Anexos Medio Mineral 1

Biodegradación de crudo de petróleo en terrarios.
Escalante
Guzmán, Rocío Miluska.
8. ANEXOS
8.1 COMPOSICION DE MEDIOS DE CULTIVO
CALDO ACETATO MINERAL
Fosfato ácido di sódico dodecahidratado. 2.25 g

Fosfato diácido monopotásico 0.345 g
Sulfato de Magnesio heptahidratado 0.05 g
Cloruro de Amonio 0.25 g
Acetato de Sodio 0.000125 g
Bicloruro de Calcio dihidratado 0.00025 g
Solución de elementos traza 0.75 mL
Carbonato de Sodio al 0.05% 0.11 mL
Agua destilada 250 mL
pH final 7.0
Esterilización a 121 ºC por 15 min.
MEDIO AUXILIAR ( AUX MEDIUM)
Sulfato amoníaco 2g
Base 82.8 mg
Aminoácidos. 250 mg
Vitaminas y sustancias nutritivas 35.9 g
Tampón fosfato 0.04 M pH= 7.1 1000 mL
Agar 1.5 g
pH final 7.0-7.2
Elaboración y diseño en formato PDF, por la Oficina General del Sistema de Bibliotecas y
Biblioteca Central UNMSM
Biodegradación de crudo de petróleo en terrarios. Escalante
CETRIMIDE AGAR
Peptona de gelatina 20 g
Cloruro de Magnesio 1.4 g
Sulfato potásico 10 g
N-cetil-N,N,N,-trimetilamoniobromuro(Cetrimide) 0.3 g
Agar-agar 13 g
Glicerina 10 mL
Petróleo al 1 %
AGAR KING-B
Peptona de carne 4g
Glicerol 2g
Fosfato diácido de Potasio 0.3 g
Sulfato de Magnesio 0.3 g
Agar 3g
pH final 7.0

MEDIO MINERAL
Cloruro de Sodio 24 g
Cloruro de Potasio 0,7 g
Fosfato diácido de Potasio 2,0 g
Sulfato de Magnesio heptahidratado 1,0 g
Fosfato ácido di sódico 3,0 g
Nitrato de Amonio 1,0 g
Agua destilada 1000
Petróleo crudo mL
pH final 10 mL
7.0
Esterilización a 121ºC por 15 minutos.
MEDIO MÍNIMO DE GOLDMAN
Fosfato ácido di potásico 18 g

Fosfato diácido de Potasio 6g
Sulfato de Magnesio 0.02 g
Sulfato diamónico 4g
Etanol 20 mL
Agua destilada. 1000 mL
pH final 7.0
Esterilización a 121ºC por 15 minutos.
Extracto de levaduras al 3%.
MEDIO PALLERONI
Fosfato ácido di sódico 9.37 g

Fosfato diácido de Potasio 8.976 g
Cloruro de Sodio 1.7 g
Cloruro de Amonio. 0.2 g
Sulfato de Magnesio heptahidratado 0.1 g
Citrato amónico férrico 0.01 g
Cloruro de Calcio 0.001 g
pH final 6.8
Esterilización a 121 ºC por 15 min., excepto el Citrato amónico férrico y Cloruro de Calcio el cual se
esteriliza por filtración y se adiciona en condiciones estériles a partir de una solución concentrada.
8.2 CARACTERÍSTICAS DEL DESTILADO DE CRUDO DE PETRÓLEO A 200 ºC
CUADRO Nº 01
Nº Tiempo Componentes Peso Fórmula %

de molecular
retención (PM)
(TR)
1 1.33 n-pentano 76 C5H12 0.49
2 1.55 n-hexano 86 C6H14 0.77
3 2.07 n-heptano 100 C7H16 0.57
4 2.69 2 metil pentano 72 C6H14 0.64
5 3.17 3 metil hexano 100 C7H14 1.82
6 3.87 1,1,2trimetil 126 C9H28 2.18
7 4.28 ciclohexano 84 C6H12 2.14
8 4.43 1-hexeno 86 C7H16 2.05
9 5.09 2 metil hexano 114 C8H18 7.58
10 7.74 2 etil hexano 114 C11H24 9.52
11 8.28 2 metil decano 156 C12H26 0.38
12 10.76 4 metil decano 128 C9H20 13.17
13 15.83 n-nonano 170 C12H26 5.95
14 16.86 2 metil undecano 142 C10H22 9.39
15 17.79 3,5 dimetil octano 170 C12H26 2.55
16 19.64 2 metil undecano 170 C12H26 8.56
17 22.34 dodecano 184 C13H28 7.86
18 24.88 n-tridecano 198 C14H30 5.09
19 24.88 n-tetradecano 198 C14H30 3.48
20 25.90 tetradecano 198 C14H30 3.90
21 27.30 2 metil tridecano 212 C15H32 3.93
22 29.60 n-pentadecano 212 C15H32 1.37
23 31.80 pentadecano 226 C16H34 1.22
24 33.91 n-hexadecano 240 C17H36 0.96
25 35.94 n-heptadecano 254 C18H38 0.85
26 37.87 n-octadecano 254 C18H38 0.77
27 39.73 octadecano 282 C20H42 0.71
28 41.51 n-eicosano 296 C21H44 0.55
29 43.23 n-heneicosano 310 C22H46 0.43
30 44.89 n-dodocosano 352 C25H52 0.37
31 46.47 n-pentacosano 394 C28H58 0.20
32 48.08 n-octacosano 408 C29H60 0.20
33 49.97 n-nonacosano 422 C30H62 0.20
34 52.22 n-triacontano 450 C32H66 0.10
n-dotriacontano
INTERPRETACIÓN:
Saturados aciclicos 95.77% (37.38% parafínico)

Saturados cíclico 2.18
Insaturados-olefínico 2.05
Aromáticos 0.00
100.00
PROPIEDADES FISICOQUÍMICAS
GRAVEDAD API A 60º F 19.0
DESTILACIÓN %DESTILADO
Hasta 200 ºC 15
Residuo pesado 85
CONDICIONES CROMATÓGRAFO DE GASES: GC/MS
Columna: Medianamente polar SUPELCO 608

T. Horno: 80 ºC (8,5’); 45 ºC/min hasta 150 ºC (1’) 8 ºC/min hasta 280 ºC (12’)
Injector:. 80 ºC (0,2’); 50 ºC/min hasta 100 ºC (5’); 50 ºC/min hasta 300 ºC hasta el final de
Vol.inj: corrida.
Split: 1,5 µl
Gas arrastre: [50:1]
Helio 20.8psi (1,73 mL/min)
NOTAS:
TR: Tiempo de retención, secuencia en que se separan los componentes en el cromatograma.
PM: Peso molecular
Gráfico Nº 01:Tiempo de retención en la columna y porcentaje de cada componente del

destilado de crudo.
Gráfico Nº 01: Tiempo de retención en la columna y porcentaje de cada componente del

destilado de crudo.
Grafico N° 01:
Tiempo de retención en la columna y porcentaje de cada componente del destilado de crudo.
8.3 CARACTERISTICAS DEL SUELO DE CULTIVO.
CUADRO Nº 02
Conductivida Análisis Mecánico pH Carbonat Materia Fósforo Óxido Cationes Cambiables

d (C.E) o de Orgánica P dipotásic
Calcio (M.O) o K2O
CaCO3
Ds/m Arena Limo Arcill Textura P.S % % ppm kg/ha Cationes Ca++ Mg++ K+ Na
P.S* % % a% intercambiabl
es (CIC)
Cmol (+)/kg
1.03 69.45 22.3 8.28 Franco 6.4 0.00 2.6 49.45 585.60 13.72 9.60 3.20 0.46 0.17
Arenoso (0.005% (0.49%) (0.038% (0.0077%) (0.0017%) (0.0004%)
) )
P.S*: Pasta Saturada
INTERPRETACIÓN:
CONDUCTIVIDAD : C.E. (sales). Según respuesta de los cultivos (dS/m)

Muy ligeramente salino: <2
Ligeramente salino: 2-4
Moderadamente salino: 4-8
Fuertemente salino: 8-16
Extremadamente salino: >16
MATERIA ORGANICA (M.O)
Bajo: < 2%
Medio: 2-4%
Alto: >4%
CALCAREO TOTAL CaCO3%
< 1%
Bajo:
1-5%
Medio:
> 5%
Alto:
FÓSFORO P (ppm) < 7%
Bajo: 7-14%
Medio: >14 %
Alto:
POTASIO K2O (kg/ha)
< 300
Bajo:
300-600
Medio:
> 600
Alto:
REACCION DEL SUELO (pH) 5.1-5.5
Fuertemente ácido:
5.6-6.0
Moderadamente ácido:
6.1-6.5
Ligeramente ácido:
6.6-7.3
Neutro:
7.4-7.8
Ligeramente alcalino:
7.9-8.4
Moderadamente alcalino:
EQUIVALENCIAS
1 dS/m
1 mmhos/cm =
1 me/100g
1 cmol (+) kg =
8.4 BIODEGRADACIÓN DE CRUDO EN TERRARIOS
FOTO Nº 01
CONSORCIO BACTERIANO EXÓGENO CONSORCIO BACTERIANO

NATIVO
CONTROL ABIÓTICO
8.5 DETERMINACIÓN DE LA REGRESIÓN MÚLTIPLE POR PASOS CON EL

PROGRAMA SPSS 9.0 WINDOWS.
Gráfico Nº 02. Ingreso de datos al SPSS.
Gráfico Nº 03. Selección de método de regresión lineal múltiple
Gráfico Nº 04.Selección de variables y del método de regresión lineal múltiple: Stepwise.
8.6 ESCALA TURBIDIMÉTRICA MC. FARLAND
Tubo Cloruro de Ácido Millones de

Bario (1%) sulfúrico(1%) m.o/mL
1 0.1 9.9 300
2 0.2 9.8 600
3 0.3 9.7 900
4 0.4 9.6 1200
5 0.5 9.5 1500
6 0.6 9.4 1800
7 0.7 9.3 2100
8 0.8 9.2 2400
9 0.9 9.1 2700
10 1.0 9.0 3000
Fuente: Microbiología de laboratorio (Bradshaw, 1976)

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Biodegradación de crudo de petróleo en terrarios.

8.1 COMPOSICION DE MEDIOS DE CULTIVO

CALDO ACETATO MINERAL

Fosfato ácido di sódico dodecahidratado. 2.25 g

MEDIO AUXILIAR ( AUX MEDIUM)

Esterilización a 121 ºC por 15 min.

MEDIO MÍNIMO DE GOLDMAN

Fosfato ácido di potásico 18 g

Fosfato ácido di sódico 9.37 g

8.2 CARACTERÍSTICAS DEL DESTILADO DE CRUDO DE PETRÓLEO A 200 ºC

Nº Tiempo Componentes Peso Fórmula %

Saturados aciclicos 95.77% (37.38% parafínico)

CONDICIONES CROMATÓGRAFO DE GASES: GC/MS

Columna: Medianamente polar SUPELCO 608

Gráfico Nº 01:Tiempo de retención en la columna y porcentaje de cada componente del

Gráfico Nº 01: Tiempo de retención en la columna y porcentaje de cada componente del

Conductivida Análisis Mecánico pH Carbonat Materia Fósforo Óxido Cationes Cambiables

CONDUCTIVIDAD : C.E. (sales). Según respuesta de los cultivos (dS/m)

8.4 BIODEGRADACIÓN DE CRUDO EN TERRARIOS

CONSORCIO BACTERIANO EXÓGENO CONSORCIO BACTERIANO

8.5 DETERMINACIÓN DE LA REGRESIÓN MÚLTIPLE POR PASOS CON EL

Gráfico Nº 02. Ingreso de datos al SPSS.

Gráfico Nº 03. Selección de método de regresión lineal múltiple

Gráfico Nº 04.Selección de variables y del método de regresión lineal múltiple: Stepwise.

8.6 ESCALA TURBIDIMÉTRICA MC. FARLAND

Tubo Cloruro de Ácido Millones de

Fuente: Microbiología de laboratorio (Bradshaw, 1976)

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