Competencia: Analizar el fundamento y aplicación de las pruebas cruzadas

PRÁCTICA 8

PRUEBAS CRUZADAS

I. INTRODUCCIÓN

La circulación sanguínea y su importancia fue descubierta por William Harvey en 1628,

sin embargo, la aplicación clínica de las transfusiones sanguíneas ocurrió posterior a
la descripción del sistema sanguíneo eritrocitario ABO por Karl Landstainer. Una vez
resueltos varios aspectos técnicos, en 1937 el médico Bernarnd Fantus establece el
primer centro de transfusión sanguínea en Chicago.

La transfusión sanguínea es un procedimiento médico ampliamente utilizado. En

términos generales, las transfusiones sanguíneas son utilizadas para recuperar y
mantener un volumen sanguíneo adecuado para evitar o tratar un shock producido por
hemorragia o trauma. Otra indicación terapéutica de las transfusiones, son el aporte de
componentes celulares o proteicos como: eritrocitos, plaquetas o factores de
coagulación; albúmina o anticuerpos. Es importante indicar que no existe transfusión de
sangre total, ya que ésta es fraccionada en por lo menos tres productos: concentrado
eritrocitario, concentrado plaquetario y plasma.

La transfusión sanguínea es el trasplante más exitoso y frecuente, sin embargo, este

procedimiento implica ciertos efectos adversos que pueden ser severos y
comprometer la vida del paciente si previo a la transfusión no se realizan las pruebas de
compatibilidad en forma adecuada.

Las complicaciones se clasifican de acuerdo a su origen en: inmunológicas, metabólicas

e infecciosas (Tabla 1). Dentro de estas complicaciones, en esta práctica se abordarán
únicamente los aspectos inmunológicos de la transfusión de concentrados eritrocitarios.

Tabla 1. Complicaciones de las transfusiones sanguíneas

I INMUNOLÓGICAS
1. No hemolíticas Ab anti-HLA preformados
Inmediatas: sistemas ABO
2. Hemolíticas
Tardías: sistemas Rh, Kidd y Duffy
II METABÓLICAS
1. Toxicidad por citrato 4. Hipercalcemia
2. Hipotermia 5. Hemorragia por efecto dilucional
3. Sobrecarga circulatoria
III INFECCIOSAS
1. Hepatitis viral 5. Paludismo
2. HIV 6. Tripanosomiasis
3. Sífilis 7. Otras
4. Otras virosis

Academia de Inmunología Médica/Laboratorio de Inmunología Médica 2018-2 39

 Competencia: Analizar el fundamento y aplicación de las pruebas cruzadas

Un requisito indispensable, entre otros, para una adecuada transfusión son las pruebas de
compatibilidad. Estas se realizan haciendo mezcla de eritrocitos y suero entre donador y
receptor, con el fin de detectar una posible reacción Ag–Ab, la cual en caso de ser
positiva, indica una incompatibilidad.

Uno de los sistemas de Ag eritrocitarios más inmunogénico, es el formado por el sistema

ABO, que es un grupo de carbohidratos presentes en la parte extracelular de una
glicoproteína de membrana llamada banda 3, que funciona como un transportador
aniónico. Los anticuerpos contra los Ag del sistema ABO son llamados
isohemaglutininas y generalmente son de clase IgM.

Si una persona del grupo sanguíneo A (receptor) recibe una transfusión de eritrocitos del
grupo B (donador), experimenta una reacción pos transfusional en la que los Ab´s anti-
B del receptor se fijan en los eritrocitos del donador y se induce su lisis mediada por
complemento, provocando la liberación de hemoglobina (Hb) e inducción de inflamación
sistémica por la liberación de las anafilotoxinas C3a, C4a y C5a. Esta reacción es un
mecanismo de daño de hipersensibilidad tipo II (HS-II) mediada por activación de
complemento y/o citotoxicidad.

Cuando la transfusión se realiza existiendo incompatibilidad del sistema ABO, la lisis

eritrocitaria por fijación de complemento es mediada por Ab d e c l a s e IgM, es
intravascular y las manifestaciones clínicas se presentan generalmente en forma
inmediata. Cuando existe incompatibilidad por los Ag Rh, Kell, Kidd y Duffy, los Ab´s
involucrados son de clase IgG, la lisis eritrocitaria es extravascular y los síntomas
aparecen de 2 a 6 días posteriores a la transfusión.

Las reacciones inmediatas y tardías comparten signos y síntomas como fiebre, diaforesis,
náuseas y aumento de las bilirrubinas. En cambio, la lisis intravascular produce Hb libre en
el plasma y en la orina, que es característico de las reacciones inmediatas.

Otros ejemplos de enfermedades con mecanismo de daño por HS-II citotóxica que
involucra antígenos eritrocitarios son la enfermedad hemolítica del recién nacido y las
anemias hemolíticas autoinmunitarias.

El estudio de laboratorio que permite establecer la compatibilidad entre donador y

receptor se llama prueba cruzada. La importancia clínica de las pruebas cruzadas es la
prevención de los efectos de la HS-II, éstas se basan en la reacción de los Ab IgM e IgG,
contra Ag´s eritrocitarios que no son propios del receptor y que están presentes en los
eritrocitos del donador. Los criterios de selección de hemoderivados se presentan en la
tabla 2.

Academia de Inmunología Médica/Laboratorio de Inmunología Médica 2018-2 40

 Competencia: Analizar el fundamento y aplicación de las pruebas cruzadas

Tabla 2. Criterios de selección para la transfusión de hemoderivados

ALTERNATIVAS DE TRANSFUSIÓN HEMATOLÓGICA (Donador)
Paquete eritrocitario o plaquetario Plasmas: fresco o congelado
(Ag) (Ab)
Grupo del receptor 1 2 3 4 1 2 3 4
A (+) A+; A- O+; O- A+; A- AB+;AB-
A (-) A- O- A-; A+ AB-;AB+
B (+) B+; B- O+; O- B+; B- AB+;AB-
B (-) B- O- B-; B+ AB-;AB+
AB (+) AB+;AB- B+; B- A+; A- O+; O- AB+;AB-
AB (-) AB - B- A- O- AB-;AB+
O (+) O+; O- O+; O- A+; A- B+; B-
O (-) O- O-; O+ A-; A+ B-; B+

El paso inicial de la prueba cruzada se da en medio salino (solución salina), en este medio
los Ab´s que aglutinan son principalmente IgM. La segunda etapa se da en un medio
proteico (albúmina bovina), el cual favorece la detección de Ab clase IgG que reaccionan a
una temperatura de 37°C. De no observarse una reacción macroscópica se utiliza el suero
de Coombs para evidenciar una reacción microscópica. La prueba cruzada consta de los
siguientes pasos:
a) Prueba cruzada mayor: consiste en la mezcla del suero del receptor (Ab) con los
eritrocitos del donador (Ag). Esta prueba in vitro es fundamental, por ser la mejor
forma de detectar Ab´s fijadores de complemento contra los glóbulos rojos
transfundidos; la existencia de aglutinación o hemólisis indica que algún Ab del suero
del receptor se ha unido a los hematíes del donador, en este caso se afirma, que la
prueba cruzada es positiva indicando incompatibilidad. Cuando no hay aglutinación o
hemólisis significa que no hay anticuerpos en el suero del receptor, considerándose
compatible el hemoderivado.
b) Prueba cruzada menor: es la prueba, donde el suero del donador (Ab) se mezcla
con los eritrocitos del receptor (Ag); la incompatibilidad puede demostrarse in vitro
por aglutinación o hemólisis de los eritrocitos.
c) Autotestigo: c onsiste en la mezcla de suero (Ab) y eritrocitos (Ag) del receptor, es
útil para la identificación de autoanticuerpos o isoinmunización.
d) Prueba de Coombs: el reactivo de Coombs es un suero con Ab anti-IgG o anti-C3d,
con este reactivo se puede evidenciar la presencia de microaglutinaciones no
perceptibles a simple vista.
Al término de las pruebas de compatibilidad se establece el resultado que puede ser:
• Compatible: sólo cuando en las pruebas cruzadas del paquete eritrocitario o
plasma, no se observe aglutinación o hemólisis en las pruebas rápidas,
atemperadas a 37ºC y d e Coombs, se considera que se puede transfundir el
hemoderivado.
• Incompatible: cuando las pruebas cruzadas del paquete eritrocitario o plasma
presentan, aglutinación o hemólisis en las pruebas rápidas, atemperadas a
37ºC y de Coombs, el hemoderivado es incompatible y esto es una contraindicación
para su transfusión.

Academia de Inmunología Médica/Laboratorio de Inmunología Médica 2018-2 41

 Competencia: Analizar el fundamento y aplicación de las pruebas cruzadas

II. OBJETIVOS

1. Conocer la importancia clínica de las pruebas cruzadas en el contexto de una

transfusión sanguínea.
2. Elegir el grupo sanguíneo del donador de un hemoderivado para transfundir, a
partir del grupo sanguíneo del receptor.
3. Interpretar la importancia inmunológica de las pruebas cruzadas mayor y menor.

III. MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO

Material Reactivos Equipo

- Gradillas - Albúmina bovina al 22% - Centrífuga clínica
- Tubos de vidrio de 12 x 75 mm - Solución salina isotónica (SSI)
- Estufa a 37°C
- Pipetas Pasteur - Eritrocitos tipificados
- Sueros: anti-A, anti-B, anti-AB, y anti-Rh
- Suero de Coombs
- Muestras problemas

IV. PROCEDIMIENTO

PRUEBAS CRUZADAS PARA LA TRANSFUSIÓN DE CONCENTRADO

ERITROCITARIO
1. Determinar el grupo sanguíneo del r e c e p t o r . Reportar en la tabla 3 , indicando
los datos del receptor.
2. Con base en la tipificación del receptor, solicitar muestras piloto del donante de
elección y del donador alternativo. Llenar tabla 4.
3. Se entregará: suero del donador de elección (SDE), suero del donador
alternativo (SDA), una suspensión de eritrocitos de donador de elección (EDE)
y eritrocitos del donador alternativo (EDA).
4. Marcar los tubos de acuerdo a la tabla 5.
5. Los tubos marcados como p ru e ba m a yor s a lin a (PMs), prueba menor salina
(pms) y a u t o t e s t igo s a lin a ( ATs) se le agregarán 2 gotas de solución salina
isotónica (SSI) y a los tubos marcados con p ru e b a m a yo r a l b u m in a (PMa),
prueba menor albumina (pma) y a u t o t e s t i go a lb ú m in a ( Ata) se les agregarán
2 gotas de albúmina bovina al 22%.
6. PRUEBA MAYOR: Adicionar a los tubos marcados como PMa, PMs 1 gota de
suero del receptor (SR) y 1 gota de la suspensión EDE y EDA respectivamente.
7. PRUEBA MENOR: Adicionar a los tubos marcados como pma, pms 1 gota de
la suspensión de eritrocitos del receptor (ER) y 1 gota de SDE y SDA
respectivamente.
8. AUTOTESTIGO (AT): Adicionar a los tubos marcados como ATs y ATa 1
gota de SR y 1 gota de ER.
9. Verificar las mezclas de reacción con ayuda de la tabla 5

Academia de Inmunología Médica/Laboratorio de Inmunología Médica 2018-2 42

 Competencia: Analizar el fundamento y aplicación de las pruebas cruzadas

Tabla 3. Identificación del paciente: ______________________________________

Prueba Directa
Anti-D RESULTADO
Suero Anti-
A B AB AT Rh Grupo Factor Rh

Tabla 4. Solicitud de concentrado eritrocitario de elección y alternativo

Grupo sanguíneo y Rh
Donante de elección
Donante alternativo

TABLA 5. Guía para la preparación de pruebas cruzadas Mayores y menores

(Cantidad en gotas).

DONADOR DE ELECCIÓN DONADOR ALTERNATIVO AUTOTESTIGO

PMs PMa pms pma PMs PMa pms pma ATs ATa

ER 1 1 1 1 1 1

SR 1 1 1 1 1 1

EDE 1 1

SDE 1 1

EDA 1 1

SDA 1 1

Academia de Inmunología Médica/Laboratorio de Inmunología Médica 2018-2 43

 Competencia: Analizar el fundamento y aplicación de las pruebas cruzadas

PRUEBAS RÁPIDAS
10. Agitar los tubos y centrifugar a 1,500 rpm durante un minuto.
11. Resuspender la muestra e interpretar el resultado. Descartar los tubos en donde
haya observado aglutinación.
12. Reportar los resultados en la tabla 6.

PRUEBAS ATEMPERADAS A 37º C

13. Incubar a 37ºC durante 20 min.
14. Centrifugar todos los tubos a 1,500 rpm durante un minuto.
15. Resuspender la muestra e interpretar el resultado. Descartar los tubos en donde
haya observado aglutinación. Reportar los resultados en la tabla 6

PRUEBA DE COOMBS
16. Lavar los eritrocitos adicionando a los tubos 2 mL de SSI.
17. Centrifugar a 1500 rpm durante un minuto.
18. Decantar el sobrenadante y resuspender el botón celular
19. Adicionar 2 gotas del suero de Coombs.
20. Agitar y centrifugar a 1500 rpm durante un minuto.
21. Observar si existe o no aglutinación, interpretar y reportar sus resultados en la
tabla 6
22. Concluir sus resultados en la tabla 7.

V. RESULTADOS

Tabla 6. Resultados de reacciones cruzadas Mayores y menores

Donador de elección Donador alternativo Autotestigo
PMs PMa pms pma PMs PMa pms pma ATs ATa

Pruebas rápidas

Pruebas atemperadas a
37ºC

Prueba de Coombs

Tabla 7. Trasfusión de concentrado eritrocitario

Muestra sanguínea Compatible/incompatible
Donador de elección
Donador alternativo

Academia de Inmunología Médica/Laboratorio de Inmunología Médica 2018-2 44

 Competencia: Analizar el fundamento y aplicación de las pruebas cruzadas

VI. CUESTIONARIO ADICIONAL

1.- Mencione las principales causas de un rechazo hiperagudo.

2.- En caso de un rechazo hiperagudo ¿Cuáles son las consecuencias inmunológicas?
3.- ¿Qué clase de anticuerpos pone de manifiesto el reactivo de Coombs?
4.- Describa de manera breve como se realizan las pruebas cruzadas en la trasfusión de
plasma.
5.- ¿Cuál es la implicación de una incompatibilidad en la prueba cruzada menor?

VII. BIBLIOGRAFÍA
1. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-003-SSA2-1993. Para la disposición de sangre
humana y sus componentes con fines terapéuticos.
2. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-017-SSA-1993. De los reactivos
hemoclasificadores para determinar grupos del Sistema ABO.
3. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-018-SSA-1993. Del reactivo anti-Rh para
identificar el antígeno D.
4. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-019-SSA-1993. Del reactivo de Coombs
antiglobulina humana.
5. Beutler, E. Preservation and clinical use of erythrocytes and whole blood. Ed.
Williams Hematology. 2001. Sixth Ed. Editores: Beutler E, Lichtman MA, Coller BS, Kipps
TJ, SeligsohnU. Ed. McGraw Hill.pp.1879-1892.
6. Calhoun L, Petz LD. Erythrocyte antigens and antibodies. En Williams Hematology.
2 0 0 1 . Sixth Ed. Editores: Beutler E, Lichtman MA, Coller BS, Kipps TJ, Seligsohn
U. Ed. McGraw Hill. 1843-1858 p.
7. Jaime Pérez, JC., Gómez Almaguer, D. Hematología: la sangre y sus enfermedades. 3ª
ed. México: McGraw-Hill-Interamericana., 2012. 338 p. ISBN: 978-607-15-0748-8
8. Parham P. El sistema inmune. 4ª ed. México: Manual Moderno., 2016. 600 p. ISBN:
9786074485646.

Academia de Inmunología Médica/Laboratorio de Inmunología Médica 2018-2 45