Es un buen método para el aislamiento de colonias (obtención de colonias aisladas); mediante esta
técnica buscamos obtener colonias separadas a partir de un inóculo. Para su realización: (i) se toma la
caja de Petri en la palma de la mano y ligeramente inclinada; con la mano contraria, se manipula
el asa de argolla previamente esterilizada por flameado directo a la llama y con ella se recoge el
material de cultivo, para colocarlo en un área periférica de la caja haciendo movimientos circulares
para homogeneizar el inóculo. (ii) El asa debe ser nuevamente flameada y enfriada en un lateral
del agar (procurando no dañarlo); a continuación se realiza una estría partiendo de la primera y
arrastrando los microorganismos presentes en ella hacia el extremo contrario de la superficie del agar.
Se debe procurar que en cada sección de la caja, las estrías queden trazadas con mayor separación.
(iii) Repita el paso ii, por tres veces (algunos autores reportan solo dos), recordando flamear y enfriar el
asa cada vez que culmine una estría y solo tocar con el asa la estría inmediatamente anterior, con el
objetivo de ir reduciendo la carga microbiana arrastrada por la argolla. Finalmente se esteriliza el
asa antes de descartarla (Figura 1).
Fig. 2. Técnica de siembra en cuadrantes, donde se observan las cuatro estrías realizadas una a continuación de la
otra y sin cargar el asa nuevamente (Fuente: Rojas, A.).
DIFERENCIACION BIOQUÍMICA
A partir de los cultivos puros de los diferentes tipos de colonias se siembra en medio
de cultivos específicos para diferenciación bioquímica de los microorganismos
Prueba del rojo de metilo. Inocular un tubo con 5 ml de medio MV – RP, incubar a
37C durante 48- 96 horas. Agregar 5 gotas de reactivo de rojo de metilo, la reacción
positiva lo indica un color rojo intenso
Prueba de oxidación – fermentación. Sembrar por picadura en dos tubos con medio
de OF ilugh Leifson. En uno de los tubos después de inocular se cubre la superficie
con parafina blanda. Incubar a 35C durante 48 horas. Las bacterias oxidantes
muestran producción de ácido (amarillo) solo en la parte superficial del tubo de
parafina y las fermentadoras muestran acido en ambos tubos.
Prueba de oxidasa. Impregnar un trozo de papel filtro con unas gotas de reactivo de
diotetra metil – parafenilendiamina recién preparado. Recoger con asa bacteriológica
de platino una colonia y extenderla sobre el papel impregnado de reactivo. La reacción
positiva se reconoce por un color purpura oscuro que aparece sobre el papel a los 5 o
10 segundos
Prueba de catalasa. Inocular un tubo con caldo nutritivo incubar a 35C durante 48
horas. Agregar unas gotas de peróxido de hidrogeno al 3 por ciento. Observar la
aparición de burbujas y acumulación de espuma en la superficie del medio, lo que
indicara una prueba positiva.
Prueba de almidón. Inocular por estría una placa de Petri con agar almidón a 35C
durante 48 horas y para investigar la acción diastasica cubrir la superficie del medio
con una solución de yodo (lugol). El medio se tiñe de purpura excepto alrededor del
crecimiento bacteriano en donde se observa una zona clara donde se indica una
prueba positiva.
ANTIBIOGRAMA
3. Ph: Entre otras cosas determina el grado de ionización del agente, siendo en
general la forma no disociada la que atraviesa mejor las paredes del microorganismo.
ELEMENTOS CRITICOS:
Son los que se introducen directamente en el cuerpo, la sangre, o cualquier área del
organismo que suele ser estéril; por Ej.: catéteres, agujas hipodérmicas, equipos de
hemodiálisis, etc. Evidentemente existe un altísimo riesgo de producir una infección si
estos objetos se encuentran contaminados en el momento de su uso.
El tratamiento para estos elementos deberá ser esterilización, en lo posible por
métodos térmicos, radiaciones, o de lo contrario con un desinfectante de alto nivel, por
Ej.: óxido de etileno, glutaraldehído, ácido peracético, etc., como sucede con los
materiales descartables.
ELEMENTOS SEMI CRITICOS:
Están en contacto con las mucosas intactas (que normalmente están colonizadas por
la flora normal) pero no la atraviesan. Encontramos en este grupo: termómetros (de
uso rectal y oral), fibroscopios, tubos endotraqueales, broncoscopios, etc. También la
esterilización es lo más aconsejable, pero se acepta una desinfección con agentes de
alto o mediano nivel, siempre posterior a un cuidadoso lavado con agua y detergente.
ELEMENTOS NO CRITICOS:
Se encuentran en contacto con la piel sana pero no con las mucosas. En condiciones
normales poseen poca posibilidad de producir infecciones. Sin embargo, pueden
funcionar como "vectores mecánicos" que transfieren gérmenes de un paciente a otro,
lo que favorece la aparición de infecciones cruzadas, mas graves en el caso de
pacientes inmunodeprimidos. Estetoscopios, máscaras faciales y humidificadores,
entre otros, son los objetos que se agrupan aquí. Se considera suficiente el lavado con
agua y detergente, seguido de la aplicación de un desinfectante de mediano nivel.
Teniendo ya una visión global de los agentes químicos, podemos comenzar a
describirlos, asociados a su: