HUAMANGA
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
PROYECTO DE TESIS
ANÁLISIS DE LA RESPUESTA INMUNITARIA INFLAMATORIA EN LA
INFECCIÓN POR EL VIRUS DE LA FIEBRE AMARILLA Y SU SIGNIFICANCIA
CLÍNICA
Presentado por:
Asesor:
Ayacucho – Perú
PROYECTO DE TESIS
I. GENERALIDADES:
1. TÍTULO:
2. PERSONAL INVESTIGADOR.
2.1. AUTOR:
2.2. ASESOR:
5.4. CRONOGRAMA:
2016 2017
ACTIVIDADES Agos. Sept. Oct. Nov. Dic. Ene.
Revisión Bibliográfica x x X x x x
Elaboración y Aprobación
x x
del Proyecto
Procesamiento y análisis
x
de muestras
Análisis de Resultados x x X x
Redacción del Informe
X x x
Final
Sustentación de informe x x
6. RECURSOS DISPONIBLES:
- MATERIAL BIOLÓGICO:
- EQUIPOS Y APARATOS
Autoclave
Computadora
Cámara fotográfica
Balanza analítica
Estufa
- MATERIALES
Balones 4 unidades
Pinzas 2 unidades
- REACTIVO
Etanol al 70 % 200 ml
- OTROS:
Cuaderno de apunte
7. PRESUPUESTO:
7.1. BIENES:
Materiales de laboratorio
S/. 6000.00
7.2. SERVICIOS
Movilidad S/ 1000.00
Otros S/ 500.00
8. FINANCIAMIENTO:
1. EL PROBLEMA CIENTIFICO
El conocimiento y uso de plantas con fines curativos es un arte milenario llamado fitoterapia,
que se ha practicado desde la prehistoria en todas las civilizaciones. Las creencias sobre
ciertas enfermedades y los medios para curarlas forman parte de la «medicina popular». En
esta materia, El Perú posee un valioso legado de la cultura ancestral, con conocimientos
acerca de las causas de las dolencias más comunes, de las propiedades de las plantas
curativas y sobre numerosas recetas naturales. La sabiduría de los nativos llamó la atención
y usos de las hierbas. Gracias a ellos se conocen hoy las virtudes de las plantas medicinales.
medicinales de algunas plantas. La mayor parte de las plantas medicinales son originarias
de nuestros bosques, campos y esteros y se las denomina «nativas», muchas de ellas ya eran
conocidas y utilizadas por los indígenas antes de la llegada de los europeos al continente
americano por ello las, el uso del “Matico”. Buddleja globosa que sirve Contra infecciones,
cataplasma para aliviar el dolor de cabeza y la decocción en gárgaras para los males de
formación de ampollas y llagas2, las “hojas de sen” Cassia angustifolia grupo de los
laxantes estimulantes3.
Este proyecto se quieres aislar e identifica las especies hongos endofiticos que tenga un
hongos endofiticos que tal vez son los encargados de brindar a la planta la propiedad
medicinal.
HIPOTESIS:
La fiebre amarilla es una infección causada por la familia flavovirus, más frecuente a nivel
mundial y supone un problema de salud pública por su alta incidencia en diversas áreas donde
adquiere características de endemia. Esta infección conlleva a una elevada morbilidad e incluso
Los mecanismos implicados en la variabilidad clínica que presentan las personas infectadas aún
1.3.1. GENERAL
1.3.2. ESPECÍFICOS
-Estudio de la significancia clínica de las alteraciones del sistema inmunitario encontradas, con
énfasis en sus fases evolutivas y severidad de la enfermedad.
- Estudio de la posible relación de las alteraciones del sistema inmunitario encontrados con el
serotipo viral infectante y tipo de infección.
JUSTIFICACION:
ANTECEDENTES:
La fiebre amarilla es una enfermedad infecciosa, causada por un virus del genero flavivirus
y familia flaviviridae, el cual se transmite por la picadura de mosquitos. Existe un ciclo
selvático, en el cual el virus se transmite de mono a mono por la picadura de un mosquito
infectado, el género aemogogus es el vector principal en américa y Aedes en áfrica. La
infección en humanos es esporádica. El otro es el urbano, en el cual el virus es transmitido
de un humano infectado a otro susceptible por la picadura de mosquito aedes. La
enfermedad tiene una amplia variedad clínica, desde formas asintomáticas a moderadas en
la mayoría de las ocasiones, 90%, a formas graves, 10%, con letalidad del 50%, la fiebre
amarilla en una enfermedad que se puede evitar con la aplicación de la vacuna 17D cuya
eficacia y seguridad están plenamente documentadas.
La fiebre amarilla es una zoonosis propia de algunas regiones tropicales de América del
Sur y África, que a través del tiempo ha causado numerosas epidemias con elevadas tasas
de mortalidad. Su agente etiológico es el virus de la fiebre amarilla, un arbovirus del género
Flavivirus (familia Flaviviridae) Control de la fiebre amarilla Guía práctica
Publicación Científica y Técnica No. 603 ORGANIZACIÓN PANAMERICANA DE
LA SALUD Oficina Regional de la ORGANIZACIÓN MUNDIAL DE LA SALUD
525 Twenty-third Street, N.W. Washington, DC 20037 www.paho.org 2005
MARCO TEORICO
FIEBRE AMARILLA
La fiebre amarilla es una enfermedad viral transmitida por mosquitos del género Aedes. La
forma grave se caracteriza por daño hepático, renal y miocárdico así como hemorragias y
tiene alta mortalidad. Está ampliamente distribuida en América Latina, en las zonas
correspondientes al Amazonas y en el Africa subsahariana. Después del brote de fiebre
amarilla en Chile en 1912, se logró la erradicación del vector, Aedes aegypti y con ello la
enfermedad. Recientemente se detectó la reaparición de este mosquito en Isla de Pascua
pero libre del virus. Este hallazgo ha motivado un análisis sobre el tema y la proposición
de medidas de prevención. Fiebre amarilla COMITE DE INFECCIONES
EMERGENTES* Rev Chil Infect (2001); 18 (1): 64-68.
AGENTE Y TRANSMISIÓN
Fiebre amarilla selvática: En las selvas tropicales lluviosas, los monos, que son el
principal reservorio del virus, son picados por mosquitos salvajes que transmiten
el virus a otros monos. Las personas que se encuentren en la selva pueden recibir
picaduras de mosquitos infectados y contraer la enfermedad.
Fiebre amarilla urbana: Las grandes epidemias se producen cuando las personas
infectadas introducen el virus en zonas muy pobladas, con gran densidad de
mosquitos y donde la mayoría de la población tiene escasa o nula inmunidad por
falta de vacunación. En estas condiciones, los mosquitos infectados transmiten el
virus de una persona a otra.
EPIDEMIOLOGÍA
La enfermedad es de clínica aguda, de duración breve y gravedad variable. Los casos más
leves presentan un cuadro pseudogripal inespecífico. En casos más graves, los ataques
típicos se caracterizan por cursar en dos fases. Se inicia con un cuadro gripal intenso, con
fiebre, escalofríos, cefalea, mialgias, postración, nauseas y vómitos. Se acompaña de
ictericia moderada, leucopenia y en ocasiones albuminuria. La mayoría de los caso se
resuelven en esta fase, pero en un 15% de los casos, tras una breve remisión, (de horas a
un día) el trastorno evoluciona a un cuadro grave con insuficiencia hepática y renal,
manifestaciones hemorrágicas, como epistaxis, gingivorragia, hematomas y melenas, y
finalmente shock por fallo multiorgánico. En un 20- 50 % de los casos graves se produce
la muerte, aunque en regiones endémicas la letalidad es menor.
Se calcula que cada año viajan a países endémicos de Fiebre Amarilla unos 9 millones de
viajeros procedentes de Asia, Europa y Norteamérica y más de 3 millones visitan zonas
con transmisión del virus en estos países. Se calcula que el riesgo de enfermar es de 1 en
267 y de muerte es 1 en 1333, aunque el riesgo es menos en periodos interepidémicos. El
riesgo de los viajeros a Sudamérica se estima unas 10 veces menos que el de los viajeros
a África. Es decir, el riesgo de los viajeros depende de la época del año, del itinerario y
actividades a realizar, de la densidad vectorial y de la presencia de virus circulante.
Destacar que en los países con áreas endémicas que mantienen altas coberturas de
vacunación la posibilidad de contagio de un viajero es considerablemente menor. Inf.
Epidemiológica Fiebre Amarilla. Epidemiología y situación mundial URL:
https://www.amse.es/informacion-epidemiologica/69-fiebre-amarilla-
epidemiologia-y-situacion-mundial
Medidas Preventivas
Medidas internacionales
MANIFESTACIONES CLÍNICAS
PATOGENIA
Después que una persona es picada por un mosquito hembra infectado, el virus se replica
en los nódulos linfáticos regionales produce una viremia y se disemina a los diferentes
tejidos afines donde alcanza el sistema fagocítico mononuclear, principal blanco de su
acción patógena. El periodo de incubación varía de 3 a 14 días, con un promedio de 4 a 7
días. En la infección primaria, el virus penetra a la célula mediante su interacción con un
receptor celular dando lugar a la aparición de anticuerpos neutralizantes capaces de
proteger al individuo contra virus homólogo y durante solo 2-3 meses contra los otros
serotipos.URL:http://dspace.uah.es/dspace/bitstream/handle/10017/14281/TESIS%
20DOCTORAL%20JULIA%20ARIAS.pdf?sequence=1
Respuesta inmunitaria
La inmunidad a la fiebre amarilla puede ser activa o pasiva. La inmunidad activa del virus
puede derivarse de la infección natural, de la infección experimental o de la vacunación.
La inmunidad pasiva puede ser el resultado de la inmunidad transmitida por una madre
inmune a su hijo, o de la inoculación a un individuo, que de otro modo sería susceptible,
con anticuerpos portectores derivados de un individuo inmune.
INMUNIDAD ACTIVA
La prueba de protección reveló asimismo que la fiebre amarilla del Continente Africano
y la de Sur América son la misma enfermedad. Esos métodos inmunológicos,
descubiertos en 1927 y 1928, se han reemplazado ahora por otro método más conveniente,
sobre todo por lo que tiene de menos engorroso y de menos costoso, que consiste en
efectuar la misma prueba en ratones suizos. Sin embargo, los primeros experimentos en
monos revelaron la importancia de los métodos inmunológicos para el diagnóstico y los
estudios epidemiológicos.
La inoculación del virus en un huésped inmune no provoca reacción visible, aun cuando
se haga la inoculación por vía intradérmica en un lugar donde cualquier reacción especie
vectora, se produce una infección inflamatoria, por benigna que fuese, podría ser
fácilmente observable. Sin embargo el huésped inmune el virus es neutralizado
eficazmente y rara vez se puede recobrar una vez que se inyectó.
Ciertos animales silvestres que son huéspedes naturales de la fiebre amarilla tanto en
África como en el Sur América, especialmente en los primates, reaccionaron a la
infección con anticuerpos de un modo semejante en todo a cómo reacciona el hombre.
Activación de Linfocitos B.
El fragmento C3d interactúa con el “Receptor tipo2 del complemento” (CR2), ubicado en
las células B, e induce su activación. Aquí se demuestra unos de los mecanismos por el
cual la inmunidad innata estimula a la inmunidad adquirida, teniendo en cuenta que el
complemento también pertenece a la primera.
Fiebre Amarilla
Más allá de los casos aislados que pudieran producirse, el verdadero problema una
epidemia podría ocurrir si los enfermos diseminaran el virus en sus ciudades de
origen.
Sin embargo, tomando los debidos recaudos, principalmente a través de la
vacunación, esto está muy lejos de suceder".
De todos modos, dada la importancia de la enfermedad, y a partir del aumento de los
casos de Fiebre Amarilla, en la ciudad de Brasilia (Brasil) se ha recomendado la
vacunación masiva de la población como medida de seguridad.
Picadura
Aedes Aegypti
Es un mosquito que puede ser huésped del virus del dengue y el de la fiebre amarilla, así
como de otras enfermedades. Anteriormente clasificado como un subgénero de Aedes (al
que pertenece el estrechamente emparentado Aedes albopictus, el principal vector del
dengue), en 2005 estudios moleculares llevaron a reclasificar Stegomyia como género,
cambiando el nombre del mosquito (que se denominaba hasta entonces Aedes aegypti).
Sin embargo, estos estudios están siendo muy discutidos, de forma que es muy probable
que en el futuro se vuelva a utilizar la antigua denominación como "Aedes aegypti", como
exigen a partir de diciembre de 2005 los editores de las revistas científicas más
importantes del sector. PEDRO CORNEJO “FIEBRE AMARILLA” URL:
http://cornejotimote.blogspot.pe/2008/12/fiebre-amarilla.html
Inmunogenicidad y Eficacia
2.2.1. VARIABLE:
a. INDICADORES:
2.3.1. ANTECEDENTES:
(UTP). Con el fin de ampliar el conocimiento sobre la flora y biota del departamento
en este género por diversos autores. Por métodos del GRUPO de BIOTECNOLOGÍA
se detalla la técnica que se utilizó para lograr el aislamiento de los hongos pertenecientes a
las hojas de dicha planta, junto con su caracterización mediante espectrometría infrarroja
En otro trabajo se trató de hongos endófitos habitan en las plantas sin causar síntomas
demuestran la enorme capacidad que tienen los hongos endófitos para producir compuestos
en nuestro grupo de trabajo mostrando que los hongos endófitos son una fuente potencial
Con los resultados obtenidos se creará una base de datos, con los cuales se construirán los
A. HONGOS ENDOFITICOS:
Los hongos endófitos habitan en las plantas sin causar síntomas aparentes de enfermedad.
La estrecha relación que existe entre el endófito y su planta hospedera se considera de gran
que tienen los hongos endófitos para producir compuestos activos que le confieren
bioactivos, así como estrategias metodológicas para su obtención. Por último, se presentan
que los hongos endófitos son una fuente potencial de metabolitos secundarios bioactivo5.
B. CLASIFICACIÓN DE HONGOS ENDOFITICOS:
Clasificación de los hongos endófitos Los hongos endófitos son un grupo muy diverso y
polifilético que habitan en diversas partes de las plantas. La mayoría pertenecen al phylum
Oomycota6.
Clavicipitáceos, y este último se divide en tres clases. Los Clavicipitáceos son los endófitos
que colonizan los pastos, mientras que los no Clavicipitáceos colonizan las plantas no
hongos endófitos de las zonas templadas, no obstante, la información sobre los endófitos de
zonas tropicales aún representa un objeto potencial de estudio, ya que se tiene información
La relación entre los hongos endófitos y su planta hospedera puede ir desde el mutualismo
hasta la patogénesis.
En estas relaciones ambos organismos producen metabolitos secundarios potencialmente
fitotóxicos, mientras que la planta produce defensas, tanto mecánicas como bioquímicas.
En consecuencia, para que ambos organismos coexistan se establece entre ellos una
defensas de la planta, las cuales varían y son influenciadas por los factores ambientales y
por la etapa de desarrollo de ambos organismos. Cuando los factores de virulencia del
hongo y las defensas de la planta están en equilibrio se establece una relación endofítica y,
por el contrario, cuando se presenta la senescencia del hospedero o se encuentra bajo estrés,
el balance se torna a favor del hongo y éste se expresa como patógeno, presentándose los
síntomas de enfermedad5.
La hipótesis mutualista. ¿Cómo saber si una relación entre una planta y un hongo endófito
cada uno de los miembros debería ser mayor cuando están asociados que cuando están
viviendo libremente. Sin embargo, esto no es fácil de probar, dado que en algunos casos el
ampliamente estudiado, del cual proviene la mayor evidencia para postular que esta
relación es mutualista. Los estudios pioneros son de la zona templada y sirven como marco
de referencia, siendo citas obligadas en este campo los trabajos de Otros estudios han usado
árboles de la zona templada (Quercus spp. y Pinus spp.), pero en ellos no se encontró
evidencia de protección contra herbivoría por parte del hongo. El efecto protector de los
endófitos sobre pastos de la zona templada, ha sido reportado por Johnson y Clay quienes
ambos casos, la mortalidad del herbívoro fue mayor cuando se alimentaba de plantas
infectadas, aunque se pudieron detectar efectos variados de acuerdo a la combinación áfido
planta Johnson. También se han postulado otros beneficios para la planta hospedera de
herbivoría y una mayor resistencia a hongos patógenos). Aunque los estudios demuestran
claramente que los endófitos causan efectos negativos en los herbívoros, siendo de
Es común que los ensayos realizados usen especies introducidas y/o que rara vez
2. DISEÑO METODOLOGICO
- Descriptivo.
- Ubicar aquellas plantas que se encuentren ligeramente aisladas de resto, las de mejor porte
y saludable.
- Una vez ubicada las planta, se observa las hojas y ramas, de entre ellas, con la ayuda de
una podadora o tijera limpiar, cortar la rama y/u hojas sanas, aquellas que no presente
mancha, ni daño por insectos u otro factor mecánico, tampoco deben estar en contacto
con el suelo rama y hoja de otra planta; introducidas dentro de la bolsa de polietileno,
b. Limpieza y desinfección:
- Sacar las muestras de plantas de bolsa de polietileno
- Lavar las muestras con agua corriente para retirar los residuos de polvo y tierra
- Cortar las hojas en fragmentos menores para trabajar dentro de una placa Petri (en algunas
- Colocar los fragmentos (hojas y tallos) dentro de placas Petri estériles y embeberlos con
- Transferir los fragmentos a otra placa Petri estéril y embebecer en una solución de
- Transferir los fragmentos a otra placa Petri estéril y enjuagar con agua destilada estéril
por 10 veces.
- Cortar los bordes de cada hoja (hojas de 0.5 X 0.5 cm3, tallos en disco de 1º 2 mm de
preferencialmente nuevas.
- Con el apoyo de pinzas debidamente desinfectadas, coger los fragmentos de hoja y/o tallos
y colocarlos sobre placas Petri contenidos en medios de cultivo (agar Sabouraud y agar
caso que los crecimientos de algunas colonias a partir de algunos fragmentos puedan ser
invasivas, en ese caso transferir los fragmentos sin crecimientos microbiano a otras placas
- Una vez crecidas las colonias, repicarlas a una placa Petri conteniendo el mismo medio y
- Una vez obtenido el crecimiento, repicar las colonias aisladas en viales conteniendo
medio TSA, agar sabouraud, de medio AACK (según el caso); una vez que hayan crecido
las colonias guardarlos como cepario para su posterior identificación Y/o evaluación de
sus cualidades.
d. Microcultivo
pues te permite visualizar al microscopio el micelio en su conjunto no solo una parte del
- Cortar de la placa con medio de Sabouraud con hoja de bisturí, cuadraditos de agar de 0,5
- Sembrar el hongo con la espátula en las cuatro esquinas y en el centro del bloque de agar.
por el borde de la placa de Petri, mojando el papel de filtro, para proporcionar una
de la incubación.
- Tras varios días de observación, cuando el crecimiento sobre el bloque sea evidente, se
recoge el cubreobjetos con una pinza estéril y se coloca sobre un portaobjetos donde
el método de disociación.
3. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
https://www.google.com.pe/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=3&cad=rja&ua
ct=8&ved=0ahUKEwjvxsTL36XOAhXEDj4KHUUlBWkQFggqMAI&url=http%3A%2F
%2Fcybertesis.uni.edu.pe%2Fbitstream%2Funi%2F1019%2F1%2Fshimabukuro_yd.pdf&
usg=AFQjCNFEgz1Uz5tVS1xWr7GinSYS_rk6lA&sig2=PGQAM62L5ZbhMLsxH1SZb
w&bvm=bv.128617741,d.cWw
http://www.ins.gob.pe/repositorioaps/0/7/jer/censi_plant_indi/Achiote_Vademecum.pdf
http://www.inkaplus.com/media/web/pdf/Sen.pdf
Química. Disp:
http://repositorio.utp.edu.co/dspace/bitstream/handle/11059/5332/66062G643.pdf;jsessioni
d=6A3EE0648B09D864C72326238008D578?sequence=1
http://www.scielo.org.mx/pdf/tip/v16n2/v16n2a6.pdf
6. Rosa, L.H. et al. in Drug Development. A case study based insight into modern strategies
7. Rodríguez, R., White, J., Arnold, A.E. & Redman, R. Fungal endophytes: Diversity and
http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/ginecologia/vol56_n3/pdf/a03v56n3.pdf
marco teorico
http://www.msal.gob.ar/images/stories/bes/graficos/0000000064cnt-01-guia-fiebre-amarilla.pdf