CODIGO P-SA-93

FECHA DE
DETERMINACION DEL PUNTO DE 10/03/2016
EMISIÓN
CRIOSCOPIA EN LECHES
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DETERMINACION DEL PUNTO DE CRIOSCOPIA EN LECHES

ELABORÓ REVISÓ APROBÓ

REFERENTE DE LABORATORIO SECRETARIO DE SALUD REPRESENTANTE DE LA
REPRESENTANTE DE CALIDAD DIRECCIÓN
PROFESIONAL DEL LABORATORIO
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1. OBJETIVO

Determinar el Punto de crioscopia en leches h mediante el uso de Crioscopio.

2. ALCANCE

El método aplica para muestras de leches higienizadas y crudas de bovino.

3. DEFINICIONES

Descenso Crioscopio: Es la disminución de la temperatura del punto de

congelación que experimenta una disolución respecto a la del disolvente puro.
Todas las disoluciones en las que, al enfriarse, el disolvente solidifica, tienen una
temperatura de congelación inferior al disolvente puro. La magnitud del descenso
crioscópico, ∆Tc, viene dada por la diferencia de temperaturas de congelación (o de
fusión) del disolvente puro y de la disolución, Tf* y Tf, respectivamente:

Principio Determinación Punto de Congelación: El punto de congelación es la

temperatura en la cual la fase sólida y la fase liquida de una sustancia o mezcla de
sustancias están presentes simultáneamente en el equilibrio.

El método adecuado para la determinación del punto de congelación se ha probado

con el congelamiento de la muestra y posterior agitación para la liberación de calor
y aumento de la temperatura hasta encontrar el punto de congelación, el cual se
determina cuando el valor de la temperatura no se incrementa en más de 0,5 m°C
durante 20 segundos

4. RESPONSABLES

Es responsabilidad de los profesionales del Laboratorio de salud Pública grupo

salud ambiental, cumplir con los lineamientos establecidos en este documento, sin
hacer ningún cambio que no esté debidamente documentado y autorizado.
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5. GENERALIDADES

Todo disolvente tiene un punto (temperatura) de congelación y de ebullición, sin embargo,

la adición de un soluto provoca que estos puntos se desplacen en la escala de temperatura.
La contante crioscópica es una constante que define la temperatura de congelación de un
disolvente. Tanto la concentración molal del soluto adicionado como la constante
crioscópica de cada disolvente definen qué tanto disminuye el punto de congelación del
disolvente, el fenómeno de la disminución de la temperatura de congelación se conoce
como descenso crioscópico y es una propiedad coligativa, es decir, es una de las
propiedades que tienen los disolventes por la adición de un soluto y que dependen
exclusivamente de su concentración molal, no de su naturaleza química. Otra propiedad
coligativa es el aumento de la temperatura de ebullición y esa depende de la constante
ebulloscopica.

El punto de solidificación de un líquido puro (no mezclado) es en esencia el mismo que el

punto de fusión de la misma sustancia en su estado sólido, y se puede definir como la
temperatura a la que el estado sólido y el estado líquido de una sustancia se encuentran en
equilibrio. El punto de solidificación de una disolución es más bajo que el punto de
solidificación del disolvente puro antes de la introducción del soluto (sustancia disuelta). La
cantidad a la que desciende el punto de solidificación depende de la concentración
molecular del soluto y de que la disolución sea un electrólito. Las disoluciones no
electrolíticas tienen puntos de solidificación más altos, en una concentración dada de soluto,
que los electrólitos. La masa molecular de una sustancia desconocida o no identificada
puede determinarse midiendo la cantidad que desciende el punto de solidificación de un
disolvente, cuando se disuelve en él una cantidad conocida de la sustancia no identificada.
Este proceso que determina las masas moleculares se denomina crioscopía.

La determinación del punto de crioscopia es un parámetro importante para la medición de

adulterantes en leches, principalmente cuando se altera la leche mediante la adición de
agua. Teniendo en cuenta que se requiere utilizar métodos oficiales para su determinación
y facilitar la toma de medidas sanitarias en los casos que los valores del punto de crioscopia
estén por fuera de los rangos admisibles según el decreto 616 de 2006.

6. PROCEDIMIENTO.

6.1 Materiales
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6.1.1 Equipos

 Crioscopio Cryostar Automático equipado con un Automuestreador de 12

muestras para medición automática.
 Impresora Térmica conectada directamente al Crioscopio.

6.1.2 Reactivos

 Estándar Calibrado A de 0,0000 °C

 Estándar Calibrado B de -0,557 °C
 Liquido de Baño Refrigerante.

6.1.3 Otros

 Probeta en marca de 2 mililitros

 Frasco lavador.

6.2 Procedimiento

6.2.1 Controles y/o curvas de calibración

 Calibración:

 Calibre el Instrumento de la siguiente manera:

 Encienda el instrumento y espere mínimo 15 minutos.
 Asegúrese que se han colocado los valores de calibración correctos (estándar de
calibración A y B) Desde luego los valores de calibración pueden ser cambiados de
acuerdo a las necesidades del usuario.
 4 vasos o probetas son necesarios para la calibración de A y B respectivamente
Lleve los vasos en el rack de muestras del automuestreador.
 Asegúrese que entre los cuatro vasos de A y B haya un espacio que los separe en
el automuestreador.
 Pipetee 2,2 mls de estándar en cada uno de los 4 vasos y luego 2,2 mL de estándar
B en los siguientes 4 vasos.
 Se recomienda que para asegurar que los vasos estén limpios, se juaguen
inicialmente con la misma solución estándar.
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 Preparando el Carrusel para la calibración:

o Espacios del 1 al 4 son disponibles para el estándar A. Espacio 5 se deja vacío.

o Espacio del 6 al 9 son espacios disponibles para el estándar de calibrado B.
o El equipo puede ser calibrado con cualquiera de las siguientes soluciones:
 Solución de calibrado A (0,000°C y -0,408 °C) solución B (-0,557°C y -0,600
°C).
 El valor de A puede ser cambiado desde la configuración del equipo. Usando
el teclado (esquina roja) es movido a la posición “A” 0,000°C.
o Después se presiona el botón “Enter” .Los dígitos pueden ser cambiados con las
flechas de arriba o abajo según aumente o disminuya valor. Presione Enter para
confirmar y guardar el nuevo valor.
o Todos los demás parámetros pueden ser cambiados de la misma manera.
o Ajuste el valor deseado para el estándar de calibración B de la misma manera
que para el estándar A.

.
Inserte el carrusel dentro del Aparato:

Use la tecla de “Calibración” y actívela presionando “Enter”.

Inicie la calibración presionando “Enter” otra vez.

Pre calibración:

La pre calibración es necesaria en casos particulares por ejemplo cuando se cambie

el termistor. Sin la pre calibración no sería posible realizar con frecuencia la
calibración. Solo se necesita un vaso o probeta con estándar “A” para realizar la Pre
calibración. La pre calibración se inicia después que el vaso es llevado en la apertura
del baño de enfriamiento.

6.2.2. Acondicionamiento y manejo de equipos

El acondicionamento y manejo del equipo se registra en el formato de la hoja de vida

(F-SA-18).

6.2.3. Condiciones ambientales

El análisis no exige condiciones ambientales específicas.

6.3. Condiciones Previas

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 Si la muestra es fresca y no hay separación visible de la crema, mezclar

trasvasándola totalmente de un recipiente a otro, tres veces como mínimo,
evitando la formación de espuma. Cuando la muestra contenga grumos de
grasa, calentar a no más de 38 C, antes de homogenizar.
 Lea cada muestra por duplicado.
 Siga las instrucciones que aparecen en el “Manual de Operador”.

6.3.1 Análisis de la muestra:

Medición:

 Inserte las muestras a ser medidas dentro de las probetas de 2 mililitros. La

cantidad de muestra debe ser entre 2,0 y 2,5 mls, preferiblemente 2,2 mls.
La muestra es llevada a alguna posición del automuestreador en el carrusel.
Ahora las muestras están listas para ser analizadas.
 Seleccione la función “START MEASUREMENT” usando el teclado.
 Presione “ENTER” y el instrumento iniciará la medición.
 El display cambia, la curva de la congelación es graficada, el valor de la
temperatura en °C está en el eje vertical, el tiempo en segundos es
desplegado en el eje horizontal. La medición puede pararse presionando el
botón “Enter” nuevamente.
 Para obtener la medición precisa es necesario calibrar el instrumento. Esto
es debido a las condiciones ambientales como la presión del aire.

6.4. Cálculos y/o valores de referencia

 6.4.1 Cálculos y resultados

Los resultados se determinan directamente desde el Crioscopio y se

expresan en °C y son registrados en el formato “Resultados Fisicoquímicos
de Leches F-SA-178.

 6.4.2 Expresión de resultados

Los resultados se expresan en °C con tres (3) decimales, aunque el Crioscopio

puede reportarlos directamente el Índice Crioscopio °H.
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6.4.4 Valores de referencia

Leche Entera

Pasteuriza Ultrapasteu UAT(UH Esterilizad

Leche Cruda da rizada T) a

-0.540 a - -0.54 a- -0.530 a -

Indice °C(g/ml) -0.530 -0.550 -0.53 a-0.51 0.510 0.51 0.510

-0.550 a- -0.550 a- -0.56 a - -0.550 a -

Crioscopio °H 0.530 0.530 -0.56 a-0.53 0.53 0.530

Leche Semidescremada

Pasteuriza Ultrapasteu UAT(UH

Leche Cruda da rizada T) Esterlizada

-0.540 a - -0.54 a- -0.530 a -

Indice °C(g/ml) -0.530 -0.550 -0.53 a-0.51 0.510 0.51 0.510

-0.550 a- -0.550 a- -0.56 a - -0.550 a -

Crioscopio °H 0.530 0.530 -0.56 a-0.53 0.53 0.530

Leche Descremada

-0.540 a - -0.54 a- -0.530 a -

Indice °C(g/ml) -0.530 -0.550 -0.53 a-0.51 0.510 0.51 0.510

-0.550 a- -0.550 a- -0.56 a - -0.550 a -

Crioscopio °H 0.530 0.530 -0.56 a-0.53 0.53 0.530

6.5. Aseguramiento calidad de resultados.

 Realizar la lectura de la muestras por duplicado y aplicar la ecuación de

Horwitz según formato F-SA-181
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 Los valores del control interno se ingresan en el F-SA-151 Control de

calidad Interno de ensayos fisicoquímicos-Punto de Crioscopia

 Registrar en el formato F-SA-34 “Control Interno de Equipos” las

actividades realizadas en el uso del Crioscopio.

6.5.1 Control de Calidad Interno.

Verifique la vigencia de los estándares.
Registre en el formato F-SA-181 y F-SA-34.

6.5.2 Control de Calidad Externo

El LSP del Meta participará en las evaluaciones realizadas por el INVIMA.

Cuando no sea posible, se buscará participar en evaluaciones de
desempeño con otras organizaciones particulares. Los resultados se
registraran en el formato F-SA-109.

6.5.3 Interferencias
Para las muestras de leches no se tiene asociado alguna interferencia, no obstante
es necesario mantener los vasos o probetas limpias y secas para evitar una
contaminación cruzada. Se recomienda lavar el vaso con la muestra de análisis
antes de la lectura.
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7. REGISTROS
Como Donde Tiempo de Disposición
Registro Responsable
conservarlo conservarlo conservación Final

Según Listado
Según Listado Según Listado
Maestro de
Maestro de Maestro de
documentos F-
F-SA-34 Director Técnico documentos F-MC- documentos F-
MC-04, Según
Formato de /Profesional de Medio físico 04, Según F-MC- MC-04, Según F-
F-MC-03 -
control de Laboratorio y/o 03 -Listado MC-03 -Listado
Listado maestro
interno de electrónico maestro de maestro de
de registros y/o
equipos registros y/o tabla registros y/o tabla
tabla de
de retención de retención
retención
documental documental
documental

Según Listado
Según Listado Según Listado
Maestro de
Maestro de Maestro de
documentos F-
Director Técnico documentos F-MC- documentos F-
MC-04, Según
/Profesional de Medio físico 04, Según F-MC- MC-04, Según F-
F-SA-18 Hoja de F-MC-03 -
Laboratorio y/o 03 -Listado MC-03 -Listado
vida de Equipos Listado maestro
electrónico maestro de maestro de
de registros y/o
registros y/o tabla registros y/o tabla
tabla de
de retención de retención
retención
documental documental
documental

Según Listado
Según Listado Según Listado
Maestro de
Maestro de Maestro de
documentos F-
F-SA-109 Director Técnico documentos F-MC- documentos F-
MC-04, Según
Análisis de /Profesional de Medio físico 04, Según F-MC- MC-04, Según F-
F-MC-03 -
resultados Laboratorio y/o 03 -Listado MC-03 -Listado
Listado maestro
Control de electrónico maestro de maestro de
de registros y/o
calidad registros y/o tabla registros y/o tabla
tabla de
de retención de retención
retención
documental documental
documental

Según Listado
Según Listado Según Listado
Maestro de
Maestro de Maestro de
documentos F-
Director Técnico documentos F-MC- documentos F-
F-SA-178 MC-04, Según
/Profesional de Medio físico 04, Según F-MC- MC-04, Según F-
Resultados F-MC-03 -
Laboratorio y/o 03 -Listado MC-03 -Listado
Fisicoquímicos Listado maestro
electrónico maestro de maestro de
de Leche de registros y/o
registros y/o tabla registros y/o tabla
tabla de
de retención de retención
retención
documental documental
documental
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Como Donde Tiempo de Disposición

Registro Responsable
conservarlo conservarlo conservación Final

Según Listado
Según Listado Según Listado
Maestro de
F-SA-151 Maestro de Maestro de
documentos F-
Control de Director Técnico documentos F-MC- documentos F-
MC-04, Según
calidad Interno /Profesional de Medio físico 04, Según F-MC- MC-04, Según F-
F-MC-03 -
de ensayos Laboratorio y/o 03 -Listado MC-03 -Listado
Listado maestro
fisicoquímicos- electrónico maestro de maestro de
de registros y/o
Punto de registros y/o tabla registros y/o tabla
tabla de
Crioscopia de retención de retención
retención
documental documental
documental

Según Listado
Según Listado Según Listado
Maestro de
Maestro de Maestro de
documentos F-
F-SA-181 control Director Técnico documentos F-MC- documentos F-
MC-04, Según
de calidad /Profesional de Medio físico 04, Según F-MC- MC-04, Según F-
F-MC-03 -
interno y Laboratorio y/o 03 -Listado MC-03 -Listado
Listado maestro
repetibilidad de electrónico maestro de maestro de
de registros y/o
resultados registros y/o tabla registros y/o tabla
tabla de
de retención de retención
retención
documental documental
documental

8. ANEXOS
No Aplica

9. HISTORIAL

VERSIÓN VIGENCIA IDENTIFICACIÓN DE LOS

CAMBIOS

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