Las pruebas bioquímicas permiten determinar las características

metabólicas de las bacterias objeto de identificación.

Algunas de estas pruebas son técnicas rápidas, ya que evalúan la presencia
de una enzima preformada y su lectura varía entre unos segundos hasta unas pocas
horas. Otras pruebas requieren para su lectura el crecimiento del microorganismo
con una incubación previa de 18 a 48h; a este grupo pertenecen la mayoría de las
pruebas que detectan componentes metabólicos o aquellas que determinan la
sensibilidad de un microorganismo a una sustancia dada tras cultivo en medios de
identificación que contienen el sustrato a metabolizar.
La forma usual de detectar una enzima se basa en el principio de que si está
presente, utilizara un sustrato determinado que ha sido puesto adrede en el medio
de cultivo o en una prueba bioquímica determinada. Los productos terminales de la
acción enzimática son detectados a través de indicadores de PH o por el
aparecimiento de pigmentos que hacen virar el color del medio.

Funciones de los componentes básicos de los medios de cultivos:

· Sustrato: Reacciona con la enzima específica y da origen a productos terminales
que pueden ser ácidos o alcalinos.
· Indicador de PH: Detecta productos terminales de la utilización del sustrato.
Son colorantes añadidos para indicar los cambios que hay en el medio durante el
crecimiento de los microorganismos. Estos indicadores son sensibles a los cambios
de PH, por lo tanto, los virajes de color de los mismos indican de manera indirecta
la presencia de productos terminales del empleo e sustrato.
· Nutrientes: La mayoría de las bacterias no crecerán solo con la presencia del
sustrato básico, por lo que se requiere agregar diversos nutrientes que varían,
dependiendo de los requerimientos de cada bacteria.
· Inhibidores: Son utilizados más en medios selectivos iníciales, pero hay que
tener en cuenta que no todos los microorganismos deseados serán inhibidos y no
todos los deseados crecerán.
Fermentación de la lactosa en Agar McConkey
Fundamento: Es un medio selectivo diferencial que permite determinar si las
bacterias Gramnegativas fermenta o no la lactosa. Las sales biliares y el cristal
violeta inhiben el crecimiento de los Grampositivos. Las colonias de bacterias que
fermentan la lactosa son rosadas y pueden estar rodeadas de una zona de
precipitados de sales biliares, el cual es debido a una caída en el pH por la
fermentación de la lactosa. Las colonias que no fermentan la lactosa permanecen
incoloras.

Lectura e interpretación: Las bacterias fermentadoras de lactosas se

observan de color rosado con o sin zona de precipitado alrededor, mientras que las
no fermentadoras de lactosa se observan incoloras o transparentes
 TSI: Agar Tres Azúcares o Triple Azúcares y Hierro.

Fundamento: Este
medio se utiliza para
determinar la capacidad
de los bacilos
gramnegativos para
fermentar lactosa,
sacarosa y glucosa, así
como para determinar su
capacidad de producir
H2S (ácido sulfúrico) y gas.
El tubo contiene dos cámaras de reacción, en la parte inclinada (pico de
flauta) se fermenta la lactosa y la sacarosa y en la parte profunda se fermenta la
glucosa. Se puede fermentar los tres azucares o uno de ellos lo cual dependerá del
microorganismo que se estudie.
Lectura e interpretación:
· Kalium-kalium K/K: Se observa tubo color rojo, no fermenta ninguno de los
azúcares.
· Acido-Acido A/A: Se observa todo el tubo de color amarillo, fermenta la
glucosa, lactosa y sacarosa, con producción o no de gas, la cual se representa con
(G) si es abundante y (g) si es poca.
· Kalium-Acido K/A: Se observa el tubo en la parte inclinada color rojo y amarillo
el fondo, fermenta solo la glucosa, con producción o no de gas, la cual se
representa con (G) si es abundante y (g) si es poca.
· Kalium- Acido K/A+: Se observa el tubo parte inclinada rojo y amarillo el fondo,
con enecrecimiento, fermenta la glucosa, con producción de H2S la cual se
representa por (+), con producción o no de gas, la cual se representa con (G) si es
abundante y (g) si es poca.

LIA: Lisina Hierro Agar.

Fundamento: Es un
medio para detectar
enzimas que descarboxilan o
desaminan la lisina en
bacilos gramnegativos.
Adicionalmente detecta
enzimas que producen
sulfuro de hidrógeno y gas
proveniente de la glucosa.
No existen Enterobacterias que posean las dos enzimas (descarboxilasa y
desaminasa de la lisina) por lo que sólo se tiene que observar, o una de ambas
reacciones o la ausencia de ambas.
 Lectura e interpretación:
· Kalium- Kalium K/K: Se observa tubo color violeta, descarboxilación de la lisina
con producción o no de gas, la cual se representa con (G) si es abundante y (g) si es
poca. Se interpreta Lisina Positiva.
· Rojo-Acido R/A: Se observa tubo color rojo superficie y amarillo fondo,
desaminación de la lisina, con producción o no de gas, la cual se representa con (G)
si es abundante y (g) si es poca. Se interpreta Lisina desaminasa.
· Kalium-Kalium K/K+: Se observa tubo color violeta superficie y negro fondo,
descarboxilación de lisina, con producción de H2S la cual se representa por (+), con
producción o no de gas, la cual se representa con (G) si es abundante y (g) si es
poca.
· Kalium-Acido K/A: Se
observa tubo color violeta
en la superficie y amarillo
en el fondo, el color
amarillo se debe a la
fermentación de glucosa.
Puede haber o no
producción de gas. Se
interpreta Lisina
negativa. Quiere decir
que no descarboxilo ni
desamino la lisina.

Nota: Es importante
diferenciar las diferentes
reacciones del tubo de
LIA, conocer cuando el
microorganismo es lisina
positiva, lisina negativa y lisina desaminasa. Las cuales serán de mucha utilidad
junto con la fermentación de lactosa en el plato de MacConkey para realizar
montaje del resto de bioquímica de identificación.

MIO:Movilidad, Indol, Ornitina.

Fundamento: Es un medio que se

utiliza para determinar la presencia de
flagelos, así como las enzimas
descarboxilasa de ornitina y triptofanasa.
Por lo tanto, sirve para determinar la
movilidad, descarboxilación de la ornitina
y producción de indol.
Algunas bacterias poseen flagelos y otras carecen de ellos. Este medio
ayuda a diferenciar las móviles de las no móviles.
 Lectura e interpretación: La movilidad se observa por turbidez del medio, si
sólo se observa crecimiento en la estría realizada es negativa. Si la bacteria posee
la enzima triptofanasa, al agregar el reactivo (3 gotas) de Kovac (p-
dimetilaminobenzaldehido) o Erlich se observa un anillo color rosado intenso. La
presencia de enzima decarboxilasa de Ornitina, desdobla la Ornitinaa putrescina, lo
que intensifica el color violeta del medio fondo del tubo. Un viraje del violeta al
amarillo se interpreta ornitina negativo.

Urea deCrhistensen:
Fundamento: Detecta la presencia de la enzima ureasa. Cuando la bacteria
tiene la enzima, la urea es desdoblada a amonio y CO2. El amonio alcaliniza el medio
haciendo virar el indicador al rosado intenso.
Lectura e interpretación: Una color rosado intenso indica reacción positiva,
si el medio conserva su color original de amarillo pálido o un poco más intenso indica
reacción negativa.

Citrato de Simons:
Fundamento: Determina la capacidad
de un microorganismo de utilizar el
citrato como única fuente de carbono.

Lectura e interpretación: Un
viraje de color verde al azul marino y
crecimiento en la superficie da una
reacción positiva, de lo contrario es
negativa

Malonato (caldo malonato fenilalanina):

Fundamento: Evalúa la capacidad del microorganismo de utilizar el malonato
como única fuente de carbono y la desaminación de la fenilalanina, en forma
combinada.Las Enterobacterias no tienen la capacidad enzimática de realizar las
dos reacciones simultáneamente, por lo que, o se observa la utilización del malonato
o la desaminación de la lisina.
Lectura e interpretación: Un viraje de color verde al azul, da una reacción
positiva, de lo contrario es negativa.

Rojo de Metilo (RM) - VoguesProskauer (VP):

Fundamento:
VP: Capacidad de un microorganismo de producir un producto final neutro, el
acetilmetilcarbinol (acetoína), a partir de la fermentación de la glucosa.
RM: Comprobar la capacidad de un microorganismo de producir y mantener
estables productos terminales ácidos de la fermentación de la glucosa.
Lectura e interpretación:
El RM es positivo si se observa un anillo de color rojo en la superficie del
medio al agregar 2gts de reactivo rojo de metilo.