UNIVERSIDAD NACIONAL DE CAJAMARCA

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS

Escuela Académico Profesional de Agronomía.

COLORANTES Y COLORACIONES

I. INTRODUCCIÓN:

Debido a que las bacterias y otros microorganismos tienen un tamaño muy

pequeño, se requiere de tinciones biológicas para visualizarlos, demostrar
detalles de su estructura interna, o algunas funciones fisiológicas; además
estos colorantes, son utilizados como indicadores de pH en los medios de
cultivos, y como indicadores REDOX para demostrar la presencia o ausencia
de condiciones de Anaerobiosis.

La mayoría de los colorantes son derivados de la Anilina, están compuestos

generalmente, por uno o más anillos bencénicos por uniones químicas bien
definidas (Cromóforos) que están asociadas a la producción del color.

Los colorantes se clasifican en base a los cromóforos presentes, se

designan como ÁCIDOS o BÁSICOS, términos relacionados no con el pH, sino
una porción significativa de la molécula si es aniónica o cationica. Los
colorantes básicos tiñen estructuras de naturaleza ácida, como la cromatina
nuclear de las células, los colorantes ácidos, reaccionan con sustancias
básicas tales como: las estructuras citoplasmáticas. De acuerdo a su
composición pueden ser simples o compuestos: los simples son aquellos que
se disuelven en agua o alcohol; los compuestos son los formados por varios
colorantes y soluciones como el Colorante de GRAM.

II. OBJETIVOS:

 Comprender los pasos necesarios para realizar la tinción deGram.

 Reconocer los microorganismos Gram positivos y negativos, al igual de

la aplicabilidad de la tinción.

 Conocer los fundamentos de las diferentes coloraciones utilizadas en la

observación microscópica de microorganismos.

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III. DESARROLLO:
COLORACIÓN DE BACTERIAS:

El primer paso en cualquier estudio bacteriológico consiste en la observación

microscópica de la muestra. Una observación directa, sin coloración, nos dará
escasa información sobre los microorganismos. Para obtener mayor
información debemos colorear el material que vamos a estudiar y lo haremos
con una o varias técnicas que nos den las características deseadas.

COLORACIÓN DE GRAM:

 COMPOSICIÓN: Está constituido por: Cristal Violeta: colorante primario

o básico, que se une a la pared celular bacteriana. (violeta).
 LUGOL: solución de yodo, utilizado como mordiente, el cual facilita la
adhesión del cristal violeta a la pared celular.
 ALCOHOL ACETONA: decolorante.
 SAFRANINA o FUCSINA DE GRAM: colorante secundario, que imparte
una coloración de contraste o contracolor (rosado).
 FUNDAMENTO DE LA COLORACIÓN DE GRAM: Un frotis es tratado
con una solución de cristal violeta el cual se une a las paredes celulares
bacterianas, luego de un tratamiento con lugol, algunas bacterias debido
a la naturaleza química de sus paredes celulares, poseen la capacidad
de retener el cristal violeta, aún luego del tratamiento con un decolorante
orgánico (alcohol acetona). Tales bacterias se denominan GRAM
POSITIVAS. Las bacterias GRAM NEGATIVAS presumiblemente debido
a su mayor contenido lipídico en su pared celular, pierden la coloración
primaria del cristal violeta aparecen rosadas al microscopio, habiendo
fijado la safranina como colorante de contraste a sus paredes celulares,
las GRAM POSITIVAS aparecen al microscopio de color violeta.

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 UTILIDAD DE LA COLORACIÓN DE GRAM: coloración diferencial,

utilizada para demostrar las propiedades tintoriales de todos los tipos de
bacterias.

 TÉCNICAS DE LA COLORACIÓN DE GRAM:

1. Preparar un extendido fino del material en estudio y dejarlo secar al aire.

2. Fijar el material al portaobjeto de modo que no sea arrastrado durante el

proceso de tinción, pasando el portaobjeto 3 ó 4 veces por la llama de un
mechero de Bunsen.

3. Colocar el preparado sobre un soporte de tinción y cubrir la superficie con

solución de Cristal Violeta por 1 minuto.

4. Pasando el minuto, lavar con agua destilada.

5. Cubrir el preparado con Lugol Gram por 1 minuto. Lavar nuevamente con
agua destilada.

6. Sostener el portaobjeto entre el pulgar y el índice y bañar la superficie con

unas gotas del decolorante: alcohol acetona hasta no arrastrar más colorante
violeta. Esto, requiere habitualmente unos 30 segundos o menos.

7. Lavar con agua destilada y colocar nuevamente el portaobjeto sobre el

soporte. Cubrir la superficie con Safranina (contracolor), durante un minuto.
Lavar con agua.

8. Colocar el preparado en un soporte de tinción en posición vertical, dejando

que escurra el exceso de agua y que se seque el extendido.

9. Examinar el extendido al microscopio con objetivo de inmersión (100X).

Las bacterias Gram positivas se observan de color violeta.

Las bacterias Gram negativas se observaran de rosado.

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Figura .a) Bacilos Gram negativos b) Cocos Gram positivos

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IV. CONCLUSIONES:

 En esta experiencia pudimos observar que con la de tinción de gram

facilita la diferencia de una bacteria gran positiva y
gram negativa realizando cada uno de los pasos fundamentales que nos
facilitan tener un buen resultado.
 Para observar las preparaciones en el microscopio óptico
siempre tenemos que realizar de forma correcta todos los pasos para
tener un buen enfoque de nuestra muestra.

V. BIBLIOGRAFÍA:
 T Stuart Waiker, Me Graw Hill, Mexico-2000-Editores S.A-Microbiología
 Jawest - Meinick y Edelberg, 16a Edición- México - Manual Moderno
Microbiología Médica.
 Murray Patrick -2a Edición- 1993. Harcourt Brace- Microbiología Médica.
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 Restrepo Angela, Robledo Jaime. 6a Edición - Corporación
ParaInvestigaciones Biológicas. Fundamentos De Medicina-
Enfermedades Infecciosas.
 http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/microgeneral/wp-
content/uploads/2017/02/03-COLORACIONES.pdf