Abstracto

FONDO: Acuaporina (AQP) canales de agua son mejor conocidos como pasiva
transportadores de agua que son vitales para la homeostasis del agua.
ÁMBITO DE REVISIÓN: estudios knockout AQP en animales enteros y células
cultivadas,
junto con mutaciones naturales humanos sugieren que el transporte de neutral
solutos a través de AQPs tiene importantes funciones fisiológicas. biofísico emergente
la evidencia sugiere que AQPs también puede facilitar gas (CO2) Y el transporte de
cationes. AQPs
puede estar implicado en la señalización celular para la regulación de volumen y control de
la
localización subcelular de otras proteínas mediante la formación de complejos
macromoleculares. Esta
revisión examina la evidencia de estas diversas funciones de AQPs así su
relevancia fisiológica.
Las principales conclusiones: Además de ser crucial para la homeostasis del agua, AQPs
están implicados en el transporte fisiológicamente importante de moléculas que no sean
agua,
regulación de la expresión en superficie de otras proteínas de membrana, adhesión celular, y
de señalización en la regulación del volumen celular.
Significado general: La elucidación de la gama completa de papeles funcionales de
AQPs más allá de la conducción pasiva de agua mejorarán nuestra comprensión de
fisiología de los mamíferos en la salud y la enfermedad. La variedad funcional de AQPs
hace
los hace un blanco de drogas emocionante y podrían proporcionar rutas a una gama de
nuevas terapias.

1. Introducción
La acuaporina (AQP) familia de proteínas se compone de muchos integral de membrana
pequeña
proteínas que se encuentran en todos los reinos filogenético. Hay hasta 13 AQPs de
mamíferos,
que se encuentran en la mayoría de los tejidos con funciones que van desde la regulación de
las renal
balance de agua [1], cerebro-líquido homeostasis [2], el ciclismo de triglicéridos entre
adipocitos y el hígado [3] y la integridad estructural de la lente del ojo [4]. Porque
esto, la comprensión de la función AQP es crucial para el estudio del envejecimiento
saludable, así como
la aparición de muchas enfermedades, tales como la inflamación del cerebro después de una
lesión o de la cabeza de carrera
[5], la diabetes insípida nefrogénica [6, 7], cataratas [8], la obesidad [9], de células de
cáncer
proliferación y migración [10] y la angiogénesis del tumor [11]. Muchos de estos
funciones y enfermedades implican o bien la permeabilidad de las moléculas que no sean
agua, o una
función de la AQP aparte de facilitar la permeabilidad de la membrana.
Trece AQPs humanos se han descubierto hasta la fecha; que varían en tamaño (antes
postraduccional
modificación) de 27 kDa (AQP8) a 37 kDa (AQP7) y, para aquellos
proteínas para las que se ha cuantificado la permeabilidad de un solo canal, tienen un 100
veces
variar en la permeabilidad al agua. Un sub-conjunto de estos AQPs también funcionan
como canales para
glicerol (y otros solutos) y se conocen como glyceroporins (AQUA) (GLPs). En
seres humanos, estos son AQP3, -7, -9 y -10. AQP6 tiene también (polémico, véase la
sección
4) ha demostrado que es permeable al glicerol, aunque filogenéticamente es un miembro
de la AQP subfamilia-selectivo de agua [12]. También es notable por su inusual
propiedades de permeabilidad (activación por el bajo pH y la permeabilidad de aniones) y
localización intracelular. Las propiedades de permeabilidad de los mamíferos son AQPs
resumen en la Tabla 1.
Esta revisión describe cómo seleccionar AQPs y regulan el paso de solutos tales como
glicerol, urea y amoníaco a través de las membranas celulares y la relevancia fisiológica de
este flujo de soluto, así como funciones putativas de AQPs más allá de la facilitación de
permeabilidad de la membrana.

2. Se establece la biología estructural de la familia AQP

Hay una gran cantidad de datos estructurales entre medio y de alta resolución disponible
para el
familia AQP (43 estructuras depositadas en el Protein Data Bank durante 11 AQPs
diferentes).
Estas estructuras sugieren que los AQPs comparten muchas características estructurales
comunes. los
AQP monómero se compone de seis transmembrana inclinada (TM) hélices que rodean una
cavidad central que contiene dos bucles formadores de hélice que entran y salen de la
misma
lado de la membrana (véase la Figura 1A). Esta cavidad central es la vía para el agua
y el transporte de solutos. Los dos bucles helicoidales contiene muy conservadas
asparagineproline-
alanina (NPA) motivos. Cristalografía y dinámica molecular (MD)
Las simulaciones sugieren que la asparagina residuos acto, en concierto con los alrededores
grupos carbonilo columna vertebral, para permitir el transporte de agua, proporcionando
enlaces de hidrógeno a
moléculas de agua [37], lo que reduce la pena de energía libre (causada por la rotura de
enlaces de hidrógeno agua-agua) de la eliminación de una molécula de agua de la solución a
granel.
experimentos biofísicos reciente que compara AQPs con gramicidina y el potasio
canal KcsA [38] sugieren que el número de sitios de enlace de hidrógeno de poros forro
para
agua determina la permeabilidad al agua del canal. Además de proporcionar de puentes de
hidrógeno
sitios, los residuos de asparagina ayudan a orientar las moléculas de agua de tal manera que
la
átomos de hidrógeno apuntan 'hacia fuera' del poro, la creación de una barrera para el
transporte de protones
[39]. Una estructura cristalina sub-angstrom reciente del AQY1 Pichia pastoris encontrado
densidades de agua que se solapan en el poro que, apoyado por simulaciones MD, sugerido
un movimiento pairwise correlacionado de moléculas de agua a través del extremo
extracelular de
el poro. Este movimiento correlacionado puede ayudar a minimizar los enlaces de
hidrógeno agua-agua en
esta región, proporcionando una barrera adicional a la penetración de protones, sin
comprometer
transporte de agua [37].
El análisis cristalográfico de la E. coli, GlpF (un análogo de GLP), sugiere que la misma
residuos de asparagina también forman enlaces de hidrógeno con glicerol [40]. Esto es
probable que sea
también es cierto de otros solutos polares que impregnan GLP.
AQPs tienen amino intracelular (N-) y carboxilo (C-) terminales de diferentes longitudes;
AQP8 tiene un corto término C de 10-15 residuos, mientras que AQP4 tiene una gran
término C
que consta de ~ 70 residuos. AQP11 tiene una cola N-terminal grande de ~ 40
residuos, mientras que AQPs 1,2 y 5 tienen corto N-terminales de <10 residuos. En
contraste con
la conservación estructural de la región TM de AQPs, se sabe mucho menos acerca de la
estructura de la termini. Esto se debe a que la mayoría de las estructuras cristalinas son AQP
obtenido utilizando construcciones en las que las colas N- y C-terminales de la proteína
tienen
ha truncado debido la dificultad de obtener cristales utilizando de longitud completa bien
difracción
moléculas AQP [41]. Esto sugiere una flexibilidad estructural inherente a estos
regiones de moléculas de AQP y de hecho una estructura de rayos X reciente de AQP2, que
incluido ~ 20 residuos de la (truncado) de la cola C-terminal, encontraron este fragmento
del término C
en cuatro conformaciones sorprendentemente diferentes en cada uno de los cuatro AQP2
monómeros dentro de la célula unidad tetramérica [42].
AQPs están generalmente de acuerdo para formar tetrámeros [43-45] reunidos en torno a un
eje central
perpendicular al plano de la membrana (véase la Figura 1B). Un quinto, hidrófobo
poro parece formar alrededor de este eje central con cada uno de los monómeros que
contribuye
uno de los cuatro 'paredes' del poro. La función, en su caso, de esta quinta poros todavía no
está
conocido, aunque las funciones postuladas serán discutidas en secciones posteriores.
Algunos
Los estudios bioquímicos han sugerido que los tetrámeros formados por GLP han reducido
estabilidad en comparación con tetrámeros formados por AQPs con estricta selectividad
agua [46, 47].

3. Los principios de selectividad soluto por AQPs aún no se han

establecido
Todos AQPs (excepto AQP12, que aún tiene que ser caracterizada) agua de transporte
(cuadro
1), mientras que algunos también el transporte de glicerol. Los glicerol GLP permeables
(por ejemplo, humana
AQPs 7, 9 y 10) también son permeables a la urea. La permeabilidad de urea de AQP3 es
controvertido, con algunos estudios que informan de transporte de urea y otros no hay
transporte [15,
17-19]. Esto puede ser debido a diferencias metodológicas, y se discute en detalle en
la sección 4.2.1.
De los mamíferos GLP AQP3, -7, y -9 también son permeables a amoníaco. AQP8 es
la única glicerol impermeable de mamífero AQP que es permeable al amoníaco
(Excluyendo 11 y 12, cuyo glicerol y / o permeabilidades amoníaco Actualmente
desconocido). La permeabilidad de amoniaco del miembro más recientemente descubierto
de la
grupo de GLP, AQP10, aún se desconoce.
AQP11 y -12 son los descubiertos más recientemente, los miembros de la familia AQP [48,
49]; Debido a esto y su localización a las membranas intracelulares, no-agua
experimentos de permeabilidad y estudios funcionales aún no se han reportado para AQP11
y AQP12 respectivamente. Hay un informe que AQP11 aumentó el glicerol
permeabilidad de una línea celular de adipocitos [36], pero esta permeabilidad de AQP11
tiene todavía
ser replicado.
El modelo de 'tamaño de exclusión' de AQP selectividad postula una correlación entre el
tamaño de
entrada del canal y la permeabilidad de la canal a diferentes moléculas polares.
En particular, este modelo se basa en experimentos in silico y cristalográficas, pero
experimentos mínimas in vitro; por lo tanto es claro si este modelo es ampliamente
aplicable a la familia AQP en su conjunto. Un residuo de arginina conservado (en el
segundo
bucle helicoidal directamente después del motivo NPA) forma parte de una constricción
canal conocido
como el aromático / arginina (ar / R) filtro de selectividad (ver Figura 1A). En el agua
selectivo
AQPs, los otros componentes de este filtro son una fenilalanina en la mitad superior de la
lado de hélice transmembrana 2 (TM2) y una histidina de poros frente en una posición
similar
en TM5. En glicerol y urea AQPs permeables, esta histidina se sustituye por una pequeña
residuo de aminoácido tal como glicina (AQP3, -7, -10) o alanina (AQP9), aunque si el
histidina está mutada a alanina en AQP1 no se convierta en un canal de glicerol. Si ambos
miembros aromáticos del filtro (H y F) se mutan a alanina, funciones AQP1 como una
canal de urea y en menor medida como un canal de glicerol [50]. Basado en esto
de observación y moleculares simulaciones de AQP1 y el GLP E. coli, GlpF [50, 51], se
se ha sugerido que el área de sección transversal del poro en la región ar / R
determina AQP selectividad para solutos polares neutros. Además, sobre la base de
análisis cristalográfico de GlpF y la bacteriana agua selectivo AQP, AQPZ, tiene
ha sugerido que el posicionamiento de los residuos ar / R por la rodea
bucles no estructurados tiene un papel en la determinación del tamaño del canal [52]. En
AQP8, el único
glicerol-impermeable, amoníaco-permeable de mamífero AQP, el tercer miembro de
el filtro es probable un residuo de isoleucina (basado en la alineación de secuencias), que es
ligeramente más grande que la alanina o glicina. En general, el pensamiento actual sobre la
selectividad soluto
sugiere que los residuos aromáticos del filtro AR / R son importantes para la exclusión
soluto
en los AQPs selectivo de agua, pero los factores moleculares adicionales pueden estar
implicados en
la mediación de selectividad soluto.

4. transporte de solutos Physiological por AQPs

4.1 Transporte de glicerol
El movimiento de glicerol alrededor del cuerpo se cree predominantemente para incluir
liberación de glicerol a partir de tejido de grasa a través AQP7, la entrada en el hígado a
través AQP9 y
movimiento en la piel y los riñones a través de AQP3.
4.1.1 AQP7
AQP7 se expresa en el tejido adiposo en adipocitos [53] y endotelios capilares [54].
Tras la hipoglucemia, los triglicéridos se descomponen dentro de los adipocitos a glicerol
y ácidos grasos libres [55]. La adrenalina, el nivel de plasma de los cuales se eleva sobre
hipoglucemia, causada translocación de AQP7 de las membranas intracelulares a la
membrana plasmática [53]. señales de adrenalina a través de lareceptor 3-adrenérgicos
para
iniciar la lipólisis adipocítico [56] haciendo de este el más probable vínculo entre adrenalina
y translocación AQP7 aunque esto aún no se ha verificado. Un trabajo reciente tiene
también
sugirió que AQP7 puede relocalized a gotitas de lípidos por la noradrenalina, posiblemente
en
de manera PKA dependiente de [57], aumentando la posibilidad de efectos diferenciales de
las hormonas en la localización AQP7 lipólisis inductores.
El glicerol liberado de almacenamiento de triglicéridos se libera de adipocitos [58] y
glicerol plasma se vuelve elevada. En AQP7 - / - ratones, la membrana plasmática de los
adipocitos
permeabilidad glicerol se redujo triple [59]. niveles de glicerol en plasma en ayuno
estado y en respuesta aagonista 3-adrenérgicos se redujeron y se indujo adrenalina
la secreción de glicerol por los adipocitos de ratón en cultivo (células diferenciadas 3T3-L1)
era
reducido aproximadamente dos veces [60]. Estos resultados sugieren que la vía principal
para flujo de salida de glicerol de los adipocitos después de la lipólisis es AQP7.
AQP7 - / - ratones desarrollan hipertrofia de adipocitos y posterior obesidad en
la edad adulta [59]. Una pérdida de función de la mutación en el gen humano ha sido AQP7
descubierto (G264V), aunque este genotipo no se correlacionó con la obesidad en
los seres humanos [61]. Esto puede ser debido a la presencia de AQP10 en adipocitos
humanos
membranas, que se encontró que contribuyen ~ 50% del agua y glicerol
permeabilidad de sanos vesículas de membrana plasmática de los adipocitos humanos [62].
Ratón
AQP10 es un pseudogen [63] y por lo tanto esta ruta secundaria para el eflujo de glicerol
no existe en ratones.
La concentración sérica de glicerol en los seres humanos bajo fisiológica normal
condiciones es típicamente entre 0,05 y 0,1 mM [64] y aumenta varias veces sobre
ayuno (debido a glicerol y la liberación de ácidos grasos libres a partir de triglicéridos
adiposo
almacenamiento) [65]. El glicerol está casi completamente reabsorbida por los riñones [66]
(a menos que
se eleva por encima de ~ 0,3 mM [67]), lo que sugiere la existencia de una reabsorción de
glicerol
camino. AQP7 se expresa en el túbulo proximal del riñón. AQP7 - / - ratones
mostró glyceroluria marcados en comparación con el tipo salvaje (~ aumento de 400 veces
en la orina
glicerol) [68]. No se encontraron niños humanos homocigóticos para el mutante AQP7
G264V
tener hyperglyceroluria, con un aumento de ~ 1.000 veces en glicerol orina cuando
en comparación con controles familiar heterocigótica [69]. El mutante G264V ha
demostrado
no tener actividad como glicerol o canal de agua en oocitos de Xenopus [61], aunque
expresión en la membrana de plasma no fue verificado en este estudio de modo que no
podía
diferenciar entre un canal no funcional y un canal incorrectamente localizada.
La mutación altera un motivo GxxxG conservado. Estos son motivos importantes para
transmembrana interacciones hélice-hélice, ya que permiten un contacto estrecho entre la
átomos de la cadena principal de las dos hélices de un par de interacción [70]. Puede ser que
la
proteína se trafica incorrectamente y localizada en las membranas intracelulares debido a
una
incapacidad para formar tetrámeros o una interacción requerida para el tráfico de
membrana.
Independientemente del mecanismo de pérdida de función, estos datos sugieren fuertemente
que AQP7
es la vía de glicerol reabsorción TM en el túbulo proximal renal.
4.1.2 AQP9
AQP9 se expresa en el hígado [71], principalmente en los hepatocitos con los más fuertes
la expresión en la superficie sinusoidal [72] (los sinusoides hepáticos son continuas con el
arteria hepática y la vena portal). Tras el ayuno, el glicerol liberado en el plasma a partir de
adipocitos se toma por los hepatocitos y se utiliza como un sustrato para la gluconeogénesis
[73].
En ratas, la expresión de la proteína AQP9 se incrementa hasta 20 veces después de 24-96
horas de ayuno
[32]. En ratones, la expresión AQP9 mide en la membrana plasmática de hepatocitos
purificada
vesículas aumentó 10 veces después de 18 horas de ayuno. Este aumento de 10 veces era
acompañado por un aumento de dos veces en hepatocitos membrana plasmática
permeabilidad glicerol, que fue revertida por adición de floretina (un polifenol de manzana
que inhibe AQP9, AQP3 y varias proteínas de los canales de membrana no AQP incluyendo
el SGLT1 y 2 transportadores de glucosa y UT-A canales de urea [ 74]). El aumento fue
abolida en AQP9 - / - ratones [75]. Ayunado AQP9 - / - ratones han elevado glicerol plasma
en comparación con el de tipo salvaje [75, 76]. Además, la concentración de glucosa en
plasma se redujo [76], lo que indica una deficiencia gluconeogenética. Estos datos apoyan
un papel fisiológico para la captación de glicerol AQP9 mediada por los hepatocitos durante
la hipoglucemia fastinginduced.
Aunque la difusión AQP9 mediada de glicerol en hepatocitos forma una considerable
proporción de la captación de glicerol en el estado de ayuno (~ 50% en los ratones en
ayunas), el hecho
que la permeabilidad de la membrana al glicerol sólo se duplica en un gran aumento en
AQP9 expresión sugiere que también hay una ruta AQP9 independiente para el glicerol
consumo. Si esto es directamente a través de la bicapa lipídica o a través de un canal de
glicerol insensible floretina no está claro.
CD8+ las células T (citotóxicas) son glóbulos blancos que facilitan la destrucción de
infectada
o de otro modo las células dañadas. Durante la infección, CD8 específica de antígeno +
células proliferan
y diferenciarse en células efectoras, que están implicados en la lucha contra la infección.
Después
aclaramiento patógeno, la mayoría de las células efectoras mueren y una pequeña población
sigue siendo tan
células T de memoria, que pueden sobrevivir durante décadas [77]. En las células de
memoria ratón, AQP9
expresión era post-infección upregulated a través de IL-7 de señalización, permitiendo que
las células para importar
glicerol para la síntesis de triglicéridos. supervivencia a largo plazo de células T habían
reducido - AQP9 - /
en comparación con células + / + y la supervivencia a largo plazo de las células + / + puede
ser inhibida por
floretina [78]. Esto sugiere que la expresión AQP9 puede actuar como un interruptor
metabólico,
permitiendo la supervivencia a largo plazo de las células T de memoria, permitiendo la
síntesis de triglicéridos a
construir una reserva energética, lo que permite la supervivencia celular en condiciones
pobres en nutrientes.
De manera similar a la observada en los hepatocitos, glicerol intracelular en CD8+ las
células T se redujo en ~ 50% en el AQP9 - / - células, sugiriendo de nuevo una ruta
secundaria para la captación de glicerol.

4.1.3 AQP3
AQP3 se expresa en la piel en los queratinocitos debajo del estrato córneo (SC). Es
más fuertemente expresado en la membrana plasmática en estas células con un poco de
intracelular
etiquetado informó en las células de la capa basal [79]. La capacidad de la epidermis para
mantener la hidratación se altera en AQP3 - / - ratones. En condiciones secas, AQP3 - / -
ratones
mostró (reducidos) niveles comparables de hidratación SC a ratones de tipo salvaje,
mientras que a
humedad normal, SC hidratación fue menor en el AQP3 - / - ratones [80]. Elevado
humedad (que impide la pérdida de agua por evaporación) no corregir la deficiencia,
lo que sugiere que la función principal de AQP3 de hidratación de la piel no es proveer
agua para reemplazar que pierde por evaporación.
concentración de glicerol SC en AQP3 - / - ratones se reduce a ~ 40% de la de tipo salvaje,
sin diferencias significativas en los niveles de otros osmolitos (iones, glucosa, urea,
lactato y aminoácidos libres) [81]. Glicerol actúa como un humectante (un 'agua-retención'
osmolito), que puede ser el mecanismo por el cual se mantiene la hidratación de la piel.
Tiene
También se ha sugerido que el glicerol puede prevenir la pérdida de agua SC mediante la
inhibición de la fase de
transición de los lípidos intercelulares de la cristalina líquida a la fase sólida [82] debido
al hecho de que se rompe en una red cristalina sólida aumentar la permeabilidad al agua en
en
vitromodelos de la SC intercelular barrera lipídica [83]. La tasa de transporte de glicerol
desde la sangre a la SC se redujo en AQP3 - / - ratones resulta en la reducción de lípidos
biosíntesis [84]. Esto sugiere un papel más para el glicerol en el mantenimiento de la piel
hidratación al permitir que el mantenimiento de la barrera SC lípidos.
Otra prueba de la función de transporte de glicerol AQP3 mediada es proporcionada por el
hecho de que se encontró la administración tópica o sistémica de glicerol para corregir las
deficiencias de la piel en AQP3 - / - ratones [84].
transporte 4,2 Urea
La urea se produce en el hígado (como un portador no tóxico de nitrógeno residual) a partir
de amoniaco,
que es un producto neurotóxico de la degradación de proteínas. El amoníaco causa la
muerte celular de las
astrocitos mediante la estimulación de la transición mitocondrial permeabilidad [85]
(apertura de
promiscuos canales de la membrana mitocondrial que conduce a la apoptosis o necrosis,
dependiendo de la disponibilidad de ATP celular [86]), aunque el mecanismo por el cual
esto
ocurre no está claro. Un humano adulto excreta aproximadamente 25 g / día de urea en la
orina, y
transporte urea en el riñón es vital para el mecanismo de concentración urinaria [87]. los
papeles fisiológicos de transporte urea por AQPs son menos claros que los del agua y
transporte de glicerol.
4.2.1 AQPs Qué mamífero son canales de urea?
AQPs 7 [27], 9 [88] y 10 [33] han demostrado ser urea permeable y hay una
consenso en la literatura sobre la permeabilidad urea de estos AQPs. Por ejemplo,
AQP9 es un canal de urea en el hígado expresado en los hepatocitos en la superficie
sinusoidal.
mediciones Urea permeabilidad realizaron en membrana plasmática de hepatocitos de ratón
vesículas de AQP9 - / - y de tipo urea transportador A1 / 3 (UT-A1 / 3) - / - ratones
mostraron que
AQP9 contribuye ~ 30% de los hepatocitos de ratón permeabilidad de la membrana y una
miembro (s) de la UT-Una familia contribuye ~ 40% [91]. Sin embargo, AQP9 - / - ratones
hicieron
no demostrar ninguna deficiencia en el aclaramiento de urea a partir de hepatocitos en un
estado que
promueve la producción elevada urea hepática (alta dieta de la proteína), sugiriendo que
AQP9
y UT-A proporcionar vías redundantes para el transporte de urea a partir de los hepatocitos
a la sangre.

Sin embargo, hay pruebas contradictorias en la literatura sobre si AQPs 3 y 8 son canales de
urea. Los primeros trabajos sobre AQP3 sugirió que AQP3 rata era urea permeable, con la
expresión de AQP3 en oocitos de Xenopus aumento de urea captación doble después de 30
incubaciones hora de ovocitos con urea radiomarcada [89] o de tres veces en los ovocitos
hinchazón ensayos [18]. Otros estudios sobre AQP3 rata no encontraron transporte urea
usando ovocitos similares técnicas volumétricas [15, 17]. Estos estudios diferían en que el
primero urea 165 mM usado mientras que los dos últimos utiliza urea 20 mM. Puede ser
que el transporte AQP3 urea es tan lento que en 20 mM no induce cambios VOLUMEN
suficientemente grande para ser medidos en la escala de tiempo de un experimento de
ovocitos hinchazón (~ 1 min) o que el transporte no es lineal,
En un estudio, AQP3 humano se utilizó un control positivo para AQP permeabilidad urea. 1
mM de urea fue añadido a ovocitos AQP3 que expresan y después de una incubación de 10
minutos, los ovocitos tenía una concentración de urea intracelular de ~ 75? M (suponiendo
un volumen de ovocitos de 1 l) [19]. Esto es de ~ 10% del valor de equilibrio era de esperar,
y el hecho de que es todavía tan lejos del equilibrio incluso después de 10 minutos sugiere
que el transporte de urea a través de AQP3, mientras que no es cero, es muy lenta. Esto
puede explicar los resultados diferentes entre corto (típicamente ~ 1 min) experimentos
volumétricos y los experimentos de absorción soluto radiomarcados ya escala de tiempo.
Los primeros trabajos sobre AQP8 ratón sugirió que era urea permeable [30], mientras que
la rata
AQP8 no [29] era, tanto usando mediciones de absorción de soluto radiomarcados en
Xenopus
ovocitos. El trabajo en rata purificado, ratón y APQ8 humano en proteoliposomas sugirió
que ni de rata ni AQP8 humana fueron urea permeable [28]. Este estudio no informó
ratón de la urea debido a la permeabilidad de liposomas hinchazón discrepancias,
probablemente causadas por
el detergente iónico requiere para solubilizar ratón AQP8.
Existe interespecie considerable amino ácido variabilidad de secuencia para AQP8 (por
ejemplo,
identidad 74% entre el ser humano y AQP8 ratón, cf 94% para AQP1 y 93% para
AQP4). Curiosamente, una diferencia entre AQP8 humano y de ratón es un residuo
que se prevé que sea de poros forro (basado en un modelo de homología con bovina AQP0
[28])
y situado en el filtro AR / R, G207 (en humanos; A205 en ratón). La idea de speciesspecific
las diferencias en la permeabilidad de AQP8 es intrigante, pero se requieren estudios
realizados en paralelo en el mismo sistema experimental para validar esto.
transporte 4.3 Amoníaco
El amoníaco se produce como un subproducto de la descomposición de proteínas y
rápidamente convertida a
urea a través del ciclo de la urea hepática para prevenir la neurotoxicidad amoníaco. Es
importante que las
control del equilibrio ácido-base en el riñón, donde la síntesis de amoníaco y la excreción
están estrechamente regulado y cambiar en respuesta a ácido o alcalosis [92].
Los miembros de la subfamilia de GLP, AQPs 3 [17], 7 [16] y 9 [17], se han reportado
a ser permeable al amoníaco, como tiene AQP8 [17, 93]. También hay evidencia de
permeabilidad de amoniaco de AQPs 1, 6 y 7 usando mediciones de microelectrodos de
pH de la superficie del ovocito [16]. La relevancia fisiológica de la permeabilidad de
amoniaco de
AQPs no está claro.
AQP8 - / - ratones sólo tienen la anormalidad fenotípica muy leve de leve
hipertrigliceridemia después de tres semanas en una dieta alta en grasa (50%) [94]. AQP8 se
expresa en la membrana mitocondrial interna de los hepatocitos [95] y aumentó el
transporte de un análogo de amoníaco en AQP8-expresión de S. cerevisiae y de rata
mitocondrias de hepatocitos por tres veces. Sin embargo, AQP8 - / - ratones no muestran
ningún deterioro en el aclaramiento de amoníaco en condiciones fisiológicas o cuando
forma crónica o aguda cargados con amoniaco [96]. Esto sugiere una vía secundaria (no
AQP) para el amoníaco, que o bien proporciona la mayor parte de la permeabilidad de
amoníaco en estos
tejidos, o está regulado en knockouts AQP amoníaco-permeable. las proteínas
asociado con el sistema de grupo sanguíneo Rhesus (Rh) se han demostrado que funcionan
como
canales de amoniaco [97]. Varios de estos se expresan en el hígado [98] (RhB y
RhC) y los riñones (de nuevo RhB y RHC), donde el amoníaco tiene un papel importante en
equilibrio ácido-base [99]. Rh - / - se han generado ratones, sin embargo estos estudios
tienen
centrado en las proteínas Rh eritrocíticas [100, 101]. análisis Fenotipo de RhB y
RhC - / - organismos y dobles nocauts AQP / Rh podrían dar una respuesta.
Desmontables de AQP8 en hepatocitos primarios de rata por ~ 80% de amonio reducida
inducida por cloruro ureagénesis en un 30% y abolió aumentos de glucagón estimulada en
ureagénesis [102]. knockdown AQP8 en una línea celular túbulo proximal humano
disminuyó
la tasa de excreción de amoniaco en un 31% a pH 7,4 y por 90% a pH 6,9 [103],
lo que sugiere que la permeabilidad AQP8 amoníaco podría ser necesario para el amoníaco
renal
excreción y estar implicado en la respuesta adaptativa renal a la acidosis. Además,
regulación a la baja de AQP8 inducida por ácido en un 30% en hepatocitos primarios de
rata se
correlacionado con una reducción del 31% en ureagénesis de hepatocitos, y downregulation
AQP8
se correlacionó con reducido contenido de urea de hígado en ratas sometidas a siete días de
acidosis [104]. Estos datos apoyan la idea de un papel fisiológico para AQP8 en cualquiera
difusión membrana plasmática de amoníaco, el transporte de amoniaco mitocondrial, o
ambos, en
apoyo de manejo de amoniaco renal y hepática.
AQP3 - / - ratones tienen varias anormalidades fisiológicas incluyendo la piel reducida
elasticidad [80] y poliuria [105], pero todos estos pueden ser explicados en términos de
reducción
glicerol y permeabilidad al agua, por lo que no está claro si la permeabilidad AQP3
amoníaco
tiene ninguna función fisiológica.
AQP7 está presente en adipocitos. Se ha demostrado en los seres humanos que durante una
intensa
ejercicio, el tejido adiposo elimina el amoníaco a partir del plasma y aumenta su
relación de glutamina / glutamato [106], lo que sugiere la incorporación de amoniaco en
glutamina
a través de la glutamina sintasa como una vía de desintoxicación secundaria en apoyo de la
ciclo de la urea hepática en los momentos de amoníaco plasma elevada. Ya sea que
contribuye AQP7
a esta absorción de amoniaco aún no se ha investigado.
transporte de dióxido de carbono 4,4
La mayoría de dióxido de carbono (CO2) Producido por el metabolismo celular (~ 70%) es
transportado a los pulmones para la expulsión del cuerpo a través del bicarbonato (HCO3
-)
sistema. En pocas palabras, el dióxido de carbono se difunde fuera de las células en las que
se produce y
en el plasma. Se mueve hacia abajo de su gradiente de concentración en los eritrocitos
(sangre roja
células), donde la anhidrasa carbónica cataliza la conversión en ácido carbónico. Sobre
disociación (H2CO3H+ + HCO3
-), El HCO3
- ion se intercambia a través de la
membrana de los eritrocitos para un ion cloruro y el protón se une a la hemoglobina [87].
Se ha especulado que el CO2 transporte a través de la membrana plasmática de
eritrocitos pueden ser ayudados por las proteínas de canal [107, 108]. Existen datos
contradictorios
sobre si una AQP contribuye a este potencial de CO2 camino. AQP1 se expresa en la
membrana plasmática de los eritrocitos [109]. AQP1 humano se ha reportado que
12
aumentar el CO2 permeabilidad de oocitos de Xenopus de cuatro veces en la presencia de
anhidrasa carbónica lo que sugiere que las funciones de AQP1 como una CO2 canal [110].
Promover
trabajo descartó la posibilidad de AQP1 el aumento de la permeabilidad de la membrana del
ovocito
mediante la alteración de la composición local, lípido o de la estructura, la interacción entre
AQP1 y
anhidrasa carbónica o regular por un nativo CO2 canal mediante el uso de un mercurial
inhibidor de AQP1 (pCMBS) y el mutante C189S AQP1, que es insensible a
el mercurio [111].
AQP1 - / - eritrocitos humanos (células Colton-null) retener HCO3
- permeabilidad, pero tienen
una reducción del 60% en CO2 permeabilidad cuando se compara con eritrocitos humanos
expresando AQP1 (es decir, no Colton-null) [112]. Sin embargo, el CO2 permeabilidad de
AQP1 - / - eritrocitos de ratón de ratones knockout AQP1 no fue diferente a la de tipo
salvaje
[113].
también han dado experimentos de flujo detenido con AQP1 reconstituidas en liposomas
resultados contradictorios. AQP1 partir de sangre humana aumentó el CO2 permeabilidad de
liposomas cuatro veces [114], mientras que el ratón AQP1 no mostró aumento [113]. Esta
está de acuerdo cualitativamente con los resultados de las mediciones en los eritrocitos
intactos en que
AQP1 humano parece aumentar CO2 permeabilidad de la membrana, mientras que el ratón
AQP1 no lo hace. Esto puede ser debido a diferencias metodológicas, sino que también
plantea la
intrigante posibilidad de que AQP1 humano es CO2 permeable mientras ratón AQP1 es
no.
Es posible que si CO2 impregna AQP1, lo hace a través de la central de tetramérica
poro más que el poro agua monomérica. Simulaciones de dinámica molecular utilizando
una
variedad de métodos de muestreo mejorados y simulación imparcial sugerir
consistentemente
que la barrera de energía libre a la permeación del poro central, hidrófoba de AQP1 es
considerablemente más pequeño que la barrera a la permeación de los poros de agua [115-
117],
probablemente debido a los enlaces de hidrógeno-proteína agua en el filtro de selectividad y
NPA
sitios que deben ser interrumpidos con el fin de CO2 molécula para atravesar los poros de
agua.
Simulación de bicapas modelo sugieren que la barrera de energía libre para el paso de CO 2
directamente a través de la membrana es mucho menor que para la permeación a través de
AQP1, y
en este tipo de sistema, la expresión de AQP probablemente servir para disminuir las
emisiones de CO2
permeabilidad al reducir el área de superficie disponible para la difusión directamente a
través de la
membrana [115, 116]. Sin embargo, no está claro lo bueno de un modelo de una sola
especie
bicapa de fosfolípidos es para una membrana celular. Es posible que una bicapa simulada
contiene una mezcla de especies de lípidos junto con esteroles exhibiría diferente
resistencia a CO2 de paso, y biofísicos mediciones de CO2 difusión en
vesículas lipídicas artificiales mostraron que la adición de colesterol podría reducir la
membrana
CO2 permeabilidad hasta en 100 veces [118]. Esto concuerda cualitativamente con MD
simulaciones que incluyen colesterol [119]. Además de CO2, Simulaciones MD tienen
También sugirió que el poro central podría ser permeable al oxígeno molecular [115]
y hay alguna evidencia de que la sobreexpresión AQP1 podría acelerar celular
hipoxia [120], aunque si esto era un efecto directo o indirecto no estaba claro.
Parece evidente que AQP1 puede conducir CO2 (Posiblemente junto con AQP 0, 5, 6 y 9
y la isoforma M23 de AQP4 [16]), sin embargo, la relevancia fisiológica (si existe) de
AQP CO2 permeabilidad aún no se ha demostrado. También hay un debate similar en el
AQP campo planta de si AQPs podría contribuir a la regulación de los niveles de CO2 para
fotosíntesis [121]. Una revisión reciente dedicada a AQPs y CO2 permeabilidad de
13
membranas biológicas [122] concluyeron que “el debate sobre el mecanismo de
la difusión del CO2 continúa membrana y es difícil sacar conclusiones generales”.
Esto sigue siendo en gran medida una cuestión abierta.
transporte de peróxido de hidrógeno 4,5
Superóxido (O2
-) moléculas se producen en las mitocondrias como un subproducto de la ATP
síntesis (en particular por los complejos I y III de la cadena de transporte de electrones) y
por
la familia NADPH oxidasa (NOX) de complejos de enzimas, que se acoplan intracelular
oxidación de NADPH a la producción extracelular de superóxido (O2
-) moléculas. Alto
niveles de especies reactivas de oxígeno (ROS) derivados de estas vías son bien conocidas
para causar daño celular e incluso la muerte y ROS mitocondrial eran largas
considerada como puramente subproductos nocivos de un sistema metabólico imperfecto.
Sin embargo, el trabajo en la última década ha demostrado que son cruciales para una
variedad de
procesos fisiológicos incluyendo la adaptación a la hipoxia, la función inmune y
la regulación de la autofagia (probablemente mediada por la modificación de la cisteína
redox
residuos) [123], por lo que claramente existe una necesidad de una regulación estricta de los
niveles de ROS.
El superóxido se somete a desproporcionación al oxígeno molecular y peróxido de
hidrógeno
(H2O2), Que puede ser catalizada por la enzima superóxido dismutasa [124], y el
altamente reactivo H2O2 a continuación, puede pasar a formar una variedad de más ROS.
H2O2 y H2O tener tamaños moleculares similares, momentos dipolares y enlaces de
hidrógeno
capacidades [125], por lo tanto, no sería sorprendente encontrar que algunos podrían AQPs
transporte H2O2. La vida media para H2O2 en las células es muy corto (por ejemplo, ~ 1 ms
en
linfocitos [126]), que hacen experimentos biofísicos de los tipos utilizados para, por
ejemplo
glicerol o urea permeación muy difícil. Los ensayos de crecimiento utilizando H 2O2
transportdeficient
de levadura se utilizan normalmente, y el crecimiento reducido después de la expresión de
un AQP es
interpretado como un aumento AQP mediada en la membrana H2O2 causando la
permeabilidad
daño celular y / o alteración metabólica. Usando esta técnica, AQP8 humano, de rata
AQP1 (pero no humano) y varios mutantes de la misma, se mostró a ser H2O2 permeable
[127]. Basándose en estos datos, los autores sugirieron que todos AQPs funcionan como
H2O2
canales. No está claro si esto es una generalización válida, pero es evidente que algunos
AQPs de mamíferos son H2O2 canales.
Los estudios de imagen utilizando una novela H2O2 colorante fluorescente sensible en
transfectadas transitoriamente
células HEK293 demostraron H2O2 permeabilidad para AQP8 humana y AQP3 (pero no
AQP1). Además, AQP3 sobreexpresión en células HeLa dejó que las células
responder a la privación de suero a través de ROS mediada por la activación de la AKT
(proteína quinasa
B) vía de señalización, mientras que las células que no expresan AQP3 podría no.
desmontables de
AQP3 en una línea celular de cáncer de colon inhibió la respuesta AKT a crecimiento
epidérmico
factor de (EGF) [128], que puede iniciar ROS señalización a través de la activación de
NOX
complejos. Esto sugiere que se requiere AQP3 para la captación de H generada-NOX2O2
en la señalización de EGF.
la migración de las células T a lo largo de gradientes de quimioquinas es vital para la
respuesta inmune correctas. T
células de AQP3 - / - ratones tenían 40-60% de reducción en la distancia de migración en
respuesta a
una variedad de quimiocinas y tuvo una reducción ~ 50% en quimiocina inducida
la migración transendotelial. La activación de Cdc42, una pequeña GTPasa involucrado en
la reorganización del citoesqueleto asociado con la quimiotaxis, se inhibió completamente
en
la AQP3 - células - /. El tratamiento con extracelular catalasa, que cataliza H2O2
desglose a H2O y O2, Impidió la respuesta Cdc42 en AQP3 + / + células y
14 tratamiento con alta concentración (100? M) de H exógena2O2 recuperado tanto el
respuesta Cdc42 y la migración de células T en AQP3 - / - células [129]. En conjunto, estos
datos
sugieren que AQP3 se requiere para la absorción de H extracelular2O2 (Probablemente
NOXgenerated)
en la respuesta quimiotáctica de células T.
Los niveles intracelulares de ROS pueden ser elevados en células de leucemia y NOX-
derivan ROS
puede activar las vías de supervivencia celular de leucemia. En una línea celular de
leucemia, shRNAmediated
desmontables de AQP8 reduce y la sobreexpresión aumenta intracelular
H2O2 contenido, así como H2O2 la captación después de 10 minutos en 100? M H2O2.
Además,
la captación de glucosa celular y la proliferación se correlacionaron con intracelular H2O2 y
expresión AQP8 [130], lo que sugiere que AQP8 puede facilitar aumento del metabolismo
y la proliferación en la leucemia.
AQP8 también se expresa en las membranas mitocondriales internas (IMM) en hepatocitos.
Desmontables de AQP8 por 60% usando siRNA en una línea celular de hepatocitos causado
un doble
aumento en la concentración de ROS mitocondrial y una disminución del 45% en H2O2 la
producción en
mitocondrias aisladas. Esto se correlacionó con una despolarización 80% de la
membrana mitocondrial, que era reversible por la ciclosporina A (un inhibidor de la
transición mitocondrial permeabilidad) o un antioxidante mitocondrial, y un ~ 30%
reducción de la viabilidad celular [131]. Esto sugiere que AQP8 mediada por H2O2 liberar
de
mitocondria hepática actúa como un mecanismo para minimizar el estrés oxidativo
mitocondrial.
AQP11 se localiza en la ER en el túbulo proximal renal. La mutación C227S de
AQP11 causó lesiones túbulo proximal y la insuficiencia renal eventual en ratones [132].
Ratones
heterocigota para el mutante C227S AQP11 estaban predispuestos a inducida por glucosa
acumulación de ROS en el túbulo proximal y la reducción de la función renal.
La inhibición de la captación de glucosa por la florizina inhibidor no específico o
antioxidante
(Sulforafano) de tratamiento fue capaz de proteger la función renal. Este efecto fue
reproducida en una línea celular túbulo proximal, en el que desmontables de siRNA
mediada
AQP11 aumentó intracelular doble concentración de ROS en ausencia de glucosa
y cuatro veces en la presencia de glucosa [133]. No está claro si era AQP11 el control de la
acumulación de ROS intracelular, actuando como un ER H2O2 canal, o si esto era un efecto
indirecto.
En conjunto, estos ejemplos proporcionan evidencia clara de H mediada por AQP2O2
permeabilidad de la membrana, y sugieren papeles fisiológicos en redox señalización a
través de la captación de H NOX-derivados2O2 y en mecanismos celulares para minimizar el
estrés oxidativo.
Una revisión reciente de H2O2 permeabilidad de AQPs sugirió que rata AQP1 puede ser
permeable a H2O2 mientras que AQP1 humano no es [134]. Los autores del estudio citado
[127] sugieren que la diferencia se debe a las diferencias en la membrana plasmática
localización, aunque la expresión de la superficie no se midió directamente. Esta diferencia
es especialmente interesante dada la especulación de que hemos tomado acerca de las
diferencias en CO2 permeabilidad entre las posibles diferencias en humano y ratón y AQP1
AQP8 permeabilidad de urea entre las especies y eleva el punto importante que a pesar altos
niveles de conservación entre AQPs de diferentes mamíferos, no están
exactamente las mismas proteínas (por ejemplo rAQP1 y hAQP1 difieren por 18 residuos),
y directa comparación entre AQPs de diferentes mamíferos en diferentes sistemas
experimentales no siempre puede ser apropiada.
5. El papel fisiológico de AQP6: Un inusual AQP
AQP6 se expresa principalmente en los epitelios del riñón, donde se expresa sólo en
membranas intracelulares. se observó inmunotinción en intracelular podocitos
vesículas, vesículas sub-apical en las células del túbulo proximal rectas, y en ambos sub-
apical y dominios sub-basolateral dentro del tipo A (ácido secretoras) células intercaladas
en la conducto colector [135]. AQP6 tiene una baja permeabilidad al agua intrínseca: La
permeabilidad al agua de la membrana de Xenopus oocitos que expresan AQP6 se
incrementó menos de tres veces [22, 136], y en algunos experimentos, no en absoluto [25,
26]. A diferencia de otros miembros de la familia AQP, mercurio aumenta más que inhibe
la permeabilidad al agua AQP6, que es reversible aumento de aproximadamente diez veces
en HgCl2 solicitud. El pH bajo activó una reversible la permeabilidad anión de AQP6 [22],
que también se demostró que era diez veces ~ más permeable a nitrato de cloruro de [137].
En conducto de rata recogida, células intercaladas, AQP6 co-localiza con H+-ATPasa en
vesículas intracelulares [22], y en el células intercaladas de ratas-alcalinos cargado, mRNA
AQP6 y los niveles de proteína aumentaron después de una semana [138]. Estos resultados,
junto con el pH-activación de agua AQP6 y permeabilidad anión sugieren la participación
de AQP6 en el equilibrio ácido-base en el renalconducto colector. Sin embargo la falta de
experimentos in vivo con knockouts AQP6 o mutaciones naturales se opone a conclusiones
significativas acerca de la papeles fisiológicos de AQP6.
6. permeabilidad a los iones de AQPs: Una controversia no resuelta
AQPs apoyar los movimientos a granel de fluido, dando de alta permeabilidad al agua para
membranas que secretan osmolitos. Estos osmolitos son a menudo iones (por ejemplo, Na +,
K+ y Cl-) Y esto se refleja en el hecho de que varios AQPs forman macromolecular
complejos con los canales iónicos y transportadores [41]. Quizás una manera más eficiente
para la naturaleza para lograr este doble permeabilidad sería tener ambos iones y agua pasan
a través del mismo canal. De hecho se ha observado que varios canales de iones puede
el agua de transporte [38], pero también se ha sugerido que algunos pueden funcionar como
AQPs canales iónicos.
La permeabilidad a los iones sensible al pH de AQP6 está bien establecido, y es probable
que la poros monomérico es la vía de iones dado que una mutación puntual de un poro-
revestimiento residuo de AQP6 abolió la permeabilidad de iones [137] y las mutaciones
AQP6-imitando de un residuo de aminoácido de poros revestimiento de AQP5 confirió
anión permeabilidad [139]. Ahí es también cierta evidencia de que la planta de AQP
nodulin-26 a partir de soja puede actuar como una por voltaje, el canal de iones anión
sesgada [140, 141].
Más controvertida es la idea de que el quinto poro formado por cuatro en el eje de la
tetrámero de AQP1 puede funcionar como un canal catiónico. En oocitos de Xenopus,
heterólogo expresión de AQP1 humana condujo a una permeabilidad de cationes PKA
activada probablemente mediada por la fosforilación de AQP1 [142] y un catión activado
por cGMP permeabilidad a través de la unión directa de cGMP a la C-terminal de AQP1
[143]. PKC
Se demostró la actividad para aumentar la permeabilidad de cationes de AQP1 en oocitos de
Xenopus través de la fosforilación directa de AQP1 en los residuos T157 y T239 [144].
Recientemente mostró que se requiere la fosforilación en estos sitios por PKC para inducida
gatillo translocación de AQP1 a la membrana plasmática [145], por lo que este puede
representar más moléculas AQP1 en la membrana en lugar de un aumento en la
permeabilidad de cationes o abierta probabilidad de un solo canal. La fosforilación de un
residuo de tirosina (Y253) dieciséis en la cola C-terminal de AQP1 fue demostrado
recientemente que se requiere para la activación por cGMP [146]. La corriente de cationes
activada por cGMP se verificó para AQP1 purificado en planas membranas artificiales y la
permeabilidad al agua AQP1 pCMBS inhibidor hicieron no inhibe la permeación de iones,
lo que sugiere que las vías de agua y de iones a través AQP1 no son los mismos [147].
Además, mutaciones puntuales a residuos de revestimiento de la tetramérica poro
propiedades alteradas de conductancia [146]. Se encontró que la probabilidad de apertura a
ser muy pequeños (<10-6) En el sistema planar bicapa [147], lo que plantea dudas sobre la
relevancia fisiológica de este conductancia de cationes. Este estudio sugiere que esta muy
baja probabilidad podría reflejar un mal plegamiento o la degradación de proteínas artefacto
en lugar de una
función “real” de AQP1. Además, APQ1 humano expresado en células HEK293 se no
inducir un catión de conductancia-fondo por encima cuando las células se cargaron con ya
sea cGMP o análogos de los mismos [148]. Además, después de que el informe inicial de
AQP1 catión permeabilidad por Yool et al, varios laboratorios informaron de ser incapaz de
replicar este resultado en el mismo sistema experimental (y en algunos casos, con
exactamente el mismo constructo AQP1) [149]. Alta variabilidad en la respuesta a
forskolina ovocito fue
También informó. Se sugirió que la discrepancia puede deberse al protocolo para
la elección de los ovocitos 'saludables' en los que realizar experimentos. Una de corte para
ovocito potencial de membrana se utiliza rutinariamente para esto. Yool et al elegir ovocitos
con una potencial <-20 mV, mientras que otros se utiliza una línea de corte -35 mV. Si
AQP1 sí actúa de hecho como un canal catiónico es plausible que podría causar una ligera
despolarización, dando lugar a ovocitos en los que AQP1 está actuando como un canal de
iones para ser falsamente excluidos como insalubre. Rata células del plexo coroideo, que
expresan fuertemente AQP1, se encontró que tenían una cGMPactivated conductancia
catión que fue abolida por tratamiento con AQP1 siRNA.
La activación de la corriente por el péptido natriurético auricular (ANP), que señala a través
guanilato ciclasa, el transporte de fluido inhibido-basal a apical. La contribución de AQP1
a esta inhibición no fue confirmado directamente, aunque Cd2+, Que ha demostrado inhibir
cGMP inducida por la conducción de cationes de AQP1, invertido la inhibición de fluido
transporte [150]. ANP y un análogo de GMPc se muestra también para regular al alza
apical-tobasal el transporte de fluidos en las células epiteliales del pigmento retinal
cultivadas, pero esto se invirtió
por un inhibidor de la permeabilidad al agua AQP1 [151].
Está claro que, en virtud de la derecha conjunto de circunstancias, AQP1 puede actuar como
un canal de cationes,
con la vía de ion probablemente que reside en el poro central formado por tetramérica
montaje. Sea o no este ion conductancia tiene restos relevancia fisiológica una cuestión
abierta. Sin embargo, el agua acoplada y el movimiento de iones son vitales para varios
procesos patofisiológicos, incluyendo la angiogénesis tumoral y la migración celular [152]
y la epilepsia [153], por lo que sigue siendo una posibilidad intrigante que están realizando
una AQPs
Función doble.
7. celular Reglamento de volumen por AQPs
Muchas células tienen la capacidad de modular su tamaño físico. Esto se logra mediante la
importación o exportación de osmolitos el fin de mover el agua en o fuera de la célula por
ósmosis. Reguladora de disminución del volumen celular (RVD) es mediada por cloruro de
potasio y flujo de salida de taurina y aumento del volumen celular reguladora (RVI) por
afluencia de sodio [154].
AQPs juegan un papel en la mediación del movimiento del agua osmótica en la regulación
del volumen celular
[155], pero hay cierta evidencia de que su papel puede ir más allá de la actuación como un
pasivo poro agua.
El receptor de potencial transitorio vainilloide tipo 4 activados por estiramiento (TRPV4)
canal es Ca2 +-biased canal catiónico no selectivo (NSCC) que se activa por célula
hinchazón [156] y se ha implicado en las respuestas celulares a los estímulos osmóticos
[157].
En algunos tipos de células TRPV4 ha demostrado proporcionar un Ca2 + señal que se
correlaciona con la activación de la K+ y Cl- canales responsables de la disminución en
celular osmolalidad asociado con RVD [157, 158]. En la glándula salival humana y murina
células, TRPV4 tiene una interacción funcional con AQP5; en las células knockout AQP5,
la afluencia de calcio hipotonicidad inducida a través de TRPV4 fue atenuada y posterior
RVD fue abolida. Hipotonicidad también aumentó la expresión de la superficie celular de
ambos TRPV4 y AQP5 y aumentaron su co-localización [159]. Esto sugiere un papel para
AQP5 en la regulación de la expresión de superficie TRPV4 o hipotonicidad inducida
actividad.
En otro ejemplo, el RVD de esperma de AQP3 - / - ratones fue inhibido en comparación
con los ratones de tipo salvaje y los ratones muestran disminución de la fertilidad [160]
[161]. A la entrada en
el tracto reproductor femenino, los espermatozoides normalmente encontrar una
disminución en extracelular osmolalidad, que se cree que es la señal que activa la motilidad
del esperma [160].
Sin embargo, este estrés hipotónico también causa la inflamación celular que, si no se
corrige por RVD, conduce a la fertilización deteriorada, probablemente debido a una
flexión excesiva de la cola de los espermatozoides dentro del útero [161]. Si AQP3
simplemente estaba actuando pasivamente como un canal de agua, RVD no sería abolida en
AQP3 - / - esperma sino más bien la escala de tiempo en el cual la célula alcanza el
equilibrio osmótico se incrementaría. Una posible explicación para la reducción fertilidad y
RVD alterado en AQP3 - / - ratones, por tanto, es que AQP3, ya sea solo o como parte de
un complejo macromolecular que está interrumpido por nocaut AQP3, está involucrado en
la ruta de señalización que activa RVD en el esperma.
En un ejemplo adicional, cuando se expone a una solución extracelular hipotónico, culta
células renales corticales conducto colector (CCD), que no expresan endógenamente AQP2,
aumentado en proporción al cambio en la osmolaridad extracelular, pero no exhibió
RVD. Sin embargo, cuando se transfectan con AQP2, estas células mostraron un RVD de
aproximadamente el 40%. El encogimiento fue mediada por Ca2 + afluencia a través de
TRPV4, que activado Ca2 +dependiente de K+ y Cl- canales y Ca2 +dependiente de Ca2 +
liberar de almacenes intracelulares. En las células CCD renales que expresan AQP2, el
estrés hipotónico causada translocación de TRPV4 a la membrana plasmática. Esta
respuesta no se produjo en
células AQP2-negativas. Cuando TRPV4 fue pre-translocado a la superficie celular antes de
la exposición hipotónica, RVD se recuperó en células AQP2-null, que muestra que no es
simplemente el alta permeabilidad al agua de AQP2 que permite RVD. Sin embargo, no lo
hicieron parecen ser cualquier co-localización entre TRPV4 endógeno y sobreexpresado
AQP2 en este sistema, ya sea antes o después de choque hipotónico, indicando un funcional
en lugar de la interacción física [162]. Estas observaciones sugieren que las formas AQP2
parte de una vía sensorial y de señalización que da como resultado la translocación TRPV4,
posiblemente a través de la detección de la osmolalidad extracelular.
En una línea celular de cáncer de la nasofaringe, las corrientes de cloruro hinchazón
inducida podrían ser inhibida por siRNA desmontables mediada de AQP3, la aplicación
extracelular de CuCl2 (Un inhibidor de AQP3 no específica) o la inyección de anticuerpos
AQP3 a través de la grabación pipetas. AQP3 también co-inmunoprecipitó con el canal de
cloruro ClC3 en este sistema [163]. El efecto de los tratamientos de inhibición de corriente
en AQP3-ClC3 interacción o ClC3 localización subcelular no se investigó, pero estos datos
sugiere un papel para AQP3 en RVD cloruro de eflujo en estas células, posiblemente
mediado a través activación o la localización del canal de cloruro ClC3.
Se ha sugerido que AQPs podrían actuar como sensores directos de gradientes osmóticos
por el acoplamiento de los cambios conformacionales de la proteína a un gradiente de
presión dentro del poro [164]. Este argumento se basa en la idea de la presión hidrostática
dentro del poro y no está claro que la aplicación de la mecánica de fluidos clásicos es
aplicable a un sistema típicamente consiste en <10 moléculas de agua. Sin embargo, es una
idea interesante, y
En conjunto, estos ejemplos apoyan claramente la idea de una función de señalización o
sensorial para AQPs en la regulación del volumen celular más allá de un mecanismo de
conducción de agua pasivo.
8. Regulación de la membrana localización de la proteína por AQPs
Existe alguna evidencia de que la expresión de uno AQP puede regular la expresión,
localización o membrana tráfico de otros AQPs y de otras proteínas de membrana.
AQP3 - / - ratones tienen poliuria y una concentración urinaria defecto. En la cortical
conductos colectores de los ratones knockout, expresión AQP2 apical se redujo en
comparación con controles y localización AQP4 basolateral estaba completamente ausente.
A diferencia de, colector medular niveles de conductos de ambos AQP2 y AQP4 no fue
diferente entre
De tipo salvaje y AQP3 - / - ratones [105]. Esto puede reflejar un requisito de AQP3 de
expresión o el tráfico de AQPs 2 y 4 en ciertos tipos de células, aunque estos observaciones
también podría ser debido a la regulación de AQPs 2 y 4 en respuesta a la fenotipo poliuria.
AQP11 - / - ratones desarrollan la enfermedad poliquística del riñón (PKD). En AQP11 - / -
ratones, policistina 1 (PC1), una proteína a la que la pérdida de mutaciones de función están
asociados con PKD autosómica dominante, se reguló doble. Sin embargo, la membrana
plasmática localización de PC1 fue casi completamente abolida y PC1 era diferencialmente
glicosilada en el AQP11 - / - ratones en comparación con AQP11 + / + [165]. La
glicosilación de algunas proteínas de la membrana es un paso crucial en el plegamiento de
proteínas y el paso a través de la sistema de control de calidad ER [166]. Otras proteínas de
membrana (AQP1 y PC2) eran correctamente glicosilada, lo que sugiere que esto era un
efecto específico PC1. Estos datos sugiere que AQP11 puede regular la expresión de la
superficie de PC1, posiblemente por mediar una interacción con una glicosiltransferasa o
parte del control de calidad ER sistema. Las interacciones entre el canal catiónico activados
por estiramiento TRPV4 y ambos AQP2 y AQP5 se ha discutido en la sección 6.
Brevemente, la expresión de estos AQPs era requerida para la translocación de la hipotonía
inducida de TRPV4 al plasma membrana asociada con RVD [159, 162]. Puede ser que en
estos sistemas, AQPs y TRPV4 están presentes en las mismas vesículas, pero interactúa el
tráfico de maquinaria sólo con el AQP. Recientemente hemos descrito translocación
hipotonía inducida de
AQP1 en células HEK293 [145] y AQP4 en astrocitos primarios de rata [167], así que esto
puede reflejar un mecanismo de regulación general por el cual AQPs pueden mediar la
subcelular localización de otras proteínas de membrana.
La histona metiltransferasa Dot1a ha demostrado inhibir la expresión de AQP5 en células
renales murinas. Llaman a cabo Dot1a condujo a la expresión AQP5 en estas células. Los
nivel total de expresión AQP2 se mantuvo sin cambios en presencia de AQP5, pero AQP2
el tráfico de membrana se deteriora. Además de esto, la co-transfección de AQP5 y AQP2
en células IMCD3 expresión reducida superficie AQP2 en comparación con la
transfecciónde AQP2 solo, lo que sugiere que AQP5 puede regular localización AQP2.
Además, AQP2 y AQP5 co-inmunoprecipitada uno con el otro, lo que sugiere una relación
directa interacción física [168]. La estequiometría de los complejos de AQP2 / AQP5 no era
investigado, por lo que no está claro si la interacción era entre AQP2 y AQP5
homotetrámeros, o mediante la formación de AQP2 heterotetrámeros / AQP5 (que es una
mecanismo de regulación establecido empleado por algunos AQPs de plantas [169]).
9. AQPs y adhesión célula-célula
La adhesión de las células entre sí es un proceso vital que abrió el camino para la evolución
de organismos multicelulares, y permite la formación de la variadas y complejas estructuras
que conforman la anatomía de los animales y las plantas modernas.
Hay evidencia de que algunos AQPs pueden realizar una función de adhesión célula-célula
por la formación de una interacción directa con un componente de la membrana en una
célula adyacente (posiblemente otra molécula AQP). Esto está bien establecido para AQP0
y no es objeto de controversia evidencia de que AQP4 también puede ser capaz de realizar
esta función.
9.1 AQP0
AQP0 (también llamado MIP, para la lente de proteínas de membrana intrínseca) se expresa
principalmente
en células de fibra óptica, que son células del ojo especializado para formar un apretado-
packed capa transparente que dispersa una cantidad mínima de luz incidente para apoyar la
función del ojo [8]. Es la proteína de membrana más altamente expresado en estos células
(45% en molaridad de todas las proteínas de membrana de fibra lente en ratones [170]).
AQP0 tetrámeros ensamblan en grandes matrices en microdominios de unión [171], los
cuales dinámicamente asociar y disociar en los bordes de la matriz, con solamente un
estimado 1% tetrámeros libres existentes en un momento dado, se mide por la fuerza
atómica de alta velocidad microscopía de membranas de fibra lente ovejas aisladas [172].
estudios Knockout y una variedad de origen natural mutaciones AQP0 en los seres humanos
y ratones [8] muestran consistentemente que la pérdida de función AQP0 en las causas
células de fibra óptica cataratas, probablemente a través de la pérdida del paquete de
estanqueidad de las células necesarias para reducir al mínimo la luz
dispersión. También se ha sugerido, basado en el análisis de las lentes de AQP0 - / - y - / +
ratones, que AQP0 es vital para la creación del gradiente de índice de refracción de la lente
requerido para minimizar la aberración esférica, a través de un mecanismo desconocido
[173].
Un análisis cualitativo de adhesión célula-célula fibra lente en AQP0 - / - ratones mostró
que
la expresión transgénica de AQP1 en el AQP0 - / - modelo no podía rescatar la adherencia
fibra
[4], ni los defectos de la transparencia del cristalino correctas [174], el apoyo a la idea de
que el papel de AQP0 en la fisiología de la lente no está relacionada con la permeabilidad al
agua de la membrana. Además, expresión de AQP0 en varios en sistemas de modelos in
vitro muestran consistentemente que es capaz para mediar en la adhesión célula-célula
[175]. biofísico de trabajo desde el principio proteoliposomas AQP0 demostró que es capaz
de AQP0 mediar en las interacciones con membranas que contienen lípidos cargados
negativamente [176]. Eso Se sugirió que esto es debido a la presencia de varios cargado
positivamente (y no con carga negativa) los residuos en los bucles extracelulares A, C y E
de AQP0. en humanos AQP0 esta superficie cargada positivamente se compone de dos
residuos de arginina (R33 y
R113) y tres residuos de histidina (H40, H122 y H201).
Un origen natural AQP0 mutación, R33C, mostró una reducción en la adhesión célula-
célula de 18, 27 o 34% (dependiendo de la metodología) para el mutante cuando se compara
con eltipo silvestre AQP0, a pesar de ningún efecto sobre la localización de membrana
[177]. Esto sugiere que eliminación de la carga positiva conservado en bucle A tiene un
efecto perjudicial sobre AQP0- la adhesión celular mediada, apoyando la idea de una cara
cargada positivamente de AQP0 que forma interacciones electrostáticas con moléculas
cargadas negativamente en un adyacente membrana. También es posible que la adición del
grupo sulfhidrilo de la cisteína facilita una novela modificación post-traduccional que
inhibe las interacciones adhesivas.
Los análisis cristalográficos de AQP0 sugieren un modelo diferente de cellcell mediada
AQP0 adhesión en el que las moléculas de AQP0 sobre las células adyacentes interactúan
entre sí directamente. Una estructura cristalina de electrones de cristales de dos capas de 2D
AQP0 sugirió que dos moléculas AQP0 en las membranas adyacentes podrían ser capaces
forma una interacción
a través de sus bucles extracelulares, mediada principalmente por residuos de prolina [178].
Seguir trabajo mostró que la forma en la que los dominios extracelulares AQP0 (ECD)
interactuar en estos cristales es fuertemente dependiente de la del grupo de cabeza de los
lípidos co-cristalizado [179]. Se ha sugerido, basado en la comparación de la estructura
electrónica con un 3D estructura de rayos X de longitud completa AQP0 [180], que un
cambio conformacional en bucle A inducida por truncamiento proteolítica de la C-terminal
(que se observa in vivo [8]) podría facilitar la unión directa de moléculas de AQP0 el uno al
otro [181]. sin embargo análisis bioquímico mostró que el truncamiento de cualquiera de los
extremos N- o C-terminal no tiene efecto sobre las propiedades de adherencia de AQP0
[182].
Los experimentos con una proteína de fusión que consiste en las secuencias de los tres
bucles extracelulares de AQP0 fusionados directamente adyacentes entre sí mostraron que
esta proteína fue capaz de inhibir competitivamente AQP0 mediada por adhesión célula-
célula [183].
Dada la ubicación relativa de los tres bucles en la AQP0 plegar y la falta de de anclaje
transmembrana en la proteína de fusión, es muy poco probable que esta proteína es
estructuralmente similar a la ECD de AQP0 intacto. El hecho de que, a pesar de ello,
funciona como un inhibidor de AQP0 adhesión célula-célula mediada por no soporta la idea
de la adhesión siendo mediada por la unión directa AQP0-AQP0, lo que dependerá de la
estructura de la ECD. Lo hace, sin embargo, apoyan la idea de la mediación a través de una
(estructura independiente) la interacción electrostática entre la ECD AQP0 cargado
positivamente y un componente de la membrana cargada negativamente en una celda
adyacente.
9.2 AQP4
AQP4 es un agua selectiva AQP expresa principalmente en las células gliales (astrocitos y
las células de Müller de la retina) del sistema nervioso central y las membranas
basolaterales de renales células del túbulo colector [155]. AQP4 existe en dos isoformas
principales (aunque hay está surgiendo evidencia de otras isoformas [184]). Estos son los
largos (323 aminoácidos) isoforma M1 y los más cortos (301 aminoácidos) M23 isoforma,
el nombre de la posición de la metionina N-terminal. De manera similar a AQP0, la
isoforma de M23 es capaz de AQP4 formar grandes conjuntos supramoleculares (OAPs
denominados de matriz ortogonal de partículas).
Electrón cristalografía de cristales de dos capas de 2D AQP4-M23 sugirió que
moléculas AQP4 sobre las células adyacentes podrían interactuar a través de sus ECDs de
una manera similar a la
que sugirió para AQP0, de nuevo mediada por la interacción entre los residuos de prolina
[185]. En el mismo estudio, AQP4-M23 se muestra para facilitar las interacciones célula-
célula entre fibroblastos de ratón de adhesión deficiente. Este resultado fue corroborado en
una sistema experimental similar, y se demostró que la adhesión generada por AQP4-
M23 fue considerablemente más débil que por AQP0. Además, AQP4-M1 era mostrado no
para facilitar la adhesión [175]. Otro estudio en la misma experimentales sistema no ha
podido reproducir estos resultados y, además, no logró encontrar AQP4- la adhesión
mediada en glia ratón primaria o membrana de la célula CHO transfectadas AQP4 vesículas
[186].
La transfección de AQP4-M23 en una línea celular de glioblastoma (D54, que carece
expresión AQP4 endógeno) aumento de la adhesión de las células al colágeno, fibronectina,
laminina, vitronectina y sustratos [187]. Es evidente que esto no se debe a ningún
potenciales propiedades de adhesión célula-célula de AQP4 y la falta de especificidad de
sustrato hace que este resultado difíciles de interpretar. Sin embargo, AQP4-M23 se
demostró que preferentemente localizar a los sitios de adhesión a la membrana de sustrato
[188], por lo que es posible que AQP4-M23 podría facilitar la agregación o localización de
las moléculas de adhesión, teniendo de ese modo un efecto indirecto sobre la adhesión
celular, tanto a otras células y a componentes de la membrana basal.
10. Conclusión
AQPs mamífero se conocen principalmente como facilitadores de procesos fisiológicos
a través de bi-direccional, el transporte de agua pasivo. Hemos revisado la evidencia
lo que demuestra que esto está lejos de todo lo que hacen. AQPs facilitan procesos
fisiológicos
por mediación de la difusión de solutos pequeños, neutros. Esto se entiende mejor por
AQPmediated transporte de glicerol que facilita el metabolismo de glicerol, ciclismo de
triglicéridos
y la hidratación de la piel. AQPs también tienen un papel en la regulación del volumen
celular y es cada vez más claro que esta función se puede extender más allá de simplemente
actuar como un poro agua pasiva y pueden implicar la transducción de señales mediada por
AQP, aunque el mecanismos que pueden estar implicados en este no se entienden bien.
Muchos tipos de células expresar varios miembros diferentes de la familia AQP y hay
nuevas pruebas que los diferentes usuarios pueden interactuar entre sí ya sea física o
funcionalmente. La participación de AQPs en la fisiología humana y celular
homeostasis va mucho más allá de su actuación como simples canales de agua con
implicaciones para una gama de procesos fisiológicos y condiciones patofisiológicas.
Expresiones de gratitud
Este trabajo fue apoyado por la Ingeniería y Ciencias Físicas de Investigación
a través de un Centro de Formación Doctoral organización molecular y la Asamblea en
células studentship a PK (Grant no: EP / F500378 / 1). RMB reconoce la financiación de la
Biotecnología y Ciencias Biológicas de Investigación (BBSRC, a través de subvenciones
BB / I019960 / 1, BB / K013319 / 1 y BB / L502194 / 1) y el innovador Medicamentos
Empresa común con arreglo Acuerdo de subvención n ° 115583 a la ND4BB HABILITAR
Consorcio.