DISCUSION RANGO LINEALIDAD

 La forma de la curva representa la velocidad de formación de productos en

el tiempo a diferentes concentraciones de enzima, los cuales demuestran
que a una mayor concentración de enzimas el rango de linealidad de
reacción es mayor y por lo tanto mantiene su capacidad catalítica durante
más tiempo y mientras éste se vaya diluyendo la capacidad catalítica de la
enzima disminuye.

 La inulinasa es una enzima caracterizada por hidrolizar la inulina en

fructosa prácticamente pura, ampliamente usada en la industria de
alimentos como edulcorante dietético con un poder de dulzor de1.5 a 2
veces la sacarosa. (Ricca et al., 2007).

 La hidrolisis completa de la inulina genera fructosa y glucosa con un grado

de concentración proporcional al DP (Determinación de Proteínas) inicial de
polisacáridos. El DP y la ramificación dependen del origen vegetal de la
inulina. (Ricca et al., 2007).

 La enzima que cataliza la hidrolisis de enlaces β-D-(2-1)- fructosidicos en la

inulina originando fructosa y glucosa se le denomina inulasa o β-D-(2-1) –
fructano fructohidrolasa; comúnmente conocida como inulinasa,
perteneciendo al grupo de clasificación de enzimas hidrolasas glicosodasas
(kushi et al., 2000; laloux et al., 1991).

 Las enzimas inulinasa se pueden dividir en exoinulinasas y endoinulinasas.

Las exoinulinasas catalizan la remoción de unidades de fructosa desde el
inicio hasta el final de la cadena con la hidrolisis del residuo de sacarosa.
Las endoinulinasas catalizan la hidrolisis de los enlaces internos de la
molécula de inulina, originando inulotriosa, inulotetrosa e inulopentosa sin
actividad invertasa para hidrolizar el residuo de sacarosa (Rouwenhorst et
al., 1990).

 Según Pandey et al. (1999), los mejores resultados de producción de

inulinasa son dados por los mohos aspergillus niger (75 U/ml) y A niger A42
(4600 U/g). También algunas cepas mutantes de levaduras, como k.
marxianus var. Marxianus CBS 6556, exhibieron rendimientos de 3000
u/ml, mientras que las bacterias no mostraron comparables rendimientos de
inulinasa.
  Según teijón, 2001; durante la fase lineal en la que la formación de
producto permanece constante, la concentración de enzima de la muestra
es el único factor limitante. Por último, a medida que va transcurriendo la
reacción, llega un momento en que el sustrato u otro reactivo se van
agotando (fase de agotamiento de sustrato) y la velocidad de reacción
disminuye hasta anularse.

 Según chistensen, 1980; sustenta que para una determinación enzimática

sea válida es necesario realizarla en la fase lineal donde el único factor
limitante es la concentración de la propia enzima y las condiciones de
reacción son las óptimas (exceso de sustrato y otros reactivos).

 Así mismo corroborando con dichos autores la gráfica nos indica el rango
de linealidad de la enzima las curvas obtenidas se basan en su
dependencia con el tiempo y con la reacción enzimática. La forma de la
curva representa la velocidad de formación del producto en el tiempo a
diferentes concentraciones de enzima, los cuales demuestras que a una
mayor concentración de enzimas el rango de linealidad de reacción es
mayor y por lo tanto mantiene su capacidad catalítica durante mas tiempo y
mientras este se vaya diluyendo una capacidad catalítica de la enzima
disminuye es por ello que se puede concluir que a concentración de la
enzima a trabajar es la enzima 1:5 la cual se muestra en la gráfica del
subgrupo B3.

En el rango de linealidad, representan las curvas obtenidas de la reacción

enzimática y su dependencia del tiempo. La forma de la curva se representa la
velocidad de formación de productos en el tiempo pero a diferentes
concentraciones de enzima, los cuales demuestran que a una mayor
concentración de enzimas el rango de linealidad de reacción es mayor y por lo
tanto mantiene su capacidad catalítica durante más tiempo y mientras este se
vaya diluyendo la capacidad catalítica de la enzima baja.

Para determinar el rango de linealidad de la enzima se determina midiendo la

velocidad inicial de reacción, que es la pendiente de la curva de progreso (curva
de producto formado o sustrato transformado frente al tiempo) en el tiempo cero.
Inicialmente, las reacciones transcurren linealmente, pudiéndose tomar la
pendiente de esta recta como velocidad inicial. A tiempos más largos, el progreso
de la reacción se aparta de la linealidad. De esta forma podemos ver que con la
dilución que deberíamos trabajar durante toda la experiencia es de enzima
1:1 – 1:2 – y 1:·3, porque me asegura una linealidad hasta en 20 min y nos
permite saber hasta que concentración llego de azúcares reductores.
 DISCUSION PARA LA PRODUCTIVIDAD DE LA ENZIMA

En el tiempo de reacción en un reactor enzimático por lote agitado permite

conocer los parámetros de la velocidad de producción en un tiempo dado y
permite también estimar que tiempo es necesario utilizar para poder obtener la
máxima productividad sin perder la capacidad o actividad catalítica de la enzima y
lo cual se estima que solo se debe trabajar para estos parámetros alrededor de 30
a 60min en un reactor enzimático por lote, pero para un reactor enzimático
continuo se permite llegar a productividades mayores y constantes en el tiempo.

La evaluación de producción de una enzima por fermentación microbiana se

determina por los parámetros de rendimientos (unidad de actividad/ml de caldo de
cultivo o unidad de actividad/mg de células) de la enzima obtenida y por las
propiedades de la enzima que dependen del tipo de microorganismos empleado,
del modo de fermentación, del medio de cultivo y las condiciones de incubación
(Greasham y Inemine, 1986; Hensing et al., 19995; Liu et al., 2005; Xiong et
al., 2007)

Las levaduras tienen las ventajas sobre los mohos de tener una mayor velocidad
de generación celular y adaptabilidad a diferentes condiciones y modos de cultivo,
y en estos las cepas de Kluyveromyces marxianus han sido últimamente mas
estudiados. Cruz-Guerrero et al (1995) demostraron que la Kluyveromyces
marxianus NRRL Y-7571 fue una levadura hiper productora de inulinasa
parcialmente constitutiva y, aunque la cepa mostro tener una alta resistencia al 2-
desoxiglucosa, la producción de inulinassa fue reprimida catabólicamente, al
confirmarse que en una fermentación en un medio de 4% de glucosa y 4% de
inulina, la inulinasa comenzó a producirse cuando los niveles de glucosa fueron
los suficientemente bajos, alcanzándose un rendimiento de 0.82 UI/ml al termino
de las 24 horas. La actividad enzimática de esta enzima puede ser inhibida por Ag,
Hg, Cd, Zn y fenilhidrazina (Negoro, 1978., Vandame y Derecke, 1993).
 DETERMINACION DE PARAMETROS CINETICOS

Esto proporciona una gráfica lineal del recíproco de la velocidad contra el

recíproco de la concentración de producto, que nos proporciona los valores
exactos de Km en el intercepto de la línea en el eje de las abcisas y el valor excato
de la velocidad máxima (Vmáx) en el intercepto del eje de las ordenadas. (Andrés
Illanes Frontaura , 1991).

Según Catana et al, 2005, en una investigación realizada a la enzima inulinasa,

los autores informaron de Vm para la enzima libre de 0.006 M(20.5 g/l). Mientras
que los valores de Km para la enzima libre fue de 0.082 M (28 g/L), lo que sugirió
restricciones de difusión significativos donde las constantes de inhibición Kl de
4.68 M (1600 g/L).
Al comparar con nuestros datos obtenidos que fueron Vap= 0.04472 g/l∗min y
Kap= 17.495 g/l , podemos inferir que nuestros resultado tubo un Km más bajo
que el de la investigación realizada, indica una unión fuerte, en este caso el
Kmax= 17.495 g/l al ser bajo indica una unión fuerte es decir de alta afinidad de
enzima y sustrato. En otras palabras, cuanto menor sea la Km, menor será la
cantidad de sustrato necesaria de la velocidad máxima, por lo que mayor será la
afinidad del enzima hacia ese sustrato, es decir cuanto mayor es Km menor es la
afinidad predominando las formas E y S libres