Anda di halaman 1dari 36

Halaman 1

Instruksi manual
Wuhan Fine Biological Technology Co., Ltd.
C6-323 Biolake, No.666Gaoxin AVE. Distrik Pengembangan
Teknologi Tinggi Eastlake, Wuhan, Hubei, China
Tel: (0086) 027-87384275
Faks: (0086) 027-87800889
www.fn-test.com
1/9
Kit ELISA Rat IL-6 (Interleukin-6)
No katalog: ER0042
Ukuran: 48T / 96T
Reaktivitas: Tikus
Rentang: 62,5-4000pg / ml
Kepekaan: <37,5pg / ml
Aplikasi: Untuk deteksi kuantitatif IL-6 dalam serum, plasma,
homogenat jaringan dan lainnya
cairan biologis.
Penyimpanan: 4 ° C selama 6 bulan
CATATAN: HANYA UNTUK PENGGUNAAN PENELITIAN.
Komponen Kit
Barang
Spesifikasi (48 t / 96 t)
Penyimpanan
Pelat ELISA Mikro (Dapat Diabaikan)
8 × 6 atau 8 × 12
4 ° C / -20 ° C
Standar Lyophilized
1 botol atau 2 botol
4 ° C / -20 ° C
Sampel / buffer pengenceran standar
10ml / 20ml
4°C
Biotin-detection antibody (Konsentrat) 60ul / 120ul
4°C
Antibodi buffer pengenceran
5ml / 10ml
4°C
HRP-Streptavidin Conjugate (SABC)
60ul / 120ul
4 ° C (cahaya bayangan)
SABC pengencer buffer
5ml / 10ml
4°C
Substrat TMB
5ml / 10ml
4 ° C (cahaya bayangan)
Hentikan solusi
5ml / 10ml
4°C
Cuci buffer (25X)
15ml / 30ml
4°C
Sealer Plat
3/5 buah
Deskripsi Produk
1 salinan

Halaman 2

Instruksi manual
Wuhan Fine Biological Technology Co., Ltd.
C6-323 Biolake, No.666Gaoxin AVE. Distrik Pengembangan
Teknologi Tinggi Eastlake, Wuhan, Hubei, China
Tel: (0086) 027-87384275
Faks: (0086) 027-87800889
www.fn-test.com
2/9
Prinsip Ujian
Kit ini didasarkan pada teknologi assay-immune assay-linked
enzyme-linked. Anti-IL-6
antibodi pra-dilapisi ke piring 96-baik. Dan biotin antibodi anti-IL-6
terkonjugasi adalah
digunakan sebagai antibodi deteksi. Standar, sampel uji dan deteksi
konjugasi biotin
antibodi ditambahkan ke sumur kemudian, dan cuci dengan
pencuci. HRP-Streptavidin
ditambahkan dan konjugat yang tidak terikat dicuci dengan
pencuci. Substrat TMB adalah
digunakan untuk memvisualisasikan reaksi enzimatik HRP. TMB
dikatalisis oleh HRP untuk menghasilkan warna biru
produk yang berubah warna menjadi kuning setelah menambahkan
larutan penghenti asam. Kepadatan kuning adalah
sebanding dengan jumlah sampel IL-6 yang ditangkap di piring. Baca
absorsisi OD di
450nm di pembaca lempeng, dan kemudian konsentrasi IL-6 dapat
dihitung.
Tindakan Pencegahan untuk Digunakan
1. Untuk memeriksa validitas operasi percobaan dan kelayakan
pengenceran sampel
proporsi, percobaan percontohan menggunakan standar dan sejumlah
kecil sampel
direkomendasikan.
2. Setelah membuka dan sebelum menggunakan, simpan piring
kering.
3. Sebelum menggunakan Kit, putar tabung dan turunkan semua
komponen ke bagian bawah tabung.
4. Penyimpanan reagen TMB menghindari cahaya.
5. Proses pencucian sangat penting, tidak sepenuhnya mencuci
dengan mudah menimbulkan false positive.
6. Duplicate well assay direkomendasikan untuk pengujian standar
dan sampel.
7. Jangan biarkan plat Micro kering pada saat pengujian, karena pelat
kering akan menonaktifkan komponen aktif
piring.
8. Jangan menggunakan kembali tips dan tabung untuk menghindari
kontaminasi silang.
9. Hindari menggunakan reagen dari batch yang berbeda
bersama-sama.
Bahan Yang Diperlukan tetapi Tidak Disediakan
1. pembaca Microplate (panjang gelombang: 450nm)
2. Inkubator 37 ° C
3. Pencuci piring otomatis
4. Pipet tunggal dan multi-saluran presisi dan tips sekali pakai
5. Bersihkan tabung dan tabung Eppendorf
6. Air deionisasi atau suling

Halaman 3

Instruksi manual
Wuhan Fine Biological Technology Co., Ltd.
C6-323 Biolake, No.666Gaoxin AVE. Distrik Pengembangan
Teknologi Tinggi Eastlake, Wuhan, Hubei, China
Tel: (0086) 027-87384275
Faks: (0086) 027-87800889
www.fn-test.com
3/9
Pencucian Manual
Buang solusi di piring tanpa menyentuh dinding samping. Tepuk
piring di penyerap
kertas saring atau bahan penyerap lainnya. Isi masing-masing dengan
benar dengan buffer cuci dan
rendam selama 1 hingga 2 menit, lalu aspirasi isi dari piring, dan
tepuk piring di penyerap
kertas saring atau bahan penyerap lainnya. Ulangi prosedur ini dua
kali lagi untuk total
TIGA mencuci.
Pencucian Otomatis
Aspirasi semua sumur, lalu bersihkan piring TIGA kali dengan
buffer350wash. Setelah pencucian akhir,
pelat invert, dan tepuk piring pada kertas filter penyerap atau bahan
penyerap lainnya. ini
merekomendasikan bahwa mesin cuci diatur untuk waktu
perendaman 1 menit.
Pengumpulan dan Penyimpanan Sampel
Isolasi sampel uji segera setelah mengumpulkan, kemudian, analisis
segera (dalam 2 jam). Atau
aliquot dan simpan pada -20 ° C untuk jangka panjang. Hindari
beberapa siklus pembekuan-freeze.
● Serum: Biarkan sampel membeku selama 2 jam pada suhu kamar
atau semalaman pada 4 ° C sebelumnya
sentrifugasi selama 20 menit pada sekitar 1000 × g. Kumpulkan
supernatan dan bawa
keluar uji segera. Tabung pengumpulan darah harus sekali pakai,
non-pirogenik,
dan non-endotoksin.
● Plasma: Kumpulkan plasma menggunakan EDTA-Na2 sebagai
antikoagulan. Sampel sentrifugal untuk 15
menit pada 1000 × g pada 2 - 8 ° C dalam 30 menit
pengumpulan. Kumpulkan supernatan dan
lakukan pemeriksaan segera. Hindari hemolisis, sampel kolesterol
tinggi.
● Jaringan homogenat: Untuk informasi umum, darah hemolisis
dapat mempengaruhi hasilnya, jadi
Anda harus membilas jaringan dengan PBS yang dingin (0,01M, pH
= 7,4) untuk menghilangkan kelebihan darah
sepenuhnya. Potongan jaringan harus ditimbang dan kemudian
dipotong kecil-kecil yang akan menjadi
dihomogenisasi dalam PBS (volumenya tergantung pada berat
jaringan. 9mL PBS akan menjadi
sesuai dengan 1 potongan jaringan gram. Beberapa protease inhibitor
direkomendasikan untuk ditambahkan
PBS.) dengan homogenizer kaca di atas es. Untuk memecah sel lebih
jauh, Anda dapat sonicate
suspensi dengan pengganggu sel ultrasonik atau menggantinya
dengan siklus pembekuan-beku. Itu
homogenat kemudian disentrifugasi selama 5 menit pada 5000 × g
untuk mendapatkan supernat.
● Supernasi kultur sel: Centrifuge supernate selama 20 menit untuk
menghilangkan ketidakmurnian yang tidak dapat larut
dan puing-puing sel pada 1000 × g pada 2 - 8 ° C. Kumpulkan
supernasi yang jelas dan lakukan pengujian
segera.
● Cairan biologis lainnya: Sampel sentrifugasi selama 20 menit pada
1000 × g pada 2 - 8 ° C. Kumpulkan
supernatan dan lakukan pemeriksaan segera.
● Persiapan sampel: Sampel harus jelas dan transparan dan
disentrifugasi
menghapus padatan tersuspensi.

Halaman 4

Instruksi manual
Wuhan Fine Biological Technology Co., Ltd.
C6-323 Biolake, No.666Gaoxin AVE. Distrik Pengembangan
Teknologi Tinggi Eastlake, Wuhan, Hubei, China
Tel: (0086) 027-87384275
Faks: (0086) 027-87800889
www.fn-test.com
4/9
Catatan: Sampel yang akan digunakan dalam 5 hari dapat disimpan
pada 4 ° C, jika tidak sampel harus disimpan
pada -20 ° C (≤1 bulan) atau -80 ° C (≤2 bulan) untuk menghindari
hilangnya bioaktivitas dan kontaminasi.
Sampel yang mengalami hemolisis tidak cocok untuk digunakan
dalam pengujian ini.
Pedoman Pengenceran Sampel
Pengguna akhir harus memperkirakan konsentrasi protein target
dalam sampel uji terlebih dahulu, dan
pilih faktor pengenceran yang tepat untuk membuat konsentrasi
protein target yang diencerkan turun optimal
jangkauan deteksi kit. Encerkan sampel dengan buffer pengenceran
yang disediakan, dan beberapa percobaan
mungkin diperlukan dalam praktek. Sampel uji harus dicampur
dengan buffer pengenceran. Dan
juga kurva standar dan sampel harus dibuat dalam pra-percobaan.
● Konsentrasi protein target tinggi (40000-400000pg / ml):
Pengenceran: 1: 100. (yaitu Tambahkan 1μl dari
sampel ke dalam 99 μl Sampel / buffer pengenceran Standar.)
● Konsentrasi protein target menengah (4000-40000pg / ml):
Pengenceran: 1:10 (yaitu Tambahkan 10 μl
sampel ke 90 μl Sampel / buffer pengenceran Standar.)
● Konsentrasi protein target rendah (62,5-4000pg / ml): Pengenceran:
1: 2. (Yaitu Tambahkan 50 μl sampel
menjadi 50 μl Sampel / buffer pengenceran Standar.)
● Konsentrasi protein target yang sangat rendah (≤62.5pg / ml):
Tidak perlu encer, atau encer pada 1: 2.
Persiapan dan Penyimpanan Reagen
Bawalah semua reagen ke suhu kamar sebelum digunakan.
1, Cuci Buffer:
Encerkan 30 ml Cucian Pembersih Terkonsentrasi ke dalam 750 mL
Buffer Cuci dengan deionisasi atau
air sulingan. Masukkan kembali larutan yang tidak digunakan pada
suhu 4 ° C. Jika kristal terbentuk dalam konsentrasinya, Anda
dapat menghangatkannya dengan 40 ° C air mandi (Suhu pemanasan
tidak boleh melebihi 50 ° C) dan mencampurnya
dengan lembut sampai kristal benar-benar larut. Solusinya harus
didinginkan ke ruangan
suhu sebelum digunakan.
2, Standar:
1). 4000pg / ml larutan standar: Tambahkan 1 ml Sampel / buffer
pengenceran Standar menjadi satu
Tabung standar, simpan tabung pada suhu kamar selama 10 menit
dan aduk rata.
2) .2000pg / ml → 62,5pg / ml larutan standar: Label 6 Eppendorf
tube with2000pg / ml,
1000pg / ml, 500pg / ml, 250pg / ml, 125pg / ml, 62.5pg / ml,
masing-masing. Aliquot 0,3 ml dari
Sampel / buffer pengenceran Standar ke setiap tabung. Tambahkan
0,3 ml standar diatas4000pg / ml
solusi ke dalam tabung 1 dan aduk rata. Transfer 0,3 ml dari tabung
pertama ke tabung ke-2 dan aduk
sepenuhnya. Transfer 0,3 ml dari tabung ke-2 ke tabung ke-3 dan
aduk rata, dan seterusnya.

Halaman 5

Instruksi manual
Wuhan Fine Biological Technology Co., Ltd.
C6-323 Biolake, No.666Gaoxin AVE. Distrik Pengembangan
Teknologi Tinggi Eastlake, Wuhan, Hubei, China
Tel: (0086) 027-87384275
Faks: (0086) 027-87800889
www.fn-test.com
5/9
Catatan: Solusi standar paling baik digunakan dalam 2 jam. Solusi
standar harus di
4 ° C hingga 12 jam. Atau simpan pada -20 ° C hingga 48
jam. Hindari siklus freeze-thaw berulang.
3, Persiapan solusi kerja Biotin-deteksi Antibodi
siapkan dalam 1 jam sebelum percobaan.
1) Hitung total volume solusi yang bekerja: 0,1 ml / well × kuantitas
sumur. (Mengizinkan
0,1-0,2 ml lebih banyak dari total volume)
2) Encerkan antibodi deteksi Biotin dengan buffer pengenceran
antibodi pada 1: 100 dan campuran
secara menyeluruh. (yaitu Tambahkan 1 μl antibodi deteksi Biotin ke
dalam 99 μl buffer pengenceran antibodi.)
4, Persiapan solusi kerja HRP-Streptavidin Conjugate (SABC):
siapkan dalam 30 menit sebelum percobaan.
1) Hitung total volume solusi yang bekerja: 0,1 ml / well × kuantitas
sumur. (Mengizinkan
0,1-0,2 ml lebih banyak dari total volume)
2) Encerkan SABC dengan SABC pengencer buffer pada 1: 100 dan
aduk rata. (yaitu Tambahkan 1ml of
SABC menjadi 99 μl buffer pengenceran SABC.)
Prosedur Pengujian
Sebelum menambahkan ke sumur, menyeimbangkan solusi kerja
SABC dan substrat TMB setidaknya 30
min pada suhu kamar (37 ° C). Ketika menipiskan sampel dan reagen,
mereka harus dicampur
sepenuhnya dan merata. Disarankan untuk memplot kurva standar
untuk setiap tes.
1. Tetapkan standar, sampel uji dan kontrol (nol) sumur pada pelat
pra-dilapisi masing-masing, dan
kemudian, catat posisi mereka. Disarankan untuk mengukur setiap
standar dan sampel dalam
duplikat. Cuci piring 2 kali sebelum menambahkan standar,
sampel, dan kontrol (nol) sumur!
2. Aliquot 0,1 ml of4000pg / ml, 2000pg / ml, 1000pg / ml, 500pg /
ml, 250pg / ml, 125pg / ml,
62,5pg / ml, solusi standar ke dalam sumur standar.
3. Tambahkan 0,1 ml Sampel / buffer pengenceran Standar ke dalam
kontrol (nol) dengan baik.
4. Tambahkan 0,1 ml sampel diencerkan dengan benar (serum Rat,
plasma, homogenat jaringan dan lainnya
cairan biologis.) ke dalam sampel uji sumur.

Halaman 6

Instruksi manual
Wuhan Fine Biological Technology Co., Ltd.
C6-323 Biolake, No.666Gaoxin AVE. Distrik Pengembangan
Teknologi Tinggi Eastlake, Wuhan, Hubei, China
Tel: (0086) 027-87384275
Faks: (0086) 027-87800889
www.fn-test.com
6/9
5. Tutup pelat dengan penutup dan inkubasi pada suhu 37 ° C selama
90 menit.
6. Lepaskan penutup dan buang isi piring, tepuk pelat pada filter
penyerap
kertas atau bahan penyerap lainnya. JANGAN membiarkan sumur
benar-benar kering kapan saja. Melakukan
Tidak Cuci Piring!
7. Tambahkan 0,1 ml solusi kerja antibodi deteksi Biotin ke dalam
sumur di atas (standar,
contoh uji & nol sumur). Tambahkan solusi di bagian bawah setiap
sumur tanpa menyentuh
dinding samping.
8. Tutup pelat dengan penutup dan inkubasi pada suhu 37 ° C selama
60 menit.
9. Lepaskan penutup, dan cuci piring 3 kali dengan pencuci.
10. Tambahkan 0,1 ml larutan kerja SABC ke dalam setiap sumur,
tutup pelat dan menetaskan
37 ° C selama 30 menit.
11. Lepaskan penutup dan cuci piring 5 kali dengan Wash buffer, dan
setiap kali biarkan mencuci
penyangga tinggal di dalam sumur selama 1-2 menit.
12. Tambahkan 90 µl substrat TMB ke dalam setiap sumur, tutupi
piring dan menetaskan pada 37 ° Cin gelap
dalam waktu 15-30 menit. (Catatan: Waktu inkubasi ini hanya untuk
referensi, waktu optimal
harus ditentukan oleh pengguna akhir.) Dan nuansa biru dapat dilihat
di 3-4 pertama
sumur (dengan larutan standar IL-6 yang paling terkonsentrasi),
sumur lainnya tidak terlihat jelas
warna.
13. Tambahkan 50 ml larutan Stop ke setiap sumur dan aduk
rata. Warna berubah menjadi kuning
segera.
14. Baca absorbansi OD pada 450 nm di pembaca lempeng segera
setelah menambahkan
menghentikan solusi.
Untuk perhitungan, (OD450 relatif) = (OD450 dari setiap sumur) -
(OD450 dari sumur Zero).
Kurva standar dapat diplot sebagai OD450 relatif dari setiap solusi
standar (Y) vs
konsentrasi masing-masing solusi standar (X). Konsentrasi IL-6 dari
sampel bisa
diinterpolasi dari kurva standar. Disarankan untuk menggunakan
kurva perangkat lunak profesional
ahli untuk 1,3, untuk rincian, silakan kunjungi: www.fn-test.com
Catatan: Jika sampel yang diukur dilarutkan, gandakan faktor
pengenceran ke konsentrasi
dari interpolasi untuk mendapatkan konsentrasi sebelum
pengenceran.
Ringkasan
1. Cuci piring 2 kali sebelum menambahkan standar, sampel dan
kontrol (nol) sumur!
2. Tambahkan 100μL standar atau sampel ke setiap sumur selama 90
menit pada 37 ° C
3. tambahkan 100μL Biotin-deteksi solusi kerja antibodi untuk setiap
sumur selama 60 menit pada 37 ° C
4. Aspirasi dan cuci 3 kali
5. Tambahkan solusi 100μLSABCworking untuk masing-masing
dengan baik. Inkubasi selama 30 menit pada 37 ° C
Halaman 7

Instruksi manual
Wuhan Fine Biological Technology Co., Ltd.
C6-323 Biolake, No.666Gaoxin AVE. Distrik Pengembangan
Teknologi Tinggi Eastlake, Wuhan, Hubei, China
Tel: (0086) 027-87384275
Faks: (0086) 027-87800889
www.fn-test.com
7/9
6. Aspirasi dan cuci 5 kali
7. Tambahkan 90μLTMB substrat. Inkubasi 15-30 menit pada 37 ° C
8. Tambahkan Solusi Berhenti 50μL. Baca di 450nm segera
9. Perhitungan hasil
Data Khas & Kurva Standar
Hasil dari menjalankan standar khas dari ELISA Kit IL-6
ditunjukkan di bawah ini. Kurva standar ini adalah
dihasilkan di laboratorium kami untuk tujuan demonstrasi
saja. Setiap pengguna harus mendapatkannya sendiri
kurva standar sesuai percobaan. (N / A = tidak berlaku)
X
pg / ml 0
62,5
125
250
500
1000
2000
4000
Y
OD450 0,042 0,113 0,174 0,293 0,569 0,869 1,662 2,373
Kekhususan
Uji ini memiliki sensitivitas tinggi dan spesifisitas yang sangat baik
untuk mendeteksi IL-6. Tidak signifikan
reaktivitas silang atau interferensi antara IL-6 dan analog diamati.

Halaman 8

Instruksi manual
Wuhan Fine Biological Technology Co., Ltd.
C6-323 Biolake, No.666Gaoxin AVE. Distrik Pengembangan
Teknologi Tinggi Eastlake, Wuhan, Hubei, China
Tel: (0086) 027-87384275
Faks: (0086) 027-87800889
www.fn-test.com
8/9
Catatan: Dibatasi oleh keterampilan dan pengetahuan saat ini, tidak
mungkin bagi kita untuk menyelesaikan persilangan
deteksi reaktivitas antara IL-6 dan semua analog, oleh karena itu,
reaksi silang mungkin masih ada.
Pemulihan
Matriks yang tercantum di bawah ini dibubuhi tingkat IL-6 tertentu
dan tingkat pemulihannya
dihitung dengan membandingkan nilai yang terukur dengan jumlah
IL-6 yang diharapkan dalam sampel.
Matriks
Kisaran pemulihan (%)
Rata-rata (%)
serum (n = 5)
91-97
95
EDTA plasma (n = 5)
85-105
95
plasma heparin (n = 5)
89-103
95
Linearitas
Linearitas kit ini diuji dengan menguji sampel yang dibubuhi dengan
konsentrasi yang sesuai
IL-6 dan pengenceran seri mereka. Hasilnya ditunjukkan oleh
persentase yang dihitung
konsentrasi ke yang diharapkan.
Mencicipi
1: 2
1: 4
1: 8
1:16
serum (n = 5)
88-104%
85-105%
92-103%
90-105%
EDTA plasma (n = 5)
82-100%
83-99%
83-100%
83-99%
plasma heparin (n = 5)
80-100%
84-96%
82-96%
85-98%
Presisi
Intra-assay Precision (Precision in an assay): 3 sampel dengan IL-6
tingkat rendah, menengah dan tinggi
diuji 20 kali pada satu piring, masing-masing.
Inter-assay Precision (Precision between assays): 3 sampel dengan
IL-6 tingkat rendah, menengah dan tinggi
diuji pada 3 lempeng yang berbeda, 8 ulangan di setiap lempeng.
CV (%) = SD / meanX100
Intra-Assay: CV <8%
Inter-Assay: CV <10%
Stabilitas
Stabilitas kit ELISA ditentukan oleh tingkat kehilangan
aktivitas. Tingkat kehilangan kit ini kurang
dari 10% dalam tanggal kedaluwarsa di bawah kondisi penyimpanan
yang sesuai.
Halaman 9

Instruksi manual
Wuhan Fine Biological Technology Co., Ltd.
C6-323 Biolake, No.666Gaoxin AVE. Distrik Pengembangan
Teknologi Tinggi Eastlake, Wuhan, Hubei, China
Tel: (0086) 027-87384275
Faks: (0086) 027-87800889
www.fn-test.com
9/9
Standar (n = 5)
37 ° C selama 1 bulan
4 ° C selama 6 bulan
Rata-rata (%)
80
95-100
Untuk meminimalkan pengaruh ekstra pada kinerja, prosedur operasi
dan kondisi lab,
terutama suhu kamar, kelembaban udara, suhu inkubator harus
dikontrol secara ketat.
Juga sangat disarankan bahwa seluruh pengujian dilakukan oleh
operator yang sama dari
mulai sampai akhir.
Halaman 1

Instruksi manual
Wuhan Fine BiotechCo., Ltd.
C6-323 Biolake, No.666Gaoxin AVE. Distrik Pengembangan
Teknologi Tinggi Eastlake, Wuhan, Hubei, China
Tel :( 0086) 027-87384275
Faks: (0086) 027-87800889 www.fn-test.com
1/9
Kit ELISA Rat FE (Ferritin)
No katalog: ER0947
Ukuran: 48T / 96T
Reaktivitas: Tikus
Jangkauan Deteksi: 3.125-200pg / ml
Kepekaan: <1pg / ml
Aplikasi: Untuk deteksi kuantitatif FE dalam serum, plasma,
jaringan homogenatesand lainnya
cairan biologis.
Penyimpanan: 4 ° C selama 6 bulan
CATATAN: HANYA UNTUK PENGGUNAAN PENELITIAN.
Komponen Kit
Barang
Spesifikasi (48 t / 96 t)
Penyimpanan
ELISA Microplate (Dapat Diturunkan)
8 × 6/8 × 12
4 ° C / -20 ° C
Standar Lyophilized
1 vial / 2 vial
4 ° C / -20 ° C
Sampel / Penyangga Pengenceran Standar
10ml / 20ml
4°C
Antibodi berlabel Biotin (Terkonsentrasi)
60ul / 120ul
4°C
Pengencer Dilusi Antibodi
5ml / 10ml
4°C
HRP-Streptavidin Conjugate (SABC)
60ul / 120ul
4 ° C (cahaya bayangan)
SABC Pengencer Penyangga
5ml / 10ml
4°C
Substrat TMB
5ml / 10ml
4 ° C (cahaya bayangan)
Hentikan Solusi
5ml / 10ml
4°C
Cuci Buffer (25X)
15ml / 30ml
4°C
Sealer Plat
3/5 buah
Deskripsi Produk
1 salinan

Halaman 2

Instruksi manual
Wuhan Fine BiotechCo., Ltd.
C6-323 Biolake, No.666Gaoxin AVE. Distrik Pengembangan
Teknologi Tinggi Eastlake, Wuhan, Hubei, China
Tel :( 0086) 027-87384275
Faks: (0086) 027-87800889 www.fn-test.com
2/9
Prinsip Ujian
Kit ini didasarkan pada teknologi assay-immune assay-linked
enzyme-linked. Anti-
FEantibody sebelumnya dilapisi ke piring 96-well. Dan biotin
antibodi anti-FE terkonjugasi
digunakan sebagai antibodi deteksi. Standar, sampel uji dan deteksi
konjugasi biotin
antibodi ditambahkan ke dalam sumur selanjutnya, dan dicuci
dengan pencuci. HRP-
Streptavidin ditambahkan dan konjugat yang tidak terikat
dibersihkan dengan pencuci. TMB
substrat digunakan untuk memvisualisasikan reaksi enzimatik
HRP. TMB dikatalisis oleh HRP untuk
menghasilkan produk warna biru yang berubah menjadi kuning
setelah menambahkan larutan penghenti asam. Itu
densitas kuning sebanding dengan jumlah FE sampel yang ditangkap
di piring. Baca OD
absorbansi pada 450nm dalam pembaca lempeng, dan kemudian
konsentrasi FE dapat
dihitung.
Tindakan pencegahan
1. Untuk memeriksa validitas operasi percobaan dan kelayakan
pengenceran sampel
proporsi, percobaan percontohan menggunakan standar dan sejumlah
kecil sampel
direkomendasikan.
2. Setelah membuka dan sebelum menggunakan, simpan piring
kering.
3. Sebelum menggunakan Kit, putar tabung dan turunkan semua
komponen ke bagian bawah tabung.
4. Penyimpanan reagen TMB menghindari cahaya.
5. Proses pencucian sangat penting, tidak sepenuhnya mencuci
dengan mudah menimbulkan false positive.
6. Duplicate well assay direkomendasikan untuk pengujian standar
dan sampel.
7. Jangan biarkan plat Micro kering pada saat pengujian, karena pelat
kering akan menonaktifkan komponen aktif
piring.
8. Jangan menggunakan kembali tips dan tabung untuk menghindari
kontaminasi silang.
9. Hindari menggunakan reagen dari batch yang berbeda
bersama-sama.
Bahan Yang Diperlukan tetapi Tidak Disediakan
1. pembaca Microplate (panjang gelombang: 450nm)
2. Inkubator 37 ° C
3. Pencuci piring otomatis
4. Pipet tunggal dan multi-saluran presisi dan tips sekali pakai
5. Bersihkan tabung dan tabung Eppendorf
6. Air deionisasi atau suling

Halaman 3

Instruksi manual
Wuhan Fine BiotechCo., Ltd.
C6-323 Biolake, No.666Gaoxin AVE. Distrik Pengembangan
Teknologi Tinggi Eastlake, Wuhan, Hubei, China
Tel :( 0086) 027-87384275
Faks: (0086) 027-87800889 www.fn-test.com
3/9
Pencucian Manual
Buang solusi di piring tanpa menyentuh dinding samping. Tepuk
piring di penyerap
kertas saring atau bahan penyerap lainnya. Isi masing-masing dengan
benar dengan buffer cuci dan
rendam selama 1 hingga 2 menit, lalu aspirasi isi dari piring, dan
tepuk piring di penyerap
kertas saring atau bahan penyerap lainnya. Ulangi prosedur ini dua
kali lagi untuk total
TIGA mencuci.
Pencucian otomatis
Aspirasi semua sumur, lalu cuci piring TIGA kali dengan buffer
350wash. Setelah pencucian akhir,
pelat invert, dan tepuk piring pada kertas filter penyerap atau bahan
penyerap lainnya. ini
merekomendasikan bahwa mesin cuci harus diatur untuk perendaman
1 menit.
Pengumpulan dan Penyimpanan Sampel
Isolasi sampel uji segera setelah mengumpulkan, kemudian, analisis
segera (dalam 2 jam). Atau alikuot
dan simpan pada -20 ° C untuk jangka panjang. Hindari beberapa
siklus pembekuan-freeze.
● Serum: Tempatkan sampel darah utuh pada suhu kamar selama 2
jam atau taruh pada suhu 4 ° C
semalam dan sentrifugasi selama 20 menit pada sekitar 1000 × g,
Kumpulkan
supernatan dan lakukan pemeriksaan segera. Tabung pengumpulan
darah seharusnya
sekali pakai, non-pirogenik, dan non-endotoksin.
● Plasma: Kumpulkan plasma menggunakan EDTA-Na 2 sebagai
antikoagulan. Sampel sentrifugal untuk 15
menit pada 1000 × g pada 2 - 8 ° C dalam 30 menit
pengumpulan. Kumpulkan supernatan dan
lakukan pemeriksaan segera. Hindari hemolisis, sampel kolesterol
tinggi.
● Homogenate Jaringan: Karena darah hemolisis memiliki hubungan
dengan hasil tes, maka perlu
hilangkan sisa darah dengan mencuci jaringan dengan penyangga
PBS pra-pendinginan (0,01M, pH = 7,4).
Jaringan mince setelah menimbang dan membuatnya dihomogenkan
di PBS (volume tergantung pada
berat jaringan. Secara umum, 9mL PBS akan sesuai untuk 1 gram
jaringan
potongan-potongan. Beberapa protease inhibitor direkomendasikan
untuk ditambahkan ke dalam PBS) dengan sebuah gelas
homogenizer di atas es. Untuk memecah sel lebih jauh, Anda dapat
sonicate suspensi dengan
sel ultrasonik mengganggu atau menggantinya dengan siklus
pembekuan-pencairan. Homogenat kemudian
disentrifugasi selama 5 menit pada 5000 × g untuk mendapatkan
supernata.
● Sel Budaya supernat: Centrifuge supernatan selama 20 menit pada
1000 × g pada 2 - 8 ° Cto
buang kotoran yang tidak larut dan puing-puing sel. Kumpulkan
supernata yang jelas dan lakukan
uji segera.
● Cairan Biologis Lainnya: Sampel sentrifugal selama 20 menit pada
1000 × g pada 2-8 ° C. Mengumpulkan
supernatan dan lakukan pemeriksaan segera.
● Preparasi Sampel: Sampel harus jelas dan transparan dan
menghilangkan padatan tersuspensi
dengan sentrifugasi.

Halaman 4

Instruksi manual
Wuhan Fine BiotechCo., Ltd.
C6-323 Biolake, No.666Gaoxin AVE. Distrik Pengembangan
Teknologi Tinggi Eastlake, Wuhan, Hubei, China
Tel :( 0086) 027-87384275
Faks: (0086) 027-87800889 www.fn-test.com
4/9
Catatan: Sampel yang akan digunakan dalam 5 hari dapat disimpan
pada 4 ° C, selain itu, sampel harus
disimpan pada -20 ° C (uji ≤1 bulan) atau -80 ° C (assay≤2 bulan)
untuk menghindari hilangnya bioaktivitas dan
kontaminasi. Sampel yang mengalami hemolisis tidak cocok untuk
pengujian ini.
Pedoman Pengenceran Sampel
Pengguna akhir harus memperkirakan konsentrasi protein target
dalam sampel uji, dan pilih a
faktor pengenceran yang tepat untuk membuat konsentrasi protein
target diencerkan jatuh secara optimal
jangkauan deteksi kit. Encerkan sampel dengan buffer pengenceran
yang disediakan, dan beberapa percobaan
mungkin diperlukan. Sampel uji harus dicampur dengan buffer
pengenceran. Dan juga
kurva standar dan sampel harus dibuat dalam pra-percobaan.
Pengenceran berikut
solusi hanya untuk referensi:
● Konsentrasi tinggi (2000-20000pg / ml): Pengenceran: 1:
100. (yaitu Tambahkan 1μl sampel ke 99μl dari
Sampel / Penyangga Pengenceran Standar.)
● Konsentrasi menengah (200-2000pg / ml): Pengenceran: 1:10.
(Yaitu Tambahkan 10μl sampel ke 90μl
Sampel / Penyangga Pengenceran Standar.)
● Konsentrasi rendah (3.125-200pg / ml): Pengenceran: 1: 2. (yaitu
Tambahkan 50μl sampel ke dalam 50μl
Sampel / Penyangga Pengenceran Standar.)
● Konsentrasi yang sangat rendah (≤3.125pg / ml): Tidak perlu encer,
atau encer pada 1: 2.
Persiapan dan Penyimpanan Reagen
Masukkan kit pada suhu kamar selama 20 menit sebelum digunakan
1, Cuci Buffer:
Encerkan 30mL Concentrated Wash Buffer ke dalam 750 mL Cuci
Buffer dengan deionisasi atau suling
air. Masukkan kembali larutan yang tidak digunakan pada suhu 4 °
C. Jika kristal terbentuk dalam konsentrasinya, Anda bisa
hangatkan dengan air mandi 40 ° C (Suhu pemanasan tidak boleh
melebihi 50 ° C) dan aduk dengan lembut
sampai kristal sepenuhnya dilarutkan. Solusinya harus didinginkan
ke ruangan
suhu sebelum digunakan.
2, Standar:
1). 200pg / ml larutan standar: Tambahkan 1 ml Sampel / buffer
pengenceran Standar menjadi satu
Tabung standar, simpan tabung pada suhu kamar selama 10 menit
dan aduk rata.
2) .100pg / ml → 3.125pg / ml larutan standar: Label 6 Eppendorf
tube with100pg / ml,
50pg / ml, 25pg / ml, 12.5pg / ml, 6.25pg / ml, 3.125pg / ml,
masing-masing. Tambahkan 0,3 ml
Sampel / buffer pengenceran Standar ke setiap tabung. Tambahkan
0,3 ml di atas200pg / mlstandar
solusi ke tabung 1 dan mencampurnya secara menyeluruh. Transfer
0,3 ml dari tabung pertama ke tabung ke-2 dan
campurkan dengan seksama. Mentransfer 0,3 ml dari tabung ke-2 ke
tabung ke-3 dan mencampurnya secara menyeluruh, dan
seterusnya.

Halaman 5
Instruksi manual
Wuhan Fine BiotechCo., Ltd.
C6-323 Biolake, No.666Gaoxin AVE. Distrik Pengembangan
Teknologi Tinggi Eastlake, Wuhan, Hubei, China
Tel :( 0086) 027-87384275
Faks: (0086) 027-87800889 www.fn-test.com
5/9
Catatan: Sebaiknya gunakan Solusi Standar dalam 2 jam. Solusi
Standar harus pada 4 ° C
hingga 12 jam. Atau simpan di -20 ° C hingga 48 jam. Hindari siklus
freeze-thaw berulang.
3, Persiapan Solusi Kerja Antibodi yang berlabel Biotin
Persiapkan dalam 1 jam sebelum percobaan.
1) Hitung total volume yang diperlukan dari solusi yang bekerja: 0,1
ml / well × kuantitas sumur.
(Biarkan 0,1-0,2 ml lebih banyak dari total volume)
2) Encerkan Biotin-detectionantibody dengan Antibody Dilution
Bufferat 1: 100 dan mencampurnya
sepenuhnya. (yaitu Tambahkan 1μl antibodi berlabel Biotin ke 99μl
Antibody Dilution Buffer.)
4, Persiapan Solusi Kerja HRP-Streptavidin Conjugate (SABC):
Persiapkan dalam 30 menit sebelum percobaan.
1) Hitung total volume yang diperlukan dari solusi yang bekerja: 0,1
ml / well × kuantitas sumur.
(Biarkan 0,1-0,2 ml lebih banyak dari total volume)
2) Encerkan SABC dengan SABC Pengencer Penyangga pada 1: 100
dan aduk dengan seksama. (yaitu Tambahkan 1μl
dari SABC ke 99μl dari SABC Dilution Buffer.)
Prosedur Pengujian
Sebelum menambahkan reagen ke dalam sumur, setimbang Substrat
TMB selama 30 menit pada 37 ° C. Ketika menipiskan
sampel dan reagen, mereka harus dicampur sepenuhnya dan
merata. Disarankan untuk merencanakan a
kurva standar untuk setiap tes.
1. Tetapkan standar, sampel uji dan kontrol (nol) sumur pada pelat
pra-dilapisi masing-masing, dan
kemudian, catat posisi mereka. Disarankan untuk mengukur setiap
standar dan sampel dalam
duplikat. Cuci piring 2 kali sebelum menambahkan standar,
sampel, dan kontrol (nol) sumur!
2. Aliquot 0.1ml of200pg / ml, 100pg / ml, 50pg / ml, 25pg / ml,
12.5pg / ml, 6.25pg / ml, 3.125pg / ml,
solusi standar ke dalam sumur standar.
3. Tambahkan 0,1 ml Sampel / Penyangga Pengenceran Standar ke
dalam kontrol (nol) dengan baik.

Halaman 6

Instruksi manual
Wuhan Fine BiotechCo., Ltd.
C6-323 Biolake, No.666Gaoxin AVE. Distrik Pengembangan
Teknologi Tinggi Eastlake, Wuhan, Hubei, China
Tel :( 0086) 027-87384275
Faks: (0086) 027-87800889 www.fn-test.com
6/9
4. Tambahkan 0,1 ml sampel yang diencerkan dengan benar
(Ratserum, plasma, homogenat jaringan dan lainnya
cairan biologis) menjadi sampel uji sumur.
5. Tutup pelat dengan penutup dan inkubasi pada suhu 37 ° C selama
90 menit.
6. Lepaskan penutup dan buang isi piring, dan cuci piring 2 kali
dengan Cuci
Buffer. JANGAN biarkan kering sepenuhnya kapan saja.
7. Tambahkan 0,1 ml larutan kerja antibodi berlabel Biotin ke dalam
sumur di atas (standar, uji
contoh & nol sumur). Tambahkan solusi di bagian bawah setiap
sumur tanpa menyentuh
sisi luar ban.
8. Tutup pelat dengan penutup dan inkubasi pada suhu 37 ° C selama
60 menit.
9. Lepaskan penutup, dan cuci piring 3 kali dengan Cuci Buffer, dan
biarkan buffer cuci tetap masuk
sumur selama 1 menit setiap kali.
10. Tambahkan 0,1 ml Solusi Kerja SABC ke setiap sumur, tutup
pelat dan menetaskan
37 ° C selama 30 menit.
11. Lepaskan penutup dan cuci piring 5 kali dengan Cuci Buffer, dan
biarkan buffer cuci tetap di
sumur selama 1-2 menit setiap kali.
12. Tambahkan 90μl TMB Substrat ke dalam masing-masing dengan
baik, tutup piring dan inkubasi pada 37 ° Cin gelap di dalamnya
15-30 menit. (Catatan: Waktu inkubasi ini hanya untuk referensi,
pengguna akhir harus menentukan
waktu optimal.) Ini akan berubah biru di 3-4 sumur pertama (dengan
FE terkonsentrasi paling banyak
solusi standar), sumur lainnya mungkin tidak menampilkan warna
yang jelas.
13. Tambahkan 50μl Stop Solution ke setiap sumur dan aduk hingga
merata. Warna berubah menjadi
segera kuning.
14. Baca OD absorbansi di 450 nm dalam Pembaca Microplate
segera setelah menambahkan
menghentikan solusi.
Mengenai perhitungan, (OD450 relatif) = (OD450 dari setiap sumur)
- (OD450 dari Zero
baik). Kurva standar dapat diplot sebagai OD450 relatif dari setiap
solusi standar (Y) vs.
konsentrasi masing-masing larutan standar (X). TheFekonsentrasi
sampel
dapat diinterpolasi dari kurva standar. Disarankan untuk
menggunakan perangkat lunak profesional
ahli kurva ke 1.3, silakan
kunjungi: http://www.fn-test.com/services/software-download/ untuk
lebih lanjut
informasi.
Catatan: Jika sampel yang diukur dilarutkan, gandakan faktor
pengenceran ke konsentrasi
dari interpolasi untuk mendapatkan konsentrasi sebelum
pengenceran.
Ringkasan
1. Cuci piring 2 kali sebelum menambahkan standar, sampel dan
kontrol (nol) sumur!
2. Tambahkan 100μL standar atau sampel ke setiap sumur dan
inkubasi selama 90 menit pada 37 ° C

Halaman 7

Instruksi manual
Wuhan Fine BiotechCo., Ltd.
C6-323 Biolake, No.666Gaoxin AVE. Distrik Pengembangan
Teknologi Tinggi Eastlake, Wuhan, Hubei, China
Tel :( 0086) 027-87384275
Faks: (0086) 027-87800889 www.fn-test.com
7/9
3. Aspirasi dan cuci piring 2 kali
4. Tambahkan 100μL larutan kerja antibodi berlabel Biotin untuk
masing-masing sumur dan inkubasi untuk 60
menit pada 37 ° C
5. Aspirasi dan cuci piring 3 kali
6. Tambahkan 100μLSABC Solusi Kerja ke setiap sumur dan
inkubasi selama 30 menit pada 37 ° C
7. Aspirasi dan cuci piring 5 kali
8. Tambahkan 90μL TMB Substrat. Inkubasi 15-30 menit pada 37 °
C
9. Tambahkan 50μL Stop Solution. Baca di 450nm segera
10. Perhitungan
Data Khas & Kurva Standar
Hasil dari operasi standar FE ELISA Kit tercantum di bawah
ini. Kurva standar ini
dihasilkan di laboratorium kami untuk tujuan demonstrasi
saja. Pengguna harus mendapatkan kurva standar sebagai
per eksperimen sendiri. (N / A = tidak berlaku)
X
pg / ml 0
3,125 6,25
12,5
25
50
100
200
Y
OD450 0,046 0,072 0,112 0,194 0,348 0,653 1,193 2,203

Halaman 8

Instruksi manual
Wuhan Fine BiotechCo., Ltd.
C6-323 Biolake, No.666Gaoxin AVE. Distrik Pengembangan
Teknologi Tinggi Eastlake, Wuhan, Hubei, China
Tel :( 0086) 027-87384275
Faks: (0086) 027-87800889 www.fn-test.com
8/9
Kekhususan
Uji ini memiliki sensitivitas tinggi dan spesifisitas yang sangat baik
untuk mendeteksi ofEF. Tidak ada cross-signifikan
reaktivitas atau interferensi antara analog EFE dan diamati.
Catatan: Dibatasi oleh keterampilan dan pengetahuan saat ini, sulit
bagi kita untuk menyelesaikan
deteksi reaktivitas antara Agar semua analog, oleh karena itu, reaksi
silang mungkin masih ada.
Pemulihan
Matriks yang tercantum di bawah ini dibubuhi tingkat tertentu dan
tingkat pemulihannya
dihitung dengan membandingkan nilai yang terukur dengan jumlah
sampelFE yang diharapkan.
Matriks
Jangkauan Pemulihan (%)
Rata-rata (%)
Serum (n = 5)
87-105
92
EDTA Plasma (n = 5)
87-95
92
Heparin Plasma (n = 5)
87-103
94

Halaman 9

Instruksi manual
Wuhan Fine BiotechCo., Ltd.
C6-323 Biolake, No.666Gaoxin AVE. Distrik Pengembangan
Teknologi Tinggi Eastlake, Wuhan, Hubei, China
Tel :( 0086) 027-87384275
Faks: (0086) 027-87800889 www.fn-test.com
9/9
Linearitas
Linearitas kit ini diuji dengan menguji sampel yang dibubuhi dengan
konsentrasi yang sesuai
Rasakan pengenceran serial mereka. Hasilnya ditunjukkan oleh
persentase dihitung
konsentrasi pada harapan.
Mencicipi
1: 2
1: 4
1: 8
1:16
Serum (n = 5)
89-105%
88-102%
90-100%
85-100%
EDTA Plasma (n = 5)
82-101%
86-100%
82-101%
93-100%
Heparin Plasma (n = 5) 86-99%
80-97%
90-99%
80-99%
Presisi
Intra-assay Precision (Precision in an assay): 3 sampel dengan rendah,
menengah dan tinggi
levelFeere diuji 20 kali pada satu piring, masing-masing.
Inter-assay Precision (Precision between assays): 3 sampel dengan
rendah, menengah dan tinggi
tingkatFitur diuji pada 3 lempeng yang berbeda, 8 ulangan di setiap
lempeng.
CV (%) = SD / meanX100
Intra-Assay: CV <8%
Inter-Assay: CV <10%
Stabilitas
Stabilitas kit ELISA ditentukan oleh tingkat kehilangan
aktivitas. Tingkat kehilangan kit ini kurang
dari 10% dalam tanggal kedaluwarsa di bawah kondisi penyimpanan
yang sesuai.
Standar (n = 5)
37 ° C selama 1 bulan
4 ° C selama 6 bulan
Rata-rata (%)
80
95-100
Untuk meminimalkan pengaruh ekstra pada kinerja, prosedur operasi
dan kondisi lab,
terutama suhu kamar, kelembaban udara, suhu inkubator harus
dikontrol secara ketat.
Sangat disarankan bahwa operator yang sama melakukan seluruh
pengujian dari awal sampai
tamat.