Anda di halaman 1dari 12

Pengaruh Ekstrak Dari Elder Flower (Sambucus nigra) sebagai penghambat proinflamasi

pada periodontitis

Latar Belakang: induksi berkepanjangan pada tingkat mediator inflamasi yang berlebihan
yang berkontribusi pada patogenesis dari status penyakit kronis, seperti periodontitis. Hal ini
demikian penting untuk mengembangkan strategi anti-inflamasi yang aman dan efektif untuk
alasan terapeutik. Pada penelitian ini, ditentukan kemampuan dari ekstrak air dari elderflower
(Sambucus nigra) untuk menghambat aktivitas proinflamasi faktor virulensi utama dari
patogen periodontal Porphyromonas gingivalis dan Actinobacillus actinomycetemcomitans.

Metode: Monosit / makrofag atau neutrofil yang diinkubasi dengan seluruh sel P. gingivalis,
A. actinomycetemcomitans, atau komponen dimurnikan (lipopolisakarida dan fimbriae)
dengan tidak adanya atau adanya ekstrak dari elderflower dan diuji untuk produksi sitokin,
aktivasi integrin, atau induksi oxidative burst.

Hasil: Ekstrak elderflower yang ditemukan potensi penghambat semua aktivitas proinflamasi
diuji. Investigasi mekanisme yang mendasar mengungkapkan bahwa ekstrak anti-inflamasi
yang menghambat aktivasi faktor transkripsi nuklir kB dan phosphatidylinositol 3-kinase.

Kesimpulan: Ekstrak elderflower memperlihatkan sifat antiinflamasi yang berguna yang


dapat dimanfaatkan untuk terapi kontrol inflamasi pada periodontitis.

KEY WORDS : Actinobacillus actinomycetemcomitans; cytokines; inflammation; nuclear


factor-kappa B; Porphyromonas gingivalis; Sambucus nigra.
Sambucus (elder atau elderberry) adalah genus dari tanaman berbunga dalam famili Adoxaceae. Hal
itu sebelumnya ditempatkan pada famili honeysuckle, Caprifoliaceae, namun telah direklasifikasi
karena bukti genetik. Ini berisi antara 5 dan 30 spesies semak gugur, pohon kecil dan tanaman herba
tahunan.
Genus terjadi pada daerah beriklim subtropis di dunia. Lebih luas di belahan bumi utara, yang terjadi
di belahan bumi selatan dibatasi untuk bagian Australasia dan Amerika Selatan. Berbagai spesies
yang banyak dibudidayakan untuk daun hias mereka, bunga dan buah.
PENDAHULUAN
inflamasi terdiri atas komponen penting imunitas bawaan.1namun, produksi yang
berlebihan dari mediator pro-inflamasi dan disregulasi perekrutan leukosit ke situs infeksi
sering mengakibatkan kerusakan jaringan. Oleh karena itu, inflamasi merupakan imunologi
double-edged sword dan mungkin memainkan peran penting dalam patofisiologi berbagai
status penyakit akut atau kronis seperti sepsis, inflamasi penyakit usus, penyakit paru
obstruktif kronis (PPOK), rheumatoid arthritis, aterosklerosis dan periodontitis.2-4sebagai
hasilnya, tujuan besar dalam terapi modulasi respon inflamasi oleh target berhubungan jalur
sinyal.2-4pusat jalur inflamasi ini diinisiasi oleh stimulasi mikroba dari toll-like receptors
(TLRs) pada sel imun bawaan yang menyebabkan aktivasi dari nuclear factor-kappa B (NF-
kB).3NF-kB mengatur ekspresi dari pengkodean gen inflamasi sitokin, kemokin, dan molekul
adhesi.1jalur TLR / NF-kB memainkan peran induktif yang besar dalam respon inflamasi
patogen periodontal. 5-9
upaya untuk mengembangkan ramuan terapi untuk penyakit inflamasi termasuk
penyelidikan dari kemungkinan aktivitas antiinflamasi dari subtansi plant-derived. Berbagai
tanaman telah terbukti memiliki sifat anti-inflamasi, dan bahan aktif yang diisolasi.10
Misalnya, bumbu kari kurkumin dari tanaman Curcuma longa menampilkan aksi
11 12
perlindungan anti-inflamasi pada model hewan dari aterosklerosis, penyakit Alzheimer,
dan alergi encephalomyelitis.13 ramuan zat tanaman anti-inflamasi relatif murah dan alternatif
aman untuk obat sintetik.10ekstrak tanaman sering digunakan dalam tradisi pengobatan
tradisional untuk antiinflamasi atau aplikasi terapi lainnya. Misalnya, ekstrak dari elderflower
(Sambucus nigra) telah digunakan untuk aksi anti-inflamasi baik dalam bentuk teh atau
melalui aplikasi topikal diarea yang terkena.14 Sifat menguntungkan S. nigra telah banyak
dikenal dalam budaya yang berbeda, termasuk Mediterania dan penduduk asli Amerika, yang
menggunakan ekstrak tanaman ini terutama untuk pengobatan rematik, demam, dan inflamasi
appendix.15
Untuk menentukan dasar ilmiah dari obat tradisi masyarakat mengenai penggunaan
anti-inflamasi S. nigra, S. nigra ekstrak air (SNAEs) diuji untuk kemungkinan mekanisme
anti-inflamasi. digunakan model in vitro melibatkan aktivasi sel imun bawaan (makrofag atau
neutrofil) oleh patogen periodontal utama (Porphyromonas gingivalis
dan Actinobacillus actinomycetemcomitans) atau faktor virulensi murni (lipopolisakarida
[LPS] dan fimbriae). P. gingivalis telah terlibat dalam inisiasi dan progresi periodontitis
kronis.16LPS dan fimbriae dari P. gingivalis dapat menginduksi pelepasan TLR-dependent
sitokin, seperti tumor necrosis factor-a (TNF-a) dan interleukin-1b (IL-1b), yang memainkan
peran penting dalam induksi dan amplifikasi inflammation.6,8,9,17 actinomycetemcomitans
dikaitkan dengan periodontitis progresif cepat pada remaja, dan LPS adalah penginduksi
inflamasi kuat melalui aktivasi TLR4.18 Selain peran mereka dalam patogenesis periodontal,
P. gingivalis dan A. Actinomycetemcomitans telah terlibat sebagai faktor penyumbang dalam
patogenesis atherosclerosis.5,7,19,20 dalam penyakit inflamasi kronis, seperti periodontitis dan
aterosklerosis,induksi berkepanjangan tingkat tinggi sitokin proinflamasi dapat berkontribusi
untuk jaringan degradasi dan eksaserbasi dari penyakit.21 Dengan demikian penting untuk
mengembangkan strategi yang aman dan efektif untuk antiinflamasi terapeutik. Hasil
penelitian ini menunjukkan bahwa SNAE mungkin menjadi sarana yang menjanjikan untuk
mengendalikan inflamasi periodontal.

BAHAN DAN METODE

Ekstrak tanaman

Elderflower kering (S. nigra) diperoleh dari dua sumber komersil. SNAEs yang disiapkan
dengan menempatkan 2,5 g elderflower dalam 100 ml air mendidih (air reagen, endotoksin
konten <0,005 EU / ml). Suspensi yang perbuat untuk meresap selama 15 menit dan
kemudian disaring. Setelah volume yang menyesuaikan 100 ml dengan tambahan LAL
reagen air, suspensi vakum disaring melalui 0,45 mm steril sistem filter. Konsentrasi ekstrak
ini (2,5 g / 100 ml, dasar bahan tanaman total yang digunakan untuk ekstraksi) sebanding
dengan yang digunakan pada sediaan elder tea. Untuk percobaan in vitro kultur sel, yang
SNAE digunakan pada berbagai pengenceran (1: 4 sampai 1: 2048), yang tidak berpengaruh
pada pH medium kultur atau kelangsungan hidup sel.

Bakteri dan Komponen

P. gingivalis 381 ditumbuhkan secara anaerob selama 48 jam dalam kaldu mengandung
hemin (5 mg / ml) dan menadion (1 mg / ml). A. actinomycetemcomitans D7 ditumbuhkan
secara anaerob selama 48 jam di tryptic kedelai kaldu dilengkapi dengan ekstrak ragi 0,6%
dan 0,04% natrium bikarbonat. LPS dan fimbriae dimurnikan seperti yang dijelaskan
sebelumnya di Synthetic detail.17,22,23 lipopeptide bakteri (Pam3Cys) diperoleh dari sumber
komersial. Pada konsentrasi ormultiplicity infeksi (MOI) yang digunakan, tidak ada
rangsangan bakteri ditemukan yang mempengaruhi kelangsungan hidup sel, seperti yang
ditentukan dengan pengecualian tripan biru. Dalam percobaan pendahuluan menggunakan A.
actinomycetemcomitans D7 di MOI 100: 1, viabilitas sel secara substansial berkurang
meskipun patogen inaktivasi panas. Oleh karena itu digunakan di MOI 20: 1 dalam percobaan
yang dilaporkan, sehingga retensi viabilitas sel> 95%. Penggunaan heatinactivated P.
gingivalis untuk aktivasi sel tidak signifikan mempengaruhi kelangsungan hidup sel bahkan
pada MOI 100: 1 (> 97% viabilitas sel).

Sel mamalia

Humanmonocytic THP-1 sel dibedakan menjadi makrofag dengan phorbol ester dan
berbudaya untuk sitokin tes induksi sebagai penjelasan sebelumnya.17 Neutrofil diisolasi dari
darah perifer selama sentrifugasi densitas gradien seperti yang dijelaskan sebelumnya.24
koleksi darah manusia dilakukan sesuai dengan yang ditetapkan pedoman disetujui oleh the
Louisiana State University Health Sciences Center institutional review board. Makrofag tikus
diisolasi dari rongga peritoneum pada elisitasi thioglycollate-induced.25 Penggunaan hewan
diperiksa dan disetujui oleh the institutional animal care and use committee.

Tes Aktivasi Sel

Induksi pelepasan sitokin dan pengukurannya oleh enzyme-linked immunosorbent assay


(ELISA) dilakukan seperti yang dijelaskan sebelumnya.17 Aktivitas subunit transactivating
p65 DNA-bindingNF-kB ditentukan seperti yang dijelaskan sebelumnya dengan cara NF-kB
p65 transkripsi uji faktor kit.17Aktivasi dari CD11b / CD18 integrin dinilai menggunakan
CBRM1 / 5 uji induksi epitop.24
Kegiatan phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) diukur sebagai produksi enzim PI
(3,4,5) P3 dari PI (4,5) P2 substrat dengan cara kit PI3K ELISA, mengikuti petunjuk dari
manufacturer. Yang Secara singkat, PI3K itu immunoprecipitated fromcell lysates
menggunakan anti-PI3Kantibody dan protein manik-manik A-agarosa, dan enzim bead-
bound kemudian diinkubasi dengan 100 pmol PI (4,5) substrat P2 dalam reaksi kinase
penyangga (4 mM MgCl2, 20 mM Tris-HCl, pH 7,4, 10 mMNaCl, dan 25 mMATP) selama 2
jam pada roomtemperature. Generasi produk PI (3,4,5) P3 ditentukan di ELISA kompetitif.
Secara khusus, reaksi produk diinkubasi dengan PI (3,4,5) detektor P3 protein selama 1 jam
pada suhu kamar dalam gelap, dan campuran kemudian ditambahkan ke PI (3,4,5) P3-dilapisi
lempeng untuk mengikat kompetitif. Setelah 30 menit inkubasi pada suhu kamar dalam gelap,
piring dicuci. Peroxidaselinked pabrikan reagen sekunder kemudian ditambahkan ke
colorimetrically Probe plate-bound PI (3,4,5) detektor P3 protein. Sinyal kolorimetri
berbanding terbalik dengan jumlah PI (3,4,5) P3 diproduksi oleh aktivitas PI3K, yang
dihitung dari kurva kalibrasi dihasilkan menggunakan konsentrasi diketahui dari PI (3,4,5)
standar P3.

Oxidative burst (produksi H2O2) neutrofil dipantau menggunakan modifikasi


kuantitatif 2’,7’-dichlorofluorescin (DCFH) assay dikembangkan oleh Bass et al.26 uji ini
didasarkan pada kemampuan 2’,7’-dichlorofluorescin diasetat (DCFH-DA) untuk berdifusi
ke dalam sel-sel di mana ia dihidrolisis untuk DCFH dan dengan demikian terperangkap
dalam sel. Selama oxidative burst polymorphonuclear leukosit, non-neon DCFH intraseluler
teroksidasi untuk diklorofluoresein sangat neon (DCF) oleh H2O2 dihasilkan dengan adanya
peroksidase. Sinyal fluorescent yang dihasilkan secara kuantitatif berkorelasi dengan
Neutrofil oxidative burst.26 neutrofil pada keseimbangan glucose-containing Hank’s larutan
garam yang dipreinkubasi pada 37°C selama 15 menit. Sampel kemudian diinkubasi dengan
25 ng / ml phorbol myristate acetate (PMA; kontrol positif) orwith panas-dilemahkan P.
Gingivalis atau A. actinomycetemcomitans sel pada 37°C untuk 30 menit. Sinyal neon yang
dihasilkan dari oksidasi DCFH ke DCF diukur sebagai relatif unit fluoresensi pada
fluoresensi lempeng pembaca dengan pengaturan panjang gelombang eksitasi / emisi dari
485/530 nm.

HASIL

Pengaruh SNAE pada pelepasan sitokin

Yang pertama kali ditentukan apakah SNAE downregulates pelepasan sitokin pada THP-1 sel
diaktifkan oleh dua rangsangan proinflamasi ampuh, Escherichia coli LPS (Ec-LPS) dan P.
gingivalis fimbriae (Pg-fimbriae). SNAE itu secara berturut diencerkan, dan konsentrasi akhir
dirangsang THP-1 berkisar antara 1: 4 sampai 1: 2.048. SNAE induksi menghambat
pelepasan TNF oleh Ec-LPS atau Pg-fimbriae dengan cara tergantung dosis (Gbr. 1). Statistik
signifikan (P <0,05) penghambatan diamati pada pengenceran SNAE ≤ 1: 512, dan
penghambatan lengkap dicapai pada ≤ 1: 16 (Gambar 1.).

dalam berikutnya
eksperimen yang melibatkan proinflamasi tambahan
rangsangan, theSNAE digunakan pada pengenceran 1:32, yang
telah ditampilkan> 80% penghambatan TNF-rilis (Gbr.
1). Rangsangan tambahan termasuk Pam3Cys (sintetik
lipopeptide mempertahankan sifat inflamasi
lipoprotein bakteri), 27 periodontal yang relevan
LPS dari P. gingivalis dan A. actinimycetemcomitans
(Pg-LPS dan Aa-LPS, masing-masing), dan heatinactivated
sel seluruh P. gingivalis 381 (Pg 381)
dan A. actinimycetemcomitansD7 (Aa D7) .Kami ditemukan
yang SNAE (01:32) poten menghambat kemampuan semua
rangsangan diuji untuk menginduksi pelepasan beberapa proinflamasi
sitokin (TNF-a, IL-1b, dan IL-6) (Gambar.
2A melalui 2C). Menariknya, induksi atau rilis
sitokin anti-inflamasi IL-10 adalah baik terpengaruh
(stimuli larut) atau hanya sedikit terhambat
(seluruh P. gingivalis atau A. actinimycetemcomitans
sel) oleh SNAE (Gambar. 2D).
Penelitian lebih lanjut menggunakan makrofag tikus
diaktifkan oleh panel yang sama rangsangan bakteri dikonfirmasi
kemampuan ofSNAE (01:32) untuk poten menghambat pelepasan
sitokin proinflamasi (TNF-a dan IL-6;
Gambar. 3A dan 3B). Sebaliknya, anti-inflamasi
sitokin IL-10 yang diregulasi oleh SNAE (Gambar. 3C).
Lowlevels IL-10were alsoobserved inSNAE-diperlakukan makrofag dalam ketiadaan
proinflamasi
stimulus, menunjukkan bahwa SNAE sendiri pameran langsung
tetapi efek IL-10-inducing sederhana (Gambar. 3C). data
Angka dari 1 sampai 3 kolektif menunjukkan bahwa
SNAE selektif menghambat pelepasan proinflamasi
sitokin dalam sel diaktifkan oleh berbagai periodontal
rangsangan yang relevan.

Gambar 1.

Tergantung dosis penghambatan pelepasan TNF-a diaktifkan THP-1 sel oleh SNAE. THP-1
sel dirangsang dengan Ec-LPS (0,25 mg / ml) atau Pg-fimbriae (1 mg / ml) dengan tidak
adanya atau ada serial SNAE diencerkan. Setelah 16 jam, supernatan kultur diuji untuk
pelepasan TNF-a. Hasilnya ditunjukkan sebagai alat - SD dari penentuan rangkap tiga dari
salah satu dari dua percobaan independen (menggunakan S. nigra dari dua sumber komersial
yang berbeda) yang menghasilkan temuan serupa. * Statistik signifikan (P <0,05)
penghambatan pelepasan TNF-a.
Gambar 2.

Penghambatan proinflamasi pelepasan sitokin diaktifkan THP-1 sel dengan SNAE. THP-1 sel
yang dirangsang dengan Ec-LPS (0,25 mg / ml), Pam3Cys (0,25 mg / ml), Pg-fimbriae (1 mg
/ ml), Pg-LPS (1 mg / ml), Aa-LPS (0,25 mg / ml), Pg 381 sel (MOI 100: 1), atau sel Aa D7
(MOI 20: 1) dengan tidak adanya atau ada SNAE (diencerkan 1:32). Setelah 16 jam,
supernatan kultur diuji untuk induksi pelepasan sitokin proinflamasi (A: TNF-a, B: IL-1b; C:
IL-6) atau sitokin antiinflamasi IL-10 (D). Hasilnya ditunjukkan sebagai alat - SD dari
penentuan rangkap tiga dari salah satu dari dua percobaan independen yang menghasilkan
temuan serupa. * Statistik signifikan (P <0,05) penghambatan pelepasan sitokin.
Gambar 3.
Penghambatan proinflamasi sitokin rilis pada tikus diaktifkan
makrofag oleh SNAE. Makrofag tikus Peritoneal yang
dirangsang dengan Ec-LPS (0,25 mg / ml), Pam3Cys (0,25 mg / ml), Pgfimbriae
(1 mg / ml), Pg-LPS (1 mg / ml), Aa-LPS (0,25 mg / ml), Pg 381
sel (MOI 100: 1), atau Aa D7 sel (MOI 20: 1) dalam ketiadaan atau
Kehadiran SNAE (diencerkan 1:32). Setelah 16 jam, supernatan kultur
diuji untuk induksi pelepasan sitokin proinflamasi
(A: TNF-a, B: IL-6) atau IL-10 anti-inflamasi (C). hasil yang
ditampilkan sebagai sarana - SD dari penentuan rangkap dari salah satu dari dua
percobaan independen yang menghasilkan temuan serupa. * statistik
signifikan (P <0,05) penghambatan pelepasan sitokin proinflamasi
(A dan B) atau peningkatan regulasi pelepasan sitokin anti-inflamasi (C).

Gambar 4.
Penghambatan p65 aktivasi NF-kB di THP-1 sel (A) atau mouse
makrofag (B) oleh SNAE. Sel-sel dirangsang dengan Ec-LPS
(0,25 mg / ml), Pam3Cys (0,25 mg / ml), Pg-fimbriae (1 mg / ml), Pg-LPS
(1 mg / ml), Aa-LPS (0,25 mg / ml), Pg 381 sel (MOI 100: 1), atau Aa D7
sel (MOI 20: 1) dengan tidak adanya atau kehadiran SNAE (diencerkan 1:32).
Ekstrak seluler disiapkan setelah stimulasi 90 menit dan
dianalisis untuk menentukan aktivitas DNA-pengikatan NF-kB p65, menggunakan
kit ELISA berbasis. Hasilnya ditunjukkan sebagai alat - SD rangkap tiga
penentuan dari salah satu dari dua percobaan independen yang
temuan serupa yang dihasilkan. * Statistik signifikan (P <0,05) penghambatan
NF-kB aktivasi p65.
Gambar 5.
Induksi integrin aktivasi spesifik epitop (CBRM1 / 5) oleh dimurnikan
fimbriae atau sel seluruh P. gingivalis dan penghambatan oleh SNAE. A)
Neutrofil di sumur mikrotiter diobati sebelumnya selama 20 menit dengan
pengenceran ditunjukkan dari SNAE, LY294002, atau LY30351 analog aktif yang
(Keduanya pada 20 mM) sebelum stimulasi 30 menit dengan fimbriae dimurnikan
(1 mg / ml) atau sel gingivalis P. (MOI 100: 1). Aktivasi CD11b / CD18
dinilai dengan pewarnaan sel dengan fluorescein isothiocyanate-
berlabel CBRM1 / 5 antibodi monoklonal dan pengukuran yang terkait sel
fluoresensi. Data dinyatakan sebagai persentase dari CBRM1 / 5
epitop-merangsang aktivitas f-Met-Leu-Phe (fMLP) (10-7 M), yang
menjabat sebagai kontrol positif. CBRM1 / 5 epitop induksi di peristirahatan
sel adalah <7% yang sel fMLP-dirangsang. B) Neutrofil adalah
dirangsang dengan fimbriae dengan adanya inhibitor seperti di atas.
Setelah 30 menit rangsangan, PI3K itu immunoprecipitated dari sel
lysates, dan aktivitas enzimatik yang dinilai seperti yang dijelaskan dalam
Bahan dan Metode. Hasil mewakili cara - SD (N = 3) dan
adalah dari salah satu dari tiga (A) atau dua (B) percobaan independen dengan
temuan serupa. * Statistik signifikan (P <0,05) penghambatan
CBRM1 / 5 epitop induksi (A) atau PI (3,4,5) produksi P3 (B).
Gambar 6.
Penghambatan oleh SNAE dari oksidatif meledak neutrofil manusia
diaktifkan oleh patogen periodontal. Neutrofil dirangsang untuk
30 menit dengan PMA (25 ng / ml) (A) atau patogen periodontal (B
dan C) dengan tidak adanya atau kehadiran SNAE di pengenceran ditunjukkan
(percobaan di B menentukan bakteri MOI efektif untuk
mengaktifkan ledakan oksidatif neutrofil). Burst oksidatif adalah
dipantau menggunakan modifikasi dari uji DCFH kuantitatif, seperti
dijelaskan dalam Bahan dan Metode. Hasil mewakili cara - SD
(N = 3) dari perwakilan percobaan independen (A dan C yang
dilakukan tiga kali; B dilakukan dua kali). * statistik
signifikan (P <0,05) perbedaan dibandingkan dengan kontrol tanpa hambatan
(A dan C) atau tidak ada aktivasi kontrol (B). RFU, relatif fluoresensi
unit.

Penghambatan NF-kB Aktivasi oleh SNAE


Kemampuan ofSNAE untuk menghambat beberapa proinflamasi
sitokin yang diinduksi oleh rangsangan yang beragam yang mengaktifkan
TLR2 (misalnya, Pg-fimbriae dan Pam3Cys) atau TLR4 (misalnya,
Ec-LPS dan Aa-LPS) menyatakan bahwa SNAE dapat bertindak
pada faktor sentral (s) yang terlibat dalam gen proinflamasi
ekspresi. Sejak NF-kB memainkan peran sentral dalam induksi
sitokin proinflamasi, kami menguji
apakah SNAE mengganggu aktivasi NF-kB.
Secara khusus,
kami menentukan kemampuan SNAE untuk menghambat
aktivitas DNA-mengikat subunit transactivating
(p65) dari NF-kB di THP-1 sel. The SNAE adalah
terbukti secara signifikan (P <0,05) menghambat p65 aktivasi NF-kB
oleh semua rangsangan diuji, termasuk Pg 381, Aa D7,
atau dimurnikan komponen-komponennya (fimbriae dan LPS)
(Gambar. 4A). Efek penghambatan serupa diamati di
makrofag tikus (Gambar. 4B).
SNAE Menekan integrin
Aktivasi di Neutrofil
CD11b / CD18is ab2 integrinthat
memainkan peran penting dalam imunitas
dan peradangan, meskipun
membutuhkan aktivasi sebelum efektif
mengikat ligan atau
integrin kontra-receptors.28Theb2
telah terlibat sebagai
efektor peradangan patologis
pada penyakit akut atau kronis
negara dan dengan demikian target
dari intervention.28 terapi
Kami baru-baru ini mengidentifikasi
jalur sinyal baru untuk
CD11b / CD18 aktivasi yang
diinduksi oleh Pg-fimbriae.24
didalam
bereksperimen menggunakan neutrofil manusia,
kami menentukan apakah
SNAE menghambat kemampuan fimbriae
atau Pg 381 sel untuk menginduksi
tinggi afinitas keadaan mengikat
CD11b / CD18 dengan memonitor induksi
dari spesifik aktivasi
CBRM1 / 5 epitop. sintetis
Senyawa LY294002 dan yang
LY303511 analog aktif yang
digunakan sebagai positif dan negatif
kontrol, masing-masing, untuk
penghambatan CBRM1 / 5 epitop induction.24Wefound thatSNAE setidaknya sama efektif
sebagai LY294002 (20 mM) di induksi penghambat
yang CBRM1 / 5 epitop, sedangkan LY303511 tidak berpengaruh
(Gambar. 5A). Penghambatan tertinggi (73% sampai 76%) diamati
dengan SNAE pada 1: 8 pengenceran (Gambar 5A.).
PI3K memainkan peran sentral dalam Pg-fimbria-induced
menandakan jalur yang mengarah ke CD11b / CD18 aktivasi pada kenyataannya, fungsi antagonis
LY294002
melibatkan penghambatan PI3K.24 Kami memeriksa kemungkinan
bahwa efek antagonis SNAE (Gambar. 5A)
sama mungkin melibatkan penghambatan aktivasi PI3K.
Secara khusus, kami menentukan kemampuan SNAE (1: 8)
untuk menekan aktivitas kinase lipid dari PI3K, dipantau
melalui generasi PI (3,4,5) P3 dari PI (4,5) P2
substrat.

SNAE ditemukan untuk menghambat secara signifikan


(P <0,05) kemampuan Pg-fimbriae untuk mengaktifkan PI3K
sampai batas sebanding seperti yang terlihat dengan LY294002
(Gambar. 5B). Data dari Gambar 5 menunjukkan bahwa SNAE
menghambat Pg-fimbria-diinduksi aktivasi CD11b /
CD18 mungkin dengan mengganggu aktivitas kinase
dari PI3K.
Penghambatan neutrofil oksidatif Burst oleh SNAE
Neutrofil menerima perhatian sebagai efektor
jaringan periodontal inflamasi yang diinduksi
damage.4 Mungkin dengan demikian berguna untuk mengembangkan sarana untuk
mengontrol oksidatif mereka meledak di periodontitis. untuk menentukan
apakah SNAE mengganggu proinflamasi ini
aktivitas, neutrofil manusia diaktifkan dengan PMA, inducer prototipe dari ledakan oksidatif, 26 di
tidak adanya atau kehadiran SNAE. Kemampuan PMA
(25 ng / ml) untuk mengaktifkan ledakan oksidatif (dipantau
sebagai DCFH oksidasi; lihat Bahan dan Metode) adalah
secara signifikan (P <0,05) dihambat oleh SNAE di dosedependent sebuah
cara (Gambar. 6A). Penghambatan hampir lengkap
(sekitar 93%) dicapai oleh SNAE dilusian di 01:16
(Gambar. 6A). Untuk menyelidiki apakah SNAE menghambat Pg
381-diinduksi meledak oksidatif, pertama kita menentukan
Jumlah sel bakteri yang mudah menginduksi neutrofil ini
aktivitas. Aktivasi maksimal dicapai pada
MOI 100: 1 (Gambar 6B.), Yang kemudian digunakan
untuk menyelidiki efek SNAE. The SNAE adalah
memang ditemukan dosis-dependen menghambat neutrofil yang
ledakan oksidatif yang disebabkan oleh Pg 381; lengkap
penghambatan dicapai pada 1: 8 pengenceran (. Gambar 6C).

Efek antagonis yang sama dengan SNAE diamati


ketika Aa D7 digunakan untuk aktivasi neutrofil
(Gambar. 6C). Data ini menunjukkan bahwa SNAE diberikannya
aktivitas penghambatan yang kuat terhadap bacterially diinduksi
oksidatif meledak di neutrofil.

PEMBAHASAN

Perkembangan strategi untuk kontrol inflamasi berhubungan dengan periodontitis


mungkin efektif untuk intervensi terapeutik. Penelitian ini menetapkan bahwa SNAE
menampilkan potensi aktivitas anti-inflamasi pada fagosit profesional yang diaktifkan oleh
bakteri periopathogenic, termasuk penghambatan 1). pro-inflammatory pelepasan sitokin; 2).
Aktivasi integrin; 3). Oxidative burst. kemampuan SNAE untuk menghambat aktivitas DNA-
binding NF-kB p65 (gambar. 4) adalah mekanisme yang tampak mendasar pada pengaruh
penghambatan dalam proinflammatory pelepasan sitokin (Gambar. 1 dan 2). Namun aktivitas
NF-kB tidak hanya tergantung pada ikatan target DNA. Tetapi juga tergantung pada induksi
aktivitas fosforilasi dan transactivasi dari subunit p65, yang dipengaruhi oleh aktivitas
PI3K.29 kemampuan SNAE juga menghambat PI3K (Gambar. 5B) menunjukkan mekanisme
lain dimana SNAE dapat mengganggu induksi NF-kB tergantung pada sitokin proinflasmasi.

Aktivitas PI3K juga mempengaruhi keadaan integrin,30 dan baru-baru ini


menunjukkan keterlibatannya dalam jalur sinyal untuk aktivasi CD11b/CD18 diinduksi oleh
pg-fimbriae.24 hal ini dapat berspekulasi dengan pg-fimbriae yang memperkuat inflamasi
periodontal oleh mempromosikan perekrutan neutrofil dan monosit yang berlebihan melalui
aktivasi CD11b/CD18, yang merupakan mediator kunci dari migrasi leukosit.30, 31fimbriae
bisa memediasi pengaruh proinflamasi dalam bentuk sel yg berhubungan dengan bakteri atau
sebagai molekul bebas dari permukaan sel bakteri atau sebagai komponen vesikel membran
luar yang dapat dengan mudah menembus jaringan gingiva.32 melalui kemampuannya untuk
menghambat PI3K dan aktivasi CD11b/CD18 oleh pg-fimbriae (Gambar. 5), SNAE mungkin
dapat mengatur jumlah migrasi neutrofil ke inflamasi jaringan periodontal. Neutrofil telah
terlibat sebagai efektor dari inflamasi kerusakan jaringan pada periodontitis, pada sebagian
generasi melalui intermediet oksigen reaktif yang menyebabkan kerusakan oksidatif pada
jaringan gingiva, ligamen periodontal dan tulang alveolar.4 sifat SNAE selain menghambat
neutrofil oxidative burst yang diaktivasi oleh P. gingivalis atau A. Actinomycetemcomitans
(Gambar. 6) menunjukkan potensinya untuk mengatur kegiatan pada inflamasi periodontal.
SNAE disediakan pada kekuatan normal yaitu konsentrasi ekstrak (material tanaman
2.5 g/ 100 ml) setara untuk yang digunakan pada sediaan elder tea.ekstrak ini ditampilkan
dengan penghambatan yang signifikan secara statistik dari pelepasan TNF-a oleh pg-fimbriae
bahkan pada 1 : 512 pengenceran (Gambar 1), menunjukkan bahwa bahan anti-inflamasi (s)
mungkin ada pada konsentrasi yang cukup tinggi untuk isolasi dan digunakan sebagai
senyawa murni (s). Fakta bahwa tidak ada masalah toksisitas yang terkait dengan SNAE (teh
yang dibuat dari S. Nigra [elderflower] aman untuk digunakan manusia) menunjukkan bahwa
SNAE dapat menemukan aplikasi perawatan periodontitis atau penyakit inflamasi lainnya.

Penyelidikan yang akan datang akan meliputi identifikasi dari bahan aktif (s)
bertanggung jawab untuk anti-inflamasi SNAE. Pada point ini, bagaimanapun, beberapa
spekulasi dapat dibuat dalam hal ini. S. Nigra mengandung quercetin, 33senyawa polifenol
alami yang mensintesis penghambatan PI3K, yang dirancang LY294002.34 dengan demikian,
kemampuan SNAE untuk menghambat PI3K bisa dimediasi paling sedikit sebagian melalui
quercetin. Kehadiran S. Nigra flower dari anthocyanin dengan aksi antioksidan35mungkin
bertanggung jawab pada kemampuan SNAE untuk menghambat oxidative burst neutrofil.
Kehadiran antioksidan juga menjelaskan, paling tidak sebagian efek penghambatan dari
SNAE pada aktivasi NF-kB. Hal ini karena antioksidan memblokir degradasi penghambatan
IKB protein, yang akibatnya NF-kB akan tetap inaktiv dalam sitoplasma dan mencegah
translokasi ke nukleus.10 senyawa potensi inflamasi lainnya yang ditemukan dalam S. Nigra
adalah rutin, yang terdiri dari 5.2% dari berat kering bunga.33Rutin adalah bentuk glikosilasi
dari quercetin, dan kedua senyawa yang ditemukan untuk melindungi pada eksperimen
arthritis pada tikus.36

Percobaan model primata dari periodontitis menunjukkan bahwa IL-1 dan TNF-a
yang terkait dengan inflamasi periodontal, pembentukan osteoklas, dan hilangnya tulang
alveolar.37kemampuan SNAE untuk menghambat induksi dua toksin proinflamasi oleh
patogen periodontal dan LPS atau fimbriae (Gambar. 1 sampai 3) menunjukkan bahwa SNAE
berpotensi dapat mengontrol inflamasi resorpsi tulang. Dalam hal ini, quercetin, salah satu
bahan aktif dari SNAE telah menunjukkan dapat menghambat pembentuka osteoklas.38jika
penelitian selanjutnya menetapkan bahwa SNAE atau bahan campuran murninya mampu
mengatur resorpsi tulang, senyawa ini dapat diaplikasikan secara lokal pada inflamasi
periodonsium untuk mengontrol periodontitis pada pasien.

KESIMPULAN

pada penelitian ini menunjukkan hasil bahwa SNAE dapat menghambat pelepasan
makrofag dari proinflammatory sitokin yang diinduksi oleh P. gingivalis, A.
actinomycetemcomitans, dan komponen yang dipilih dari patogen tersebut. Selain itu, SNAE
menahan aktivasi neutrofil, yang terlibat sebagai efektor dari kerusakan jaringan periodontal.
Efek ini dapat disebabkan oleh penghambatan aktivasi NF-kB dan PI3K. Penemuan ini
menunjukkan bahwa SNAE dapat dimanfaatkan untuk perawatan inflamasi periodontal dan
selain itu, memberikan dasar ilmiah untuk penggunaan ekstrak tanaman sebagai agen anti-
inflamasi pada tradisi pengobatan masyarakat.

Beri Nilai