Anda di halaman 1dari 40

PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATÓLICA DEL ECUADOR

FACULTAD DE MEDICINA

GUIA DE LABORATORIO
CLINICO

Dra. Celia Bowen Fernández


2010

1
INDICE
INTRODUCCIÓN…………………………………………………………..………3
PRÁCTICA N° 1
Bioseguridad en el Laboratorio Clínico…………………….……………………4
PRÁCTICA N° 2
Punción venosa y capilar…………………………………………………………8
PRÁCTICA N° 3
Soluciones y diluciones…………………………….……………………………13
PRÁCTICA N° 4
Elemental y microscópico de orina…………………..…………………………18
PRÁCTICA N° 5
Coprológico y coproparasitario………………………...………………..………25
PRÁCTICA N° 6
CARBOHIDRATOS: Determinación de glucosa en sangre…….……………30
PRÁCTICA N° 7
LIPIDOS: Determinación de colesterol en sangre……………………….……35
PRÁCTICA N° 8
Electroforesis………………………………………………………………...……38
BIBLIOGRAFÍA…………………………………………………………………...41

2
INTRODUCCIÓN

El laboratorio Clínico constituye una herramienta primordial para el profesional


médico, ya que diferentes patologías son diagnosticadas por medio de las
determinaciones analíticas en muestras biológicas empleadas que permiten
tener un diagnóstico más acertado y poder dar un eficaz tratamiento a las
enfermedades de los pacientes con mayor precisión y seguridad.

Los estudiantes de segundo nivel de la Pontificia Universidad Católica del


Ecuador necesitan desde muy temprano conocer que la carrera de Medicina
está muy relacionada con el mundo del Laboratorio, por ello es necesario que
ellos vayan desarrollando destrezas y habilidades que van a ser de mucha
utilidad a lo largo de la formación académica y durante la profesión médica.

3
PRÁCTICA No. 1

BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO CLINICO

OBJETIVO
Conocer y aplicar las normas de bioseguridad para evitar accidentes y
posibles riesgos de contagio.

CONTEXTUALIZACIÓN

Los laboratorios de análisis clínicos constituyen un área en la cual coinciden


muchos agentes potencialmente agresivos y de contagio, tanto para la salud
del personal como para las propias instalaciones. Debido a que todos los
procedimientos analíticos pueden ser riesgosos de acuerdo al manejo de
nuevas técnicas, productos químicos y biológicos, así como de los equipos.
Para ello se han implementado las normas de bioseguridad en el
laboratorio que son un conjunto de medidas y normas preventivas,
destinadas a mantener el control de riesgos laborales procedentes de
agentes biológicos, físicos o químicos.

PRECAUCIONES UNIVERSALES:

1. Acceso restringido, permitido solo a personas autorizadas


2. Prohibido usar el celular, comer, fumar, beber o almacenar comidas o
cualquier objeto de uso personal dentro del laboratorio.

4
3. Usar ropa protectora de trabajo como mandil, mascarillas, guantes (de
látex) la misma que debe ser retirada antes de abandonar el laboratorio.
Botas y gorra en casos de exposición a microorganismos de alta
peligrosidad.

4. Antes de iniciar cualquier actividad en el laboratorio asegurarse de que


en la mano no existan escoriaciones. En caso contrario cubrir las
mismas de manera adecuada.

5. Cambio inmediato de los guantes en caso de rotura y lavado de manos.

6. No tocarse la boca ni los ojos con las manos enguantadas


5
7. Evitar la formación de aerosoles y gotas.

8. Manejo adecuados de los objetos corto punzantes. Una vez utilizados se


deben almacenar en recipientes rígidos y eliminarse luego de ser
decontaminados.

9. Terminantemente prohibido pipetear con la boca. Debe utilizarse los


pipeteadores automáticos.

10. Decontaminar las superficies de trabajo una vez terminado el trabajo


diario.Se recomienda el uso de hipoclorito de sodio al 10%.

6
11. Evitar conductas inseguras y de riesgo.
12. Manejo adecuado de los desechos desde el lugar de origen y realizar
tratamiento adecuado especialmente de los infecciosos.

13. Los desechos de los fluidos corporales pueden eliminarse por las
cañerias habituales una vez que hayan sido decontaminados.
14. Lavarse las manos con abundante agua y jabón luego de haber
terminado el trabajo diario.

15. Plan de inmunizaciones para el personal de laboratorio

ACTIVIDAD 1:
 Poner en práctica las normas anteriores durante cada sesión de
laboratorio.
 Realizar un video de las normas de bioseguridad y subirlo a la
plataforma Moodle.

7
PRACTICA No. 2

PUNCIÓN VENOSA Y CAPILAR

Objetivos:
1. Conocer la técnica para la obtención de muestras de sangre como
medio para mantener la integridad del profesional de salud y la del
paciente
2. Adiestramiento adecuado para el manejo de instrumentos necesarios en
la toma de muestras sanguíneas
3. Aplicar las precauciones universales de bioseguridad en el laboratorio
con respecto al manejo de líquidos biológicos y material infeccioso
4. Conocer los usos de los diferentes anticoagulantes empleados en el
laboratorio

Fundamento teórico:
La relativa facilidad con que se obtiene la sangre venosa hace de esta técnica
el principal método de obtención de sangre en los laboratorios de análisis
clínicos. A partir de la sangre sin anticoagulante se obtiene suero, si la sangre
contiene anticoagulante, se obtiene plasma. Del plasma forma parte el
fibrinógeno, sustancia de la que carece el suero.

Materiales:
-Torniquete
-Algodón
-Alcohol antiséptico (isopropílico al 70%)
-Jeringuillas
-Sistema vacutainer: capsula, tubos alvacío, agujas de toma múltiple
- Lancetas
-Tubos capilares heparinizados
-Plastilina

Técnica de la punción venosa:


1. Se identifica al paciente comprobando que la solicitud de exámenes
corresponda al mismo
2. Si se solicita una muestra en ayunas, debe comprobarse que
efectivamente el paciente no ha ingerido alimentos
3. Hay que dirigirse al paciente e informarle sobre el procedimiento a que
va a ser sometido. Se debe tranquilizarle, eliminando en lo posible su
tensión.
4. Se ha de colocar adecuadamente al paciente, según éste se encuentre
sentado, o en decúbito prono, para tener acceso fácil y cómodo a la fosa
antecubital.
5. Hay que preparar todo el material, incluidos los tubos para recogida de
la muestra, el torniquete, los objetos que se emplean para limpiar la piel,
las jeringas, cuando sea necesario, la aguja estéril para extracción de
sangre y dispositivo utilizado para fijar la aguja al tubo de extracción al
vacío.
6. Se solicita al paciente que cierre el puño para que las venas resulten
más palpables.

8
7. Se seleciona una vena adecuada para la punción. Se prefieren las venas
de la fosa antecubital, en particular la cubital interna y la cefálica.
También pueden utilizarse las venas de la muñeca, el tobillo y la mano.
Si existiera ya un catéter intravenoso en un brazo, se utilizará el otro
para la extracción de la muestra.

8. Preparar la cápsula insertando la aguja pero dejando un poco flojo la


capucha de la parte externa de la misma para retirarlo al momento de la
punción.
9. Se aplica un torniquete varios centímetros por encima de la zona de
punción (aproximadamente a cuatro dedos sobre el doblez del brazo).
No hay que dejar nunca el torniquete más de 1 minuto. En casos
excepcionales no debe usarse el torniquete, por ejemplo cuando en el
pedido está el Calcio.

10. Se limpia la zona de la venopunción con una torunda embebida en


solución en alcohol antiséptico. Se comienza en el punto de la punción y
se prosigue la limpieza hacia fuera siguiendo un movimiento en espiral.
Se deje que la zona se seque y no se toca con ningún objeto que no
haya sido esterelizado previamente.

11. Se fija firmemente la vena tanto por encima como por debajo del lugar
de punción, con la ayuda de los dedos pulgar y medio, o índice y pulgar.

9
12. Se realiza la venopunción. a) Se penetra a través de la piel con la aguja
formando un ángulo de aproximadamente 15º con el brazo y con el bisel
hacia arriba. Se sigue la dirección de la vena con la aguja. B) Se
introduce la aguja con suavidad pero con la suficiente rapidez para
reducir las molestias del paciente. No hay que enterrar la aguja. C) Si se
utiliza una jeringa, se tira hacia atrás del émbolo, con tensión lenta y
uniforme a medida que la sangre va fluyendo en su interior. No debe
realizarse este movimiento con excesiva rapidez, ya que podría
hemolizarse la sangre o colapsarse la vena. d) Si se utiliza un tubo al
vacío, en cuanto la aguja haya penetrado en la vena, se dirigirá el tubo
todo lo posible hacia delante en el dispositivo de sujeción. Al mismo
tiempo se sujeta tenuemente la aguja en su lugar. Una vez que haya
llenado el tubo, se retira, cogiéndolo por su extremo y tirando
suavemente de él.

13. Cuando la sangre comience a fluir, se suelta el torniquete.

14. Una vez que se haya extraído toda la muestra, hay que indicar al
paciente que relaje el puño y que no bombee con la mano.
15. Se coloca suavemente sobre el punto de la punción una bola de algodón
estéril. Se extrae la aguja y a continuación se ejerce presión sobre la
zona.
16. Se venda el brazo. En general es suficiente una tira de esparadrapo
sobre la bola de algodón, para detener la hemorragia.
17. Se mezclan los tubos con el anticoagulante. Si la muestra ha sido
extraída con jeringa, se transferirá la sangre a los tubos
correspondientes tomando las debidas precauciones para evitar la
hemólisis de las muestras.

10
18. Se comprobará el estado del paciente; por ejemplo, si se ha mareado y
si la hemorragia está controlada.
19. Se elimina el material contaminado: agujas, jeringas, algodones, etc.
20. Se marcan las etiquetas y se registra la hora en que se extrajeron las
muestras.
21. Se envían los tubos de sangre para su análisis a los correspondientes
departamentos del laboratorio. Si es preciso, se hace constar la hora en
la solicitud.

Punción capilar:
1. Tener todo el material en perfecto orden: algodón, alcohol, lancetas,
tubos capilares y plastilina.
2. Pedir al paciente que se frote el dedo pulgar hasta que obtenga una
buena irrigación de la zona de punción.
3. Desinfectar la zona y secarla con otro algodón libre de alcohol
4. Sacar la lanceta y realizar la punción de forma rápida y firme.
5. Deshechar la primera gota para evitar contaminación con restos de
alcohol.
6. Colocar el capilar en la zona e ir llenándolo hasta las tres cuartas partes
del tubo.
7. Retirarlo de la zona y colocar un algodón con poco alcohol y solicitar al
paciente que se sostenga por unos minutos para que deje de fluir la
sangre.
8. El capilar sellarlo con plastilina y colocarlo en el lugar designado para
ese paciente.

Anticoagulantes utilizados con mas frecuencia

EDTA (tapón lila): Tubo estéril con anticoagulante EDTA: sal de ácido etileno
diamina tetracético di o tripotasica o di sódica, concentración: 1,2 a 2,0mg/ml
de sangre(4,1 a 6,8mmol/l de sangre) basado en EDTA anhidro. Para uso en
hematología

Citrato de sodio (tapón azul 1/9 y tapón negro 1/4): citrato trisódico con
0,100 a 0,136 mol/l de ácido cítrico. Se recomienda 0,105 mol/l para lograr la
estandarización recomendada por la WHO para que quede a 3,2%. Se usa
para pruebas de coagulación (TP, TTP, fibrinógeno), utilizar l parte de citrato y
9 de sangre entera.

11
Tapón rojo: Tubo estéril sin anticoagulantes ni aditivos ni geles separadores.
Para obtener suero.

Los tapones de colores con una banda Gris agregada indican que el tubo
corresponde a uno los anteriores y que además contiene gel separador de
suero o plasma

ACTIVIDAD 2

 Realizar un video de la punción venosa, en base a la práctica realizada y


subirlo a la plataforma Moodle.

 Realizar un video de la punción venosa, en base a la práctica realizada y


subirlo a la plataforma Moodle.

12
PRACTICA No. 3

SOLUCIONES Y DILUCIONES

Objetivos:
- Conocer lo que es un soluto y un solvente para preparar soluciones a
diferentes concentraciones
- Conocer dos formas de expresar matemáticamente la proporción de
soluto a solvente dentro de una solución (p/v y v/v)
- Realizar diluciones simples a partir de una solución

Fundamento teórico:
Las soluciones son mezclas homogéneas de dos o más substancias, que
pueden separarse por métodos físicos en sus diversas substancias
componentes. En una solución, aquella substancia que se encuentra en mayor
proporción se conoce como Solvente y las demás como Solutos.

Existen varias formas de expresar la concentración de una solución, esto es, la


proporción de soluto a solvente. Para efectos cualitativos, frecuentemente se
habla de soluciones diluidas, concentradas, saturadas o sobresaturadas.
Aunque existen diversas formas de expresar matemáticamente la proporción
de soluto a solvente dentro de una solución, las de uso mas extendido suelen
ser Molaridad, el Porcentaje Peso a Volumen, el Porcentaje Peso a Peso y las
Partes por Millón.

El porcentaje Peso a Volumen es una relación que expresa los gramos de


soluto que se hallan contenidos en cada 100 mililitros de solución.
Existen varias formas de expresar la concentración de una solución, esto es, la
proporción de soluto a solvente. Para efectos cualitativos, frecuentemente se
habla de soluciones diluidas, concentradas, saturadas o sobresaturadas.
Aunque existen diversas formas de expresar matemáticamente la proporción
de soluto a solvente dentro de una solución, las de uso mas extendido suelen
ser Molaridad, el Porcentaje Peso a Volumen, el Porcentaje Peso a Peso y las
Partes por Millón.
13
El porcentaje Peso a Volumen es una relación que expresa los gramos de
soluto que se hallan contenidos en cada 100 mililitros de solución.

CARACTERÍSTICAS DE LAS SOLUCIONES:


-No se sedimentan.
-Pasan a través de papel filtro sin que se separen sus componentes.
-Son totalmente transparentes (permiten el paso de la luz).

COMPONENTES:
-Soluto: Es la sustancia que se disuelve,se encuentra en menor cantidad y es
común que se encuentre en estado sólido.
-Solvente: Sustancia que disuelve al soluto, se encuentra en mayor cantidad,
se encuentra en estado líquido. El disolvente más común es el H2O, sin
embargo existen otros disolvente orgánicos como el etanol, la cetona y el éter.
Solubilidad: Es la máxima cantidad de una sustancia que es posible
disolver en una determinada cantidad de solvente, bajo ciertas condiciones.

FACTORES QUE AFECTAN LA SOLUBILIDAD DE UNA SUSTANCIA:


a) Temperatura : a < temperatura < solubilidad.
b) Presencia de otros solutos.
c) Tamaño del soluto a disolver.
d) Agitación.
e) Presión.

Materiales y reactivos:
Materiales:
- Probeta graduada de 50 ml
- Vaso de precipitación de 50 ml
- Matraz aforado de 50 ml
- Pipetas graduadas de : 1, 2, 5 y 10 ml.

- Peras de seguridad

14
- Tubos de ensayo
- Gradillas
- Balanza
- Varilla de vidrio

Reactivos:
- Safranina en polvo
- Cloruro de sodio en polvo
- Agua destilada

Procedimiento:
1. Método para preparar soluciones:
Unidades de medidas:
p/v = peso de soluto sobre volumen de solvente expresado en gr/ 100ml
v/v = volumen de soluto sobre volumen de solvente expresado en ml/100 ml.

Ejemplo de soluciones p/v:


Preparar 50 ml. de solución de NaCl (cloruro de sodio) al 0.85% en agua
destilada
Datos
V1= 50 ml.
V2= 100 ml
Concentrac. Solución= 0.85% (pesar 0.85 gramos de NaCl y aforar con
agua
destilada hasta obtener 100 ml de solución)
0.85 gr. NaCl 100 ml agua destilada
X 50 ml agua destilada

X=0.425gr. deNaCl

Disolver en agua destilada hasta


obtener 50 ml de solución

15
Ejemplo de soluciones v/v:
Preparar 40 ml. de solución de Etanol al 70% en agua destilada
Datos
V1= 40 ml.
V2= 100 ml
Concentrac. Solución= 70% (70 ml de etanol puro diluidos en 100 ml de
agua destilada)
70 ml de etanol 100 ml agua destilada
X 40 ml agua destilada

X= 28 ml. de etanol puro diluir en 12 ml de agua destilada


para obtener una solución de 40 ml de etanol al 70%.

16
2. Método para realizar diluciones

Partiendo de una solución cualquiera que sea su concentración las


diluciones se realizan del siguiente modo:
Si se tiene una solución HCl (ácido clorhidrico) y se quiere diluir en agua
destilada 1:20 para obtener un volumen final de 50 ml se realiza los
siguientes cálculos:
1ml de soluc. HCl 20 ml. de agua destilada
X 50 ml de agua destilada
X =2.5 ml de HCl se necesita para obtener una
solución de 50 ml en agua destilada (medir 47.5 ml de
agua)

3. Para obtener el factor de dilución:


Utilizando el ejemplo anterior el factor de dilución se obtiene del siguiente
modo:

Fd = Volumen mayor = 50 = 20
Volumen menor (alícuota) 2,5

La solución en efecto está diluida 20 veces

ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIÓN
Realizar de manera grupal los cálculos y la preparación de diluciones
según los datos entregados por la docente. Presentar en un hoja con los
nombres de los integrantes del grupo.

17
PRACTICA No. 4
ELEMENTAL Y MICROSCÓPICO DE ORINA

Objetivos
1. Analizar la orina realizando exámenes macróscopico, químicos y
microscópicos en la misma
2. Correlacionar los parámetros analizados con enfermedades renales o
del tracto urinario

Definición de examen rutinario de orina: Es un examen físico y/o químico de


la orina y comprende una serie de pruebas químicas y microscópicas para
evaluar infecciones del tracto urinario, enfermedad renal y enfermedades de
otros órganos que provocan la aparición de metabolitos anormales (productos
de descomposición) en la orina.
El examen elemental y microscópico de orina consta de tres partes:
1) Macroscópico: color, aspecto

2) Químico (tira reactiva): pH, leucocitos, proteínas, glucosa, urobilinógeno,


bilirrubina, cuerpos cetónicos, sangre.

18
3) Microscópico: leucocitos, eritrocitos, células bajas, células altas (se
reporta numero por campo en 10 camposcon lente de 40x), moco,
bacterias, cristales, parásitos, hongos (se reporta por cruces en 10
campos con lente de 40 x) y cilindros se reporta número por placa (con
lente de 10x).

1. Instrucciones para recoger una muestra parcial de orina

a. El frasco tiene que ser suministrado por el Laboratorio, o adquirir en la


farmacia uno estéril apropiado para la recolección de orina.
b. Es preferible que la orina sea la primera orina de la mañana.

c. Practicar previo aseo genital, con agua y jabón, sin dejar residuos. Esto
es especialmente importante en la mujer que debe lavarse el área entre
los labios de la vagina y evitar la contaminación de la muestra con
crema, antisépticos y secreciones vaginales. Los hombres y niños deben
limpiarse la cabeza del pene
d. Deje escapar la porción inicial de la micción al inodoro, a continuación
recolecte en el frasco la porción media (10 ml) y descarte la porción final
de la micción nuevamente en el inodoro.
e. Tape bien el frasco y entréguelo rápidamente al Laboratorio (máximo
dos horas luego de tomar la muestra).
f. NO recoger la muestra durante el Periodo Menstrual

19
2. Método para el análisis de orina macroscópico y químico:

a. Después de recibir la orina en el laboratorio, analizarla tan pronto como


sea posible. Antes del análisis las muestras de orina deben estar a la
temperatura ambiente
b. Realizar la homogenización de la orina
c. Con movimientos moderados en el recipiente transportado hasta el
laboratorio (bien mezclada y no agitada)
d. Verter en un tubo de ensayo de 16 x 100 mm aproximadamente 10 ml

e. Determinar el color, aspecto (nitidez)

f. Registrar la presencia de un olor inusual y de cantidades anormales de


espuma coloreada
g. Sumergir brevemente la tira reactiva, no más de un segundo (evitar
tocarla con los dedos, ya sea antes o después de sumergirla)
h. Eliminar el exceso de orina en la tira,: limpiar el borde de la misma con el
reborde del tubo o con papel secante
i. No permitir que los reactivos de la tira se junten
j. No depositar la tira reactiva directamente sobre la superficie de trabajo
k. Seguir exactamente las recomendaciones en cuanto al tiempo para cada
test químico.

20
l. Mantener la tira reactiva junto a la carta de colores y leer bajo una buena
iluminación
m. Tener en cuenta las fuentes de error, la sensibilidad y la especificidad de
cada prueba con la tira reactiva

2.1. Parámetros que se observan en el examen macroscópico :

En el examen macroscópico se analiza el aspecto como por ejemplo si es


trasnparente, ligeramente turbia, turbia, espesa, opaca y el color de la orina
que puede ser amarilla pálida, amarilla oscura, ámbar, roja, verde, azul entre
otros.

2.2. Parámetros que se observan en el examen químico:

 Densidad (ó gravedad específica): Registra la concentracuión iónica


de la orina (es decir, qué tan concentrada o diluida se encuentra). Se
basa en la liberación de protones por un formador de complejos en
presencia de cationes. Esto causa un viraje de color del indicador azul
de bromotimol, de azul hacia amarillo, pasando por verde azulado
 pH: Indican la acidez o alcalinidad de la orina. Los valores pH más
frecuentes en orina fresca de personas sanas se encuentran entre 5 y
6. El test es específico para la detección de iones hidronio, siendo el
valor pH el logaritmo decimal negativo de la concentración de iones
hidronio. El papel reactivo contiene los indicadores rojo de metilo,
fenolftaleína y azul de bromotimol.
 Leucocitos: Comprueba la actividad esterásica de granulocitos. Esta
enzimas desdoblan un éster de indoxilo a indoxilo, que reacciona con
una sal de diazonio formando un colorante violeta. se detectan
leucocitos intacto y también los lisados (indicio de IVU)
 Nitrito: Los agentes patógenos más frecuentemente causantes de
infecciones de las vías urinarias, E. coli y la mayoría de los gérmenes
patógenos urinarios, transforman el nitrato absorbido con la
alimentación en nitrito. Este es detectado por una coloración del rosa
al rojo de la zona reactiva. El ensayo se basa en el principio de la
prueba de Griess y es específico para el nitrito. (indicio de IVU)
 Proteínas: El test se basa en el principio del error proteico de
indicadores de pH y reacciona de manera especialmente sensible a la
albúmina.
 Glucosa: La detección de glucosa se efectúa según el método
específico de la glucosa-oxidasa-peroxidasa.
 Cuerpos cetónicos: La detección se realiza en el principio de la prueba
de legal y reacciona más intensamente al ácido acetilacético que a la
acetona. Las cetonas son un subproducto del metabolismo de las
grasas, presente con inanición y diabetes.
 Urobilinógeno: Es un producto de degradación de la bilirrubina. El test
se basa en que una sal de diazonio estable produce con el
urobilinógeno, casi instantáneamente un colorante azóico rojo
 Bilirrubina: En la orina es un producto de degradación de la
hemoglobina. La detección se basa en la copulación de una sal de

21
diazonio con bilirrubina para formar un colorante azoico. Incluso los
más leves matices rosa ya deben ser considerados como positivos.
 Hemoglobina: Es un indicio de hemólisis. La mioglobina cataliza la
oxidación del indicador por el hidroperóxido orgánico contenido en el
papel reactivo. Puntos verdes aislados hasta acumulados en la zona
reactiva amarilla indican la presencia de eritrocitos intactos. La
hemoglobina así como los eritrocitos hemolizados o la mioglobina son
indicados por una coloración verde homogénea de la zona reactiva.

3. Método para realizar el examen microscópico del sedimento


urinario
a. Una vez realizado el examen microscópico y químico de la orina, se
la centrifuga por 5-10 minutos a 1500-2000 rpm con la orina
previamente homogenizada.

b. Eliminar cuidadosamente el sobrenadante. El volumen final utilizado


para resuspender el sedimento puede variar según el sistema
estandarizado que se use, pero debe ser siempre constante en
cualquier laboratorio dado.
c. Resuspender con suavidad el sedimento, eliminar las dos primeras
gotas y colocar la tercera gota en una placa portaobjetos, cubrir con
un cubreobjetos. Dejar que la orina se deposite durante 30 a 60
segundos.
d. Observar al microscopio con objetivos de pequeño y gran aumento.
Para detectar algunas entidades del sedimento con un índice bajo de
refracción será necesaria una luz amortiguada o una iluminación de
contraste de fase. El foco fino debe variarse continuamente mientras
se examina. Progresar de manera sistemática a lo largo de toda la
placa, teniendo cuidado de examinar los bordes en busca de
cilindros.
e. Recuento del número de cilindros por lo menos en 10 campos de
pequeño aumento (10x) y anotar en el informe el número de cilindros
por campo. Puede utilizarse un margen razonable, es decir, 0 a 2, 2 a
5, 5 a 10, etc. Usar el gran aumento (40x) para indicar el tipo de
cilindros. Los cilindros se apreciarán si se utiliza microscopio de
contraste de fase.
22
f. Identificación y recuento de los eritrocitos, leucocitos y células
epiteliales renales utilizando el objetivo de gran aumento (40x).
Efectuar el recuento por lo menos 10 campo de gran aumento y
expresarlo como células por campo. En el informe puede utilizarse un
margen razonable.
g. Reportar:
h. Las células epiteliales (bajas) y altas si están presentes en gran
número o como fragmentos (células transicionales)
i. Bacterias, levaduras, microorganismos. Una bacteriuria detectable a
pequeño aumento puede expresarse por lo menos como 2 +.
j. Los cristales se cuantifican bajo pequeño aumento. La presencia de
cristales anormales debe confirmarse químicamentey correlacionarse
con la historia del paciente
k. Grandes cantidades de moco

3.1. Elementos que se observan en el examen microscópico:

 Las bacterias y otros microorganismos (normalmente no están presentes)


 Cilindros urinarios

 Cristales . Por ejemplo cristales de oxalato de calcio.

 Grasa
 Moco
 Glóbulos rojos (un indicio de daño en los túbulos)

23
 Células tubulares renales
 Células epiteliales

 Glóbulos blancos (un indicio de infección del tracto urinario)

ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIÓN
Cada estudiante debe traer su muestra de orina siguiendo las
instrucciones recomendadas, realizar el análisis clínico durante la práctica,
realizar el portafolio de la práctica y subirlo a la plataforma Moodle.

24
PRACTICA No. 5

COPROLOGICO Y COPROPARASITARIO

Objetivos
1. Observación macroscópica y microscópica de las heces para aprender a
reconocer diferentes patologías gastrointestinales
2. Aprender a realizar la técnica para la preparación de un coproparasitario

Materiales y rectivos:
A. Materiales
-Placa portaobjetos
-Placa cubreobjetos
-Microscopio
-Guantes
-Palillos de dientes

B. Reactivos
-Solución fisiológica al 0.85%
-Solución de lugol (dilución 1:5 de lugol)
-Muestra de heces

Procedimiento:

Recolección de la muestra:
Debe recogerse en un recipiente limpio, debe tenerse cuidado de no mezclarse
con orina, descartar los provenientes de pacientes tratados con bismuto y
bario. Las muestras obtenidas deben enviarse rápidamente al laboratorio
especialmente si son líquidas o semilíquidas ya que las formas trofozoicas de
los protozoos pierden movilidad y mueren poco después de enfriarse.

Procesar la muestra antes de dos (2) horas. Si esto no es posible, mantener las
muestras en refrigeración o temperatura de 4º Centígrados.

1. Examen macroscópico (físico) heces:

25
La inspección de las heces es importante, ya que puede conducir a un
diagnósrtico de infectación parasitaria, ictericia obstructiva, diarrea,
malabsorción, obstrucción rectosigmoidea, disentería o colitis ulcerosa, o
pérdida de sangre en el conducto gastrointestinal.
a. Debe anotarse la consistencia (especificando si son pastosas, blandas,
semilíquidas ó líquidas ó duras) y color del excremento (café, amarilla,
rojiza, negruzca, verdes, etc)
b. Los proglótides o gusanos adultos se pueden detectar en el examen
general, manchas de sangre o moco, y, la presencia de restos
alimenticios.

Color: Normalmente las heces son de color pardo de diferente intensidad, este
color se debe a la presencia de urobilina, varia de acuerdo a la ingestión de
alimentos y medicamentos.
Olor: Las sustancias aromáticas provenientes de la desaminación y
descarboxilación del triptofano por las bacterias son las que le dan a la materia
fecal el olor característico.
Consistencia: Normalmente las heces son blandas aunque moldeadas. Se
observan heces extremadamente duras en el estreñimiento y líquidas por
acción de purgantes, o por causas que originen diarrea. Esta consistencia
puede ser : Líquida, blanda o dura.
Aspecto: Hay diferentes aspectos como son : Diarreico, cremoso, mucoide,
granuloso, pastosa,caprino.
Reacción: La reacción y el pH de la materia fecal depende del régimen
alimenticio.

2. Exámen Microscópico de las heces:

En una lámina portaobjetos se colocan dos gotas, en la parte izquierda solución


salina y en la derecha lugol, luego se toma con un palillo la muestra de materia
fecal, se debe escoger la parte que tenga elementos anormales como sangre,
moco, etc. y de otra parte para que así quede una muestra representativa, se
homogeniza en la lámina primero en la solución salina y luego en el lugol, se le
colocan los cubreobjetos. La suspensión no debe quedar muy gruesa pero
tampoco muy delgada.

26
Residuos alimenticios: Fibras musculares: Se presentan en forma de cilindros
con estrías longitudinales y transversales.
Grasas neutras: Aparecen como esferas refringentes de diferentes tamaños.
Acidos grasos: Se observan como agujas incoloras.
Almidones: Tienen formas irregulares y son refractiles al agregar el lugol.

Fibras vegetales: Se caracterizan por ser de doble pared, contienen clorofila y


poseen un canal central muy marcado.

Productos de irritación de la mucosa: Moco: Se observa en cualquier patología.


Glóbulos Rojos: Su hallazgo indica lesión en la parte baja del aparato digestivo.
Células epiteliales: Indican una excesiva irritabilidad.
Bacterias: Carecen de significación clínica.
Leucocitos: Si hay gran cantidad indica irritación bacteriana.
Cristales de Charcot-leyden: Se ven en forma de rombos alargados.

2. Exámen parasitológico

NEMATODOS: Gusanos redondos

Ascaris lumbricoides: Se observan huevos miden aprox. 45-75 x 30-50 mm,


presenta una célula rodeada por tres capas, producen una patología de dolor
de estómago y desnutrición.

27
CESTODOS: Gusanos planos

-Taenia: Los huevos miden 20-30 x 30-40 mm, son ovoides con membrana
gruesa, amarillenta que se encuentra estriada en forma de empalizada y
encierra un embrión de seis ganchos poco visibles. Produce trastornos
nerviosos.

PROTOZOARIOS:

Entamoeba histolítica: Se observan quistes miden aprox. 20 mm se observa


con cuatro núcleos. Pueden causar lesión de la mucosa intestinal.

Entamoeba coli: Son quistes más grandes que los de histolítica, tiene más de
cuatro núcleos. Es considerada como no patógena.

28
Giardia lamblia: es un protozoo flagelado patógeno que parasita el tracto
digestivo de humanos y otros mamíferos. Presenta un tamaño de 20 micras de
longitud y 15 de ancho. Posee 8 flagelos, 2 anteriores, dos posteriores, dos
ventrales y dos caudales, cuya función es la de motilidad. Proyectada en un
plano se parece una pera.

ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIÓN
Cada estudiante debe realizar el análisis físico y microscópico de sus propias
heces. Realizar el portafolio de la práctica y subirlo a la plataforma Moodle.

29
PRACTICA No. 6

CARBOHIDRATOS: Determinación de glucosa en sangre

1. Objetivos:

1. Conocer la técnica mediante la cual se determina la glucosa en


sangre
2. Diferenciar pacientes con hipo e hiperglicemia

2. Fundamento teórico:

La glucosa es la principal fuente de energía de las células en el organismo. La


glucosa es un monosacárido con una concentración postpandrial de 90 mg/dl
en la sangre y sirve como una fuente de energía indispensable para la función
celular.

El diagnóstico de los trastornos del metabolismo de los hidratos de carbono se


apoya en parte en la medición de la glucosa plasmática, ya sea en ayuna o tras
estimulación o pruebas de supresión.

Los resultados de la glucosa plasmática pueden clasificarse como


hiperglucémicos (como la diabetes mellitus) o hipoglucémicos.

Principio de la reacción:

La prueba utilizada se determina mediante el método enzimático colorimétrico,


basado en la reacción de Trinder.

Glucosa + O2 + H2O GOD (glucosa oxidasa) ácido glucónico + H2O2

30
2H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol POD (peroxidasa) quinoneimina (rojo) +
4H2O

La glucosa se determina después de la oxidación enzimática en presencia de


glucosa oxidasa. El peróxido de hidrógeno formado reacciona bajo la catálisis
de peroxidasa con fenol y 4-aminoantipirina formando un complejo rojo violeta
llamado quinoneimina.

Punto final de una reacción: Las reacciones catalizadas por enzimas son
únicas en el sentido de que presentan aumentos muy grandes de la velocidad
en relación a las reacciones no catalizadas y muestran una cinética de
saturación, es decir la velocidad de la reacción alcanza un valor máximo a una
concentración determinada de sustrato, no dan por resultado aumento de la
velocidad de la reacción. La medida se realiza siempre en las condiciones
óptimas de pH, temperatura, presencia de cofactores, etc. En estas
condiciones, la velocidad de reacción observada es la velocidad máxima (Vmax).
La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparición de los productos o
la desaparición de los reactivos.

En el caso de la reacción de la glucosa catalizada por la enzima glucosa


oxidasa y la peroxidasa llega a su punto final cuando todo el sustrato (glucosa)
se ha oxidado, y después se mide el cambio de color.

Espectofotómetro:

31
La absorbancia y la transmitancia de una sustancia en disolución se miden con
un aparato denominado espectrofotómetro, el cual consta básicamente de los
siguientes componentes:

Fuente de luz: Lámpara que emite una mezcla de longitudes de onda.

Colimador: Conjunto de lentes que enfocan la luz convirtiéndola en un haz de


rayos paralelos.

Monocromador: Dispositivo que selecciona luz de una única longitud de onda.

Detector fotoeléctrico: Transductor de luz en electricidad. La luz provoca el


desplazamiento de electrones en el metal del detector, produciendo una
corriente eléctrica que es proporcional a la intensidad de la luz recibida.

Registrador: Mide la señal del detector, la compara y genera una medida en


una escala determinada.

A) Esquema de un espectrofotómetro de un solo haz


B) Esquema de un espectrofotómetro de doble haz, en el cual se
corrigen las variaciones espectrales de los diferentes elementos ópticos
que lo componen

El funcionamiento del espectrofotómetro es el que sigue: la luz de una fuente


continua pasa a través de un monocromador, que selecciona una banda
estrecha de longitudes de onda del haz incidente.

Esta luz “monocromática” atraviesa una muestra de espesor b, y se mide


la potencia radiante de la luz que sale. Es necesario calibrar el
espectrofotómetro con un blanco antes de medir las absorbancias de la
disolución problema. Esta celda o cubeta de referencia sirve para compensar
los efectos de reflexión, dispersión o absorción de luz de la celda con el

32
disolvente.

Cuando emerge poca luz de la muestra (absorbancia alta), la intensidad


es difícil de medir. Cuando emerge mucha luz de la muestra (absorbancia
baja), es difícil detectar la diferencia de absorbancia entre las celdas de
muestra y de referencia.

3. Parte experimental:

3.1. Procedimiento:

Ensayo:

Longitud de onda: Hg 546 nm.


Paso de luz: 1 cm
Temperatura: 20-25ºC
Medición: frente a un blanco de reactivo. Se requiere un blanco de reactivo por
serie

Esquema de pipeteo:

Microdeterminación
Pipetear en las cubetas Blanco de reactivo STD ó muestra
STD ó muestra 5 ul
Reactivo para glucosa 500 ul 500 ul
Mezclar, incubar por 10 minutos de 20-25ºC ó 5 minutos a 37ºC. Medir la
absorbancia del STD y las muestras frente a un blanco de reactivo antes de 60
minutos.

33
Materiales y reactivos:

Materiales Reactivos
Espectrofotómetro Reactivo para glucosa
Tubos de ensayo Estándar de glucosa (100 mg/dl)
Gradilla Muestras de suero sanguíneo (ó
plasma)
Pipetas automática
Puntas de plástico para pipetas
automát..
Reloj
Cubetas de plástico para espectrofot.

Nota: El espectrofotómetro debe estar encendido 20 minutos antes de leer las


absorbancias.

3. Cálculo de la concentración de la glucosa

C (mg/dl)= 100 x ∆A muestra


∆A Estándar

Valores de referencia: 70 – 100 mg/dl

ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIÓN
Cada grupo debe realizar el análisis de glucosa en sueros sanguíneos.
Realizar el portafolio de la práctica y subirlo a la plataforma Moodle.

34
PRÁCTICA No 7

LÍPIDOS: Determinación de colesterol en sangre

1. Objetivos

3. Conocer la técnica mediante la cual se determina el colesterol en


sangre
4. Diferenciar pacientes con hipo e hipercolesteremia

2. Fundamento teórico:

Los principales lípidos del plasma humano son el colesterol, los ésteres del
colesterol, los triglicéridos, los fosfolípidos y los ácidos grasos no esterificados.
El colesterol es un importante componente estructural de las membranas
celulares y un precursor para la biosíntesis de los ácidos biliares y las
hormonas esteroideas.

El riesgo cardiovascular es una función continua de la concentración de


colesterol y que los individuos situados en el límite superior del margen normal
tienen un riesgo mayor que los que están situados en el límite inferior.

La prueba utilizada para determinar colesterol es mediante el método


enzimático colorimétrico del siguiente modo:

Principio de la reacción:

Esteres de colesterol + H2O CHE(colesterol esterasa) colesterol + ácidos


grasos

35
Colesterol + O2 CHO (colesterol oxidasa) colesterol- 3-ona +
H2O2

2H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol POD (peroxidasa) Quinoneimina (rojo) +


4 H2O

El colesterol se determina después de hidrólisis enzimática y oxidación. El


indicador es la quinoneimina (complejo rojo) formada por el peróxido de
hidrógeno y 4-aminoantipirina en presencia de fenol y peroxidasa.

2. Parte experimental:

2.1. Procedimiento:

Ensayo:

Longitud de onda: Hg 546 nm.


Paso de luz: 1 cm
Temperatura: 20-25ºC
Medición: frente a un blanco de reactivo. Se requiere un blanco de reactivo por
serie

Esquema de pipeteo:

Microdeterminación
Pipetear en las cubetas Blanco de reactivo STD ó muestra
STD ó muestra 5 ul
Reactivo para colesterol 500 ul 500 ul
Mezclar, incubar por 10 minutos de 20-25ºC ó 5 minutos a 37ºC. Medir la
absorbancia del STD y las muestras frente a un blanco de reactivo antes de 60
minutos.

Materiales y reactivos:

Materiales Reactivos
Espectrofotómetro Reactivo para colesterol
Tubos de ensayo Estándar de colesterol (200 mg/dl)
Gradilla Muestras de suero sanguíneo (o
plasma)
Pipetas automática
Puntas de plástico para pipetas
automát..
Reloj
Cubetas de plástico para espectrofot.

Nota: El espectrofotómetro debe estar encendido 20 minutos antes de leer las


absorbancias.

36
4. Cálculo de la concentración de colesterol

C (mg/dl)= 200 x ∆A muestra


∆A Estándar

Valores de referencia: hasta 200 mg/dl

ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIÓN
De manera grupal realizar el análisis de colesterol en un suero sanguíneo y
realizar los respectivos cálculos y análisis de los resultados. Subir a la
plataforma junto con el informe de la glucosa.

37
PRÁCTICA No. 8

ELECTROFORESIS

Objetivo:
Aplicar la técnica de electroforesis para separar las diversas fracciones
proteícas del suero humano

Fundamento teórico:
La electroforesis es una técnica basada en los movimientos de moléculas
cargadas en un campo eléctrico, cada molécula se mueve hacia el electrodo de
carga opuesta (cátodo y ánodo), este movimiento denominado “electroforesis”
da nombre a la técnica. En el transporte electroforético, a la fuerza del campo
eléctrico se opone la resistencia viscosa del medio, produciéndose, cuando se
igualan una velocidad constante de desplazamiento de las partículas.

En resumen, puede decirse que cuando una molécula cargada se coloca en un


campo eléctrico se moverá hacia uno u otro electrodo dependiendo de: 1) su
carga eléctrica, 2) su tamaño, 3) la intensidad del campo eléctrico y 4) la
temperatura del medio.

La electroforesis se aplica en el campo de la Bioquímica a la separación de


compuestos que poseen grupos ionizables (aminoácidos, péptidos, proteínas,
ácidos nucleicos) teniendo en cuenta que la carga neta de estas sustancias
depende del pH del medio en que se encuentren. Si la molécula tiene carga
positiva migrará hacia el cátodo, si tiene carga negativa hacia el ánodo. La
fuerza iónica de la solución tampón tiene una importancia fundamental en la
electroforesis, puesto que cuando es baja, permite velocidades de migración de
los solutos más rápidas y con menor desprendimiento de calor.

Las proteínas están compuestas de aminoácidos que poseen grupos ionizables


(principalmente -COO- y –NH+ 3), pueden encontrarse cargadas positiva o
negativamente, o bien de permanecer eléctricamente neutras según la
proporción de los diversos grupos ionizados a un determinado pH. En su punto

38
isoeléctrico (pI o pHI), la proteína tiene carga neta cero. Por debajo de pI las
proteínas estarán cargadas positivamente y por encima del pI negativamente.

El porcentaje normal de estas proteínas en el suero humano es:


-Albúmina………54-62%
-α-globulinas……9-15%
-β-globulinas……14-19%
-γ-globulinas……14-19%

En el siguiente cuadro se observa la concentración normal en mg/dl , peso


molecular (PM) y funciones de las proteínas (el cuadro no presenta una
clasificación completa de las proteínas, se observan unos cuantos ejemplos
que se encuentran en mayor concentración).

PROTEÍNAS PM CONCENTRACIÓN FUNCIÓN


1)Albúmina 69000 3500 a 4500 mg/dl Presión oncótica
y transporte
2)Globulinas
alfa1
Alfa1 40000 55 a 140 mg/dl Proteína de fase
glucoproteína aguda
ácida
Alfa 1 antitripsina 54000 200 – 400 mg/dl Proteasa
inhibidora
3)Globulinas
alfa2
Alfa2 725000 140 – 420 mg/dl Proteasa
macroglobulina inhibidora
Haptoglobina 90000 380 a 780 mg/dl Liga HB
circulante
3.Globulinas beta
Transferrina 76000 200 a 300 mg/dl Transporte del Fe
Hemopexina 5700 50 a 100 mg/dl Liga el hem
4.Gama
globulinas
IgG 150000 700 a 1500 mg/dl Anticuerpos
IgA 150000 a 300000 - Anticuerpos
IgM 750000 a 900000 - Anticuerpos
Crioglobulinas 220 - Desconocido

ACTIVIDADES Y EXPERIMENTACIÓN

 Realizar el análisis de las proteínas en un suero sanguíneo y luego


reportar en la carpeta con una foto los resultados con una posible patología de
la respectiva consulta (realizar un ejemplo de cada una en la misma foto).
 Realizar el portafolio de la práctica y subirlo a la plataforma Moodle.

39
BIBLIOGRAFIA:
 Ángel M., G. y M. Ángel R., Interpretación Clínica del Laboratorio, 6ª.
edición, Editorial Médica Panamericana, Bogotá, 2.001
 Henry, J. B., Diagnóstico y Tratamiento Clínicos por el Laboratorio, 9ª.
Edición, Editorial Salvat Médica, México, 1.993
 Manual de Bioseguridad en el Laboratorio, O. M. S., Ginebra, 1.994
 Métodos Básicos de Laboratorio en Parasitología Médica, O. M. S.,
Ginebra, 1.992

40