UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA)

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

Departamento Académico de QUÍMICA BÁSICA Y APLICADA

INFORME DE LABORATORIO
Nº 02

ASIGNATURA: QUÍMICA ANALÍTICA INSTRUMENTAL

PROFESOR: QUISPE JACOBO, FREDY ENRIQUE

INTEGRANTES: ATAUQUI GUIZADO, Celia

AYALA ROMERO, Niki Edinson
CASABONA ACEVEDO, Deníse Rosario
LOAYZA ÑAHUERO, Franklin
ROJAS PAREDES, Luis Eduardo

GRUPO: sábado 15:00 – 19:00

Lima, 25de agosto del 2018

 I. Introducción

La espectrofotometría es una técnica que mide la interacción de moléculas con la radiación

electromagnética. La luz que se encuentra en la luz visible y la luz ultravioleta de los espectros
electromagnéticos presenta una energía de 150-400 kJmol-1. La energía de la luz es usada para
promover electrones de un estado de excitación a otro. Un espectro es obtenido cuando la
absorción de luz es medida en función de una frecuencia o longitud. Moléculas con electrones
deslocalizados en sistemas aromáticos a menudo absorben la luz a 150-400 nm (ultravioleta) o en la
región visible de 400-800 nm.

La absorbancia de un soluto depende linealmente de la concentración y por consiguiente la

espectrofotometría de absorción es ideal para hacer mediciones cuantitativas. La longitud
de absorción y la fuerza de absorbancia de una molécula no sólo depende de la naturaleza
química, si no del ambiente molecular en donde se encuentre el cromóforo. Las mediciones
espectroscópicas son muy sensibles y se requieren pequeñas muestras de material para el análisis.
Ley de Lambert-Beer. La cantidad de radiación electromagnética absorbida por un analito se puede
relacionar cuantitativamente con la concentración de dichas sustancias en solución. La
transmitancia (T) se define como la fracción de radiación incidente trasmitida por la disolución. Si
la potencia radiante que incide sobre la disolución es Po y P la potencia radiante que sale, entonces:
Además, se observa que la potencia de la energía trasmitida disminuye geométricamente
(exponencialmente) con la concentración C y con la distancia b recorrida a través de la disolución.

II. Marco teórico

El fundamento de la espectrofotometría, se basa en la absorción de las radiaciones

electromagnéticas por parte de los grupos cromóforos que constituyen las moléculas químicas
disueltas en una solución ópticamente vacía.

Se hace un barrido desde 200nm a 400nm si son soluciones incoloras y de 400nm a 800nm si son
soluciones coloreadas con intervalos de 5nm. Se obtienen datos de absorbancia y del % de
transmitancia.

 ESPECTROS DE ABSORCIÓN:

En los métodos espectrofotométricos de análisis, es de gran utilidad saber qué longitud absorbe
con mayor intensidad la solución para fines de análisis cuantitativo.

Para lo cual se traza una curva espectral haciendo irradiar sobre la muestra diferentes longitudes de
onda y midiendo la variación de absorbancia respectiva. Se traza una gráfica de absorbancia vs
longitud de onda y se ubica el o los picos primarios y secundarios
III. Objetivos
1. Adquirir el conocimiento para poder cuantificar la muestra problema de aseptil
rojo 5%, haciendo uso del espectrofotómetro UV-Visible
2. Determinar la longitud de onda óptima a 565 nm.
3. Obtener los porcentajes de transmitancia y la absorbancia de la solución de la
muestra problema aseptil rojo
4. Determinar la zona de trabajo y la concentración óptima.

IV. Materiales y métodos

A) MATERIALES
1. MATERIAL Y EQUIPOS

B) M
É
T
O
D
O
S

1. P
r
e
paración de la muestra
A partir Aseptil rojo 5% se obtuvo 100 ug/ml de azosulfamida, a partir de esa concentración se
preparó varias soluciones de distintas concentraciones conocidas
(90,80,70,60,50,40,30,20,10,5,3,1,0.5,0.1,0.3 ug/ml).

2. Lectura en el espectrómetro Genesis 10S UV-Visible Thermo

I. Encendido y manejo del Espectrofotómetro Genesis 10 S UV-Visible Thermo

 1. Conectar el tomacorriente del
transformador a una fuente de electricidad.

2. Esperar 3 -5 minutos hasta que se

estabilice el equipo.

3. Encender el equipo presionando un

botón que se encuentra detrás del equipo.

4. Se observó las diferentes opciones de

funciones que realiza el equipo y para la
práctica de laboratorio se seleccionó la opción Modo de medición/Enter, luego se observó los
parámetros, Absorbancia y transmitancia, concentración estándar, etc.

5. Escoger la opción Trasmitancia/Enter/ Correr análisis.

6. Si se desea saber la absorbancia, clic en Esc/No almacenar ensayo/ Enter y escoger la opción con
el cursor.

II. Búsqueda de la mejor señal analítica

III. Lectura de las soluciones obtenidas a partir de Azosulfamida 5%

 Debido a que el analito AZOSULFAMIDA se encuentra disuelto en agua se debe usar el agua
como blanco.

V. Resultados

1.- Se determinó la longitud de onda (λ) analítica de la azosulfamida.

Se realizó la determinación de λ analítica mediante el programa VISIONlite Scan, para una muestra de
azosulfamida 0.001% (10 µg/ml). Parámetro: λ inicial: 400 nm, λ final: 600 nm, intervalo: 2 nm,
velocidad: fast, cuba de cuarzo.

Se observó la máxima absorción a 526 nm , λ analítica: 526 nm, por lo tanto, la absorbancia más alta
posible de la muestra de azosulfamida es igual a 0.257.

Imagen 1. Resultados del análisis espectrofotométrico de la muestra de

azosulfamida 10 µg/ml
2.- Se determinó la concentración óptima, mínima y máxima según Lambert-Beer

Se preparó soluciones de azosulfamida de diferentes concentraciones, en el espectrofotómetro (λ

analítica: 526 nm) se determinó los niveles de absorbancia (A), transmitancia (T), luego se calculó la

absortancia para cada solución tal como se muestra en la Tabla 1.

Tabla 1. Resultados del análisis espectrofotométrico de las soluciones de

azosulfamida a diferente concentración

№
[µg/ml] A %T ABSORTANCIA
SOLUCIÓN

1 100 2.810 0.156 99.844

2 90 2.463 0.344 99.656

3 80 2.324 0.475 99.525

4 70 1.024 9.431 90.569

5 60 1.969 1.074 98.926

6 50 1.617 2.416 97.584

7 40 1.137 7.273 92.727

8 30 1.807 15.600 84.400

9 20 0.090 98.032 1.968

10 10 0.083 96.081 3.919

 11 5 0.026 94.024 5.976

12 3 0.017 96.263 3.737

13 1 0.015 96.666 3.334

14 0.5 0.016 96.289 3.711

15 0.3 0.017 96.154 3.846

16 0.1 0.001 96.872 3.128

La gráfica de la curva de Ringbow se elaboró a partir de los valores de absortancia calculados y el

logaritmo (Log [C]) de la concentración de azosulfamida.

Tabla 2. Determinación de los valores de Log [C]

№
[µg/ml] [mg/ml] Log [C] %T ABSORTANCIA
SOLUCIÓN

1 100 100000 4 0.156 99.844

2 90 90000 4.9542 0.344 99.656

3 80 80000 4.9030 0.475 99.525

4 70 70000 4.8451 9.431 90.569

5 60 60000 4.7781 1.074 98.926

6 50 50000 4.6990 2.416 97.584

7 40 40000 4.6021 7.273 92.727

8 30 30000 4.4771 15.600 84.400

9 20 20000 4.3011 98.032 1.968

10 10 10000 4 96.081 3.919

11 5 5000 3.6990 94.024 5.976

12 3 3000 3.4771 96.263 3.737

13 1 1000 3 96.666 3.334

14 0.5 500 2.6990 96.289 3.711

15 0.3 300 2.4771 96.154 3.846

16 0.1 100 2 96.872 3.128

 120
110
100
90
80
Absortancia

70
60
50 Series1
40
30
20
10
0
0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0
Log [C]

Según la gráfica elaborada:

Concentración óptima: 12.5 µg/ml

C. mínima: 1.0 µg/ml

C. máxima: 20.0 µg/ml

VI. Discusión
 VII. Conclusiones

1. Se adquirió conocimientos para poder cuantificar la muestra problema de aseptil rojo

5%, haciendo uso del espectrofotómetro UV-Visible
2. Se determinó la longitud de onda óptima a 565 nm.
3. Se obtuvo los porcentajes de transmitancia y la absorbancia de la solución de la
muestra problema aseptil rojo.
4. Se determinó la zona de trabajo y la concentración óptima.

VIII. Referencias bibliográficas

1.- Walter, Reyes. Análisis químico e instrumental moderno. España. Editorial REVERTE; 2005.

2.- Guillermo Pérez. Espectrometría ultravioleta-visible.[Citado el 30 de agosto de 2018] Disponible

en web: http://www.espectrometria.com/espectrometra_ultravioleta-visible

3.- Murcia, N., Lundquist, E., Russo, S., y Peters, D., “A simple spectrophotometric method for the
determination of traces of mercury (II) and lead (II)”. Journal of Chemical Education, july1990,
volume 67, number 7, pp. 608‐610.

4.- Khan, H., Ahmed, M., Bhanger, M., “A rapidspectrophotometric method for determination of
trace level lead using 1,5‐diphenylthiocarbazone in aqueous micellar solutions”. AnalyticalSciences,
february2007, vol 23, pp. 507‐512.
 IX. Cuestionario

1. De acuerdo a l a estructura química del compuesto estudiado ubi que el o los

grupos cr omófor os. Señale las transiciones electrónicas respecti vas .

Grupos cromóf oros: N=N transición n π*

2. Calcule la energía y el número de ondas de la longitud de onda óptima

obtenida.

C 3x108 m/s
V= V = 530x10−9 m V = 5,66x1014 s−1


E = h .v E = (6,626x10−34 J. s)(5,66x1014 𝑠 −1 )
E = 37,50x10−20 J

1 1
Número de ondas = = = 2,85x10−6 m−1
 530x10−9 m

3. Qué problemas detectó en la construcción de la curva de Ringbow?

La dificultad que se encontró fue al momento de unir los puntos calculados (absortancia vs
logaritmo (Log [C]) de la concentración), ya que había puntos que no se podían unir por que
quedaban lejos de la gráfica de Ringbow, esto se debió a que hubo una mala lectura al
momento de realizar la absorbancia de las distintas concentraciones, como se muestra en la
gráfica siguiente.
 120
110
100
90
80
Absortancia
70
60
50 Series1
40
30
20
10
0
0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0
Log [C]

4.- ¿Existen inconvenientes con celdas de plástico para trabajar entre 300 y
400 nm? Represente gráficamente
Si existen problemas ya que a esa longitud de onda el espectrofotómetro
registra una absorbancia, esta absorbancia es de la celda de plástico mas no del
analito; lo contrario ocurre cuando se utiliza una celda de cuarzo

5.- ¿Indique las transiciones permitidas para azosulfamida?

 Se da una transición π π se da cuando el cromoforo al menos debe tener una
instauración, están presentes también los anillos aromáticos.