FICHA TECNOLÓGICA POR SISTEMA PRODUCTO
BIOTECNOLOGIA
1. PROTOCOLO PARA LA EXTRACCIÓN DE ADN DE INSECTOS*
2. PROBLEMA A RESOLVER: Existen en el mercado kits
para la extracción de ADN, sin embargo, son costosos (100
ml/156 dólares) y deben ser importados con la consecuente
pérdida de tiempo y esfuerzo. También existe numerosos
métodos de extracción de ADN desarrollados para
diferentes especies; sin embargo, la mayoría requieren una
alta inversión de tiempo, cantidad de tejido y reactivos; o
bien, producen bajo rendimiento de ADN. Además, cuando
se trabaja con un gran número de muestras, se requiere un
método rápido y eficiente de extracción que produzcan
ADN de alta calidad.
3. DESCRIPCIÓN DE LA TECNOLÓGIA: En el presente
protocolo el espécimen (insecto) se pulveriza en un mortero
con la ayuda de nitrógeno líquido y se coloca en 200 μL de la
solución de extracción (50 mM de Tris HCl, pH 8.0; 50 mM
de EDTA; 0.1 M de Mercaptoetanol y 3% de SDS) más 25
μL de proteinasa K (10 mg/mL) en tubos de 1.7 mL. La
mezcla se incuba a 65oC por 10 min. Posteriormente se
añade a la mezcla 100 μL de acetato de potasio 5 M, se
agita suavemente y se incuba en hielo por 10 min, luego se
centrifuga a 12000 rpm por 10 min a 4oC. La fase acuosa es
colectada y se añade un volumen de
fenol:cloroformo:alcohol isoamílico (25:24:1). La mezcla es
centrifugada y se colecta la fase acuosa. Después se añade
0.6 volúmenes de isopropanol frío y se incuba la mezcla por
30 min a -20oC para precipitar el ADN. El ADN se colecta por
centrifugación y el precipitado es lavado con etanol al 70%,
se seca y se diluye en 50 μL de TE (10 mM de Tris-HCl, pH
8.0 y 1 mM de EDTA). Para eliminar el RNA se añade 5 μL
de RNasa (10 mg/mL) y se incuba a 37oC por 30 min.
Después la mezcla es tratada con 10 μL de proteinasa K (10
mg/mL) y se incuba por 15 min a 50oC. Posteriormente se
agrega 400 μL de TE y se extrae la muestra con un volumen
de fenol:cloroformo:alcohol isoamílico (25:24:1). Se
recupera la fase acuosa y el ADN es precipitado con 0.1
volúmenes de acetato de sodio 3 M y dos volúmenes de
etanol frío, se incuba la muestra por 60 minutos a -20oC.
Después se centrifuga y el ADN se lava con etanol al 70%,
seca y diluye en 50 μL de TE, para luego almacenarse a -
20oC.
Sino se dispone de nitrógeno líquido para pulverizar el
insecto, éste debe por lo menos, estar almacenado a una
temperatura de -80oC y molerse inmediatamente en un
mortero previamente congelado a la misma temperatura.
4. USUARIOS Y MERCADO: Esta tecnología puede ser
aplicada en todo el país y laboratorios que cuenten con un
mínimo de equipo (morteros, centrífuga, baño maría y
termoblock.
A= Agrícola
Tecnología Validada
129
5. RECOMENDACIONES PARA SU USO: Los reactivos y
componentes utilizados en este protocolo, son de uso
común en laboratorio donde se practica alguna técnica de
la biología molecular, en caso contrario, pueden
conseguirse en cualquier casa comercial que venda
productos biotecnológicos.
6. COSTO: El costo estimado fluctúa entre $15 y
$20/muestra; sin embargo, puede variar, ya que los
productos que se utilizan son importados y están sujetos a
la cotización diaria del tipo de cambio (dólar).
7. RESULTADOS ESPERADOS: Este método de
extracción de ADN en insectos (Anastrepha ludens)
permite obtener de 1 a 4 μg de ADN de alta calidad y el
manejo de 15 a 20 muestras/día; además, los reactivos que
se emplean en el protocolo, son de uso común en los
laboratorios de biología molecular, de bajo costo
comparado con un kit comercial (hasta un 50 % menor).
8. IMPACTO POTENCIAL: Esta tecnología representa una
buena opción para disminuir costos en la extracción de
ADN en los laboratorios, permite manejar un buen número
de muestras por día y requiere de un mínimo de equipo e
infraestructura para su implementación.
9. AMBITO DE APLICACIÓN: Este protocolo puede ser
estandarizado en cualquier laboratorio de biotecnología de
México.
10. DISPONIBILIDAD: Este protocolo es válido en el
laboratorio de biotecnología de Río Bravo y su
disponibilidad es inmediata.
11.INFORMACIÓN ADICIONAL: Puede utilizarse
nitrógeno líquido para pulverizar las muestras; sin
embargo, cuando no se dispone de nitrógeno líquido es
practico congelar los especimenes (insectos) a -80oC,
cuando menos con 24 horas de anticipación y molerse
inmediatamente después de ser extraídos del congelador
en morteros previamente congelados a la misma
temperatura.
Corsini, G.; Manubens, A.; Lladser Lobos, S; Seelenfreund,
D., and Lobos, C. 1999. AFLP Análisis of fruit fly Ceratitis
capitata. Focus 21(3):72-73.
Para mayor información:
Dr. Víctor Pecina Quintero
Investigador de Biotecnología
Campo Experimental Río Bravo
Carretera Matamoros – Reynosa km 61
Apartado Postal # 172 C.P. 88900
Tel: 01(899) 934-10-45 y Fax: 934-32-35
Correo electrónico: pecina.victor@inifap.gob.mx
 FICHA TECNOLÓGICA POR SISTEMA PRODUCTO

BIOTECNOLOGIA
1. PROTOCOLO PARA LA EXTRACCIÓN DE ADN DE INSECTOS*

Método para extracción de ADN de Reducción de costos

insectos
50 % más económico

Kit comercial para

extracción de ADN

Laboratorio de Biotecnología
Tecnología validada INIFAP-CERIB

Ámbito de aplicación de la tecnología

Nacional

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