Universidad Católica de Santa María

“IN SCIENTIA ET FIDE ERITFORTITUDO NOSTRA”

Facultad de Medicina Humana

PROYECTO DE INVESTIGACIÓN

“Cáncer Gástrico en Arequipa: Caracterización Epigenética e Infección por el Virus

Epstein Barr y su Correlación Clínico - Patológica”

Autores:
 Oscar Carnero Fuentes
 Mauricio Postigo Mac Dowall
 Carlos Arenas Chavez
 Jordi Camara Cabello
 Carla Moscoso Zeballos
 Nataly Butron Bustamante.
 Luis Puma Villanueva.
 Juan de Dios Rodriguez Velez
I. RESUMEN:

El Cáncer Gástrico es uno de los tipos de cáncer más comunes y la principal causa de muerte
relacionada al cáncer en el Perú, no conociéndose antecedentes previos de estudios epidemiológicos,
clínicos y patológicos sobre este problema en nuestra región. El avance de la ciencia ha originado la
clasificación molecular del cáncer gástrico y el descubrimiento de alteraciones epigenéticas en éste, así
como su contribución a la patogénesis de esta fatal enfermedad. Entre estos últimos, la metilación
del DNA desregulada esta particularmente asociada a la aparición y el pronóstico del cáncer gástrico.
Adicionalmente, según los estudios en países desarrolados, un pequeño grupo de carcinomas gástricos
están relacionados a la infección por el virus Epstein Barr, lo cual no ha sido analizado aún en nuestra
región, y, ya que en países latinoamericanos y asiáticos la infección por el virus Epstein Barr tiene
manifestaciones neoplásicas diferentes a los países del hemisferio norte, esperamos ampliar la relación
entre este virus y nuestros casos de cáncer gástrico.

Palabras Clave: Cáncer Gástrico, Patología, Virus Epstein Barr, Epigenética, Metilación.

II. JUSTIFICACIÓN:

Originalidad: Este proyecto busca describir y establecer la correlación clínico-patológica y el pronóstico

asociados al perfil epigenético y la infección por el VEB en el cáncer gástrico en nuestra localidad, hecho
que no tiene precedentes según nuestra búsqueda bibliográfica local.
Relevancia científica: La mortalidad en cáncer constituye uno de los aspectos más importantes para la
evaluación de la efectividad de las intervenciones orientadas al diagnóstico temprano implementadas por
programas/estrategias de prevención y control de cáncer.
En nuestro país, según el último registro y análisis de situación de cáncer publicado por MINSA en el
2013, se publicó que las neoplasias malignas con mayor número de defunciones fueron: estómago
(15.8%), hígado y vías biliares (10.9%) y pulmón, tráquea y bronquios (9.9%). Se observó que en el sexo
masculino, las neoplasias con mayor número de defunciones fueron las de estómago (17.6%), próstata
(15.7%) y pulmón, tráquea y bronquios (10.8%); mientras que en el sexo femenino, los cánceres de
mayor mortalidad fueron los de estómago (13.8%), hígado y vías biliares (11.9%) y cuello uterino
(10.7%). En la práctica diaria observamos un incremento en el diagnóstico de esta enfermedad,
lamentablemente la mayoría de casos en estadio avanzados y cada más en pacientes jóvenes, con pocas
alternativas terapéuticas para poder tratarlos. Por cual creemos que es fundamental efectuar este tipo de
estudio genético en poblaciones como la nuestra, para poder ir estableciendo perfiles genómicos,
epigenómicos y de ahí diseñar estrategias terapéuticos y de diagnóstico precoz.
Relevancia social: tanto el tratamiento como el pronóstico del paciente dependen del estadío de la
patología, que puede incluir desde una endoscopia hasta un tratamiento quirúrgico con quimioterapia 3.
Mientras que el pronóstico también está vinculado a la edad del paciente, el grado de invasión tumoral y
las metástasis ganglionares4, entonces si nuestra hipótesis basada en la epigenética es probada será un
recurso más para ampliar la terapéutica, redefinir el pronóstico y sentar las bases para una oncología cada
vez más personalizada.
Relevancia contemporánea: Dado que en los últimos años la epigenética ha dado nuevas luces a la
etiología y progresión de las neoplasias, nuestro estudio sigue esta línea con el fin de dar una posible
diana terapéutica.
Factibilidad: para el presente proyecto contamos con acceso a historias clínicas y muestras parafinadas de
pacientes diagnosticados con cáncer gástrico en el servicio de Oncología del HNCASE, en el período
2010-2015. Asimismo, contamos con acceso a un laboratorio de biología molecular ubicado en las
instalaciones de la Universidad Católica de Santa María.
Interés personal: como profesionales de la salud dedicados a la investigación oncológica buscamos
adquirir nuevos conocimientos que por un lado, permitan brindar un servicio de mayor calidad a los
 pacientes y por otro lado, complementen la escasa investigación que se realiza en el país sobre estos
temas.
Concordancia con política investigativa: nuestra investigación se encuentra dentro del grupo III en las
prioridades de investigación, donde se incluyen aquellas relacionadas al desarrollo de soluciones que
ayuden a prevenir o mitigar problemas de salud. Entonces, los resultados de la investigación repercutirán
positivamente sobre la prevención de la neoplasia y su elevada tasa de mortalidad.5

III. HIPÓTESIS:

H1: Existe relación entre las características clínico-patológicas y pronósticas en los pacientes con cáncer
gástrico y el perfil epigenético del genoma tumoral e infección por el virus Epstein Barr.
H0: No existe relación entre las características clínico-patológicas y pronósticas en los pacientes con
cáncer gástrico y el perfil epigenético del genoma tumoral e infección por el virus Epstein Barr.

IV. OBJETIVOS:

A. GENERAL
Describir las características clínico-patológicas y pronósticas de los casos de cáncer gástrico, y
analizar su relación con el perfil epigenético y la infección por el VEB de las células tumorales
de los pacientes diagnosticados y tratados por carcinoma gástrico en la red asistencial Arequipa
de ESSALUD entre los años 2010 y 2015.

B. ESPECÍFICOS
1. Describir las características clínicas y patológicas de los pacientes con carcinoma gástrico
diagnosticados en ESSALUD Arequipa del 2010 al 2015 y su relación con el pronóstico.
2. Describir las alteraciones epigenéticas en el genoma tumoral.
3. Evaluar la relación entre las características clínicas, patológicas y pronosticas con el estado de
metilación de los genes involucrados en los pacientes con carcinoma gástrico diagnosticados en
ESSALUD Arequipa del 2010 al 2015.
4. Evaluar la relación entre las características clínicas, patológicas y pronósticas con la Infección
por el virus Epstein Barr en las células del carcinoma gástrico diagnosticados en ESSALUD-
Arequipa del 2010 al 2015.
5. Analizar la relación entre el estado de metilación de los genes involucrados en el cáncer gástrico
y la infección por el VEB en los pacientes con carcinoma gástrico.
Formular como una recomendacion

V. METODOLOGÍA:

1. Pacientes: Se realizará la búsqueda de historias clínicas de 150 pacientes diagnosticados y tratados por
carcinoma gástrico en la red asistencial Arequipa (Hospital Nacional Carlos Alberto Seguín
Escobedo) entre los años 2010 y 2015.
2. Estudio histopatológico: Las muestras estudiadas han sido fijadas en formalina bufferada, y
procesadas con la técnica usual para el tratamiento tisular (deshidratación progresiva con alcohol,
xileno y posterior parafinización). Posteriormente se realizan secciones de los bloques de parafina con
un grosor de 3m para finalmente teñirlas con la técnica usual de hematoxilina/eosina.
3. Hibridización in situ para el RNA codificado por el virus Epstein Barr (EBER-CISH): Marca
Histosonda (Cenbimo, Lugo-España). Reconstitución de la sonda, desparafinización, inhibición de
uniones inespecíficas de DNA (opcional), desproteinización con proteinasa K, incubación con la
sonda a 620C por 30-60 minutos, lavado de la sonda con PBS y revelado de la sonda con Ac anti-
 digoxina por 30 mins a temperatura ambiente, lavado con PBS, incubación con Ac anti-
ratón/peroxidasa por 20-30 mins a temperatura ambiente, lavado con PBS y finalmente apliación de
diaminobenzidina y contraste con hematoxilina.
4. Molecular: Desparafinación y extracción de ADN de las muestras patológicas. Conversión del DNA a
DNA bisulfito. qPCR específica para metilación.
5. Recolección de datos.
6. Procesamiento de datos.
7. Análisis e interpretación de resultados.

VI. IMPACTO DE LOS RESULTADOS:

Al realizar este tipo de investigación vamos a poder definir y establecer una clasificación y un perfil
epigenómico en pacientes nuestros con diagnóstico de cáncer gástrico, esto a su vez nos permitirá
entender mejor la fisiopatogenia y el proceso de carcinogénesis de esta enfermedad, establecer los
eventos y alteraciones genéticas que ocurren en nuestra población en cada uno de los estadios clínico –
patológicos. Además nos permitirá conocer la real magnitud en la etiología por parte del VEB, siendo este
dato desconocido en razas como la nuestra.
Todo tendrá a futuro un impacto más que importante en la investigación de futuras dianas terapéuticas
moleculares y también poder diseñar estrategias de diagnóstico precoz a nivel molecular.
1. 1 Perfil epigenómico
1. 2 Perfil clínico patológico regional
1. 3 Estado de infección por VEB en las células tumorales.
1. 4 Futuras dianas terapéuticas y preventivas.

VII. ASPECTOS ÉTICOS :

El protocolo de investigación sera sometido a evaluación del comité institucional de ética e

investigación de la universidad Católica de Santa María y el comité de ética del Hospital
Nacional Carlos Alberto Seguin Escobedo para su evaluación ética el equipo se compromete a
cumplir con todas las observaciones de ambos comités.
El protocolo de investigación cumple con asegurar la confidencialidad de los datos genéticos
obtenidos de los pacientes con diagnostico de Cáncer Gástrico que sean objetos de estudio .
El equipo del proyecto de investigación se compromete al uso ético de las muestras obtenidas las
cuales serán utilizadas solo para los fines y objetivos específicos del presente estudio .
Las muestras de tejido embebido en Parafina no serán utilizadas para otros estudios secundarios
no relacionados a la investigación .
Las muestras de tejidos serán codificadas de tal manera que no puedan ser vinculadas y/o asociadas
a la identidad del paciente de estudio

Conflictos de Intereses :

El Equipo de Investigación declara que no existen conflictos de intereses entre sus miembros y los
equipos e insumos incluidos en este estudio.

VIII. CRONOGRAMA:

AGOSTO SETIEMBRE OCTUBRE NOVIEMBRE DICIEMBRE

ACTIVIDADES JULIO 2018 ENERO 2019
2018 2018 2018 2018 2018
 Elección del
X
tema

Búsqueda de
X
antecedentes

Diseño del
X
proyecto

Aprobación del
X
proyecto

Ejecución del
proyecto y
X X
Recolección de
datos

Procesamiento
X
de datos

Análisis e X
interpretación de
resultados

Presentación del X
paper final

IX. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Ministerio de Salud. Dirección general de epidemiología. Análisis de la situación del cáncer en Perú.
Lima: Ministerio de Salud; 2013. Disponible en: http://www.dge.gob.pe/portal/docs/asis_cancer.pdf.
2. Instituto Nacional de Enfermedades Neoplásicas. Dirección Ejecutiva de Promoción de la Salud,
Prevención y Control Nacional del Cáncer. Programa nacional de Prevención de cáncer gástrico y de
colon. Lima: INEN. Disponible en:
http://www.inen.sld.pe/portal/documentos/pdf/educacion/091115_CANCER%20GASTRICO%20-
%20JEMH.pdf.
3. Takahashi T, Saikawa Y, Kitagawa Y. Gastric Cancer: Current Status of Diagnosis and Treatment.
Cancers [Revista on-line] 2013 [Consultado 8 julio 2018]; 5: 48-53. Disponible en:
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3730304/pdf/cancers-05-00048.pdf
4. Park J, Ryu W, Kim J, Park S, Kim S, Kim C, Mok Y. Prognostic Factors for A dvanced Gastric
Cancer: Stagestratified. Cancer Reast Treat [Revista on-line] 2006 [Consultado 8 julio 2018]; 38(1):
13-18. Disponible en:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2741652/pdf/crt-38-13.pdf
5. Instituto Nacional de Salud. Oficina General de Investigación y Transferencia Tecnológica.
Prioridades Nacionales de Investigación en Salud 2015 – 2021. Lima: Instituto Nacional de Salud.
Disponible en:
 http://www.ins.gob.pe/repositorioaps/0/2/jer/mater_prior/Resumen%20Ejecutivo%20Proceso%20de%
20Prioridades%20de%20Investigacion%2011_05_15%20v4R.pdf.
6. Gulley M. Genomic assays for Epstein–Barr virus-positive gastric adenocarcinoma. Experimental &
Molecular Medicine 47, 2015.
7. Yiping Qu, Siwen Dang, Peng Hou. Gene methylation in gastric cáncer. Clinica Chimica Acta 424:
53–65, 2013.
8. Sanjeevaiah A, Cheedella N, Hester C, and Porembka MR. Gastric Cancer: Recent Molecular
Classification Advances, Racial Disparity, and Management Implications. J Onc Pract 14:4; 217-225,
2018.
9. Sharma S,.Kelly TK and Jones PA. Epigenetics in cáncer. Carcinogenesis 31: 1; 27–36, 2010.
10. .