4 - Columnas cromatográficas
4.-
4.1. Dimensiones de columnas
4.2. Materiales de las columnas
4.2.1. Soportes sólidos
4.2.2. Fases estacionarias líquidas
4.2.3. Fases estacionarias sólidas
4.3. Instalación de la columna
4.4. Acondicionamiento de la
l columna
l
4.5. Teoría de cromatografía de gases
4 5 1 Resolución de la columna.
4.5.1. columna Selectividad y eficiencia
4.5.2. Relación de partición y eficiencia del recubrimiento
Columnas Cromatográficas
4 - Columnas cromatográficas
4.-
4.1. Dimensiones de columnas
4.2. Materiales de las columnas
4.2.1. Soportes sólidos
4.2.2. Fases estacionarias líquidas
4.2.3. Fases estacionarias sólidas
4.3. Instalación de la columna
4.4. Acondicionamiento de la
l columna
l
4.5. Teoría de cromatografía de gases
4 5 1 Resolución de la columna.
4.5.1. columna Selectividad y eficiencia
4.5.2. Relación de partición y eficiencia del recubrimiento
Columnas Cromatográficas
Diámetro
Longitud interno
COLUMNAS (ID) Material
(m)
(mm)
más empleado
inerte y rígido
Vidrio
Acero A veces se
EMPAQUETADAS 1–5 2–4 inoxidable
utilizan
recubrimientos
de Teflon
(material
Sílice inerte)
fundida
recubierta
bi t
Flexibles y
CAPILARES 10 - 100 0.1 – 0.8 poliamida fuertes
Metálicas mecánicamente
4 - Columnas cromatográficas
4.-
4.1. Dimensiones de columnas
4.2. Materiales de las columnas
4.2.1. Soportes sólidos
4.2.2. Fases estacionarias líquidas
4.2.3. Fases estacionarias sólidas
4.3. Instalación de la columna
4.4. Acondicionamiento de la
l columna
l
4.5. Teoría de cromatografía de gases
4 5 1 Resolución de la columna.
4.5.1. columna Selectividad y eficiencia
4.5.1. Relación de partición y eficiencia del recubrimiento
Componentes de columna
Requisitos
Estabilidad térmica – Las temperaturas de análisis no
han de descomponer los materiales de la columna.
Estabilidad química – Materiales inertes, libres de
centros activos.
Relleno
Fase líquida GLC
Soporte sólido +
Sólid poroso
Sólido GSC
Componentes de columna
Columna empaquetada
poliamida
p m
tubo de
sílice
f
fase
estacionaria Columna capilar
pared
p d tubular
t b l soporte
t
100-530 µm sílice fundida adsorbente
poroso
fase
fase líquida
líquida
WCOT PLOT SCOT
Componentes de columna empaquetadas
Soporte sólido
Incrementa el área superficial ( 0,5-10 m2 g-1)
El soporte sólido
Compuesto de partículas pequeñas de tamaño
sirve de base para uniforme (microporos regulares ~ 1 µm) y poca
la fase estacionaria resistencia mecánica
No interfiere con la muestra
Tamaño de Intervalo de
malla Existen tamaños de malla estándar
diámetro medio
(µm) Se emplea
p universalmente tierra de diatomeas
60/80 177-260 la serie Chromosorb es la más popular
80/100 149-177
Soportes Descripción
100/120 125 149
125-149 sólidos
ólid
ChromasorbTM
120/140 105-125
P Rosa, el menos inerte, mayor
eficiencia
W Blanco, más inerte, pero menos
eficiente que P. Para drogas,
pesticidas y bioquímicos.
bioquímicos
G Menor área superficial, más inerte
y más fuerte que W. Uso general.
Componentes de columna
Silanización
(desactivación de la superficie)
GLC GSC
Fases líquidas Adsorbentes sólidos
Son líquidos no volátiles que cubren de forma Adsorbentes porosos. Gel de sílice, óxido de
CH3 R1 CH3
H3C Si O Si O Si CH3 R1, R2 = radical orgánico
CH3 R2 CH3
n
Polietilenglicol HO-[CH2-O-CH2-O]-H
Fases estacionarias líquidas
Sustitución de la cadena
La cantidad y el tipo de
100% metil
sustitución determina el tipo de 5% fenil
fase
fase. 6% cianopropilfenil
20% fenil
Un aumento de la sustitución
polarridad
35% fenil
disminuye la estabilidad térmica. 14% cianopropilfenil
p p
50% fenil
Para incrementar la polaridad 65% fenil
p
se emplean sustituciones fenilo,, 40-50% trifluoropropil
p p
50% cianopropilfenil-
cianopropilo, cianopropilfenil, Polietilengicol (PEG)
trifluoropropilo… 50% cianopropil
80% cianopropil
Las fases enlazadas y
100% cianopropil
entrecruzadas favorecen la
estabilidad térmica.
Fases estacionarias líquidas
Sangrado de columna
Aparece como una señal de ruido de fondo en
el detector. El sangrado se produce por la Ácidos Bases fuertes
fuertes
descomposición de la fase estacionaria.
estacionaria
HCl KOH
El sangrado aumenta con el espesor de la H2SO4 NaOH
H3PO4 NH4OH
c p ell diám
capa, diámetro
tr dde lla c
columna,
lumn lal longitud
l n itud y lla HNO3
Adsorbentes sólidos
GSC se emplea,
p ,p principalmente,
p ,p
para muestras g gaseosas.
Menor número de centros de adsorción en el soporte sólido que causen
colas. Además, no hay fase líquida, por tanto no se produce sangrado.
Material Aplicación
Carbón Mezclas gaseosas,
hidrocarburos Polímeros porosos
Alúmina Mezclas gaseosas, C2, Porapak® y Hayesep®.
C3, C4 Etilvinilbenceno entrecruzado con
Gel de sílice Dióxido de carbono, divinilbenceno.
hidrocarburos Pueden modificarse mediante
Tamiz
T mi O2 , N2 , CH4 , CO copolimerización con monómeros
molecular polares.
Polímero Compuestos gaseosos Disponible en muchos tamaños de
poroso y polares
l poro y partícula.
tí l
Columnas Cromatográficas
4 - Columnas cromatográficas
4.-
4.1. Dimensiones de columnas
4.2. Materiales de las columnas
4.2.1. Soportes sólidos
4.2.2. Fases estacionarias líquidas
4.2.3. Fases estacionarias sólidas
4.3. Instalación de la columna
4.4. Acondicionamiento de la
l columna
l
4.5. Teoría de cromatografía de gases
4 5 1 Resolución de la columna.
4.5.1. columna Selectividad y eficiencia
4.5.2. Relación de partición y eficiencia del recubrimiento
Instalación de la columna
Instalación de la columna
Corte de la columna
Introducir la tuerca y la férrula en la columna.
Emplear una herramienta afilada de cortar.
I
Inspeccionar
i ell corte
t con una lupa.
l
cm
Columnas Cromatográficas
4 - Columnas cromatográficas
4.-
4.1. Dimensiones de columnas
4.2. Materiales de las columnas
4.2.1. Soportes sólidos
4.2.2. Fases estacionarias líquidas
4.2.3. Fases estacionarias sólidas
4.3. Instalación de la columna
4.4. Acondicionamiento de la
l columna
l
4.5. Teoría de cromatografía de gases
4 5 1 Resolución de la columna.
4.5.1. columna Selectividad y eficiencia
4.5.2. Relación de partición y eficiencia del recubrimiento
Acondicionamiento de la columna
Acondicionamiento de la columna
En primer lugar hay que dejar circular el gas portador a través de la
columna durante 15-30 minutos.
Acondicionar con una rampa de temperatura lenta (5 (5°/min)
/min)
Acondicionamiento inicial ≥ 4 horas.
Si está contaminada,
contaminada se acondiciona a 20 °C
C por encima de la
temperatura máxima recomendada para la columna.
L temperatura
La t t normall de
d acondicionamiento
di i i t recomendada:
d d :
Tmax − Tapp
Tcond = + Tapp
2
Tcond = Temperatura
p de acondicionamiento
Tmax = Temperatura máxima recomendada para la columna
Tapp = Temperatura máxima requerida para el análisis
Columnas Cromatográficas
4 - Columnas cromatográficas
4.-
4.1. Dimensiones de columnas
4.2. Materiales de las columnas
4.2.1. Soportes sólidos
4.2.2. Fases estacionarias líquidas
4.2.3. Fases estacionarias sólidas
4.3. Instalación de la columna
4.4. Acondicionamiento de la
l columna
l
4.5. Teoría de cromatografía de gases
4 5 1 Resolución de la columna.
4.5.1. columna Selectividad y Eficiencia
4.5.2. Relación de partición y eficiencia del recubrimiento
Teoría de Cromatografía de Gases
11.18
18 × ∆t R
R =
W1 + W2
W1 y W2 = anchura de los
dos picos medida a la mitad
de sus alturas.
alturas
Teoría de Cromatografía de Gases
RESOLUCIÓN
Con
C n las columnas
c lumnas capilares se obtiene
btiene una ma
mayorr
resolución que con las columnas empaquetadas.
Teoría de Cromatografía de Gases
RESOLUCIÓN
R= 1.0 los dos picos están separados un 98% de la línea de base.
Selectividad Eficiencia
de la de la
Columna Columna
l
Resolución
Selectividad Eficiencia
de la de la
Columna Columna
l
Resolución
SELECTIVIDAD DE LA COLUMNA
SELECTIVIDAD DE LA COLUMNA
P ió d
Presión de vapor de
d los
l componentes.
t
Teoría de Cromatografía de Gases
Selectividad Eficiencia
de la de la
Columna Columna
l
Resolución
Eficiencia:
Ef c enc a med
medida
da del ensancham
ensanchamiento
ento del p
pico.
co.
Teoría de Cromatografía de Gases
EFICIENCIA DE LA COLUMNA
Eficiencia
Columna empaquetada
medida del Columna capilar
p
ensanchamiento
2
⎛t ⎞ ⎛ tR ⎞
2
N = 5 .54 ⎜ R ⎟ ´
EFICIENCIA DE LA COLUMNA
N=L/H
B. Difusión longitudinal.
C Resistencia
C. R i t i a la
l transferencia
t f i de
d masa.
Teoría de Cromatografía de Gases
B. Difusión longitudinal
perfil de
perfil de
concentración
ó
concentración
inicial
después de la
difusión
Fase Móvil
ó
concentración concentración
en equilibrio real
Fase Estacionaria
o Fuerte
F t ddependencia
d i d
de lla velocidad
l id d dde fl
flujo
j y lla
cantidad de fase estacionaria.
Teoría de Cromatografía de Gases
EFICIENCIA DE LA COLUMNA
B
Ecuación de Van Deemter HEPT = A + + Cµ
µ
EFICIENCIA DE LA COLUMNA
Gráficas de Van Deemter
N effff = 5 . 54 ⎜ = 5 . 54 ⎜ = 8 . 864
⎜ W ⎝ 6 s ⎠
⎝ ⎠
t 300 s
α = R2 = = 1 .7
tR1 180 s
L c ol 1500 cm
HEPT = = = 0 . 17 cm
N eff 8 . 864
Eficiencia de recubrimiento
Comparación de la eficiencia de columna real con la eficiencia máxima teórica.
Neffreal o bien
bi HEPTteórico
CE% = ×100 CE% = × 100
Neffteórico HEPTreal
Espesor de capa
Cantidad de recubrimiento de fase estacionaria
Capas de poco espesor dan lugar a una
Afecta a la retención y
mayor retención y capacidad. Se emplean
a la capacidad
p
para compuestos poco volátiles.
volátiles
Capacidad de columna
La capacidad de columna es la máxima cantidad de muestra
que puede inyectarse en la columna sin que se produzca una
distorsión de pico significante.
significante
La capacidad de columna
Un exceso da lugar a:
se incrementa con:
o ensanchamiento de pico.
o espesor de capa (df).
) o asimetría (colas o frentes).
frentes)
o temperatura.
o diámetro interno (ID).
o selectividad de la fase
estacionaria.
Gaussiano Cola Frente
Relación de partición y eficiencia del recubrimiento
Relación de partición
t R − t0
K ´=
t0
Eficiencia de recubrimiento
pico
Columna de 15 m,
calcular: de
aire
i 0 53 mm
0.53 mm,espesor
espesor
a.- la relación de fase de recubrimento
b.- la relación de partición minutos 0.25 µm
c.- la
l eficiencia
f de
d recubrimiento
b
Emplear la ecuación de Golay-Giddings r 265 µ m
para determinar HEPT teórico.
teórico
a.- β =
2 d
β =
2 ( 0 . 25 µ m )
= 530
f
2
⎛ t ´R ⎞ ⎛ 300s ⎞
2
1500cm
c.- N = 5 .54 ⎜ Neff = 5.54⎜ = 13850 HEPTreal = = 0.11 cm
m
⎜W ⎝ 6.0 s ⎠ 13.850
⎝ ⎠
11 × 52 + (6 × 5) + 1 0.045cm
HEPTteórico = 0.0265cm = 0.045 cm CE% = ×100 = 41 %
3(1 + 5) 2 0.11cm
Características de una columna
RESUMEN
Columnas Columnas
empaquetadas capilares