilton (MH) sebagai medianya, kemudian

diinkubasi selama 24 jam pada suhu 33-35ºC. Hasil minimum

inhibitory concentration (MIC) methicillin ≤2 mg/L mengindikasikan

bahwa strain S. aureus ini masih rentan/sensitive terhadap methicillin,

sedangkan MIC > 2 menunjukkan resisten (Brown et al., 2005).

Uji Piringan difusi (disc diffusion) cefoxitin Sekarang ini lebih

banyak direkomendasikan dibandingkan dengan oxacilin. Hal ini

dikarenakan pada cefoxitin tidak diperlukan media, temperature,

inkubasi khusus, serta tidak terpengaruh adanya hiper-produksi dari

penisilinase sehingga tidak terjadi positif palsu MRSA (Brown, et al.,

2005). Digunakan metode pengujian difusi agar untuk mengetahui

aktivitas antimikroba. Mikroba uji dicampurkan dengan media

pertumbuhan (Nutrien broth) dan dituang ke dalam cawan petri

sehingga membentuk lempeng agar. Di lempeng agar dibuat sumur

yang kedalamnya dimasukkan larutan uji. Setelah proses inkubasi

dilakukan pengukuran diameter hambat berupa zona bening di sekitar

sumur yang menunjukkan penghambatan pertumbuhan mikroba

(Hendri, 2008).
 7

2.1.2. Epidemiologi

Saat ini diperkirakan sekitar 2-3% populasi umum telah

terkolonisasi oleh MRSA. Jumlah ini akan meningkat lagi menjadi

±5% pada populasi yang berkelompok seperti militer dan penjara.

Orang yang terkolonisasi akan mudah untuk terjadi infeksi, walaupun

sebagian besar akan tetap asimtomatik (Navy Environmental Health

Center, 2005). Antara tahun 1996-1999 dilaporkan bahwa 23 rumah

sakit di Kanada terdapat 6% dari seluruh isolat S. aureus yang resisten

terhadap methicillin, dengan rerata 4,14 kasus MRSA per 1000 pasien

yang dirawat dari 35% pasien dengan infeksi. Sebagian besar isolat

diperoleh dari MRSA yang berasal dari ruang perawatan akut

(72,6%), 7,2% diperoleh dari bangsal perawatan, 4,6% diperoleh dari

komunitas masyarakat, dan sisanya (15,6%) tidak diketahui asalnya

(BC Center for Disease Control, 2001). Di Amerika Serikat, selama

13 tahun (1993-2005) infeksi MRSA telah sangat berkembang, pada

tahun 2005 terdapat 368.600 kasus MRSA di rumah sakit seluruh AS.

Keadaan ini menunjukkan adanya peningkatan sebesar 30%

dibandingkan pada tahun 2004 (Elixhauser dan Steiner, 2007).

Healthcare-associated MRSA (HA- MRSA) oleh Centers for Disease

Control and Prevention (CDC) didefinisikan sebagai infeksi MRSA

yang terdapat pada individu yang pernah dirawat di rumah sakit atau

menjalani tindakan operasi dalam 1 tahun terakhir, memiliki alat bantu

medis permanen dalam tubuhnya, bertempat tinggal di fasilitas

 8

perawatan jangka panjang, atau individu yang menjalani dialisis

(Anderson, et al., 2007. Pada awal 1990-an telah muncul MRSA yang

didapatkan pada individu yang sebelumnya tidak memiliki faktor

risiko yang berhubungan dengan MRSA Keadaan ini disebut sebagai

community-associated MRSA (CA- MRSA) (Borloug, et al., 2005;

Anderson, et al., 2007).

2.1.3. Mekanisme Resistensi

Resistensi antibiotik terdiri dari resistensi natural dan aquired.

Resistensi natural disebabkan aktivitas antibiotik yang berkurang dari

spektrum biasanya, sedangkan resistensi aquired disebabkan oleh

peningkatan minimal inhibitory concentration (MIC). Peningkatan

faktor yang menentukan efektifitas suatu antibiotik ini dapat terjadi

lambat (resistensi aquired relatif) ataupun cepat (resistensi aquired

absolut), yang disebut terakhir disebabkan oleh suatu mutasi gen.

Resistensi antibiotik beta laktam disebabkan oleh salah satu dari

mekanisme berikut; inaktivasi oleh enzim beta-laktamase, modifikasi

target PBP, penurunan kemampuan antibiotik terhadap PBP dan

adanya pompa refluks (Jawetz, 2005).

Resistensi terhadap komponen beta laktam yang tidak

terhidrolisis oleh enzim-enzim beta laktamase seperti methicillin,

oxacillin, nafcillin, cloxacillin dan dicloxacillin disebut dengan

resistensi intrinsik atau resistensi methicillin. Resistensi ini

disebabkan oleh perubahan afinitas penicillin binding protein 2a

 9

(PBP2a) akibat mutasi gen mecA. Penyebab kedua resistensi

antibiotik beta laktam disebabkan perubahan afinitas PBP terhadap

struktur beta laktam dan hal ini terjadi pada methicillin resistance

staphylococcus dan penicillin resistance pneumococcus (Hardy K,

2004).

Sifat resitensi intrinsik, merupakan mekanisme utama yang tidak

tergantung pada beta laktamase, yaitu dengan diperolehnya protein

pengikat penisilin tambahan, PBPs-2a (PBPs-2’) yang mempunyai

afinitas rendah terhadap semua antibiotik beta laktam. Karena

merupakan penicilininase-resistant penicillin yang pertama, maka

resistensi ini disebut methicilin resistance. Resisten terhadap

methicilin ini akan diikuti dengan timbulnya resistensi yang simultan

terhadap sejumlah besar golongan antibiotika lainnya lewat perolehan

determinan reseptor tambahan, atau akibat mutasi. Semuanya ini akan

menyebabkan reseptor pada tempat target berubah menjadi resisten.

Bentuk ini disebut sebagai true MRSA. PBP-2a ini disandi oleh gen

mecA yang terletak di mec, suatu sikuens spesifik pada DNA

Staphylococcus yang merupakan determinan resistensi terhadap

metisillin (Cohen, et al, 2008).

2.2. Uji Kepekaan Terhadap Antimikroba

Uji kepekaan terhadap antimikroba dimulai ketika pertemuan yang

diprakarsai WHO di Genewa (1977), kepedulian terhadap semakin luasnya

resistensi antimikroba baik yang berhubungan dengan infeksi manusia atau

 10

hewan. Hal ini mencetuskan program surveilance untuk memonitor resistensi

antimikroba menggunakan metode yang sesuai. Dengan tes kepekaan

terhadap antimikroba akan membantu klinisi untuk menentukan antimikroba

yang sesuai untuk mengobati infeksi. Untuk mendapatkan hasil yang valid,

tes kepekaan harus dilakukan dengan metode yang akurat dan presisi yang

baik, dimana metode tersebut langsung dapat digunakan dalam menunjang

upaya pengobatan. Kriteria yang penting dalam metode tes kepekaan adalah

hubungannya dengan respon pasien terhadap terapi antimikroba.

WHO merekomendasikan penggunaan teknik difusi Kirby-Bauer yang

telah diperkenalkan pada tahun 1976, metode tersebut sangat sesuai

khususnya untuk golongan Enterobactriaceae, tetapi dapat pula digunakan

untuk semua bakteri pathogen.

Pada prinsipnya tes kepekaan terhadap antimikroba adalah penentuan

terhadap bakteri penyebab penyakit yang kemungkinan menunjukkan

resistensi terhadap suatu antimikroba atau kemampuan suatu antimikroba

untuk menghambat pertumbuhan bakteri yang tumbuh in vitro, sehingga

dapat dipilih sebagai antimikroba yang berpotensi untuk pengobatan.

2.2.1. Faktor lingkungan yang berpengaruh terhadap tes kepekaan

Penentuan tes laboratorium terhadap mikroorganisme untuk

hasil yang lebih akurat harus memperhatikan faktor fisika dan kimia

yang mempengaruhi baik terhadap mikroorganisme ataupun pengaruh

terhadap daya kerja antimikroba, sehingga harus dihindari faktor-

faktor lingkungan yang kemungkinan mempengaruhi.

 11

Faktor lingkungan tersebut diantaranya:

1. pH

Beberapa antimikroba dipengaruhi oleh pH lingkungan,

contohnya aktifitas antibakteri eritromisin dan aminoglikosida

berkurang apabila terjadi penurunan pH, sedangkan aktifitas

tetrasiklin akan menurun bila terjadi peningkatan pH. Aktifitas

aminoglikosida yang daya kerjanya menghambat sintesis protein

bakteri melalui membran sel dengan proses oksidasi, sehingga

apabila tidak terdapat oksigen akan mengurangi aktifitas

antimikroba tersebut.

2. Kation

Aktifitas aminoglikosida juga dipengaruhi oleh konsentrasi

kation Ca++ dan Mg++. Tahapan aktifitas antimikroba yang penting

adalah absorpsi antimikroba ke permukaan sel bakteri.

Aminoglikosida bermuatan positif dan bekerja terutama untuk

bakteri gram negatif, misalnya membran luar Pseudomomonas

aeruginosa yang bermuatan negatif

3. Tersedianya bahan gizi tertentu

Bahan gizi tertentu dapat mempengaruhi aktifitas

antimikroba, misalnya bakteri enterococcus mampu menggunakan

timin dan asam folat hasil metabolisme untuk menghindari

pengaruh aktifitas sulfoamida dan trimetroprim, yang dihambat

oleh jalur metabolik asam folat.

 12

Informasi mengenai resistensi yang kemungkinan berasal dari

lingkungan digunakan untuk membuat metoda standar yang dapat

mengurangi pengaruh faktor lingkungan terhadap bakteri uji, sehingga

pemeriksaan lebih akurat.

2.2.2. Tujuan pengendalian faktor lingkungan

1. Hambatan pertumbuhan berkaitan dengan aktifitas antimikroba

melawan bakteri uji dan tidak dibatasi oleh bahan gizi, suhu dan

kondisi lingkungan lainnya yang dapat menghalangi

pertumbuhan, sehingga dapat dipastikan hambatan pertumbuhan

hanya disebabkan oleh antimikroba yang digunakan.

2. Mengoptimalkan kondisi untuk pemeliharaan keutuhan dan

aktifitas antimikroba sehingga dapat dipastikan kegagalan

menghambat pertumbuhan bakteri disebabkan oleh keresistenan

bakteri itu sendiri tapi bukan dari pengaruh lingkungan yang

membuat antimikroba inaktif.

3. Untuk mempertahankan hasil konsisten yang berulang

(reproducibility dan consistency) sehingga organisme yang sama

akan memperlihatkan hasil kepekaan yang sama, terhadap metode

uji laboratorium yang digunakan

Pengujian dilakukan di bawah kondisi standar, dimana kondisi

standar berpedoman kepada Clinical and Laboratory Standards

Institute (CLSI). Standar yang harus dipenuhi yaitu: konsentrasi

inokulum bakteri, media perbenihan (Muller Hinton) dengan

 13

memperhatikan pH, konsentrasi kation, tambahan darah dan serum,

kandungan timidin, suhu inkubasi, lamanya inkubasi dan konsentrasi

antimikroba.

Walaupun kondisi penting untuk pemeriksaan invitro telah

distandarkan namun tidak ada kondisi invitro yang mengambarkan

kondisi yang sama dengan keadaan invivo tempat yang sebenarnya

bakteri tersebut menginfeksi. Dengan demikian ada beberapa faktor

yang memegang peranan penting dari pasien disamping hal-hal yang

dapat mempengaruhi hasil uji kepekaan yang telah diperhitungkan

pada metode uji. Faktor tersebut yaitu:

a. Difusi antimikroba pada sel dan jaringan hospes

b. Protein serum pengikat antimikroba

c. Gangguan dan interaksi obat

d. Status daya tahan dan system imun pasien

e. Mengidap beberapa penyakit secara bersamaan

f. Virulensi dan patogenitas bakteri yang menginfeksi

g. Tempat infeksi dan keparahan penyakit

2.2.3. Dasar pemeriksaan uji kepekaan

1. Merupakan metode yang langsung mengukur aktifitas satu atau

lebih antimikroba terhadap inokulum bakteri

2. Merupakan metode yang secara langsung mendeteksi keberadaan

mekanisme resitensi spesifik pada inokulum bakteri

3. Merupakan metode khusus untuk mengukur interaksi antara

mikroba dan antimikroba

 14

2.2.4. Metode-metode pengukuran aktifitas antimikroba

Kemampuan antimikroba dalam melawan bakteri dapat diukur

menggunakan metode yang biasa dilakukan yaitu :

1. Metode konvensional : dilusi (agar atau kaldu), difusi dan Etest

a. Metode dilusi

Metode dilusi terdiri dari dua teknik pengerjaan yaitu

teknik dilusi perbenihan cair dan teknik dilusi agar, yang

bertujuan untuk penentuan aktifitas secara kuantitatif,

antimikroba dilarutkan kedalam media agar atau kaldu, yang

kemudian ditanami bakteri yang akan dites. Setelah

diinkubasi semalam, konsentrasi terendah yang dapat

menghambat pertumbuhan bakteri di sebut dengan MIC

(minimal inhibitory concentration). Nilai MIC dapat pula

dibandingkan dengan konsentrasi obat yang didapat di serum

dan cairan tubuh lainnya untuk mendapatkan perkiraan

respon klinik.

1) Dilusi perbenihan cair

Dilusi perbenihan cair terdiri dari makrodilusi dan

mikrodilusi. Pada prinsipnya pengerjaannya sama hanya

berbeda dalam volume. Untuk makrodilusi volume yang

digunakan lebih dari 1 ml, sedangkan mikrodilusi

volume yang digunakan 0,05 ml sampai 0,1 ml.

antimikroba yang digunakan disediakan pada berbagai

 15

macam pengenceran biasanya dalam satuan µg/ml,

konsentrasi bervariasi tergantung jenis dan sifat

antibiotik. (misalnya cefotaxime untuk uji kepekaan

terhadap Streptococcus pneumonia, pengenceran tidak

melebihi 2 μg/ml, sedangkan untuk Escherichia coli

pengenceran dilakukan pada 16 µg/ml atau lebih).

Secara umum untuk penentuan MIC pengenceran

antimikroba dilakukan penurunan konsentrasi

setengahnya misalnya mulai dari 16, 8, 4, 2, 1, 0,5, 0,25

µg/ml) konsentrasi terendah yang menunjukkan

hambatan pertumbuhan dengan jelas baik dilihat secara

visual atau alat semiotomats dan otomatis, disebut

dengan konsentrasi daya hambat minimum/ MIC

(minimal inhibitory concentration).

2) Dilusi agar

Pada teknik dilusi agar antibiotik sesuai dengan

pengenceran akan ditambahkan kedalam agar, sehingga

akan memerlukan perbenihan agar sesuai jumlah

pengeceran ditambah satu perbenihan agar untuk kontrol

tanpa penambahan antibiotik. Konsentrasi terendah

antibiotik yang mampu menghambat pertumbuhan

bakteri merupakan MIC antibiotik yang di uji.

 16

Penentuan MBC dari MIC perbenihan cair

Dasar penentuan antimikroba secara invitro adalah MIC

(minimum inhibition concentration) dan MBC (minimum

bactericidal concentration). MIC merupakan konsentrasi

terendah bakteri yang dapat menghambat pertumbuhan

bakteri dengan hasil yang dilihat dari pertumbuhan koloni

pada agar atau kekeruhan pada pembiakan kaldu. Sedangkan

MBC adalah konsentrasi terendah antimikroba yang dapat

membunuh 99,9% pada biakan selama waktu yang

ditentukan, agar antimikroba efektif pada MIC atau MBC

Sedapat mungkin mencapai tempat infeksi absorpsi obat dan

distribusi antimikroba akan mempengaruhi dosis, rute dan

frekuensi pemberian antimikroba untuk mendapatkan dosis

efektif di tempat terjadinya infeksi.

Penentuan konsentrasi minimum antibiotik yang dapat

membunuh bakteri / minimum bactericidal concentration

(MBC) dilakukan dengan menanam bakteri pada perbenihan

cair yang digunakan untuk MIC ke dalam agar kemudian di

inkubasi semalam pada 37⁰C. MBC adalah ketika tidak

terjadi pertumbuhan lagi pada agar .

Keuntungan dan kerugian metode dilusi:

Dengan teknik dilusi memungkinkan penentuan

kualitatif dan kuantitatif dilakukan bersama-sama. MIC dapat

 17

membantu dalam penentuan tingkat resistensi dan dapat

menjadi petunjuk penggunaan antimikroba. Kerugiannya

metode ini tidak efisien karena pengerjaannya yang rumit,

memerlukan banyak alat-alat dan bahan serta memerlukan

ketelitian dalam proses pengerjaannya termasuk persiapan

konsentrasi antimikroba yang bervariasi.

b. Metode difusi

Cakram kertas yang telah dibubuhkan sejumlah tertentu

antimikroba, ditempatkan pada media yang telah ditanami

organism yang akan di uji secara merata. Tingginya

konsentrasi dari antimikroba ditentukan oleh difusi dari

cakram dan pertumbuhan organism uji dihambat

penyebarannya sepanjang difusi antimikroba (terbenuk zona

jernih disekitar cakram), sehingga bakteri tersebut merupakan

bakteri yang sensitif terhadap antimikroba. Ada hubungan

persamaan yang hampir linear (berbanding lurus) antara log

MIC, seperti yang diukur oleh metode dilusi dan diameter

zona daya hambat pada metode difusi.

Hasil dari tes kepekaan, mikroorganisme

diklasifikasikan ke dalam dua atau lebih kategori. Sistem

yang sederhana menentukan dua kategori yaitu sensitif dan

resisten. Meskipun klasifikasi tersebut memberikan banyak

keuntungan untuk kepentingan statistik dan epidemiologi,

 18

bagi klinisi merupakan ukuran yang terlalu kasar untuk

digunakan. Dengan demikian hasil dengan 3 klasifikasi yang

biasa digunakan (sensitif, intermediate, dan resisten) seperti

pada metode Kirby-Bauer. Terapi antimikroba idealnya

berdasarkan penentuan bakteri penyebab dan antimikroba

sesuai yang sensitif terhadap bakteri tersebut.

Pengobatan secara empiris biasanya dimulai sebelum

ada hasil laboratorium mikrobiologi, ketika pengobatan harus

dilakukan sebelum penyakit menjadi bertambah parah .

Efektifitas antimikroba bervariasi tergantung lokasi infeksi,

kemampuan antimikroba mencapai sumber infeksi dan

kemampuan bakteri untuk menahan atau menginaktifasi

antimikroba. Beberapa antimikroba dapat bertindak sebagai

bakterisidal (benar-benar membunuh bakteri) sedangkan yang

lain bertindak sebagai bakteriostatik (mencegah bakteri

berkembang biak), dengan demikian sistem imun hospes

mempengaruhi kepekaan terhadap bakteri tersebut.

Uji kepekaan pada laboratorium klinik lebih banyak

digunakan metode cakram difusi. Pada metode ini inokulum

bakteri ditanam secara merata pada permukaan agar. Cakram

antimikroba diletakkan pada permukaan agar dan dibiarkan

berdifusi ke dalam media sekitarnya. Hasilnya dilihat zona

hambat antimikroba terhadap pertumbuhan bakteri. Ukuran

 19

zona jernih tergantung kepada kecepatan difusi antimikroba,

derajat sensitifitas mikroorganisme dan kecepatan

pertumbuhan bakteri. Zona hambat cakram antimikroba pada

metode difusi berbanding terbalik dengan MIC. Semakin luas

zona hambat, maka semakin kecil konsentrasi daya hambat

minimum MIC. Untuk derajat kategori bakteri dibandingkan

terhadap diameter zona hambat yang berbeda-beda setiap

antimikroba, sehingga dapat ditentukan kategori resisten,

intermediate atau sensitif terhadap uji antimikroba.

Keuntungan dan kerugian metode difusi:

Metode ini sangat mudah dilakukan karena tidak rumit

dalam pengerjaannya dan efisien karena dalam satu

perbenihan agar dapat menguji maksimal 12 macam

antimikroba. Tidak membutuhkan alat dan bahan yang

banyak sedangkan kerugiannya tidak dapat diketahui secara

tepat tingkat resistensi atau kepekaan bakteri terhadap

antimikroba

c. E-test

Metode yang digunakan selain metode Kirby-Bauer

dalam uji kepekaan adalah E-test (Epsilometer test) yang juga

berdasarkan prinsip difusi. E-test digunakan untuk

pemeriksaan mikrobiologis untuk kepekaan bakteri dan

jamur.
 20

Etest menggunakan strip persegi panjang yang telah

mengandung antibiotik. Bakteri ditanam pada perbenihan

agar kemudian diletakkan strip Etest pada permukaan agar,

setelah antibiotik berdifusi ke dalam agar akan terbentuk

zona hambat pada konsentrasi antibiotik yang bertingkat

terdapat pada strip Etest. Setelah 24 jam inkubasi akan

tampak zona hambat yang berbentuk elips, ketika sampai

pada garis zona yang telah melekat pada strip (tidak ada zona

hambat lagi) pada konsentrasi tersebut merupakan

pembacaan hasil MIC.

2. Uji kepekaan Metode komersial

Pada dasarnya metode komersial merupakan penggabungan

metode konvensial dilusi dan difusi dan keakuratan metode

komersial ini dievaluasi dengan cara membandingkan dengan

metode konvensional. Media perbenihan , kondisi lingkungan

disesuaikan dengan standar metode konvensional dan tujuan dari

metode tetap sama seperti metode konvensional, hanya

pengerjaan dan cara penggunaan alatnya yang lebih praktis,

dimana pencapaian tujuan bervariasi tergantung kepada:

Susunan bakteri dan komposisi antimikroba yang digunakan

Tingkat otomatisasi dalam penanaman, inkubasi, interpretasi dan

pelaporan. Metode yang digunakan untuk mengukur hambatan

pertumbuhan bakteri
 21

a. Kecepatan memperoleh hasil

b. Akurasi

Jenis-jenis Metode komersial :

a. Metode mikrodilusi perbenihan cair (broth microdilution

methods)

Secara umum metode ini didesain untuk menerima

inokulum dan diinkubasi pada kondisi sesuai petunjuk

penggunaan, biasanya untuk pembacaannya memerlukan alat

semiotomatis.

b. Agar dilusi derivatif (agar dilution derivations)

Pada metode ini telah disediakan perbenihan agar yang

telah mengandung antimikroba melingkar, dimulai dari

tengah-tengah/pusat lingkaran perbenihan agar dengan

konsentrasi tertinggi, terus melingkar ke arah tepi dengan

konsentrasi semakin menurun. Penanaman bakteri dimulai

dari tepi perbenihan dengan satu goresan tegak lurus. Difusi

antibiotik akan tampak zona hambat dari konsentrasi tinggi

(pusat lingkaran) ke rendah (tepi).

c. Difusi pada agar derivatif (diffusion in agar derivations)

Pada metode ini digunakan perbenihan Muller Hinton

yang diletakkan di atasnya strip antibiotik secara melingkar.

 22

d. System pengujian otomatis (automated antimicrobial

susceptibility test system)

Contoh metode pengujian otomatis ini adalah Vitek

legacy system dan vitek 2 system. Metode ini dalam persiapan

inokulum dan penanamam bakteri dilakukan secara otomatis,

cara pembacaan dan interpretasi kategori menggunakan

system algoritma.

e. Metode pengujian alternative dan suplemen. Metode

pengujian yang bertujuan untuk mengetahui mekanisme

resistensi.

f. Metode yang langsung mendeteksi mekanisme resistensi

spesifik

Metode dengan pengukuran antimikroba berdasarkan

keberadaan mekanisme khusus, misalnya berdasarkan metode

fenotip, deteksi asetiltransferase kloramfenikol.

g. Metode khusus untuk mendeteksi kompleks interaksi

antimikroba –organisme.

h. Tes kombinasi aktifitas antimikroba.

i. Spiral Gradient Endpoint Test (SGE), merupakan uji

kepekaan pada satu agar terdiri dari 15 suspensi mikroba

dapat digoreskan swab dengan arah memutar melalui

beberapa konsentrasi. Software dibutuhkan untuk

menghitung konsentrasi yang sebenarnya dari setiap mikroba

yang tumbuh yang menghambat pertumbuhan. Teknik ini

 23

digunakan untuk menghilangkan keterbatasan metode

konvensional dimana setiap media agar hanya satu

konsentrasi, menghemat waktu dan bahan karena satu plate

SGE sama dengan 8 plate pada metode konvensional.

2.3. Disk Cefoxitin

2.3.1. Definisi Cefoxitin

Cefoxitin merupakan inducer kuat dari sistem pengaturan mecA

(Swenson JM, et al, 2007). Cefoxitin merupakan antibiotik yang

masuk dalam golongan sefalosporin generasi kedua, inti dasar

sefalosporin C adalah asam 7-amino-sefalosporonat (7-ACA: 7-

aminocephalosporanic acid) (farmakologi UI, 2007).

2.3.2. Struktur Kimia

Sefalosporin berasal dari fungus Cephalosporium acremonium

yang iisolasi pada tahun 1948 oleh Brotzu (farmakologi UI, 2007).

Inti dasar Sefalosporin C adalah asam 7-amino-sefalosporonat

(7-ACA : 7-aminocephalosporanicacid) yang merupakan kompleks

cincin dihidrotiazin dan cincin betalaktam. Sefalosporin C resisten

terhadap penisilinase, tetapi dirusak oleh sefalosporinase. Hidrolisis

asam sefalosporin C menghasilkan 7-ACA yang kemudian dapat

dikembangkna menjadi berbagai macam antibotik sefalosporin.

Modifikasi R1 Pada posisi 7 cincin betalaktam dihubungkan dengan

aktivitas antimikrobanya, sedangkan substitusi R2 pada posisi 3 cincin

dihidrotiazin mempengaruhi metabolisme dan farmakokinetiknya

(farmakologi UI, 2007).

 24

Gambar 2.1
Struktur Kimia

2.3.3. Aktivitas Antimikiroba

Sefalosporin merupakan antibiotik betalaktam yang mekanisme

kerjanya dengan menghambat sintesis dinding sel mikroba, yang

dihambat ialah reaksi transpeptidase tahap ketiga dalam rangkaian

reaksi pembentukan dinding sel (Farmakologi UI,2007).

Mekanisme kerja sefalosporin analog dengan penisilin yaitu

berupa: berikatan dengan PBP spesifik yang bertindak sebagai

reseptor obat pada bacteria, penghambatan sintesis dinding sel dengan

memblokir transpeptidase pada peptidoglikan, mengaktifkan enzim

otoloitik pada dinding sel yang dapat mengakibatkan kerusakan sel

dan bakteri mati (Jawetz, 2005).

Cefoxitin yang merupakan golongan sefalosporin generasi

kedua kurang aktif terhadap bakteri gram positif dibandingkan dengan

generasi pertama, tetapi lebih aktif terhadap kuman gram negative;

misalnya, e. choli dan klebsiella(Farmakologi UI,2007)

2.3.4. Mekanisme resistensi

2.3.4.1. Obat sulit dalam menembus bakteri

2.3.4.2. Hilangnya PBP spesifik

2.3.4.3. Degradasi obat oleh bealaktamase

 25

2.3.5. Farmakokinetik

2.3.5.1. cara pemberian, dapat diberikan per oral yang akan diabsorpsi

melalui saluran cerna, inta vena maupun inta muscular

2.3.5.2. ikatan protein plasma, 70-80%

2.3.5.3. t ½ plasma

2.3.5.4. Ekskresi dalam urin 85% (farmakologi UI,2007)

2.3.6. Efek Samping

Sefalosporin bersifat nefrotoksik, meskipun jauh lebih ringan

dibandingkan dengan aminoglikosia dan polimiksin (Farmakologi UI,

2007).

2.3.7. Indikasi Klinik

Cefoxitin dan sefotetan memberikan hasil yang baik untuk

mengatasi berbagai infeksi yang melibatkan bakteri gram negative dan

anaerob, seperti B. Fragillis ifeksi intra-abdominal, penyakit radang

pelvis dan pada iabetic foot dan juga terhadap H. Influenzae

(Farmakologi UI, 2007).

2.3.8. Deteksi MRSA metode difusi disk cefoxitin

2.3.8.1. resisten jika ≤21mm

2.3.8.2. sensiif jika ≥22mm

CLSI 2007
 26

2.4. Disk Oxacilin

2.4.1. Definisi

Oxacilin merupakan salah satu klasifikasi antibiotik penisilin

yang masuk kedalam golongan beta laktam (Farmakologi UI, 2007).

2.4.2. Sejarah dan sumber

Pada tahun 1928 di London, Fleming menemukan antibiotik

pertama yaitu penisilin yang satu decade kemudian dikembangkan

oleh Florey dari biakan peniciliium notatum untuk pengunaan

sistemik. Kemudian digunakan P. chrysogenum yang menghasilkan

lebih banyak penisilin (Farmakologi UI, 2007).

Penisilin yang digunakan dalam pengobatan berbagai dalam

penisilin alam dan penisilin semisintetik yang diperoleh dengan cara

mengubah struktur kimia penisilin alam atau dengan cara sintesis dari

inti penisilin yaitu asam 6-aminopenisilanat (6-APA). Sebagai bahan

dasar untuk penisilin semisintetik, 6-APA dapat pula disintesis dengan

memecah rantai samping (Farmakologi UI, 2007).

2.4.3. Struktur Kimia

Penisilin merupakan asam organik, terdiri dari satu inti siklik

dengan satu rantai samping. Inti siklik terdiri dari cincin tiazolidin dan

cincin betalaktam. Rantai samping merupakan gugus amino bebas

yang dapat mengikat bebagai jenis radikal. Dengan mengikat berbagai

radikal pada gugus amino bebas tersebut akan diperoleh berbagai jenis

penisilin, misalnya pada penisilin G, radikalnya adalah gugus benzyl

(Farmakologi UI, 2007).

 27

Beberapa antibiotik golongan penisilin ada yang berkurang

aktivitas antimikrobanya dalam suasana asam sehingga harus

diberikan secara parenteral. Penisilin lain hilang aktivitasnya bila

dipengaruhi enzim betalaktamase yang memecah cincin betalaktam

(Farmakologi UI, 2007).

Gambar 2.2
Struktur Kimia Oxacillin Sodium
Oksasilin merupakan antibiotik yang tahan terhadap penisilinase

dan merupakan antibiotik yang memiliki spectrum antimikroba sempit

(Farmakologi UI, 2007).

2.4.4. Aktivitas Antimikroba

Aktivitas bakterisida melalui penghambatan sintesis dinding sel

bakteri dengan mengikat satu atau lebih protein pengikat penisilin

(PBP). Adanya efek autolytic bakteri dengan menghambat PBPs

tertentu yang terkait dengan aktivasi proses autolytic bakteri

(Farmakologi UI, 2007).

2.4.5. Mekanisme Resistensi

1) Pembentukan enzim betalaktamase (misalnya pada kuman S.

aureus, H.influenzae, gonokokkus dan berbagai batang gram-

negatif. Sekarang ini dikenal leboh dari 50 jenis betalaktamase.

 28

Pada umumnya kuman gram positif mensekresi betalaktamase

ekstraselular dalam jumlah relative besar. Kuman gram negative

hanya sedikit mensekresi keluar betalaktamase tetapi tempatnya

strategis, yaitu di rongga periplasmik diantara membrane

sitoplasma dan dinding sel kuman. Kebanyakan jenis

betalaktamase dihasilkan oleh kuman melalui kendali genetic oleh

plasmid.

2) Enzim autolysin kuman tidak bekerja sehingga timbul sifat

toleran kuman terhadap obat.

3) Kuman tidak mempunyai dinding sel (misalnya mikoplasma).

4) Perubahan PBP atau obat tidak dapat mencapai PBP

(Farmakologi UI, 2007).

2.4.6. Farmakokinetik

2.4.6.1. Absorbsi, Penisilin G mudah rusak pada suasana asam (PH

2), cairan lambung dengan PH 4 tidak terlalu merusak

penisilin (Farmakologi UI, 2007).

2.4.6.2. Distribusi, penisilin G didistribusi luas dalam tubuh. Kadar

obat yang memadai dapat tercapai dalam hati, empedu, ginjal,

usus, limfe dan semen, tetapi dalam CSS sukar dicapai

(Farmakologi UI, 2007).

2.4.6.3. Ekskresi, penisilin pada umumnya diekskresikan melalui

proses sekresi di tubuli ginjal yang dapat dihambat oleh

probenesid. Masa paruh eliminasi penisilin dalam darah

diperpanjang oleh prebenesid menjadi 2-3 kali lebih lama

(Farmakologi UI, 2007).

 29

2.4.7. Efek Samping

2.4.7.1. Reaksi alergi, merupakan efek samping yang sering dijumpai,

terjadinya reaksi alergi didahului oleh adanya sensitisasi.

Dalam hal ini diduga sensitisasi terjadi akibat pencemaran

lingkungan oleh penisilin (misalnya makanan asal hewan atau

jamur). Reaksi alergi yang ditimbulkan biasanya berupa

kemerahan pada kulit (farmakologi UI,2007).

2.4.7.2. Syok anafilaksis (farmakologi UI, 2007).

2.4.7.3. Reaksi toksik dan iritasi local, efek toksik pada penisilin

terhadap susunan saraf menimbulkan gejala epilepsy grand

mal, dan ini dapat ditimbulkan dengan pemberian penisilin

IV dosis besar. Dasar kejadiannya diperkirakan akibat

depolarisasi parsial oleh peningkatan eksitabilitas membrane

neuron (Farmakologi UI, 2007).

2.4.7.4. Perubahan Biologi, perubahan biologi oleh penisilin terjadi

akibat gangguan flora bakteri diberbagai bagian tubuh. Abses

dapat terjadi pada tempat suntikan dengan penyebab

stafilokokus atau bakteri gram negative (Farmakologi UI,

2007).

2.4.7.5. Infeksi kokus gram positif: infeksi pneumokokus,

pneumonia, meningitis, endokarditis (Farmakologi UI, 2007).

2.4.7.6. Infeksi streptokokus; faringitis, skaritina, demam rematik

(farmakologi UI, 2007).

 30

2.4.8. Deteksi MRSA metode difusi disk oxacilin

2.4.8.1. resisten jika ≤10mm

2.4.8.2. sensitif jika ≥13mm

CLSI 2007
 31

2.5. Kerangka Teori

Oxacilin Cefoxitin

Enzim Gen PBP2 (mec A)

etalaktamase

Kemampuan Reseptor target

antibiotik

Tekanan osmoatik

Nutrient

MRSA Konsentrasi pH

Temperatur

Aerasi

Gambar 2.3. Kerangka Teori

 32

2.6 Kerangka konsep

uji disk oxacilin

Methicillin Resisten
Staphylococcus aureus
uji disk cefoxitin

Gambar 2.4. Kerangka Konsep

2.7 Hipotesis

Hipotesis dari penelitian ini adalah adanya perbedaan uji disk cefoxitin

dan oxacilin pada deteksi bakteri Methicillin Resistant Sthapylococcus aureus

metode difusi.
 BAB III

METODE PENELITIAN

3.1 Jenis Penelitian

Jenis penelitian yang dilakukan adalah penelitian eksperimental

laboratorium dengan rancangan metode khusus uji diagnostik.

3.2 Variabel dan Definisi Operasional

3.2.1 Variabel-variabel yang terdapat pada penelitian ini meliputi:

3.2.1.1 Variabel Bebas (Independent Variabel)

Variabel bebas dalam penelitian ini adalah uji disk

cefoxitin dan uji disk oxacilin.

3.2.1.2 Variabel terikat (dependent variabel)

Variabel terikat dalam penelitian ini adalah Methicillin

Resistent Staphylococcus aureus (MRSA).

3.2.2 Definisi Operasional

3.2.2.1 Uji disk cefoxitin

Uji disk cefoxitin merupakan uji sensitifitas antibiotik

metode difusi dengan menggunakan disk cefoxitin yang

diletakkan pada cawan petri yang telah ditumbuhi bakteri

MRSA dan cawan petri yang ditumbuhi MSSA,disk akan

membentuk zona hambat yag kemudian diukur dengan

menggunakan jangka sorong dalam satuan mm kemudian

dibandingkan dengan standart CLSI. Hasil dikelompokkan

33
 34

menjadi resisten dan sensitif, Resisten jika diameter ≤21mm

dan sensiif jika diameter ≥22mm. Skala yang digunakan

nominal

3.2.2.2 Uji disk oxacilin

Uji disk oxacilin merupakan uji sensitifitas

antibiotik metode difusi dengan menggunakan disk oxacilin

yang diletakkan pada cawan petri yang telah ditumbuhi

bakteri MRSA dan cawan petri yang ditumbuhi MSSA,disk

akan membentuk zona hambat yag kemudian diukur dengan

menggunakan jangka sorong dalam satuan mm kemudian

dibandingkan dengan standart CLSI. Hasil dikelompokkan

menjadi resisten dan sensitif, Resisten jika diameter ≤10mm

dan sensiif jika diameter ≥13mm. Skala yang digunakan

nominal

3.2.2.3 MRSA

Metisilin Resisten Staphylococcus aureus yaitu

staphylococcus yang telah resisten terhadap golongan

penicillin dan antibiotik beta. Deteksi MRSA metode difusi

dengan cara mengukur diameter dari zona hambat yang

dihasilkan oleh masing-masing disk antibiotik dengan

menggunakan jangka sorong, dimana untuk disk oxacilin

resisten jika diameter ≤10mm dan dikatakan sensitif jika

diameter ≥13mm, sedangkan untuk disk cefoxitin resisten

jika diameter ≤21mm dan dikatakan sensitif jika diameter

≥22mm. Skala yang digunakan nominal.

 35

3.3 Populasi dan Sampel

3.3.1 Populasi

Bakteri Methicillin Resistent staphylococcus aureus dan Methicillin

sensitif staphylococcus aureus yang didapatkan dari Laboratorium

Mikrobiologi Rumah Sakit Umum Dr. Karyadi Semarang.

3.3.2 Sampel

Sampel pada penelitian ini adalah bakteri Methicillin Resistant

Staphylococcus aureus dan Methicillin sensitif staphylococcus aureus

dengan kepekatan 0,5 Mc Farland (1,5 x 108/ ml). Sampel diambil

secara random kemudian dispread 0,2 cc kedalam cawan petri dengan

media muller hinton.

Jumlah sampel yang digunakan didapat dari rumus:

(Zα)2 PQ
N=
d2

N = Besar subjek yang di diagnose oleh baku emas

N’ = besar sampel untuk uji diagnostic

Zα = deviat baku alpha

P = sensitifitas alat yang diinginkan

Q = 1- P

d = presisi

1,962 X 0,97 X 0,03

N= 0,12

0,111
N= 0,01

N= 11,17
 36

𝑁
N’= 𝑃𝑟𝑒𝑣𝑎𝑙𝑒𝑛𝑠𝑖

11,17
N’= 0,235

N’ = 47,548

3.4 Instrumen dan Bahan Penelitian

3.4.1 Instrumen Penelitian yang dipakai adalah :

3.4.1.1 Inkubator

3.4.1.2 Lampu spiritus

3.4.1.3 Sterilisator

3.4.1.4 coloni spreader

3.4.1.5 Cawan petri

3.4.1.6 jangka sorong

3.4.1.7 masker

3.4.1.8 Sarung tangan

3.4.2 Bahan yang digunakan dalam Penelitian

3.4.2.1 Bakteri Methicillin Resisten Staphylococcus aureus

3.4.2.2 Bakteri non MRSA(Staphylococcus aureus)

3.4.2.3 Disk antibiotik oxacilin

3.4.2.4 Disk antibiotik cefoxitin

3.4.2.5 media muller hinton

 37

3.5 Cara penelitian

3.5.1 Sterilisasi alat

Sterilisasi alat yang digunakan dalam penelitian ini menggunakan

oven pada suhu 160-1800C selama 2 jam. Atau dengan menggunakan

autoclave pada suhu 1210C selama 15-20 menit. Alat-alat yang

digunakan ditunggu sehingga mencapai suhu kamar dan kering.

3.5.2 Pembuatan suspense Methicillin Resistant staphylococcus aureus

3.5.2.1 ambil 1 koloni methicillin Resistant staphylococcus aureus

3.5.2.2 buat pengenceran ½ Mcfarland

3.5.2.3 jika terlalu keruh maka tambahkan NACL dan jika terlalu

bening tambahkan kuman

3.5.3 Pembuatan suspense Methicillin sensitif staphylococcus aureus

3.5.3.1 ambil 1 koloni methicillin sensitif staphylococcus aureus

3.5.3.2 buat pengenceran ½ Mcfarland

3.5.3.3 jika terlalu keruh maka tambahkan NACL dan jika terlalu

bening tambahkan kuman

3.5.4 Penanaman disk

3.5.3.1 spreader suspense kuman pada media mullerhinton

3.5.3.2 inkubasi 24 jam

3.5.3.3 amati zona hambat yang terbentuk

3.5.3.4 ukur dengan menggunakan jangka sorong satuan mm

3.5.3.4 cocokkan dengan CLSI

 38

3.5.5 Alur penelitian

spread kuman MRSA dengan spread kuman MSSA dengan

pengenceran ½ Mcfarland pengenceran ½ Mcfarland pada
pada 12 cawan petri 12 cawan petri

letakkan disk oxacilin dan disk letakkan disk oxacilin dan disk
cefoxitin pada 12 cawan petri cefoxitin pada 12 cawan petri
dengan kuman MRSA tersebut dengan kuman MSSA tersebut

Inkubasi pada incubator selama 24 jam

Amati zona hambat yang

dihasilkan dan ukur dengan
jangka sorong satuan mm

Cocokkan dengan
standart CLSI

RESISTEN SENSITIF

3.6 Tempat Waktu dan Tanggal

3.6.1 Tempat penelitian

Tempat penelitian dilaksanakan di Laboratorium Mikrobiologi

Fakultas Kedokteran Universitas Islam Sultan Agung Semarang.

3.6.2 Waktu penelitian

Waktu penelitian dilakukan pada tanggal 18-23 Januari 2014

 39

3.7 Analisa hasil

Data yang didapat berupa resisten dan sensitif untuk masing-masing

disk antibiotik, tidak dilakukan uji normalitas (Shapiro-Wilk test) dan uji

homogenitas (Leuvene’s Test) dikarenakan skalanya kategorik. Untuk uji

hipotesis digunakan uji hipotesis fisher.

Tabel 3.1. uji diagnostik

Bakteri
Total
MRSA MSSA
Resisten a b a+b
Hasil Uji disk Sensitif c d C+d
a+c b+d N

Sensitifitas = a: (a+c)

Spesivitas = d : (b+d)

Prediksi positif = a : (a+b)

Prediksi negatif = d : (c+d)

 BAB IV

HASIL PENELITIAN DAN PEMBAHASAN

4.1. Hasil Penelitian

Penelitian perbedaan uji disk cefoxitin dan uji disk oxacilin untuk

deteksi MRSA (metisilin resisten staphylococcus aureus) secara in vitro

dengan jumlah sampel 48 ini menggunakan 24 cawan petri dimana 12 cawan

petri menggunakan bakteri MRSA dan 12 cawan petri lainnya menggunakan

bakteri MSSA (metisilin sensitive staphylococcus aureus), masing-masing

cawan berisi disk antibiotik cefoxitin dan disk antibiotik oxacilin, Penelitian

ini dilaksanakankan pada tanggal 18-23 januari 2014 di Laboratorium

Mikrobiologi Fakultas Kedokteran Universitas Islam Sultan Agung

Semarang.

Hasil tabulasi silang untuk disk cefoxitin pada deteksi MRSA

didapatkan data sebagai berikut:

Tabel 4.1 Tabulasi silang uji disk cefoxitin

Bakteri
Total p
MRSA MSSA
Resisten Count 12 0 12
Expected Count 6.0 6.0 12.0
% of Total 50.0% .0% 50.0%
0.000
Sensitif Count 0 12 12
Expected Count 6.0 6.0 12.0
% of Total .0% 50.0% 50.0%
Total Count 12 12 24
Expected Count 12.0 12.0 24.0
% of Total 50.0% 50.0% 100.0%

40
 41

Tabel 4.1 Menunjukkan bahwa uji disk cefoxitin menghasilkan 12

sampel yang resisten MRSA dan tidak ada sampel sensitif MRSA,Sedangkan

untuk MSSA tidak ada sampel yang resisten dan 12 sampel sensiif, dilakukan

uji hipotesis fisher didapatkan hasil P=0,000 (<0,05) maka dapat diartikan uji

disk cefoxitin bermakna pada deteksi MRSA.

Hasil tabulasi silang untuk disk oxacilin pada deteksi MRSA

didapatkan data sebagai berikut:

Tabel 4.2 Tabulasi silang uji disk oxacilin

Bakteri
Total p
MRSA MSSA
Resisten Count 9 0 9
Expected Count 4.5 4.5 9.0
% of Total 37.5% 0.0% 37.5%
0.000
Sensitif Count 3 12 15
Expected Count 7.5 7.5 15.0
% of Total 12.5% 50.0% 62.5.%
Total Count 12 12 24
Expected Count 12.0 12.0 24.0
% of Total 50.0% 50.0% 100.0%

Tabel 4. 2 menunjukkan bahwa uji disk oxacilin menghasilkan 9

sampel resisten MRSA dan 3 sampel sensitif MRSA,Sedangkan untuk MSSA

tidak ada sampel yang resisten dan 12 sampel sensiif, dilakukan uji hipotesis

fisher didapatkan hasil P=0,000 (<0,05) maka dapat diartikan uji disk oxacilin

bermakna pada deteksi MRSA.

Masing-masing data yang telah didapat dilakukan uji diagnostik dengan

menggunakan CEBM statistic calculator untuk mendapatkan hasil yang

sesuai dengan tujuan peneliti dan didapatkan hasil sebagai berikut:

 42

uji diagnostic untuk disk cefoxitin :

Sensitifitas cefoxitin dalam mendeteksi MRSA adalah 96,2%, maka

dapat diartikan kemampuan disk cefoxitin dalam mendiagnosa kuman MRSA

adalah 96,2%, dari seluruh sampel yang memang positif MRSA.

Spesifisitas cefoxitin dalam mendeteksi MRSA adalah 96,2%, maka

dapat diartikan kemampuan disk cefoxitin dalam mendiagnosa kuman

TIDAK MRSA adalah 96,2%, dari seluruh sampel yang memang negatif

MRSA.

PPV disk cefoxitin dalam mendeteksi MRSA adalah 96,2%, maka dapat

diartikan nilai duga positif sebagai sampel itu benar-benar MRSA 96,2%,

jika diuji dengan disk cefoxitin posiitf.

NPV disk cefoxitin dalam mendeteksi MRSA adalah 96,2%,maka dapat

diartikan nilai duga negatif sebagai sampel itu benar-benar tidak MRSA

96,2% jika diuji dengan disk cefoxitin negatif.

 43

uji diagnostic untuk uji oxacilin:

Sensitifitas oxacilin dalam mendeteksi MRSA adalah 73,1%, maka

dapat diartikan kemampuan disk oxacilin dalam mendiagnosa kuman MRSA

adalah 73,1%, dari seluruh sampel yang memang positif MRSA.

Spesifisitas oxacilin dalam mendeteksi MRSA adalah 96,2%, maka

dapat diartikan kemampuan disk oxacilin dalam mendiagnosa kuman TIDAK

MRSA adalah 96,2%, dari seluruh sampel yang memang negatif MRSA.

PPV disk oxacilin dalam mendeteksi MRSA adalah 95,0%, maka dapat

diartikan nilai duga positif sebagai sampel itu benar-benar MRSA 95,%, jika

diuji dengan disk oxacilin posiitf.

NPV disk oxacilin dalam mendeteksi MRSA adalah 78,1%, maka dapat

diartikan nilai duga negatif sebagai sampel itu benar-benar tidak MRSA

78,1% jika diuji dengan disk oxacilin negatif.

 44

4.2 Pembahasan

Hasil penelitian terlihat adanya perbedaan sensitifitas, spesifitas, ppv,

npv antara uji disk oxacilin dan uji disk cefoxitin pada deteksi MRSA, Pada

penelitian ini sensitifitas cefoxitin (96,2%) lebih tinggi dibanding sensitifitas

oxacilin (73,1%), spesifitas cefoxitin dan oxacilin sama (96,2%), PPV

(positive predictive value) cefoxitin (96,2%) lebih tinggi dibanding oxacilin

(95,0%,), NPV(negative predictive value) cefoxitin (96,2%) lebih tinggi

dibanding oxacilin (73,8%).

Hasil penelitian ini sesuai dengan penelitian Clarence J. Fernandes, et

al., 2005 yang menyatakan bahwa sensitifitas dan spesifisitas cefoxitin lebih

tinggi dibanding oxacilin dan cefoxitin dapat digunakan untuk deteksi MRSA

baik secara difusi maupun dilusi (Clarence J. Fernandes, et al., 2005).

Kelebihan cefoxitin dalam mendeteksi MRSA dikarenakan Cefoxitin

merupakan inducer kuat dari sistem pengaturan Gen mecA (Swenson JM, et

al, 2007) dimana Gen mecA terletak pada kaset kromosom staphylococcal

mec dan mengkodekan protein pengikat penicillin 2a (PBP2a) sehingga

antibiotik cefoxitin ini tidak dapat berikatan dengan komponen sel bakteri,

dan bakteri akan etap hidup meskipun terpapar antibiotik teresbut dalam

jumlah yang besar . (Kenneth H. Rand and Herbert J. Houck., 2004). Hasil

Cefoxitin lebih mudah untuk ditafsirkan dan lebih mudah dibaca (Felten, A.,

2002; Mimica, 2007 Pottumarthy, S., T. R. Fritsche, dan R. N. Jones, 2005).

Mekanisme resistensi MRSA terhadap antibiotik cefoxitin dikarenakan Obat

sulit dalam menembus bakteri, hilangnya PBP spesifik, degradasi obat oleh

bealaktamase (Farmakologi UI,2007).

 45

Oxacilin juga memiliki keunggulan diantaranya Oxacilin satu golongan

dengan metisilin, lebih murah dan mudah didapatkan (Van Leeuwen WB,

2003; David Velasco et al., 2004), digunakan untuk menggantikan

Methicillin yang tidak lagi tersedia secara komersial di Amerika Serikat dan

oxacilin lebih mungkin untuk mendeteksi strain heteroresistan. Hasil

kerentanan oxacillin dapat diterapkan pada golongan penisilinase-stabil

penisilin yang lain seperti kloksasilin, dicloxacillin, Methicillin,

Flukloksasilin dan Naficillin. Zona oxacillin sering berkabut, sehingga

disalahartikan sebagai bukti kepekaan oksasilin (Pottumarthy, S., T. R.

Fritsche, dan R. N. Jones, 2005). Mekanisme resistensi MRSA terhadap

antibiotik oxacilin dikarenakan Pembentukan enzim betalaktamase, enzim

autolysin kuman tidak bekerja sehingga timbul sifat toleran kuman terhadap

obat, kuman tidak mempunyai dinding sel (misalnya mikoplasma), Perubahan

PBP atau obat tidak dapat mencapai PBP (Farmakologi UI, 2007).

Pendeteksian MSSA baik menggunakan disk cefoxitin maupun oxacilin

menunjukkan 24 sampel sensitif dari 24 sampel yang memang dinyatakan

sensitif oleh alat Short-Incubation Automated Instrument Systems (SIAIS)

hal ini manunjukkan hasil yang memuaskan pada deteksi MSSA, pada deteksi

MRSA dengan disk cefoxitin menunjukkan 12 resisten dari 12 sampel yang

sudah dinyatakan resisten oleh alat (SIAIS) akan tetapi Pada deteksi MRSA

dengan disk oxacilin menunjukkan 9 resisten dan 3 sensitif dari 12 sampel

yang sudah dinyatakan resisten oleh alat (SIAIS),adanya 3 perbedaan hasil ini

kemungkinan karena Zona oxacillin sering berkabut, sehingga disalahartikan

sebagai bukti kepekaan oksasilin (Pottumarthy, S., T. R. Fritsche, dan R. N.

Jones, 2005)
 46

Keterbatasan dalam penelitian ini adalah peneliti hanya menggunakan

uji disk difusi akan lebih baik jika menggunakan uji kepekaan anibiotik

secara dilusi sebagai gold standart tes kepekaan antibiotik, kendala lain yang

dihadapi pasien adalah pengambilan material sampel yang tidak sama dari

pasien seperti ada yang dengan material sputum dan ada yang dengan

material darah.
 BAB V

SIMPULAN DAN SARAN

5.1. Simpulan

Berdasarkan data penelitian tentang perbedaan uji disk cefoxitin dan uji

disk oxacilin untuk deteksi mrsa (metisilin resisten staphylococcus aureus)

secara in vitro , maka dapat di simpulkan bahwa :

5.1.1. ada perbedaam bermakna antara uji disk cefoxitin dan uji disk oxacilin

pada deteksi Metisilen Resistant Staphylococcus aureus(MRSA)

5.1.2. Sensitifitas cefoxitin dalam mendeteksi MRSA (96,2%) lebih tinggi

dibandingkan Sensitifitas oxacilin (73,1%).

5.1.3. Spesifisitas cefoxitin dalam mendeteksi MRSA sama dengan

Spesifisitas oxacilin (96,2%).

5.1.4. PPV disk cefoxitin dalam mendeteksi MRSA (96,2%) lebih tinggi

dibandingkan disk oxacilin (95,0%).

5.1.5. NPV disk cefoxitin dalam mendeteksi MRSA (96,2%) lebih tinggi

dibandingkan disk oxacilin (78,1%)

5.2. Saran

Berdasarkan keterbatasan dan kendala dalam penelitian ini,maka saran

yang dapat penulis ajukan adalah perlu dilakukan:

5.2.1. Penelitian dengan menggunakan metode dilusi

5.2.2. Penelitian dengan sampel material yang sama

47
 DAFTAR PUSTAKA

Anderson, J., Mehlhorn, A., MacGregor, V. 2007. Community-Associated

Methicillin-resistant Staphylococcus aureus. What's in Your Neighborhood?
Jobson Medical Information LLC. US Pharm, 32(8):HS3-HS12. Anonim.
2005

Borlaug, G., Davis, J.P., Fox, B.C, 2005, Community Associated Methicillin-
resistant Staphylococcus aureus (CA-MRSA) Guidelines for Clinical
Management and Control of Transmission. http://www.unc.edu/ depts/
spice/WisconsinCAMRSAGuide.pdf/.

Boyle-Vavra, S. & Daum, R. S. (2007). Community-acquired methicillin-resistant

Staphylococcus aureus: the role of Panton-Valentine leukocidin. Lab Invest
87, 3–9

Broekema, N.M., Van, T.T., Monson, T.A., Marshall, S.A., Warshauer, D.M.,
2009, Comparison of cefoxitin and oxacillin disk diffusion methods for
detection of mecA-mediated resistance in Staphylococcus aureus in a large-
scale study.J Clin Microbiol. Jan;47(1):217-9.

Brown, D.F.J., Edwards, D.I., Hawkey, P.M., Morrison, D., Ridgway, G.L.,
Towner, K.J., Wren, M.W.D, 2005, Guidelines for the laboratory diagnosis
and susceptibility testing of methicillin-resistant Staphylococcus aureus
(MRSA). J Antimicrob Chemother, 56:1000– 1018.
centers for disease control and prevention , 2001,
http://jama.jamanetwork.com/journal.aspx

Clarence, J., Fernandes, 1., Lorna, A., Fernandes, 1., Peter Collignon2., 2005,
Cefoxitin resistance as a surrogate marker for the detection of methicillin-
resistant Staphylococcus aureus.

CLSI. 2006. Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests.

Approved standard M2-A9, ninth ed. CLSI, Wayne, PA.

CLSI. 2007. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing. CLSI

Approved standard M100-S17,clinical and laboratory standards institute ,
Wayne, PA

Cohen, M. L., Edward S. W., and Falkow, S., 2008, Common R-Plasmids in
Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis During a
Nosocomial Staphylococcus aureus Outbreak.

48
 49

Dellit, T., Duchin, J., Hofmann, J., Olson, E.G., 2004, Interim Guidelines for
Evaluation & Management of Community Associated Methicillin-resistant
Staphylococcus aureus Skin dand Soft Tissue Infection in Outpatient
Settings. http://www.metrokc.gov/health/providers/epidemiology/MRSA-
guidelines.pdf.

Duckworth,Epstein ,T., L, 1998 Extraceluller matrix heparan sulfate modulates

endothelial cell susceptibility to Staphylococcus aureus

Elixhauser, A., Steiner, C., 2007, Statistical Brief #35: Infection with Methicillin-
resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in U.S. Hospitals,1993-2005.
http://www.hcupus.ahrq.gov/reports/statbriefs/sb35.pdf

Farmakologi dan terapi, 2007,departemen farmakologi dan terapeuik fakultas

kedokteran universitas Indonesia, Edisi Kelima. Jakarta; balai penerbit
FKUI. 664-683

Felten, A., B. Grandry, P. H. Lagrange, and I. Casin, 2002, Evaluation of three

techniques for detection of low-level methicillin-resistant Staphylococcus
aureus (MRSA): a disk diffusion method with cefoxitin and moxalactam, the
Vitek 2 system, and the MRSA-screen latex agglutination test. J. Clin.
Microbiol. 40:2766-2771.

Gemmell CG., Edwards DI., Fraise AP et al, 2006 Guidelines for the prophylaxis
and treatment of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA)
infections in the UK J Antimicrob Chemother 57: 589-608

Hardy, J., P. M. Hawkey, F. Gao and B. A. Oppenheim. 2004. Methicillin

resistant Staphylococcus aureus in the critically ill. British Journal of
Anaesthesia. 92(1):121-130

Hendri, W., Priani, S. E., dan Lukmayani, Y, 2008, Uji Aktivitas Antibacteri
Madu Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus, Prodi Farmasi FMIPA
Universitas Islam Bandung.

Jawetz, E., Mellinck, J., dan Aldelberg, E. 2005, Mikrobiologi Kedokteran, Buku
1, Edisi Pertama. Jakarta; Penerbit Salemba Medika.92-95, 229-230,256

Juuti, K, 2004, Surface protein Pls of methicillin-resistant Staphylococcus aureus

role in adhesion, invasion and pathogenesis, and evolutionary aspects.
[Disertation]. Helinski: Department of Biological and
EnvironmentalSciences Faculty of Biosciences. p. 61-63
 50

Kenneth H. Rand and Herbert J. Houck., 2004. Synergy of Daptomycin with

Oxacillin and Other ß-Lactams against Methicillin-Resistant
Staphylococcus aureus. Antimicrob Agents Chemother. 48: 2871-2875

Lestari, S. E., 2008, Molecular Epidemiology of Methicillin-Resistant

Staphylococcus aureus (MRSA) di Indonesia. Bagian Mikrobiologi Rs dr
Kariadi. Semarang, diakses dari http://www.lppm.undip. ac.id/ abstrak/
content/ view/512/344/.

Madhusudhan, N.S., Deepa, S., Shoba, D.N., 2011, correlation of cefoxitin disc
diffusion test and oxacillin disc diffusion test fordetecting mec a mediated
oxacillin resistant staphylococcus aureus. JOURNAL OF
PHARMACEUTICAL AND BIOMEDICAL SCIENCES

Mimica, M. J., E. N. Berezin, R. L. B. Carvalho, L., A. P. Safadi, E. Schneider,

and H. H. Caiaffa-Filho, 2007,. Detection of methicillin resistance in
Staphylococcus aureus isolated from pediatric patients: is the cefoxitin disk
diffusion test accurate enough? Braz. J. Infect. Dis. 11:415-417.

Mulholland, Adegbola. Bacterial infections - A major cause of death among

children in Africa. NEJM 2005; 352:75-7.

Navy Environmental Health Center, 2005, Guidelines for the Management of

Community Acquired Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus (CA-
MRSA) Infections in the US Navy and Marine Corps. http://www-
nehc.med.navy.mil/Downloads/prevmed/CPG_MRSA_20050516_final.pdf.

Pottumarthy, S., T. R. Fritsche, and R. N. Jones, 2005, Evaluation of alternative

disk diffusion methods for detecting mecA-mediated oxacillin resistance in
an international collection of staphylococci: validation report from the
SENTRY antimicrobial surveillance program. Diagn. Microbiol. Infect. Dis.
51:57-62.

Swenson, J. M., D. Lonsway, S. McAllister, A. Thompson, L. Jevitt, W. Zhu, and

J. B. Patel, 2007, Detection of mecA-mediated resistance using reference
and commercial testing methods in a collection of Staphylococcus aureus
expressing borderline oxacillin MICs. Diagn. Microbiol. Infect. Dis. 5833-
39.

Van Leeuwen WB, 2003, Molecular approaches for the epidemiological

characterization of S. aureus strain, p 55-95. In Fluit Ad C, and Franz-Josef
Schitz (editors), MRSA: Current perspectives. Caister Academic Press,
Norfolk England.
 51

Velasco, D., del Mar Tomas, M., Cartelle, M., Beceiro, A., Perez, A., Molina, F.,
Moure, R., Villanueva, R. & Bou, G. (2004). Evaluation of different methods
for detecting methicillin (oxacillin) resistance in Staphylococcus aureus. J
Antimicrob Chemother 55, 379–382.

Wahid, M. H. 2007. MRSA Update: Diagnosis dan tatalaksana. 4th Symposium of

Indonesia Antimicrobial Resistence Watch (IARW). Dalam: Andra. Jakarta,
29 Juni-1 Juli. Jakarta: Farmacia. hal 64

Wijisaksono, D. P., 2007. Terapi optional “baru” untuk infeksi gram (+): Peran
Vancomycin. Dalam: M. Sja’bani, S. Nurdjanah, K. Widayati, M.R. Ikhsan,
A. Widiatmoko (eds.). Naskah lengkap Pertemuan Ilmiah Tahunan IX Ilmu
Penyakit Dalam FK UGM. Hal. 13- 24. Yogyakarta. PGTKI Press. Dalam
Imam Kris Biantoro, Bagian/SMF Ilmu Penyakit Dalam, FK UGM/RS Dr.
Sardjito, Yogyakarta, 2008, Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus
(MRSA) (diakses http://www.scribd.com/ doc/18470559/Mrsa)
 52

Lampiran 1. Surat penelitian

 53

Lampiran 2. Surat keterangan penggunaan laboratorium

 54

Lampiran 3. Hasil Penelitian

 55

Lampiran 4. Hasil uji SPSS

Crosstabs

Case Processing Summary

Cases
Valid Missing Total
N Percent N Percent N Percent
Outcome deteksi * Bakteri * 48 100.0% 0 .0% 48 100.0%
Disk

Outcome deteksi * Bakteri * Disk Crosstabulation

Bakteri
Disk MRSA MSSA Total
Cefoxitin Outcome deteksi Resisten Count 12 0 12
Expected Count 6.0 6.0 12.0
% of Total 50.0% .0% 50.0%
Sensitif Count 0 12 12
Expected Count 6.0 6.0 12.0
% of Total .0% 50.0% 50.0%
Total Count 12 12 24
Expected Count 12.0 12.0 24.0
% of Total 50.0% 50.0% 100.0%
Oxacilin Outcome deteksi Resisten Count 9 0 9
Expected Count 4.5 4.5 9.0
% of Total 37.5% .0% 37.5%
Sensitif Count 3 12 15
Expected Count 7.5 7.5 15.0
% of Total 12.5% 50.0% 62.5%
Total Count 12 12 24
Expected Count 12.0 12.0 24.0
% of Total 50.0% 50.0% 100.0%
 56

Chi-Square Tests
Asymp. Sig. Exact Sig. (2- Exact Sig. (1-
Disk Value df (2-sided) sided) sided)
Cefoxitin Pearson Chi-Square 24.000a 1 .000

Continuity Correctionb 20.167 1 .000

Likelihood Ratio 33.271 1 .000

Fisher's Exact Test .000 .000

Linear-by-Linear 23.000 1 .000

Association
N of Valid Cases 24
Oxacilin Pearson Chi-Square 14.400c 1 .000
Continuity Correctionb 11.378 1 .001
Likelihood Ratio 18.259 1 .000
Fisher's Exact Test .000 .000
Linear-by-Linear 13.800 1 .000
Association
N of Valid Cases 24
a. 0 cells (.0%) have expected count less than 5. The minimum expected count is 6.00.
b. Computed only for a 2x2 table
c. 2 cells (50.0%) have expected count less than 5. The minimum expected count is 4.50.
 57

Hasil Perhitungan EBM Stat Calculator UJI diagnostic disk cefoxitin

 58

Hasil Perhitungan EBM Stat Calculator UJI diagnostic disk oxacilin

 59

Lampiran 5. Ethical Clearance

 60

Lampiran 6. Gambar penelitian

61
62
63
64