Multazam Kamaludin

14513089

RADIASI ULTRAVIOLET SEBAGAI STRATEGI PENGOLAHAN AIR BALLAST:

INAKTIVASI FITOPLANKTON DIUKUR DENGAN ALIRAN CYTOMETRY

Studi ini meneliti dosis yang berbeda UV (mj / cm2) dan efek inkubasi gelap pada
kelangsungan hidup ganggang suecica Tetraselmis, untuk mensimulasikan pengolahan air ballast dan
transportasi berikutnya. Sampel UV diiradiasi dan dianalisis dengan sitometri dan metode kultur
standar. Dosis ≥400 mJ / cm2 diberikan inaktivasi setelah 1 hari yang diukur oleh semua metode
analisis, dan direkomendasikan untuk pengolahan air ballast jika penurunan segera diperlukan.
Iradiasi dengan dosis UV yang lebih rendah (100-200 mJ / cm2) memberi perbedaan besar inaktivasi
antara eksperimen dan metode analisis. Namun, inaktivasi meningkat dengan meningkatnya dosis dan
waktu inkubasi. Kami berpendapat bahwa UV dosis ≥100 mJ / cm2 dan ≤200 mJ / cm2 dapat
mencukupi jika air dirawat di intake dan kiri di tangki ballast gelap. Hasil variabel menunjukkan
tantangan memberikan rekomendasi ambigu pada durasi inkubasi gelap dibutuhkan untuk inaktivasi
ketika ganggang diperlakukan dengan dosis UV yang rendah.

Kapal menggunakan air sebagai pemberat untuk memastikan stabilitas dan trim selama
pelayaran, dan air ambient dipompa ke dalam tangki pemberat di lambung kapal. Hal ini secara
tradisional dibuang tanpa pengobatan apapun dan merupakan vektor global untuk invasion.
Amultitude air dari organisme seperti virus, bakteri, ganggang dan zooplankton dilakukan di seluruh
dunia di tangki ballast kapal. Beberapa organisme bertahan di tangki ballast dan dilepaskan ke
lingkungan baru. Spesies non pribumi beradaptasi dan membangun di lingkungan yang baru, mereka
mungkin berdampak pada asli spesies dan menyebabkan perubahan ekologi di laut. Hal ini penting
untuk meminimalkan dan mencegah penyebaran spesies dengan debit air pemberat untuk
menghambat ekosistem harmto potensial, ekonomi, atau kesehatan manusia.

Pada tahun 2004 Organisasi Maritim Internasional (IMO) didirikan standar untuk pengolahan
air ballast melalui Konvensi Internasional untuk Pengendalian dan Pengelolaan Kapal Ballast Water
dan Sedimen. Peraturan D-2 dari Konvensi menetapkan standar mengenai kategori dan konsentrasi
organisme di debit. Konvensi ini akan mulai berlaku 12 bulan setelah diratifikasi oleh 30 negara yang
mewakili 35% dari pedagangpengiriman tonase. Pada Agustus 2015 44 Serikat, yang mewakili
32,86% dari tonase dunia, telah meratifikasi Konvensi. Mendatang IMOregulations telah
menyebabkan pengembangan berbagai pengobatan ballastwater
sistem (BWTS) yang memfasilitasi disinfeksi air pemberat.
Semua BWTS telah disetujui oleh otoritas nasional sesuai dengan peraturan IMO dan / atau peraturan
badan nasional lainnya (mis AS Coast Guard (USCG)).

Menentukan kondisi UV iradiasi sel adalah tugas yang kompleks. Di sisi lain, murah, metode
cepat dan handal untuk menganalisis ballast air yang diperlukan untuk persetujuan dari teknologi
BWTS dan kepatuhan pengujian debit air ballast. Pengujian kepatuhan dapat dilakukan dalam dua
tangga; sebuah indikasi dan analisis rinci. Sebuah analisis indikasi adalah pengukuran relatif
sederhana dan cepat yang memberikan perkiraan kasar dari jumlah organisme layak dalam air ballast
di debit. Contoh metode analisis indikatif yang mis BallastCAM dan berbagai fluoresensi atau ATP
pendeteksian. Jika analisis indikasi menunjukkan kepatuhan Peraturan D-2, ada ada kebutuhan untuk
analisis rinci. Haruskah analisis indikatif menjadi non-compliant, bagaimanapun, analisis rinci harus
dilakukan untuk memberikan kuat dan langsung pengukuran menentukan konsentrasi organisme yang
layak di debit air ballast menurut Peraturan D-2. Kuantifikasi bakteri hidup secara tradisional
mengandalkan metode budidaya, yang memakan waktu dan dapat memberikan palsu negatif seperti
beberapa spesies yang uncultivable meskipun layak. Arus cytometry (FCM) telah diusulkan sebagai
Multazam Kamaludin
14513089

metode yang menjanjikan untuk analisis rinci. FCM memfasilitasi deteksi cepat, pencacahan dan
karakterisasi organisme dalam kombinasi dengan pewarna fluorescent, dan memungkinkan untuk
mempelajari populasi dan masyarakat secara tidak langsung.

Studi saat ini menggunakan protokol FCM untuk menguraikan UV yang berbeda dosis dan
efek inkubasi gelap pada inaktivasi ganggang T. suecica, untuk mensimulasikan pengolahan air
ballast dan transportasi berikutnya. tujuan khusus kami adalah untuk:

1. Tentukan dosis minimum UV yang secara permanen nonaktif ganggang.

2. Menghitung efek dari dosis UV yang berbeda pada T. suecica.
3. Perkirakan waktu inkubasi gelap diperlukan untuk menonaktifkan secara permanen ganggang
diperlakukan dengan UV dosis lebih rendah dari minimum permanen inaktivasi dosis.
4. Memberikan rekomendasi untuk pengelolaan air ballast.

Iradiasi dilakukan menggunakan sinar collimated lampu UV MP (800W). Untuk setiap

percobaan tiga sampel dari 15 ml diencerkan budaya T. Suecica diiradiasi dengan dosis UV yang
sama dalam cawan petri whilemixed dengan 1 × 0,4 cm pengaduk magnet bar di 200 rpm pada suhu
kamar (RT). Intensitas (mW / cm2) dari lampu UV tetap dan waktu paparan yang digunakan adalah
155, 233, 311, 622 dan 1244 karena UV dosis 100, 150, 200, 400 dan 800 mJ / cm2, masing-masing.
Sampel diiradiasi dipindahkan ke steril 50 ml tabung polypropylene, jadi sampel kontrol, termasuk 2
×15ml sel non-iradiasi dan 10 ml sel-sel mati. Kematian
sel dibunuh oleh fixationwith formaldehida pada 5% konsentrasi akhir. Semua tabung yang dibungkus
aluminium foil dan diinkubasi dalam gelap dengan kelopak yang menempel pada 15 ° C.

Pertama, pra-studi lebih dari 5 hari telah dilakukan untuk mengamati inaktivasi yang Efek
dari dosis UV yang berbeda dan inkubasi gelap, dan iklim efek ini diinterpretasi dengan FCM. Hal ini
diikuti oleh dua percobaan selesai, dilambangkan sebagai exp-I dan exp-II, dan gambaran dari set-up
untuk percobaan ini diberikan pada.

Untuk menentukan jumlah sel dikultur, plate count analisis dilakukan 1 hari setelah perawatan
UV. Juga di hari 1, nomor yang paling mungkin analisis dilakukan. Itu Sampel diencerkan dalam
medium pertumbuhan (24 PPT air laut buatan menambahkan 0,12% Substral) di seri 10 kali lipat
hingga 10-4 pengenceran untuk total volume 1 ml pr. baik di 48 piring dengan baik dan diinkubasi
pada 15 ° C, 14:10 light: siklus gelap dan intensitas 90 cahaya lx. Pertumbuhan positif ditentukan
dengan perubahan warna menjadi hijau sebagai terdeteksi oleh mata, dan mencetak gol melawan meja
MPN untuk tiga replikasi desain dari bakteri Analytical Pedoman FDA, yang memberikan hasil kasar
di interval.

Ketika jumlah hidup / sinyal sel yang rusak di FCM dot plot adalah sekitar 10% dari jumlah
total sel, cek pertumbuhan kembali dilakukan untuk verifikasi. Untuk exp-I prosedur ini dilakukan
keluar pada hari 22 untuk sampel diobati dengan 100-200 mj / cm2 dan pada hari 2 untuk sampel
diobati dengan 400 dan 800 mJ / cm2, dan untuk exp-II di hari 20 untuk sampel diobati dengan 100-
200 mj / cm2 dan pada hari 3 untuk sampel diperlakukan dengan 400 dan 800 mJ / cm2. 1 ml sampel
ditambahkan 9 media ml pertumbuhan 50 ml labu Erlenmeyer. Tidak ada perubahan yang terlihat
warna hijau menunjukkan bahwa tidak ada sel-sel reproduksi di mencicipi. Termos, nampan dan
piring diinkubasi pada 15 ° C di gelap selama 3 minggu.

Analisis FCM dalam pra-studi menunjukkan bahwa inaktivasi meningkat dengan dosis UV
Multazam Kamaludin
14513089

yang lebih tinggi dan selama masa inkubasi gelap. Berdasarkan hasil tersebut, dua experiments were
lengkap dilakukan keluar, dan hasil ini disajikan di bawah ini. iradiasi UV dengan dosis ≥400 mJ /
cm2 tidak aktif ganggang permanen seperti yang ditunjukkan oleh semua analysismethods.
FCManalyses (Gbr. 2b, d) Ara. 2. Grafik baris menunjukkan% gated sinyal (= hidup dan sel yang
rusak) dari jumlah total sel (= hidup, rusak dan sel-sel mati) fromexp-I (a, b) dan exp-II (c, d).
Kesalahan bar menunjukkan 1 standar deviasi dari 3 ulangan. 272 r.o. Olsen et al. / Marine Pollution
Bulletin 103 (2016) 270-275 sampel diiradiasi dengan 400 dan 800 mJ / cm2 ditampilkan b4% dan
≤0.1% hidup / rusak sinyal sel setelah 1 hari, masing-masing. Angka dari sel-sel hidup dan rusak tetap
pada tingkat ini orwere jauh berkurang selama masa inkubasi. plate count dan MPN tidak
menunjukkan Pertumbuhan di UV dosis ≥400 mJ / cm2 dan juga tidak pertumbuhan kembali cek
dilakukan di hari 2 dan 3 untuk exp-I dan exp-II, masing-masing.

Seperti yang diamati dalam pra-studi, FCManalysis UV iradiasi sampel menunjukkan

hubungan antara inaktivasi dan UV dosis. Ini diperiksa pada hari ke 1, ketika efek langsung dari
perawatan UV adalah diamati, dan lagi jumlah hidup / sel yang rusak menurun dengan dosis UV
yang lebih tinggi. Tabel 1 menunjukkan perbandingan hasil dari FCM, MPN dan piring count dari
exp-I dan -II. Sampel kontrol adalah semua dalam kisaran yang sama, namun hasil MPN
menunjukkan N11,000 sel ml-1, yang menunjukkan bahwa sampel harus telah diencerkan lebih lanjut.
Hasil untuk UV diiradiasi sampel, bervariasi ketika menggunakan analisis yang berbeda metode.
Dalam exp-I ada kesepakatan yang baik antara hidup / rusak jumlah sel yang diperoleh FCM dan
analisis MPN, tetapi angka lempeng analisis mengakibatkan angka jauh lebih rendah di hari 1. Untuk
exp-II, hasil yang sebanding diperoleh dengan menggunakan plate count dan analisis MPN sedangkan
hasil menggunakan FCM memberi cukup hidup yang lebih tinggi / rusak jumlah sel.

Variasi yang cukup besar yang diamati antara hasil dari dua percobaan ketika melihat tingkat
rinci. Pertama, persentase hidup / sel yang rusak dalam kontrol bernoda bervariasi pada hari 1,
menjadi 92% dan 54% di exp-I dan exp-II, masing-masing. Kedua, untuk sampel UV irradiatedwith
≤200 mJ / cm2, tingkat inaktivasi bervariasi antara percobaan dan jumlah FCMlive / sel yang rusak
berfluktuasi. Ketiga, beberapa ulangan menunjukkan standar deviasi yang besar; yang paling jelas
dalam exp-I. Keempat, di hari-hari pertama setelah radiasi UV, diamati lebih banyak sel di sampel
diperlakukan dibandingkan dengan kontrol.

Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengevaluasi inaktivasi oleh UV yang berbeda dosis
dan inkubasi gelap pada alga T. suecica, untuk memberikan rekomendasi untuk pengelolaan air ballast
mengenai pengobatan dan transportasi. UV dosis 400 dan 800 mJ / cm2 diberikan sel T. suecica
unculturable dan tanpa aktivitas 1 hari setelah iradiasi sedangkan dosis ≤200 mJ / cm2 tidak selalu
menginaktivasi sel. Hal ini menunjukkan bahwa dosis minimal UV yang permanen menginaktivasi
alga ini specie adalah suatu tempat antara 200 dan 400 mJ / cm2 yang mirip dengan
dosis ditemukan mematikan setelah UV-C memancarkan cyanobacteria Microcystis aeruginosa.
Sampel diiradiasi dengan UV dosis 100, 150 dan 200 mJ / cm2 terkandung culturable dan esterase T.
aktif sel suecica 1 hari setelah iradiasi, namun inaktivasi meningkat dengan dosis UV yang lebih
tinggi. Hasil kami di sejalan dengan penelitian sebelumnya dari air tawar ganggang hijau Chlorella
ellipsoidea, Chlorella vulgaris, dan Scenedesmus quadricauda, dan cyanobacteria M. aeruginosa yang
menunjukkan sensitivitas yang terbatas terhadap radiasi UV-C
dengan dosis ≤200 mJ / cm2.

Membandingkan metode analisis yang berbeda pada hari 1 untuk sampel UV diiradiasi
dengan dosis ≤200 mJ / cm2 mengungkapkan bahwa jumlah FCM sel terjaga keamanannya lebih
Multazam Kamaludin
14513089

tinggi dari jumlah cfu terdeteksi oleh plate count. perbedaan tersebut antara plate count dan hasil
FCM juga telah diamati dalam penelitian lain dari UV iradiasi bakteri dan alga. UV kerusakan DNA
yang diinduksi dapat memblokir transkripsi dan replikasi, menghambat pertumbuhan dan reproduksi.
Sel-sel DNA yang rusak tidak terdeteksi sebagai hidup dengan tes pertumbuhan, meskipun mereka
dapat mengekspresikan aktivitas menjelaskan hasil bertentangan dari FCM dan analisis plate count.

Plate count dan analisis MPN didasarkan pada kapasitas reproduksi dan satu bisa berharap tes
pertumbuhan ini memberikan hasil yang sebanding. Namun, hasil yang diperoleh oleh MPN yang
mirip dengan piring menghitung hasil exp-II dan FCM di exp-I. Ini menggambarkan tantangan
mendapatkan hasil direproduksi ketika menganalisis UV diiradiasi organisme dengan metode yang
menganalisis karakteristik seluler yang berbeda. Lebih lanjut, tes pertumbuhan dapat
memperkenalkan kesalahan sebagai mayoritas mikroba yang tidak berkultur fluorometry tekad akan
menjadi analisis yang lebih obyektif Metode dan berpotensi memberikan hasil yang sedikit berbeda.
Namun, metode MPN divalidasi oleh peneliti lain dan dengan mikroskop.

Hasil FC menunjukkan bahwa inaktivasi meningkat dengan waktu inkubasi gelap.

Fitoplankton adalah organisme fotosintetik membutuhkan cahaya sebagai sumber energi dan inkubasi
gelap secara alami akan mempengaruhi kelangsungan hidup mereka dari waktu ke waktu, terutama
jika sel-sel terus dengan aktivitas tidak berubah menyebabkan mereka kehabisan energi. Selain itu,
inkubasi di kegelapan akan membatasi photoreactivation; mekanisme perbaikan yang menghilangkan
UV diinduksi lesi DNA dan membalikkan kerusakan dengan menggunakan energi cahaya,
meninggalkan sel unrepaired dan sekarat. Penelitian lain melaporkan terbatas atau tidak
photoreactivation di UV iradiasi Escherichia coli selama inkubasi di kegelapan. Sesuai persetujuan
dengan penelitian lain sampel kontrol yang terkandung sel direproduksi bahkan setelah 3 minggu
inkubasi gelap. Kemampuan T. suecica untuk bertahan hidup dalam kegelapan dari waktu ke waktu
menyiratkan tidak melebih-lebihkan efek dari perawatan UV dan membuat yang sesuai organisme
indikator untuk pemantauan air pemberat.

Iradiasi UV sebagai teknologi pengobatan telah dikritik karena ketidakpastian tentang

inaktivasi di debit tetapi lebih lingkungan friendly dari desinfeksi kimia dan tidak menciptakan
produk samping yang berbahaya. Selain itu, radiasi UV merupakan sedikit
risiko untuk operator dan kurang pelatihan diperlukan untuk menjalankan sistem.