Departamento de Ciencias de la Vida y la Agricultura

Ingeniería en Biotecnología
BIOINFORMATICA

Integrantes: Muñoz Alejandra, Siguenza Sasha.

Practica N°: 03
Fecha: 05-06-2018 NRC: 4304

1. TEMA: Barcoding

2. INTRODUCCIÓN:
El barcoding consiste en identificar organismos utilizando un fragmento de ADN
cuya secuencia puede ser relacionada de forma unívoca con una especie (Lanteri ,
Analía A., 2017), de la misma manera como un código de barras identifica a un
producto en un supermercado. Para que una secuencia funcione como barcode debe
poseer una variabilidad intra específica baja y a la vez una variabilidad inter
específica alta. (Paz A., Gonzalez M., 2011)

Desde el origen del concepto, se establecieron tres criterios principales para probar
la eficiencia de las regiones de códigos de barras. Estos son (i) Primarios
universales para amplificar la región del código de barras (ii) Cálculo del espacio
del código de barras (distancia intra e interespecie) y (iii) Potencia de resolución de
la especie. (Sulma P., Jiménez P., 2012)

Existen al momento varias secuencias que son consideradas barcode universal para
diferentes grupos taxonómicos, pero es recomendable emplear genes de plástidos o
ADN ribosomal nuclear.

3. OBJETIVOS:
3.1 OBJETIVO GENERAL:
Ejecutar un barcoding mediante un programa bioinformático Staden Package.

3.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS

 Ensamblar fragmentos de ADN a partir de secuencias obtenidas con el método
Sanger.
 Hacer búsquedas de BLAST para la identificación molecular de microorganismos
 Determinar si una secuencia es apropiada para barcoding.

4. MATERIALES Y METODOS
Equipos: Computador
Muestras: Secuencias
5. DESARROLLO

5.1. Ensamblaje de secuencias

Utilizar Pregap para preparar las secuencias para el ensamblaje
Paso1: Cargar las secuencias en pregap

Fig.1: Utilizar Add Files en la pestaña “Files to Process” para cargar secuencias al
programa.

Paso2: Crear un Gap4 database.

Fig.2: En la pestaña “Configure Modules” se marcó la opción “Gap4 shotgun

assembly”, se creó un Gap4 database llamado ENSAMBLE y de desmarco las
opciónes “Cloning Vector Clip” y “Screen for unclipped vector”.
Paso 3: Corrida del programa Pregap4

Fig.3: Se ejecutó PreGap presionando el botón Ejecutar en la esquina inferior

izquierda de la ventana principal. . La pantalla cambiará a la pestaña "Salida de
texto" y los archivos serán procesados.

Sin modificar Quality Clip

Paso 4: Se selecciona el archivo creado (Ensamble.0)

Fig.4: Nos proporciona el tamaño de la secuencia, longitud, número de clones.

Paso 5: Para poder editar los contig se selecciona en el fragmento de la secuencia y
edit config.

Fig.5: Se observa dos secuencias, y el resultado final es un consenso derivado de

las secuencias de arriba, también puede desplazarse por el contig usando la barra
de desplazamiento inmediatamente debajo de la fila superior de botones.

Fig.6: A la izquierda del nombre hay un número, este es solo el número de la

secuencia que se ha dado dentro del conjunto. Los números tienen un signo
menos al lado de ellos. Esto indica que esta secuencia ha tenido que ser
inversamente complementado para encajar en el conjunto

Fig. 7: Búsqueda del asterisco, ya que la secuencia no coincide con la secuencia de

consenso, además se colorea.
Quality Clip modificado

Paso7: Se modifica la opción Quality Clip

Fig.8: En “Quality Clip” se cambio window length a 120 y average confidence a

10.

Paso 8: Se edita los contigs

 Contig modificado a 1, se obtiene una buena resolución en la secuencia

5.2. Búsqueda de bases de datos

Utilizar la secuencia ensamblada de KS29 para hacer una búsqueda de BLAST e
identificar al microorganismo, utilice la base de datos completa y en otra búsqueda
utilice la base de datos de organismos tipo.
Secuencia ensamblada

Fig.11: Secuencia consenso obtenido de Staden package.

Paso1: Búsqueda BLAST NUCLEOTIDE

Fig.12: Al realizar el BLAST los resultados indican que la secuencia consenso KS29 tiene:
99% de identidad con el microorganismo Ophiosphaerella herpotricha.
99% de identidad con el microorganismo Ophiosphaerella korrae

Fig.13: La imagen muestra que la secuencia consenso KS29 tiene:

100% de identidad con el microorganismo Ophiosphaerella herpotricha

Ensamblaje de secuencias ITS

Utilizar Pregap para preparar las secuencias para el ensamblaje
Paso1: Cargar las secuencias en pregap
Fig.17: Utilizar Add Files en la pestaña “Files to Process” para cargar secuencias
al programa.

Paso 2 y 3: Crear un Gap4 database y Corrida del programa Pregap4

Fig.18: Se ejecutó PreGap presionando el botón Ejecutar en la esquina inferior

izquierda de la ventana principal. . La pantalla cambiará a la pestaña "Salida de
texto" y los archivos serán procesados.
Quality Clip modificado

Paso 4: Se modifica la opción Quality Clip

Fig.19: En “Quality Clip” se cambio window length a 120 y average confidence a

10.

Fig.20: Se ejecutó PreGap presionando el botón Ejecutar en la esquina inferior

izquierda de la ventana principal. . La pantalla cambiará a la pestaña "Salida de
texto" y los archivos serán procesados.
 Paso 8: Obtención de contigs

Fig.21: Se obtuvo un único contig al realizar el ensamblaje con los parámetros

descritos.

Búsqueda de bases de datos

Utilizar la secuencia ensamblada de ITS para hacer una búsqueda de BLAST e
identificar al microorganismo, utilice la base de datos completa y en otra búsqueda
utilice la base de datos de organismos tipo.
Secuencia ensamblada
CTGCGGAGGGATCATTACCGAGTTTACAACTCCCAAACCCCTGTGAACATACCTATTT
GTTGCCTCGGCGGTGCCTGTTCCGACAGCCCGCCAGAGGACCCCAAACCCTGATTACA
TTTAAGAAGTCTTCTGAGTAAACCGATTAAATAAATCAAAACTTTCAACAACGGATCT
CTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAG
AATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCGCTAGTATTCTGGCGGG
CATGCCTGTCCGAGCGTCATTTCAACCCTCAAGCCCCCGGGCTTGGTGTTGGGGATCG
GCGAGCCTCCGCGCCCGCCGTCCCCTAAATCTAGTGGCGGTCTCGCTGTAGCTTCCTC
TGCGTAGTAGCACACCTCGCACTGGGAAACAGCGCGGCCACGCCGTTAAACCCCCAAC
TTCTGAACGTTTGACCTCGGGTCAGGTAGGAATACCCGCTGAACTTAAGCATATCATA

Secuencia consenso obtenido de Staden package de Secuencia ensamblada entre

A6_ITS1 y A6_ITS4

Búsqueda BLAST NUCLEOTIDE

Fig.22: Búsqueda de BLAST. Secuencia ensamblada entre A6_ITS1 y A6_ITS4.

Ensamblaje de secuencias EF1

Utilizar Pregap para preparar las secuencias para el ensamblaje
Paso1: Cargar las secuencias en pregap
Fig.23: Utilizar Add Files en la pestaña “Files to Process” para cargar secuencias
al programa.

Paso 2 y 3: Crear un Gap4 database y Corrida del programa Pregap4

 Fig.24: Se ejecutó PreGap presionando el botón Ejecutar en la esquina inferior
izquierda de la ventana principal. . La pantalla cambiará a la pestaña "Salida de
texto" y los archivos serán procesados.

Quality Clip modificado

Paso 4: Se modifica la opción Quality Clip

Fig.25: Se ejecutó PreGap presionando el botón Ejecutar en la esquina inferior

izquierda de la ventana principal. . La pantalla cambiará a la pestaña "Salida de
texto" y los archivos serán procesados.

Búsqueda de bases de datos

Utilizar la secuencia ensamblada de ITS para hacer una búsqueda de BLAST e
identificar al microorganismo, utilice la base de datos completa y en otra búsqueda
utilice la base de datos de organismos tipo.
Secuencia ensamblada
TCAAGAACCTGATTACTGGTACTTCCCAGGCCGATTGCGCTATTTNTCATCATTGCCG
CCGGTACTGGTGAGTTCGAGGCTGGTATCTCCAAGGATGGCCAGACCCGTGAGCACGC
TCTTCTCGCCTACACCCTGGGTGTCAAGAACCTCATCGTCGCCATCAACAAGATGGAC
ACCACCAAGTGGTCCGAGTCCCGATTCCAGGAGATCATCAAGGAGACCTCCAACTTCA
TCAAGAAGGTCGGCTACAACCCCAAGAGCGTCGCTTTCGTCCCTATCTCCGGATTCAA
CGGCGACAACATGCTTACTGTCTCCACCAACTGCCCCTGGTACAAGGGATGGGAGCGT
GAGACCAAGGGTGGCAAGTACTCTGGCAAGACCCTCCTCGAGGCCATCGACTCCATTG
AGCCCCCCAAGCGTCCTCTTGACAAGCCCCTCCGTCTTCCCCTCCAGGATGTCTACAA
GATCGGTGGTATTGGAACGGTGCCCGTCGGCCGTATCGAGACTGGTATCATCAAGCCC
GGCATGGTCGTCACCTTCGCTCCTTCCAACGTCACCACTGAAGTCAAGTCCGTCGAGA
TGCACCACGAGCAGCTTCAGCAGGGTCTTCCCGGTGACAACGTCGGCTTCAACGTGAA
GAACGTCTCCGTCAAGGAGATCCGACGTGGCAACGTCGCTGGTGACTCCAAGAACGAC
CCCCCTCAGGGTGCCGCTTCCTTCACCGCCCAGGTCATTGTCCTCAACCACCCTGGCC
AGGTCGGTGCTGGTTACGCCCCCGTTCTGGACTGCCACACTGCCCACATCGCCTGCAA
GTTCGCCGAGATCCAGGAGAAGATCGATCGCCGAACCGGTAAGGCTACTGAGTCCGCC
CCCAAGTTCATCAAGTCTGGTGACTCCGCCATCGTCAAGATGGTTCCCTCTAAGCCCA
TGTGTGTTGAGGCTTTCACCGACTACCCTCCTCTGGGCCGATTCGCCGTCCGTGACAT
GCGTCAAC

Secuencia consenso obtenido de Staden package de Secuencia ensamblada entre

A6_EF1_983 y A6_EF1_22188

Búsqueda BLAST NUCLEOTIDE

Fig.26: Búsqueda de BLAST. Secuencia ensamblada entre A6_EF1_983 y

A6_EF1_22188

Secuencia ensamblada
CAAGATTCACATCAAACGTCGTCGTCATCGTAAGTCGAGCACTCATCACCACGCCTGC
CTCGCCGTGACAGCTTGCTGACCTGACTCCTAGGGGTTCGTACTACCACATCGTTCTT
TGAGTTCTCACTAGACAGCTTGCTGACGCCTTTGACAGCCACGTCGACTCTGGCAAGT
CGACCACCGTGAGTACTCCCGCCACCATGACCGCCTTATCTCGGTTGCATTACCCCGC
CATGACCAGCGCGGGGTATTCCTATTACTGCTTACTGACATTCATCAATAGACTGGTC
ACTTGATCTACCAGTGCGGTGGTATCGACAAGCGAACCATCGAGAAGTTCGAGAAGGT
TGGTCCTCTTTTTCCGATTTTATCCTCGATCGTCGGTCGATTCCCACGTCGCCGGTCC
TGCACCCGACGCACATTCTCGCCCCTCGATCAAATTTCCATACTGCAATTTTTTTTGG
TGGGGCGAATTTTACCCCTCCACACATTTGTGGTTGAAATTTGCCCCGCCCCACCCTA
GCATCCCAACCACAAACTCGAGCCTCGTCACATACTATGCACAGAATACTGACAACGT
 CGCCTTACAGGAAGCCGCTGAGCTCGGCAAGGGTTCCTTCAAGTATGCCTGGGTTCTT
GACAAGCTCAAGGCTGAGCGTGAGCGTGGTATCACCATCGATATCGCCCTCTGGAAGT
TCGAGACTCCCCGCTACTTCGTCACCGTCATTGGTAAGTCGCAGCTGTCCATTTACCT
TGACCTGCTTGAACTTGTCCTAACTATTTGCCCACAGACGCTCCCGGACATCGTGATT
TCATCAAGAACATGATCACGG

Secuencia consenso obtenido de Staden package de Secuencia ensamblada entre

A6_Ef1 y A6_Ef2
Búsqueda BLAST NUCLEOTIDE

Fig.27: Búsqueda de BLAST. Secuencia ensamblada entre A6_Ef1 y A6_Ef2

6. RESULTADOS
a) ¿Qué fragmento de ADN está representado en las secuencias de KS29?
atggctcattaaatcagttatcgtttatttgatagtaccttactacttggataaccgtggtaattctagagctaatacatgctgaaaaccccaacttcgggaggggtgtatttattagataa
aaaaccaacgcccttcggggcttcttggtgattcatgataactttacggatcgcatggccttgcgccggcgacggttcattcaaatttctgccctatcaactttcgatggtaaggtattg
gcttaccatggtttcaacgggtaacggggaattagggttcgattccggagagggagcctgagaaacggctaccacatccaaggaaggcagcaggcgcgcaaattacccaatcc
cgacacggggaggtagtgacaataaatactgatacagggctcttttgggtcttgtaattggaatgagtacaatttaaacctcttaacgaggaacaattggagggcaagtctggtgga
cattcagctcccattctgctgacgccagagatagtcgggcatcttgtagatgttatgccggctagtcgatgtacccgctgttttgatgggggggtaccggcaagacaacctggatcg
gggaaggctaaggcatcaaatgagatgctatgctaatcccgagcagagctgccatggagcgatcttggacagcctgtgtagagcacgctaaggtgtcggccagctcatgtagtt
ggcttaagggacgtgccattcccatccgaaagggtggctgccagcaatagcgcccatcacgcgaaggctggcaggttcaaattgtttttgaagattataataggccagcagccgc
ggtaattccagctccaatagcgtatattaaagttgttgcagttaaaaagctcgtagttgaaccttgggtctggctggcaggtccgcctcaccgcgtgtacttgtcc-
ggccgggccttccttctggagaacctcatgcccttcactgggcgtgttggggaccakgacttttactttgaaaaaattagagtgttcaaagcaggcctttgctcgaatacgttagcat
ggaataatagaataggacgtgcggtcctattttgttggtttctaggaccgccgtaatgattaatagggacagtcgggggcatcagtattcaattgtcagaggtgaaattcttggatttat
tgaagactaactactgcgaaagcatttgccaaggatgttttcattaatcagtgaacgaaagttaagggatcgaaaacgatcagataccgtcgtagtcttaaccgtaaactatgccgac
tagggatcgttttttgttctttttctgactctctcggcaccttacgagaaatcaaagtttttgggttctgggggnagtatggtcgcaaggctgaaacttaaagaaattgacggaangggc
accaccaggcgtggagcctgcggcttaatttgactcaacacggggaaactcaccaggtccagatgaaataaggattgacagattgagagctctttcttgatttttcaggtggtggtg
catggccgttcttagttggtggagtgatttgtctgcttaattgcgataacgaacgagaccttaacctgctaaatagccaggctagctttggctggtcgccggcttcttagagggactat
cggctcaagccgatggaagtttgaggcaataacaggttgacctacacaggcctgtaacagtgggcctcattaaagataactgctagttcagcgtcttaaccttctttggggaagtcc
cctactgtcgggagaaggcaagttttacttgtgacgcgggcaacaccacctggtacagggaacgccggacctgctattgcgtttgcaggttggccgatcctgtggcgagccaaa
gtaacgtttggccgtcgcaacgcgcggaaaggggtgggccaacaattgttggcttaaggtacgtgctaatcccttgggtaaccaagctctagcgataagacccgacaggtcaag
gcgctagggggcagttgtgaatattcaactgctggtaggttcagtttttgaaccgttaatgctgtgatgcccttagatgttctgggccgcacgcgcgctacactgacagagccaacg
agttcttcaccttggccgaaaggtctgggtaatcttgttaaactctgtcgtgctggggatagagcattgcaattattgctcttcaacgaggaatgcctagtaagcgcgtgtcatcagcat
gcgttgattacgtccctgccctttgtacacaccgcccgtcgctactaccgattgaatggctcagtgaggccttcggactggcttggggaggttggcaacgaccaccctaagccgga
aagttcgtcaaactcggtcatttagaggaagtaaaagtcgtaacaaggtttccgtaggtgaacctgcggaaggatcattacacgatagtacaggccccaagtgtagaacaaactac
gcagacgggttatgtctattacccttgtttattgagtacctatgtttccttggtgggcttgcccgccaaaaggacaccctattaaacctttttattttcaatcagcgtctgaataaaaataat
aattacaactttcaacaacggatctcttggttctggcatcgatgaagaacgcagcgaaatgcgataagtagtgtgaattgcagaattcagtgaatcatcgaatctttgaacgcacattg
cgccccttggtattccatggggcatgcctgttcgagcgtcatttgtaccttcaagctctgcttggtgttgggtgtttgtctactccactgcgtttggactcgccttaaagtaattggcagc
ctatatttggttttgagcgcagcacattttgcgtcttactgccagttatataggcacccaataagcctttttatcacgtttgacctcggatcaggtagggatacccgctgaacttaagcata
tcaataagcggaggaaaagaaaccaacagggattgccctagtaacggcgagtgaagcggcaacagctcaaatttgaaatctggctctttcagagcccgagttgtaatttgcagag
ggcgctttggcgttggcagcggtccaagttctttggaacaggacgtcacagagggtgagaatcccgtacgtggtcgctagacttcgccgtgtaaagccccttcgacgagtcgagt
tgtttgggaatgcagctctaaatgggaggtaaatttcttctaaagctaaatactggccagagaccgatagcgcacaagtagagtgatcgaaagatgaaaagcactttggaaagaga
gtcaaacagcacgtgaaattgttgaaagggaagcgcttgcagccagacttgcctgtagttgcttatccagacttctgtctggtgcactcttctataggcaggccagcatcagtttggg
cggttggataaaggtctctatcacgtacctctcttcggggaggccttataggggagacgccatgcaaccagcccagactgaggtccgcgcatctgctaggatgctggcgtaatgg
ctgtaagcggcccgtcttgaaacacggaccaaggagtctaacatctatgcgagtgtttgggtgtcaagcccatacgcgtaatgaaagkgaacggaggtgggaacyttttaggtgc
accatcgmccgatcctgatgtcttcggatggattkgagtaaragcatggctgtkgggacccgaaagakggtgaactatgcttgaatagggkgaagccrgagraaactctggtgg
agsctcgcagcggttctrasgtgcaawtcgatcgtcaawttkgggmwtagggscraaagaywaatcramcwatcwrktasytggtycykgcsraagtttcccycrgrww
ascrktaaskwatymrktttwwkragkwaaassrawkgwtwaragscykggggktkraammamcytymmcytwtycymaamyttwaawwwkgwarraaky
cytkgtwmytkgwtkramskkgrmmmytkgawkgwmcsktwmcwakkggscmwttttkgkwarsmrramykgssrakssggrwkramcsramsssgggk
twargkkscmrrawwwwmssyymwymrrmmmcmmmaaargkkktwrktymwyywrrmmrsmrgrmsgkkgscmwkgrarkysgrawycssywa
rgrrkkkkkwammamyymmcykscsrawkramywrgccykraaawkgrwkgsssyymarsskwwtwmccmwwmcccsscsscsgggsmrgaattwak
scccsgssrrkwrgsmagsskggrrgsyyskgaacraascytkggggtgaccccgggtcgaacggcctctagtg

ITS1, ITS2, rARN 18s, rARN 5.8s, rARN 18s, algunos intrones

b) ¿Qué parte de esa secuencia es considerada barcode universal de hongos?

Se encontró que la secuencia más conservada de Ophiosphaerella herpotricha,
con este fragmento fue comparado con la secuencia de análisis. Esta secuencia
expresa el barcode universal de hongos, debido a que alberga secuencias de ITS,
que presentan dos separadores internos transcritos llamados ITS1 e ITS2, que
debido a sus propiedades se utiliza para diferenciar entre miles de especies de
hongos.
Fig.14: Se observa una secuencia conservada Ophiosphaerella herpotricha
isolate A66 18S ribosomal RNA gene, secuencia parcial; espaciador transcrito
interno 1, gen de ARN ribosómico 5.8S y espaciador transcrito interno 2,
secuencia completa; y el gen del ARN ribosomal 28S, secuencia parcial.

Fig.15: Secuencia conservada Ophiosphaerella herpotricha aislado del gen del

ARN ribosomal A66 18S, secuencia parcial; espaciador transcrito interno 1, gen
de ARN ribosómico 5.8S y espaciador transcrito interno 2, secuencia completa;
y el gen del ARN ribosomal 28S, secuencia parcial.
 Fig.16: Alineamiento de fragmento conservado en hongos Ophiosphaerella
herpotricha con secuencia de análisis.
Obteniendo la secuencia barcode:
GGACATTCAGCTCCCATTCTGCTGACGCCAGAGATAGTCGGGCATCTTGTA
GATGTTATGCCGGCTAGTCGATGTACCCGCTGTTTTGATGGGGGGGTACCG
GCAAGACAACCTGGATCGGGGAAGGCTAAGGCATCAAATGAGATGCTATG
CTAATCCCGAGCAGAGCTGCCATGGAGCGATCTTGGACAGCCTGTGTAGAG
CACGCTAAGGTGTCGGCCAGCTCATGTAGTTGGCTTAAGGGACGTGCCATT
CCCATCCGAAAGGGTGGCTGCCAGCAATAGCGCCCATCACGCGAAGGCTGG
CAGGTTCAAATTGTTTTTGAAGATTATAATAGG

c) ¿Qué pasa cuando se hace la búsqueda con la secuencia de KS29 en la base

de datos de organismos tipo?
Se obtuvo que la secuencia de practica se alineo con el espécimen tipo
Pseudocoleophoma calamagrostidis con respecto al ARN subunidad ribosómica
pequeña 18S, y en base a lo obtenido con Blast esta es una secuencia parcial, cepa
KT3284, cobertura de 46%, E valor 0.0 e identidad del 93%.

d) ¿Qué pasa cuando se hace la búsqueda con la secuencia de A6 en la base de

datos de organismos tipo?
 Al ensamblar A6_EF1_983, A6_EF1_22188, se identificó con Beauveria
medogensis cepa 2898 gen factor de elongación-1 alfa, cds parcial.
 Con respecto al ensamble de A6_Ef1 y A6_Ef2, en la búsqueda se identificó
que pertenece a Ilyonectria torresensis factor de elongación cepa PARC142
traslación 1-alfa (TEF1) de genes, cds parcial
 En la región ITS, en el ensamble A6_ITS1 y A6_ITS4, se identificó con
Dactylonectria alcacerensis CBS 129087 región ITS.
e) ¿A qué especie pertenece A6? Ilyonectria sp.
f) ¿Qué fragmento de A6 sirve mejor como barcode para ese grupo taxonómico?
¿Porqué?
Es EF1 debido a que toda su secuencia está presente en el gen, es decir tiene una
buena cobertura e identidad esto se logró observar al hacer un alineamiento entre
la secuencia ensamblada y la de Ilyonectria sp, además ITS1 solo tiene una
buena identidad pero varia con respecto a EF1 con la cobertura, al no ser tan
buena.

Alineamiento entre: Secuencia conservada de Ilyonectria sp. y ensamble de

A6_EF1_983 y A6_EF1_22188
 7. CONCLUSIONES
 Pregap4 proporciona interfaces que ensamblan en una gran secuencia
contigua de datos (secuencia consenso), tomando una serie de secuencias
cortas superpuestas, tratando de ensamblar en un ADNc completo, o incluso
una mezcla de los dos. Se debe tener en cuenta que no hay presencia de
gaps en el contig.
 Staden package proporciona una secuencia consenso fiable con una
longitud de 4315 pb que al analizarla en BLASTNUCLEOTIDE se obtuvo
99% de identidad con el microorganismo Ophiosphaerella herpotricha. Y
99% de identidad con el microorganismo Ophiosphaerella korrae.

8. Bibliografía
Lanteri , Analía A. (2017). Código de barras del ADN y sus posibles aplicaciones en el
campo de la Entomología. Scielo, 11.

Paz A., Gonzalez M. (2011). CÓDIGOS DE BARRAS DE LA VIDA: INTRODUCCIÓN

Y PERSPECTIVA. bdigital, 16.

Sulma P., Jiménez P. (2012). Uso de herramientas bioinformáticas en la evaluación de

secuencias “DNA barcode” para la identificación a nivel de especie. Dialnet, 12.