“Universidad reGiOnaL aUtónOma

de LOs andes”
UNIANDES

FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS

ESCUELA DE:
ODONTOLOGIA

CATEDRA:

“LABORATORIO DE BIOQUIMICA”

SEMESTRE:

TERCERO

AUTORES:
Aldaz Tatiana
Córdova Ma. Fernanda
Carolina Mayorga
Rodríguez Diego

2007
 Agradecimiento
Queremos hacer público nuestro agradecimiento a nuestro respetado catedrático el
Dr. Marcelo Ochoa, y a los docentes que conforman la cátedra BCM-Bioquímica por su guía y
entereza n cada paso de nuestra formación académica.

Ayudantes de Cátedra de Bioquímica

 Dedicatoria

Para toda la gran familia de la Facultad de Ciencias Médicas de nuestra querida

Universidad Autónoma de los Andes; donde estamos forjando nuestras vidas profesionales.

Para las generaciones actuales y futuras que se educan en tan noble institución.

“Pensemos siempre que solo una sólida educación y una buena formación moral nos hace seres
humanos verdaderamente libres”
 PRIMERA PRÁCTICA

HOMEOSTASIS DE LA GLUCOSA

OBJETIVOS:

Al término de la práctica y una vez cumplidas todas las experiencias de enseñanza

aprendizaje, el estudiante será capaz de:

1. Establecer la importancia de los carbohidratos en la producción de energía

metabólica celular.

2. Recordar las diversas formas y clasificaciones que presentan los hidratos de

carbono, tanto en la naturaleza, como en el organismo.

3. Relacionar la alteración del metabolismo de los hidratos de carbono con el

desarrollo de la Diabetes Mellitus.

INTRODUCCIÓN

Los carbohidratos son una fuente de energía para la mayoría de organismos

vivos. Tejidos como el cerebro necesitan de glucosa en forma permanente, y su
deficiencia o exceso ocasiona graves trastornos. Las concentraciones elevadas y
persistentes de glucosa pueden ocasionar ceguera, falla renal y enfermedad
vascular periférica crónica. Una baja cuantía de glucosa a su vez puede causar
convulsiones y aun coma.

METABOLISMO FETAL

Dada su importancia en pediatría nos referiremos brevemente al metabolismo ríe

los carbohidratos en el feto.

La glucosa, el lactato y los aminoácidos son los principales sustratos para el

metabolismo y el crecimiento fetal. La glucosa de la circulación materna se
transfiere al feto por difusión facultada a través de la placenta, por lo que la
concentración de glucosa en el feto es aproximadamente las dos terceras partes
de la concentración plasmática de glucosa en la madre.

Las enzimas gluconeogénicas están presentes en el feto, desde la 10 semana de

gestación. La glucosa utilizada por el feto, está disponible para el metabolismo
oxidativo fetal y es una fuente de carbono para almacenar glucógeno y para la
síntesis de otros compuestos orgánicos. En condiciones normales, del 60 al 70%
de la glucosa utilizada por el feto es oxidada a CO2.

La insulina está presente en el páncreas del feto humano, desde la octava

semana de gestación. Como la insulina no atraviesa la placenta, el incremento
de los niveles de insulina en el último trimestre de gestación, puede reflejar un
incremento de la liberación de insulina pancreática fetal. Sin embargo, el páncreas
fetal parece ser menos sensible a los cambios de concentración de glucosa que el
páncreas del adulto. La secreción de insulina se aumenta por la hiperglucemia
fetal aguda.
Por su parte el glucagón está presente desde el comienzo del segundo
trimestre, aunque en un feto normal y con concentraciones de glucosa materna
normal, no parece tener una función reguladora.

Por otra parte, la síntesis de glucógeno empieza al comienzo de la novena

semana de gestación en el embrión humano, y la mayor cantidad de glucógeno
se acumula durante el último trimestre.

Se ha observado que los niveles de glucógeno en pulmón y músculo cardíaco

declinan suavemente, cuando el feto se acerca al término. El almacenamiento de
glucógeno cardíaco puede servir como fuente de energía durante períodos de
estrés como por ejemplo en casos de asfixia fetal. Los contenidos de glucógeno
hepático y muscular alcanzan al final de la gestación de 3 a 5 veces los niveles de
un adulto y forman un importante pool de reserva de energía para el feto y el
recién nacido. La síntesis de glucógeno hepático se regula en el feto por medio de
la glucógeno sintetasa y la glucógeno fosforilasa.

En el momento del nacimiento, se interrumpe el suministro de glucosa por la

placenta y la glucosa sanguínea cae, de modo que el glucagón comienza a
aumentar con un pico máximo en las dos primeras horas de vida estimulando la
glucogenolisis hepática.

También hay cambios en las enzimas fetales. La hexocinasa fetal importante en

la glucólisis, tiene una actividad 500 veces más elevada que en los adultos,
disminuye en los últimos cinco de gestación llegando a valores de adulto a los 21
días después del nacimiento.

Por su parte la fructocinasa y la galactocinasa no tienen actividad en el hígado

fetal con niveles bajos después del nacimiento y alcanza un pico en el periodo de
destete.

La principal forma de obtención de energía de los tejidos fetales es la glucólisis, y

corno resultado de ello una alta producción de lactato (90%) y solo el 10% da
origen a la acetil Co A. El lactato a su vez es una fuente de producción de la
glucosa por el mecanismo cíe la gluconeogénesis.

GLUCEMIA Y MECANISMOS DE CONTROL

Una persona adulta de vida sedentaria, consume diariamente 200 a 300 g de

glúcidos, 70-100 g de proteína y 60-90 g de grasa, que corresponden a un
requerimiento energético diario de 1600 a 2400 Kcal. Las reservas energéticas se
movilizan entre las comidas y durante la noche para mantener la glucosa
sanguínea.

La disponibilidad constante de combustibles en la sangre se denomina

Homeostasis calórica, la cual implica que el nivel sanguíneo de combustible en
equivalente de ATP, no cae debajo de cierto límite, independientemente de si la
persona se encuentra en un estado de buena nutrición o en ayuno

La homeostasis de la glucosa se logra mediante dos ajustes:

 A) regulación entre la captación periférica y la producción hepática de glucosa
que mantiene niveles entre 70- 110 mg/dl.

B) Regulación hormonal por el mantenimiento de un balance entre liberación y

acción de la insulina, por un lado, y por otro las respuestas opuestas
mediadas por el glucagón, catecolaminas, hormona del crecimiento y
cortisol.

Hay que considerar que también ciertos fármacos son capaces de presentar entre
sus efectos indeseables, alteraciones de los carbohidratos como ocurre con los
diuréticos, beta bloqueadores, simpaticomiméticos, corticoides y hormonas
sexuales.

Dado que la mayor parte de la glucosa es fuente exógena se reconocen dos

períodos:

1. Estado post-prandíal en la que la disponibilidad de nutrientes es superior

a la demanda, por lo que hay una síntesis neta de la sustancia de reserva.

2. Estado post-absortivo (6-12 horas) en la que se produce una degradación

neta de la sustancias de reserva (glucógeno).

En el estado post-prandial, la concentración sérica de glucosa es elevada y la

relación insulina/glucagón alta, a favor del numerador.

La glucosa sumada a secretagogos como los ácidos grasos libres, cuerpos

cetónicos y aminoácidos (que inducen la liberación de calcio libre en el interior del
acino pancreático), obran como un estimulador de las células beta del páncreas
que producen una pre -prohormona conocida como pre-pro insulina, de la cual
se escinde el péptido señal de 23 a.a. para formar la pro insulina, la cual por
acción de proteasas llega a constituir la insulina + el péptido C.

Cabe señalar que el incremento del calcio intracelular pancreático, se asocia a

una elevación del ATP, promoviéndose la activación de los canales iónicos de
membrana que permiten la liberación de insulina.

Normalmente un páncreas funcional produce y libera diariamente 40 a 50

unidades de insulina, pero tiene cientos de unidades almacenadas bajo reserva.

La acción de la insulina involucra varios pasos posteriores a la unión de la

hormona con sus receptores formados por 2 subunidades alfa extracelulares y 2
subunidades beta transmembrana y citoplasmática.

La insulina se une a la subunidad alfa y produce fosforilación de residuos de

tirosina en las subunidades beta, lo cual desencadena una cascada de
fosforilaciones tanto del mismo receptor como de otras moléculas
intracitoplasmáticas, de las cuales la más importante es el denominado sustrato
del receptor insulínico tipo 1 o IRS 1. Si por error metabólico la fosforilación ocurre
sobre residuos de treonina o de serina del receptor, lo que ocurre es una
disminución de la acción insulínica.
Toda esta cadena de eventos, inducen la translocación a la membrana
plasmática de transportadores de glucosa (GLUT 4) hasta la activación de las
vías metabólicas implicadas en el almacenamiento de las reservas energéticas.

La insulina cumple con cinco grandes efectos fisiológicos:

A. Inhibe la liberación de ácidos grasos del tejido adiposo (lipólisis)

B. Promueve la síntesis de glucógeno
C. Acelera el transporte de glucosa a través de GLUT 4, en el músculo y tejido
adiposo
D. Activa la síntesis de triglicéridos en el tejido adiposos (lipogénesis)
E. Inhibe la síntesis de glucosa en el hígado (glucogénesis)

Es común; encontrar en la clínica, el término sensibilidad a la insulina, a la cual

definimos como la relación entre el grado de utilización de la glucosa
plasmática y los cambios en la concentración de la hormona.

Una disminución en la acción de la insulina (resistencia a la insulina) puede

producirse como consecuencia de una alteración a nivel de pre o post-receptores,
disminución del flujo sanguíneo tisular, alteración del transporte celular de glucosa
o defectos intracelulares del metabolismo (principalmente en el músculo
esquelético). La toxicidad de la glucosa en la hiperglucemia crónica puede alterar
la secreción de insulina e inducir la resistencia a la insulina.

La disminución del nivel plasmático de la glucosa en rangos fisiológicos, conlleva

la disminución de la secreción de insulina. Si se producen disminuciones
adicionales de la glucemia, se incrementa la secreción de las hormonas
contrarreguladoras: glucagón, adrenalina, cortisol y hormona del crecimiento que
tienen efectos antagónicos a la insulina en hígado y tejidos periféricos.

Estos efectos típicos de un estado post- absortivo, son de comienzo rápido en el

caso del glucagón y adrenalina y más retrasado si se trata de cortisol y hormona
del crecimiento. El glucagón tiene un potente efecto en la gluconeogénesis,
glucogenolisis hepáticas y movilización de reservas lipídicas. Las catecolaminas
especialmente adrenalina, potencian la secreción del glucagón, inhiben la
actividad de la glucógeno sintetasa y estimulan la lipólisis, glucogénesis y
gluconeogénesis. Las catecolaminas además tienen un efecto alfa adrenérgico
que limita la secreción de insulina y predomina sobre el efecto beta adrenérgico
(liberador de insulina).

Juntos catecolaminas y glucagón, movilizan las reservas energéticas en

hígado, tejido adiposo y músculo esquelético, para producir sustratos como
glucosa y ácidos grasos libres para el metabolismo celular durante la
hipoglucemia o estrés.

El cortisol estimula la lipogénesis, la degradación proteica y la gluconeogénesis a

tiempo que estimula la liberación de adrenalina por la médula suprarrenal.

Por su parte la hormona del crecimiento tiene efectos sinérgicos y antagónicos

con la insulina. El efecto sinérgico está dado mediante la somatomedina C con
efectos pro-insulínicos, mientras que es antagónico en tanto inhibe el trasporte y
utilización de la glucosa en los tejidos periféricos e incrementa la lipólisis.

De lo que hemos señalado, el hígado norma! cumple un pape! fundamental en la

regulación de la glucemia. Un hígado normal es glucogénico, glucolítico,
hipogénico y colesterogénico.

En estado de ayunas el hígado es diferente: glucógenolítico, gluconeogénico,

cetogénico y proteolítico.

En palabras simples, el hígado es un estratega de altos kilates pues almacena

calorías cuando hay alimento, pero al mismo tiempo es capaz de movilizar estos
depósitos cuando el resto del cuerpo lo necesita.

Bajo estos mecanismos reguladores, la glucosa sanguínea se mantiene siempre

bajo estrechos límites fisiológicos en la sangre, mientras que las concentraciones
de cuerpos cetónicos o de ácidos grasos varían en uno o dos órdenes de
magnitud. La proporción de insulina/glucagón variará desde 0.5 en una persona
bien alimentada a 0.05 después de un ayuno de 3 días.

MARCHA EXPERIMENTAL

DETERMINACIÓN DE GLUCOSA POR ESPECTROFOTOMETRIA

La oxidación enzimática de la glucosa por la enzima glucosa oxidasa (GOD)

forma ácido glucónico y peróxido de hidrógeno. En presencia de peroxidasas
(POD), el H2O2 produce la oxidación copulativa del fenol con la 4, aminofenazona
(4,AF) y la formación de un cromógeno de color rojo cereza que exhibe una
absorción máxima a 505 nm.

Reactivos

1. Reactivo de trabajo (GOD y POD)

2. Aminofenazona

3. Fenol

4. Estándar (100 mg/dl)

Técnica y procedimientos

En tres tubos de ensayo rotulados como blanco, estándar y desconocido,

pipetear:
Reactivos Blanco Estándar Desconocido
Estándar No 20 l No
Muestra No No 20 l
R. de 2 mi 2 mi 2 mi
trabajo
Incube en baño María a 37 °C durante 10 minutos y proceda a la lectura
espectrofotométrica con 505 nm, llevando al 100 % de transmitancia con el tubo
blanco, luego registre las lecturas del estándar y del desconocido. Transforme las
lecturas en absorbencias utilizando la tabla del anexo.

Cálculo

Glucosa (mg/dl) = D x F

donde, F = 100 mg/dl / absorbencia del estándar

Valores de referencia

Suero o plasma 0,7 a 1,10 g/l

Sangre total 0,6 a 1,00 g/l

LCR 0,4 a 0,74 g/l

PREGUNTAS

1. Consultar que significa la hipoglucemia fisiológica y patológica.

2. Consultar que significa la hiperglucemia fisiológica y patológica.

3. Alteraciones de los carbohidratos que afectan la boca y estructura bucal.

4. Cuales son los valores normales de glucemia en el ayuno y estado

postprandial.
 SEGUNDA PRÁCTICA

COLESTEROL

OBJETIVOS.

Al término de la práctica el estudiante estará en capacidad de:

1. Recordar la importancia y clasificación de los lípidos presentes en el

organismo.

2. Relacionar las alteraciones metabólicas de los lípidos con el desarrollo de

patología relacionadas, en especial el colesterol.

INTRODUCCIÓN

Presente en todas las células, el colesterol es una sustancia grasa natural,

constituida por un esqueleto de 27 carbonos, dispuestos en dos ciclos hexanos,
un ciclo pentano y una cadena lateral alifática. De carácter insoluble, posee en el
carbono 3 un grupo OH por el se fija y muestra al medio acuoso, mientras que el
resto de la molécula se sepulta en el interior de las estructuras celulares por su
carácter hidrofóbico. Son alimentos ticos en colesterol y grasas saturadas las
carnes rojas y derivados, pollo con piel, carne de cerdo, todo tipo de embutidos,
chocolates, huevos y productos lácteos enteros.

De origen hepático y exógeno, constituye un elemento químico importante por su

participación en la síntesis de hormonas esteroides y pro-vitamina D3, y cuya
síntesis se ejecuta en más del 50% en el organismo, es decir cerca de 500 mg/
día.

Si consideramos como un 100% todo el organismo, el 50% se elabora en el

hígado, un 15% en el intestino y el resto en la piel y lo hace tanto en el retículo
endoplásmico como en el citoplasma.

Su síntesis involucra cinco pasos fundamentales:

1. Formación de HMG CoA. (3 hidroxi 3 metil glutaril CoA) a partir de la acetil

Co. A

2. Fosforilación del mevalonato para formar unidades isoprenoides activas

(isopentanilpirofosfato)

3. Condensación de 3 moléculas de isopentanilpirofosfato para formar el

farnesilpirofosfato, que se condensa con los isoprenoides y forma el
geranilpirofosfato y luego en escualeno.

4. El escualeno que tiene una estructura semejante a los esteroides, se

convierte en lanosterol al ciclarse la molécula.

5. Formación del colesterol.

La principal enzima del ciclo de biosíntesis, es la HMD glutaril Co.A reductasa,
que puede ser inhibida por medicamentos que impiden su síntesis. Por otra parte
se ha descrito una variación diurna que afecta tanto a la síntesis como a la
actividad de la reductasa. La administración de insulina o hormona tiroidea
produce un incremento de la actividad de la enzima clave, mientras que el
glucagón o los corticoides lo reducen.

En el hombre, el colesterol total que se eleva con la edad, se halla esterificado en

cerca del 75%, siendo transportado por las lipoproteínas de forma esférica,
encontrándose en mayor cantidad en las LBD o beta lipoproteínas.

Su excreción de cerca 1 g diario, se cumple en un 50% por las heces como

coprostanol y el resto como esteroides neutros.

Dado que el colesterol es un factor de riesgo para sufrir enfermedad coronaria,

junto con el tabaquismo, hipertensión arterial, diabetes, sobrepeso u obesidad e
inactividad física, edad mayor de 45 años en hombres y de 55 en mujeres, historia
familiar de fallo cardíaco, se lo dosifica junto a las lipoproteínas HDL y LDL.

El colesterol HDL es el llamado colesterol bueno por ayudar al organismo a

arrastrar el colesterol desde los sitios periféricos al hígado para que se
metabolice, protegiendo de esta manera la acumulación del colesterol en tejidos y
arterias.

Por el contrario el colesterol LDL es el colesterol malo, porque transporta el

colesterol por todos los sitios del organismo, depositando el lípido en la pared de
arterias formando placas de ateroma que pueden ocluir el sistema vascular; por
tanto cuanto mayor son los niveles de colesterol LDL en sangre, mayor es el
riesgo de sufrir enfermedad coronaria.

Se considera que los niveles de colesterol deseable o saludable, son menores de

200 Mg. / dl; Colesterol LDL menor a 130 mg / dl y Colesterol HDL menor a 35
mg / dl. Se considera como límite de riesgo tipo Boderlein o limítrofe entre 200 a
239 Mg. / dl de colesterol. Se considera como valores bajo de colesterol HDL, a
cifras menores de 35mg / dl.

El colesterol LDL es considerado como una mejor orientación de enfermedad

coronaria que el colesterol total aislado. Sus cifras tienen un valor significativo si
se acompañan de un colesterol HDL bajo, un colesterol total elevado o Boderlein
y dos o más factores de riesgo.

Se ha observado una hipercolesterolemia en casos de ictericia obstructiva,

cirrosis biliar, hipotiroidismos, síndrome nefrótico, diabetes mellitus, xantomatosis,
gota, etc. Quinto mes de embarazo y postparto.

Las principales funciones de los lípidos son las siguientes:

Ácidos grasos: Combustible metabólico, constituyentes de lípidos.

Prostaglandinas: Moduladores intracelulares.

Esteres de Glicerol

 Acilgliceroles: Depósitos de ácidos grasos, intermediarios metabólicos.

 Fosfoglicéridos: Estructura de membrana

 Esfingolípidos

 Esfingomielina: Estructura de membrana

 Glucoesfingolípidos: Membranas, antígenos de superficie

Derivados del esterol

 Colesterol: Estructura de membrana y de lipoproteínas

 Esteres de Colesterol: Almacenamiento y transporte

 Ácidos biliares: Digestión y absorción de lípidos

 Hormonas esteroides: Regulación metabólica

 Vitamina D: Metabolismo de calcio y fósforo

Terpenos

 Dolicoles: Síntesis de glucoproteínas

 Vitamina A : Visión, integridad epitelial, expresión genética y crecimiento.

 Vitamina E: Antioxidante lipídico

 Vitamina K: Coagulación sanguínea

ALTERACIONES PATOLÓGICAS RELACIONADAS CON EL METABOLISMO

DEL COLESTEROL

El organismo de los seres vivos funciona en tal armonía que cada célula lleva
consigo la información de su respectivo rol a jugar en determinado momento de la
vida. De esta manera en los seres humanos los componentes lipídicos funcionan
coordinadamente manteniendo funciones específicas.

Cuando esta coordinación, no funciona, se genera una serie de alteraciones

patológicas:

Depósitos de Colesterol

En algunas lipidosis el colesterol se acumula en diversas partes del cuerpo como

huesos y otros tejidos. Debido a la coloración amarillenta de éstos depósitos, la
enfermedad toma el nombre de xantomatosis, misma que puede cursar o no con
alteraciones en los niveles séricos de colesterol o de alguna lipoproteína, como es
el caso del xantoma diseminado o síndrome de Hand Schuller Christian, en el que
se observa además de lesiones óseas y del sistema nervioso. Estos depósitos de
colesterol suelen observarse también en diabetes mal controlada, hipotiroidismo y
obstrucción biliar (xantomatosis secundaria ).

Acúmulos de colesterol en el árbol biliar

El colesterol se mantiene en solución en la bilis, debido a la acción hidrotrópica de

las sales biliares y por la combinación con las proteínas secretadas por la pared
de la vesícula. De esta manera el colesterol contribuye indirectamente a la
formación de cálculos biliares, junto a otros factores como el estasis de la bilis y
los procesos de desarrollo bacteriano concomi-tantes (colecistitis - colelitiásis).
Todo esto hace que el colesterol se precipite y forme un cálculo solitario,
generalmente de gran tamaño o múltiples cálculos facetados con mezclas
variables de colesterol, pigmentos biliares y calcio (colelitiasis).

Modificaciones del colesterol circulante

El hígado produce y capta colesterol plasmático. La vida media del colesterol en

el plasma es de aproximadamente 8 días e inmediatamente es esterificado a nivel
hepático, por lo que en afecciones como la necrosis hépatocelular, e intoxicación
por fósforo blanco, este suele disminuir a cifras de 70 a 700 mg por 100 ml (valor
normal 150 a 250 con un 75% de esterificación). La disminución de la
esterificación se relaciona con el grado de afección hépatocelular.

La ateroesclerosis

En aquellos casos en los cuales las cifras de colesterol se mantienen

crónicamente elevadas, este suele depositarse en el endotelio de las arterias,
especialmente a nivel de las coronarias, formando placas constituidas por
colesterol y sus ésteres y en cantidades menores por fosfolípidos y
triacilglicéridos. Las alteraciones de los lípidos plasmáticos que más influyen
sobre el depósito de grasas sobre las arterias son :

1. Incremento en la concentración de lipoproteínas de muy baja densidad

(VLDL) y normalidad de lipoproteínas de baja densidad (LDL)

2. Incremento en la concentración de LDL

3. Incremento de los niveles de VLDL y LDL

4. Niveles bajos de las lipoproteínas de alta densidad (HDL)

La nutrición en lípidos de las personas, constituye un factor de riesgo mayor para

el desarrollo de ateroesclerosis (exceso de ácidos grasos saturados en la dieta).

Los principales factores de riesgo para el desarrollo de la ateroesclerosis son :

antecedentes genéticos y familiares, edad, sobrepeso y consumo de una dieta
rica en lípidos, estilo de vida sedentario, estrés, hábito de fumar e ingesta de
alcohol excesiva.
Desde la perspectiva de salud y nutrición, se recomienda evitar los factores de
riesgo señalados y en el aspecto dietético se debe procurar una reducción
máxima del total de grasa ingerida a menos del 30 % de la energía requerida,
reducir la ingesta de grasas saturadas a menos del 10% de la energía requerida y
reducir el consumo de colesterol a menos de 30mg./ día (1 huevo = 212mg).

MARCHA EXPERIMENTAL
(Tecnica de Crockett y Tecnica de Moline)

COLESTEROL TOTAL (TECNICA DE CROCKETT)

Principio. Este método consiste en añadir de una forma prefijada una

microcantidad de suero a una mezcla reactiva ya preparada, que es una mezcla
ternaria formada por anhídrido acético, ácido acético y ácido sulfúrico.

Toma del producto. 2ml de sangre total extraída del enfermo en ayunas, en un
tubo seco.

Reactivo. Reactivo de color, de composición idéntica al indicado para el método

extractivo.

Técnica. En una serie de tubos de ensayo introducir 4ml de reactivo de color.

Añadir a la parte superior de esta mezcla, sin mezclar, 0.2ml de suero.

Para evitar la mezcla se utiliza una micropipeta de 0.2ml, cuya capilaridad

produce un descenso lento del suero. Para recuperar los últimos vestigios de
sueros retenidos, se eleva la micropipeta de modo que la punta se encuentre
situada 3 o 4 cm. por encima de la mezcla reactiva y en contacto con la pared del
tubo; se sopla entonces con precaución para evitar la mezcla.

Como anteriormente, la escala de patrones se efectúa mediante un suero de

referencia con una tasa alta de colesterol. Después de reconstruir el suero patrón
se diluye una fracción al ½ con suero fisiológico.

PREGUNTAS

1. Cite las características físico-químicas de lípidos

2. Que son los ácidos grasos Omega 3 y Omega 6; defina su importancia y

sus fuentes alimenticias

3. Patologías causadas por el aumento de los valores normales de colesterol.

(Mínimo tres y descríbalas)
 TERCERA PRÁCTICA
PROTEÍNAS SERICAS
Objetivos:
Al terminar la práctica y una vez cumplidas todas las experiencias de enseñanza
aprendizaje, el estudiante será capaz de:
1. Identificar la importancia de la albúmina y la globulina en el organismo.
2. establecer relaciones entre los niveles de albúmina y globulina como un
acercamiento a la clínica y diagnostico de enfermedades.
Introducción:
Las proteínas son constituyentes de los músculos, las enzimas, las hormonas, los
vehículos de transporte, la hemoglobina y otras sustancias funcionales y
estructurales claves del organismo. Las proteínas forman el componente más
significativo que contribuye a la presión osmótica dentro del espacio vascular.
Esta presión osmótica sirve para mantener el líquido dentro del espacio vascular y
minimizar, por tanto, su extravasación.

La albúmina y la globulina constituyen la mayor parte de las proteínas dentro

del cuerpo y se miden como proteínas totales.

La albúmina: es una proteína sintetizada por el hígado. Constituye

aproximadamente el 60 por ciento de las proteínas totales. El principal objetivo de
la albúmina dentro de la sangre consiste en mantener la presión osmótica
coloidal. Además, la albúmina transporta constituyentes sanguíneos importantes,
como fármacos, hormonas y enzimas.

Las globulinas son los constituyentes fundamentales de los anticuerpos. Su

papel en el mantenimiento de la presión osmótica es mucho menor que el de la
albúmina. En menor grado, las globulinas actúan también como vehículos de
transporte.
Tanto la albúmina como las globulinas pueden medirse por separado.
La albúmina es sintetizada dentro del hígado y, por tanto, proporciona una
medición de la función de los hepatocitos.

Las globulinas se dividen a grandes rasgos en globulinas alfa-1, alfa-2, beta y

gama globulinas, las cuales se pueden separar y cuantificar en el laboratorio
mediante la electroforesis y la densitometría.

La fracción alfa-1 incluye la alfa-1 antitripsina y la globulina fijadora de tiroxina.

La fracción alfa -2 contiene la haptoglobina, ceruloplasmina, HDL y alfa-2
macroglobulina.
En general, los niveles de proteínas alfa-1 y alfa-2 aumentan cuando hay
inflamación. La fracción beta incluye la transferrina, el plasminógeno y las beta
lipoproteínas
La fracción gama incluye los diferentes tipos de anticuerpos (immunoglobulinas
M, G y A).

Explicación de la prueba y fisiología relacionada

Cuando una enfermedad afecta a la célula hepática, el hepatocito pierde su
capacidad para sintetizar albúmina, cuyo nivel sérico disminuye mucho. Sin
embargo, puesto que la albúmina tiene una vida media de 10-18 días, la
afectación severa de la síntesis hepática de albúmina no se puede reconocer
hasta transcurrido ese tiempo.

La albúmina y la globulina séricas también son parámetros de nutrición. Los

pacientes desnutridos muestran niveles muy disminuidos de proteínas séricas.
Además, los pacientes con enteropatías y uropatias pierden proteínas
presentando niveles bajos, a pesar de una síntesis normal.
Algunas enfermedades disminuyen selectivamente la albúmina, mientras las
globulinas permanecen normales o aumentan para mantener una cantidad normal
de proteínas totales. Por ejemplo, en las enfermedades colágeno-vasculares
como el caso del lupus eritematoso, la permeabilidad capilar está aumentada.
La albúmina, una molécula mucho menor que la globulina, se pierde de forma
selectiva hacia el espacio extravascular. Otro grupo de enfermedades que
también se asocian con albúmina baja, globulina alta y proteínas totales normales
son las enfermedades hepáticas crónicas. En estos casos, el hígado no puede
producir albúmina, pero la globulina es sintetizada adecuadamente en el sistema
reticuloendotelial. El nivel de albúmina es bajo en ambos tipos de enfermedades,
pero la cifra de proteínas totales se mantiene normal debido al aumento de
globulinas. Estos cambios, sin embargo, se pueden detectar midiendo la relación
albúmina/globulina. En condiciones normales, esa relación es superior a 1,0. Las
enfermedades que acabamos de mencionar se asocian con relaciones más bajas.

Interpretación de la prueba
ALBÚMINA
1. Niveles aumentados:
 Hemoconcentración.

2. Niveles disminuidos:
 Enfermedad hepática (hepatitis, cirrosis, necrosis hepatocelular).
 Enteropatias pierde proteínas (Síndrome de malabsorción, Enf. de Crohn,
esprúe, Enf. Whipple).
 Nefropatía pierde proteínas (Síndrome nefrótico, glomerulonefritis).
 Pérdidas hacia el tercer espacio (ascitis, quemaduras tercer grado).
 Desnutrición.
 Dilución secundaria a un exceso de líquidos IV.
 Aumento de la permeabilidad capilar (Enf. colagenovasculares).

GLOBULINA
1. Niveles aumentados:
 Tumores Inmunológicos (p. ej., mieloma múltiple).
2. Niveles disminuidos:
 Desnutrición.
 Deficiencias inmunológicas.

PROTEÍNAS TOTALES
1. Niveles aumentados:
 Hemoconcentración.

FACTORES QUE ALTERAN LOS RESULTADOS

Entre los fármacos capaces de aumentar los niveles de proteínas se incluyen:
 esteroides anabólicos
 andrógenos,
  corticoesteroides
 dextrano
 hormona del crecimiento
 insulina
 fenazopiridina
 progesterona.
Entre los fármacos que pueden disminuir los niveles de proteínas se incluyen:
 iones amonio
 estrógenos
 fármacos hepatotóxicos
 anticonceptivos orales.

MARCHA EXPERIMENTAL
Determinación de proteínas totales por espectrofotometría
Los enlaces peptídicos reaccionan en medio alcalino con el ion cúprico para
formar un complejo de color violeta, cuya intensidad de color es proporcional a 1a
concentración de proteínas totales de la muestra.

Reactivos y método
En tres tubos de ensayo dispense:
Pipetear en las cubetas Reactivo Blanco Muestra o Estandar
Muestra/ estándar ------ 20 ul
Reactivo de color 1000 ul 1000 ul
Mezcle, incube por 10 min de 20 a 25 °C. Mida la absorbancia de la muestra y del
estándar frente al reactivo de color en 30 minutos.

Cálculos:
Con factor:
g/dl = 19 x Absorbancia o g/dl = 190 x Absorbancia

Con Estándar:
g/dl = 8 x Absorbancia de la muestra o g/dl = 80x Absorbancia de la muestra
Absorbancia del estándar Absorbancia del estándar
 PREGUNTAS

1. Digestión, absorción y transporte de aminoácidos

2. Cuales son las formas de eliminación del nitrógeno proveniente de las

proteínas

3. Valores normales de proteínas en sangre.

4. Que es la albuminuria
 CUARTA PRÁCTICA
UREA
OBJETIVOS:

Al término de la práctica ya cumplidas todas las experiencias de enseñanza

aprendizaje, el estudiante estará en la capacidad de:

1. Identificar la importancia del ciclo de la urea.

2. Comprender los mecanismos de eliminación del nitrógeno.
3. Ratificar la importancia del metabolismo de las proteínas.

INTRODUCCIÓN.

Ciclo de la urea.

El metabolismo de los aminoácidos y la degeneración de las bases nitrogenadas

(púricas y pirimídicas) generan importantes cuantías de amoniaco (NH 3). Su
estructura química corresponde al de una base de fuerza mediana y representa
para el organismo un poderoso veneno celular. En concentraciones elevadas
(niveles de amonio en sangre de 5x10-5 M son altamente tóxicos) puede lesionar
las neuronas, por lo tanto, éste debe inactivarse y excretarse rápidamente. En el
hombre se elimina principalmente en forma de urea.

La urea es la diamida del ácido carbónico; contrariamente al amoniaco, ésta es

neutra y no tóxica. Es una molécula de pequeño tamaño desprovista de cargas y
puede atravesar las membranas. Como ella es muy soluble en el agua, puede
transitar en la sangre y eliminarse con la orina.

La evolución ha conducido a la aparición de varios mecanismos para la

eliminación de iones amonio. Existen organismos amoniotélicos, que excretan
directamente los iones amonio a la atmósfera o al agua, como por ejemplo: una
gran parte de peces, anfibios acuáticos, nematodos y protozoos.

Las aves y los reptiles terrestres excretan amonio e forma de ácido úrico y se les
conoce como organismos uricotélicos. El hombre y la mayor parte de vertebrados
terrestres eliminan este metabolito tóxico en forma de úrea, a través de un ciclo
metabólico conocido como el ciclo de la urea y por ello reciben el nombre de
organismos ureotélicos.

En 1932, H. A. Krebs y K. Henseleit propusieron por primera vez la existencia del

ciclo de la urea, también conocido como ciclo de krebs-Henseleit o ciclo de la
ornitina, esto sucedió cinco años antes del conocimiento de todas las reacciones
del ciclo del ácido cítrico.

El ciclo de la urea consta de cinco pasos secuenciales, y se lleva a cabo

especialmente en el hígado; las dos primeras reacciones se realizan en el interior
de las mitocondrias y las tres restantes en el citosol.

El ciclo de la urea constituye el principal eliminador de amoniaco del organismo.

Los desordenes metabólicos que conducen un anormal funcionamiento de las
enzimas que sintetizan la urea en el ciclo son potencialmente fatales. La terapia
disponible en el momento actual comprenden las siguientes acciones:

1. Limitar la ingesta proteica y la potencial formación de amoniaco.

2. Remover el exceso de amoniaco.
3. Mimetizar el ciclo de la urea con detoxificadores alternativas.

DISEÑO EXPERIMENTAL

Método

La urea se hidroliza por acción de la ureasa en presencia de agua para producir

amoniaco y dioxido de carbono. En una reacción de Berthelot modificada los
iones amonio reaccionan con hipoclorito y salicilato para formar un complejo
verde. El aumento de la absorbancia a 578nm es proporcional a la concentración
de urea en la muestra.

Muestras

Suero, plasma (todos los anticoagulantes, excepto el heparinato de amonio

pueden ser usados) y orina.

No usar suero lipémicos.

Suero o plasma se puede almacenar hasta 3 días a 4 grados centígrados.

Ensayo

Longitud de onda: Hg 578 nm

Paso de luz: 1 cm
Temperatura: 20 a 25 gradoas centígrados, 37 grados centígrados
Medición: frente a un blanco de reactivo. Solo se requiere un blanco de
reactivo por serie.

Esquema de pipeteo

Pipetear en cubetas Blanco Reactivo Muestra o Estándar

Muestra/Estándar --------- 10 ul
Reactivo 1a 1000 ul 1000 ul
Mezclar, incubar por 10min a 20 - 25ºC o por 3 min a 37ºC
Reactivo 2 100 ul 1000 ul
Mezclar, incubar por 10min de 20 a 25ºC o por 5 min a 37ºC.
Leer la absorbancia de la muestra y el Estándar frente a un
blanco reactivo antes de 60min.

Calcular la concentración de Urea

Para suero/plasma.

Muestra x 80
Estándar .

Resultado se expresa en mg/dl.

Valores de referencia:

Urea (Suero): 10 – 50 mg/dl.

PREGUNTAS

1. Describa el ciclo de la urea

2. Consultar el método de cuantificación de ácido úrico en sangre.

3. Que son organismos amoniotelicos y organismos ureotelicos

BIBLIOGRAFIA

ESTEVEZ M. Edmundo, CALLE M. Andrés y TERAN T. Enrique. BIOQUIMICA

MÉDICA; EL LABORATORIO. Primera Edición. Editorial Propumed, Quito-
Ecuador. Mayo 2002.

Dr. YEPEZ Rodrigo. BIOQUIMICA MÉDICA EN EL LABORATORIO. Tomo I.

Arco Iris, producción grafica. Quito-Ecuador. 2004.

DEVAUX Guy. TECNICAS DE BIOQUÍMICA MEDICA. Editorial JIMS.

MURRAY R, GRANNER D, MAYERS P, RODWELL V; BIOQUIMICA DE

HARPER. Editorial El manual Moderno, Mexico, 1988.

ESTRELLA R. BIOQUIMICA Y BIOLOGIA MOLECULAR. Editorial

Interamericana. La Paz-Bolivia, 1996.

NEWSHOLME F.A. LEECH, A. BIOQUIMICA MEDICA. Editorial

Interamericana, México, 1987.