1. Tujuan dibuat kultur sel limfosit?

 Untuk melakukan analisis kromosom dalam bentuk analisis kariotipe

 Untuk menilai status imunitas seluler dengan cara menghitung indeks transformasi sel
blast
2. Cara menghitung indeks transformasi sel blast?
Rumus Indeks Transformasi Sel Blast = JumLah Limfoblast + JumLah Kromosom X 100%
JumLah Total (Limfoblast + Kromosom + Limfosit)

3. Fungsi larutan :
a. RPMI 1640 : Sebagai medium standard sel limfosit
b. PHA : Untuk stimulasi mitosis limfosit
c. FBS : Sebagai Growth Factor dan nutrisi pertumbuhan sel
d. Kolcemid : Menghentikan mitosis pada fase metafase
4. Membandingkan 2 metode identifikasi kromosom?
a. G Banding (Giemsa)
Pewarnaan banding untuk identifikasi kromosom dengan pewarna Giemsa yang
membedakan gelap terang pada lengan p dan q
b. Q Banding (Quinacrine)
Corak terang a, corak gelap g untuk identifikasi sequens pada lengan panjang kromosom Y
c. R Banding (Reverse)
Kebalikan G Banding, R Band gelap, G Band terang. Untuk identifikasi kelainan kromosom di
ujung.
d. C Banding (Centromere)
Ter Banding pada daerah sentromer untuk identifikasi kelainan pada daerah sentromer
e. Prometafase Banding
Untuk identifikasi kelainan struktur kromosom
f. FISH ->
5. Proses-proses pembuatan preparat kariotipe?
a. Persiapan
- Ruangan dan laminar flow disinari UV untuk mempertahankan sterilitas
- Pengambilan sampel darah pada pasien (0.5-0.8 ML)
b. Kultur limfosit
- Masukkan RPMI 1640 ke dalam tabung centrifuge sebanyak 5 ML
- Masukkan FBS sebanyak 0.8 ML
- Masukkan Pytohaemaglutamin (PHA) sebanyak 70 mikro
- Masukkan 0.5-0.8 ML darah
- Inkubasi dalam inkubator 37oC menggunakan penambahan CO2 5%
- Satu jam sebelum panen, masukkan kolcemid untuk penghentian mitosis pada fase
metafase
c. Harvest/panen
- Kultur limfosit dikeluarkan dari inkubator
- Centrifuge 1300 rpm selama 10 menit
- Supernatan dibuang dan pellet ditambahkan larutan hipotonis KCl 0.075 M sebanyak 5-
10 ML, campur perlahan hingga homogen
- Inkubasi pada suhu 37oC selama 20 menit agar sel lisis
- Membuat larutan carnay’s segar dengan campuran metanol absolut dan asam asetat
(3:1)