CK-MB DS

unitest
Método UV de doble sensibilidad (DS) para la determi-
MONOCLONAL nación de la isoenzima MB de Creatina Kinasa en sue-
ro o plasma con anticuerpos monoclonales anti CK-M

SIGNIFICACION CLINICA N-acetilcisteína (NAC) .......................................... 20 mmol/l

La Creatina Kinasa (CK) es una enzima intramuscular consti-
tuida por una subunidad M (músculo) y otra subunidad B (brain
= cerebro) que se combinan dando lugar a las isoenzimas
CK-MM (muscular), CK-BB (cerebral) y CK-MB (miocárdica).
La elevación sérica de CK y de CK-MB constituye un indica-
dor de injuria de miocardio. Luego de un infarto agudo de mio-
cardio, en aproximadamente el 55% de los casos, el pico
máximo de elevación de CK y CK-MB se produce en forma
simultánea, mientras que en el 45% de los casos la elevación
máxima de CK-MB precede a la de CK total.
FUNDAMENTOS DEL METODO
El esquema reaccional luego de la inhibición específica de
las subunidades CK-M con anticuerpos monoclonales (que
inhiben tanto la isoenzima MM como las subunidades M de
la CK-MB), es el siguiente:
CK
creatina fosfato + ADP > creatina + ATP
HK
ATP + D-glucosa > ADP + D-glucosa-6-fosfato
G-6-PDH
D-glucosa-6-fosfato + NADP+ > 6-fosfo-D-glucono-
lactona + NADPH + H+
6-PGL
6-fosfo-D-gluconolactona + H2O > 6-fosfo-D-gluconato
6-PGDH
6-fosfo-D-gluconato + NADP+ > D-ribulosa-5-fosfato
+ CO2 + NADPH
El empleo de 6-fosfo-D-gluconolactonasa (6-PGL) y 6-
fosfogluconato deshidrogenasa (6-PGDH) aumenta la sensi-
bilidad ya que provoca la liberación de otra molécula de NADPH
al medio de reacción, duplicando la señal.
REACTIVOS PROVISTOS
Buffer: solución de buffer imidazol 100 mmol/l; pH 6,7.
Sustrato: viales para determinaciones individuales contenien-
do cantidades suficientes para obtener las siguientes con-
centraciones una vez reconstituidos:
creatina fosfato ..................................................... 30 mmol/l
ADP ....................................................................... 2 mmol/l
glucosa ................................................................. 20 mmol/l
NADP .................................................................... 2 mmol/l
hexoquinasa (HK) ................................................ ≥ 2500 U/l
glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G-6-PDH) ...... ≥ 2000 U/l
acetato de magnesio ............................................ 10 mmol/l
AMP ...................................................................... 5 mmol/l
di-(adenosina-5') pentafosfato ................................ 10 umol/l
6-fosfogluconolactonasa (6-PGL) ........................... ≥ 200 U/l
6-fosfogluconato deshidrogenasa (6-PGDH) ......... ≥ 400 U/l
Anticuerpos monoclonales capaces de inhibir 1000 U/l de CK-
M (a 25oC) o 2000 U/l de CK-M (a 37oC).
Suero Control: viales conteniendo suero liofilizado (ver tabla
adjunta para valor teórico).
INSTRUCCIONES PARA SU USO
Buffer: listo para usar.
Sustrato: agregar 2,5 ml de Buffer a un vial de Sustrato. Ta-
par y agitar hasta disolución completa.
Suero Control: abrir el vial teniendo la precaución de no per-
der material. Pipetear exactamente el volumen de agua desti-
lada indicada en el rótulo. Tapar y esperar 5 minutos. Disolver
el contenido completamente por inversión del vial. El Suero
Control de CK-MB reconstituido se trata de la misma manera
que una muestra desconocida.
PRECAUCIONES
Los reactivos son para uso diagnóstico "in vitro".
El Suero Control ha sido examinado para HIV y HBV encon-
trándose no reactivo. No obstante, debe ser empleado como
si se tratara de material infectivo.
ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE
ALMACENAMIENTO
Reactivos Provistos: estables en refrigerador (2-10oC) hasta
la fecha de vencimiento indicada en la caja.
Sustrato reconstituido: en refrigerador (2-10oC) es estable 7
días a partir del momento de su reconstitución.
Suero Control reconstituido: estable 3 días refrigerado (2-
10oC), o 3 meses congelado (-20oC). No congelar y descon-
gelar repetidamente.
INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS
REACTIVOS
Cuando el espectrofotómetro ha sido llevado a 0 con agua
destilada, lecturas de Absorbancia del Sustrato reconstituido
> 0,800 D.O. (a 340 nm) son indicio de deterioro del mismo.
MUESTRA
Suero o plasma
a) Recolección: obtener de la manera usual.
b) Aditivos: en el caso de que la muestra a emplear sea
plasma, debe usarse heparina o EDTA como anticoagulante.
Se recomienda el empleo de Anticoagulante W de Wiener
lab.

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c) Sustancias interferentes conocidas: los sueros con he- METODO DE CONTROL DE CALIDAD
mólisis visible o intensa, producen valores falsamente aumen- Suero Control CK-MB.
tados, por lo que no deben ser usados.
No se observan interferencias por hemoglobina hasta 0,05 g/dl VALORES DE REFERENCIA
(50 mg/dl), bilirrubina hasta 25 mg/l (2,5 mg/dl) y heparina Temperatura 25oC 30oC 37oC
hasta 20 U/ml. Valores 10 U/l 16 U/l 25 U/l
Referirse a la bibliografía de Young para los efectos de las Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios
drogas en el presente método. valores de referencia.
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: la
muestra debe ser fresca. En caso de no procesarse en el INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS
momento, puede ser conservada 12 horas a temperatura Se tiene alta probabilidad de daño de miocardio si se cum-
ambiente (< 25oC), 3 días refrigerada (2-10oC) o 1 mes conge- plen simultáneamente las siguientes condiciones:
lada (-20oC). 1- La actividad de CK total excede los siguientes rangos nor-
males:
MATERIAL REQUERIDO (no provisto)
Temperatura 25oC 30oC 37oC
- Espectrofotómetro.
Varones ≤ 80 U/l ≤ 130 U/l ≤ 195 U/l
- Micropipetas y pipetas capaces de medir los volúmenes
Mujeres ≤ 70 U/l ≤ 110 U/l ≤ 170 U/l
indicados.
- Baño de agua a la temperatura indicada en PROCEDIMIEN- Si se sospecha daño de miocardio y los valores se encuen-
TO. tran por debajo del rango normal, existe la posibilidad de un
- Cronómetro. infarto reciente. En este caso debe repetirse la determinación
luego de 4 horas.
CONDICIONES DE REACCION 2- La actividad de CK-MB excede los valores normales. Ver
(Aumento de absorbancia) VALORES DE REFERENCIA.
- Longitud de onda: 340 nm (Hg 334 ó 366). 3- El porcentaje de CK-MB se encuentra entre el 6-20% del
- Temperatura de reacción: 25, 30 ó 37oC. valor de CK total. Si el porcentaje es menor al 6% es probable
- Tiempo de reacción: 10 minutos que haya daño del músculo esquelético. Si el porcentaje su-
- Volúmenes de muestra y reactivo: pueden variarse propor- pera el 20% del valor total de CK se puede sospechar de la
cionalmente (ej. 40 ul muestra + 1 ml Sustrato reconstitui- presencia de una forma macro de CK (CK atípica) que no es
do o 20 ul muestra + 500 ul Sustrato reconstituido). inhibida por los anticuerpos anti CK-M.
La presencia de CK atípica puede determinarse por:
a) Persistencia por más de 48 horas (la CK-MB decae aproxi-
PROCEDIMIENTO madamente a las 30-48 horas de iniciado el infarto).
Llevar el aparato a cero con agua destilada. Ver INDICIOS b) Estabilidad frente al tratamiento de la muestra a 40oC du-
DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS REACTIVOS. rante 20 minutos.
En una cubeta mantenida a la temperatura seleccionada c) Análisis electroforético (se obtiene una banda entre las iso-
(25, 30 ó 37oC) colocar: enzimas MM y MB).

Sustrato reconstituido 2,5 ml LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

Preincubar unos minutos. Luego agregar: Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.
Muestras con actividad CK total que supera las 1000 U/l (a
Muestra 100 ul 25oC) o las 2000 U/l (a 37oC) deben diluirse con solución fisio-
lógica (cloruro de sodio 0,9%). El resultado obtenido debe
Mezclar inmediatamente por inversión. Esperar 5 minu-
multiplicarse por la dilución efectuada.
tos. Ajustar la absorbancia a un valor de referencia y dis-
parar simultáneamente el cronómetro. Registrar la absor-
PERFORMANCE
bancia cada minuto, durante 5 minutos. Determinar la di-
a) Reproducibilidad: procesando de acuerdo al documento
ferencia promedio de absorbancia/min (∆A/min) restando
EP5A del NCCLS (National Committee on Clinical Laboratory
a cada lectura la anterior y promediando los valores. Utili-
Standards), se obtuvo lo siguiente:
zar este promedio para los cálculos.
Precisión intraensayo
Nivel D.S. C.V.
CALCULO DE LOS RESULTADOS 39,5 U/l ± 0,6 U/l 1,44 %
CK-MB (U/l) = ∆A/min x factor 183,4 U/l ± 1,9 U/l 1,05 %
Medida a 340 nm: CK-MB (U/l) = ∆A/min x 4.127
Medida a Hg 334: CK-MB (U/l) = ∆A/min x 4.207 Precisión total
Medida a Hg 366: CK-MB (U/l) = ∆A/min x 7.429 Nivel D.S. C.V.
Los factores arriba mencionados ya contemplan la correc- 39,5 U/l ± 0,8 U/l 1,90 %
ción necesaria para convertir el valor de CK-B en CK-MB. 183,4 U/l ± 2,6 U/l 1,39 %

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b) Límite de detección: depende del fotómetro empleado y
de la longitud de onda. En espectrofotómetros con cubetas
de caras paralelas de 1 cm de espesor, para un ∆A/min de
0,001 el mínimo cambio de actividad detectable será 4 U/l.
c) Linealidad: la reacción es lineal hasta 350 U/l. Para valo-
res superiores, se debe diluir la muestra con solución fisioló-
gica y multiplicar el resultado obtenido por el factor de dilu-
ción.

PRESENTACION
- 28 viales x 2,5 ml + 2 Sueros Control c.s.p. 1 ml
(Cód. 1271354).

BIBLIOGRAFIA
- D.G.K.C. - Z. Klin. Chem. 10:281 (1972).
- S.S.C.C. - Scand. J. Clin. Lab. Invest. 33:291 (1974).
- I.F.C.C. - Clínica Chimica Acta 105:147F (1980).
- Wu, A.; Bowers, G. - Clin. Chem. 28/10:2017 (1982).
- Gerhardt, W.; Waldenstrom, J. - Clin. Chem. 28:277 (1982).
- Würzburg, U. et al. - J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 15:131
(1977).
- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
AACC Press, 4th ed., 2001.
Tietz Textbook of Clinical Chemistry, Saunders Co., 3rd ed
(1999).
- National Committee for Clinical Chemistry Standards
(NCCLS). Document “Evaluation of the Linearity of Quantita-
tive Analytical Methods“, EP6-P (1986).
- NCCLS Document “Evaluation of Precision Performance of
Clinical Laboratory Devices“, EP5-A (1999).
- Stein W. Med Welt; 36:572 (1985).
- Szasz G, Busch EW. Third European Congress of Clinical
Chemistry, Brighton, England, 3-8. June 1979 (Abstract).

Elaborado por:
Wiener Laboratorios S.A.I.C.
Riobamba 2944
2000 - Rosario - Argentina
http://www.wiener-lab.com.ar
Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
Bioquímica
Producto Inscripto M.S.
Wiener lab.
Cert. Nº: 1621/96 2000 Rosario - Argentina
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