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Edgar Javier Grazt G.

Lorena Quiroga
Angie Lorena Fonseca

Taller 2 Inmunología

Preguntas teoricas

1. La técnica se basa en la propiedad de los linfocitos T humanos de unirse a los


eritrocitos de carnero formando rosetas E. Esta técnica no puede diferenciar
entre linfocitos Tc y Th debido a que se basa en el receptor CD2, el cual está
presente en ambos tipos de célula (Lomonte, 2009)

2. La citometría de flujo en principio crea microgotas de fluido a través de un


microtubo, la solución de este fluido se ajusta de modo que sea improbable que
haya más de una célula por microgota, si se quiere identificar un tipo de célula
en particular esta es marcada fluorescentemente, adyacente al tubo por el que
fluyen las gotas hay un láser y frente a este un detector. Cuando las células
marcadas fluorescentemente son expuestas al láser estas brillan, siendo este
brillo detectado y registrado si simplemente se quiere hacer un conteo. Si se
quiere separar estas células posteriormente hay unos electroimanes que cargan
diferencialmente las gotas según se haya detectado que estas están marcadas o
no, según su carga estas se dirigirán a dos caminos diferentes, terminando
separadas (Loken MR ,1990).(Ver anexos, figura 1).

3. Cuando una célula presentadora de antígeno ingiere un patógeno, sus proteínas


son degradadas y fragmentos de aproximadamente 20 aminoácidos de estas
son unidos al MHC-II. Cuando un linfocito T reconoce estos antígenos, estimula
al linfocito B mediante la liberación de citoquinas, finalmente los linfocitos B
producen anticuerpos específicos para este antígeno,(Wearsch and Cresswell,
n.d.), (Nesmiyanov, n.d.).

Preguntas prácticas

Inmunofluorescencia:

A. Describa los resultados obtenidos.


R. No fue posible observar linfocitos B por fluorescencia, en su lugar se presentó una
aglomeración alargada que contiene el fluorocromo, elemento que no se asocia a la
estructura esperada.
B. Discuta los resultados obtenidos: ¿Pudo observar linfocitos fluorescentes? ¿Por
qué si? o ¿Por qué no?

No pudimos observar linfocitos por medio de inmunofluorescencia, esto pudo


deberse a que no se tomaron correctamente las células de la interfaz después
de centrifugar, por lo tanto al realizar el procedimiento de unión, estos no se
unieron a los anti-IgMs marcados con fluoresceína. Fallas al momento de secar
la lámina y fijar las células pueden llevar a que no se una correctamente el
segundo anticuerpo, este segundo anticuerpo es el que está marcado con
fluoresceína, por lo tanto no se verán los linfocitos en el microscopio. Si hubo
errores en el aislamiento de las células, la membrana de estas pudo haberse
degradado y por lo tanto no habría unión con los anticuerpos.

Recuento/Viabilidad celular:

a. A partir de los resultados obtenidos calcule el índice de viabilidad de las células


observadas. Discuta sus resultados.

Encontramos dos células vivas y una muerta, para un total de 3 células,


por tanto el IVC es de 66,6% aunque dado el reducido tamaño de la muestra
este no es un dato extrapolable o confiable.

b. Calcule el número de células presentes en la suspensión de linfocitos obtenida


al inicio de la práctica.
Determinamos que la suspensión inicial contenía 7500 células/mL

Bibliografía

Lomonte, B. (2009). Tecnicas de Laboratorio en Inmunologia Clinica [Ebook] (3rd ed.).


Retrieved from
http://www.medic.ula.ve/idic/docs/clases/iahula/curso_2010/suplementario-tema16.pdf
Loken MR (1990). "Immunofluorescence Techniques in Flow Cytometry and Sorting"
(2nd ed.). Wiley: 341–53.n MR (1990). "Immunofluorescence Techniques in Flow
Cytometry and Sorting" (2nd ed.). Wiley: 341–53.

Nesmiyanov, P. Antigen Processing and Presentation | British Society for Immunology.


Retrieved from https://www.immunology.org/public-information/bitesized-
immunology/systems-and-processes/antigen-processing-and-presentation
Wearsch, P., & Cresswell, P. Poster : Antigen processing and presentation. Retrieved
from https://www.nature.com/nri/posters/antigenprocessing/index.html

Anexos
Figura 1: Ilustración metodología citometría de flujo.