Anda di halaman 1dari 13

Aktivitas Antioksidan dan Kandungan Luteolin Marchantia polymorpha L.

(Tugas Makalah Metabolisme Sekunder)

Oleh
Inten Wahyuningtias (1517021002)
Lily Utami (1517021082)
Yonathan Christyanto (1517021151)

JURUSAN BIOLOGI
FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM
UNIVERSITAS LAMPUNG
2018
I. PENDAHULUAN

A. Latar Belakang

Lumut hati dan lumut adalah tanaman kecil yang tumbuh rendah dan termasuk
filum Bryophyta, yang secara filogenetik ditempatkan antara tanaman vaskular
dan ganggang. Bryophyta memiliki lebih dari 20.000 anggota di seluruh dunia,
dan hampir 3000 bryophyta dilaporkan memiliki nilai obat. Anggota dari divisi
unik ini di kerajaan tumbuhan sekarang semakin banyak digunakan sebagai
sumber baru farmasi. Satu kelas menarik dari bryophyta yaitu lumut hati,
memiliki aktivitas terapeutik yang berbeda dan telah diaplikasikan secara
terapeutik di seluruh dunia, terutama di Kebudayaan India. Spesies Marchantia
adalah salah satu tanaman obat tradisional Cina yang penting digunakan
khususnya untuk pengobatan hepatitis dan kelainan kulit karena sifat antibiotik,
anti-inflamasi, dan diuretik (1,2). Menurut studi fitokimia, spesies Marchantia
mengandung terpenoid, flavonoid, steroid, dan bis (bibenzyls) (2-6).

Marchantia polymorpha L. (Marchantiaceae) adalah sebuah liverwort dengan


thallus besar, didistribusikan ke seluruh dunia dan pameran antimikroba, anti-
hepatic, antipiretik, dan sifat diuretik. Itu juga digunakan untuk mengobati
patah tulang, luka, gigitan ular berbisa, luka bakar, dan luka terbuka (1,3,7).
Dalam studi sebelumnya, enzim polimorfisme koloni Eropa dari Marchantia
polymorpha L. diselidiki untuk variabilitas genetik, dan kehadiran 3 komponen
yang berbeda secara genetik diindikasikan (8). Karena pentingnya variabilitas
genetik M. polymorpha dan ketiadaan studi tentang sampel Turki, kami
memilih untuk mempelajari liverwort tertentu. Untuk yang terbaik dari
pengetahuan peneliti yaitu aktivitas antioksidan dan senyawa fenolik dari M.
polymorpha dari Turki diselidiki pertama kali dalam penelitian ini.
B. Tujuan

Adapun tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui aktivitas


antioksidan dan kandungan luteolin Marchantia polymorpha L.
II. METODOLOGI PENELITIAN

A. Bahan Tanaman

Marchantia polymorpha L. dikumpulkan dari Ilgaz wilayah Provinsi


Kastamonu di Anatolia pada Mei 2007. Liverwort diidentifikasi oleh Prof. Dr
Barbaros Çetin, dan voucher spesimen disimpan di herbarium Universitas
Ankara Fakultas Farmasi (AEF 25978).

B. Bahan Kimia dan Standar

DPPH (D9132) dan kit pengujian antioksidan ABTS (CS0790) dibeli dari
Sigma (Jerman). Chromatographic grade double-distilled water, HPLC kelas
metanol, asetonitril, dan analitik kelas asam trifloroasetat digunakan untuk
analisis HPLC. Senyawa fenolik berikut dibeli dari Sigma (Jerman): asam
klorogenik (C3878), asam caffeic (C0625), rutin (R5143), myricetin
(M6760), quercetin (Q4951), luteolin (L9283), dan kaempferol (K0133).

C. Prosedur Ekstraksi

Untuk aktivitas antioksidan, 5 g kering dan bubuk Seluruh liverwort


diekstraksi dengan metanol dan etil asetat (100 mL masing-masing) dengan
magnetic stirrer untuk 1 jam (50 oC, 250 rpm). Setelah fltrasi, fase organik
diuapkan sepenuhnya oleh evaporator berputar (Buchi-R200), dan ekstrak
kasar digunakan dalam uji aktivitas antioksidan.

Untuk analisis HPLC, 200 mg kering dan bubuk seluruh liverwort diekstraksi
dengan metanol oleh magnetic stirrer selama 6 jam (50 oC, 250 rpm). Ekstrak
kemudian diratakan dan diselesaikan hingga 10,0 mL dalam permintaan
volumetrik dengan metanol, melewati 0,45 μm flter, dan disuntikkan ke
sistem HPLC.

D. Aktivitas antioksidan

Uji 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH). Kapasitas untuk mengais "radikal


bebas" DPPH yang stabil dipantau sesuai dengan metode modifed dari Barros
dkk. (9). Berbagai konsentrasi metanol dan ekstrak etil asetat (0,25 mL)
dicampur dengan 2,75 mL larutan metanol yang mengandung DPPH radikal.
Campuran itu dikocok dengan kuat dan simpan berdiri selama 10 menit
dalam gelap (sampai penyerapan stabil nilai-nilai diperoleh). Pengurangan
DPPH radikal ditentukan dengan mengukur penyerapan pada 517 nm.
Aktivitas pembilasan radikal (Inh%) dihitung sebagai persentase perubahan
warna DPPH menggunakan persamaan: Inh% = [(ADPPH - As) / ADPPH] × 100,
di mana AS adalah absorbansi larutan ketika ekstrak sampel ditambahkan
pada tingkat tertentu, dan ADPPH adalah absorbansi dari solusi DPPH. Ekstrak
konsentrasi memberikan 50% penghambatan (IC50) dihitung dari grafik
inhibisi persentase terhadap konsentrasi ekstrak. Trolox (Sigma, Jerman)
digunakan sebagai standar.

Uji 2,2’-Azino-bis (3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonat acid) (ABTS). Metode


ABTS digunakan untuk memperkuat hasil yang diperoleh dari radikal DPPH
uji aktivitas pemulungan. Pengujian ini dilakukan menggunakan kit uji
antioksidan yang dipasok oleh Sigma dengan metode Miller dan Rice-Evans
yang dimodifikasi (10). Prinsip dari uji antioksidan adalah pembentukan dari
myoglobin feril radikal dari metmyoglobin dan hidrogen peroksida, yang
mengoksidasi ABTS untuk menghasilkan kation radikal ABTS +, yang larut
chromagen yang berwarna hijau dan dapat ditentukan spektrofotometri pada
405 nm. Antioksidan menekan produksi kation radikal dalam tergantung pada
konsentrasi, dan warnanya intensitas menurun secara proporsional. Trolox,
sebuah air vitamin E larut analog, digunakan sebagai standar atau
mengendalikan antioksidan. Solusi kerja myoglobin (20 μL) dan solusi kerja
ABTS (150 μL), yang mana disiapkan dengan mencampur larutan hidrogen
peroksida 3% (25 μL) dan larutan ABTS (10 mL), ditambahkan ke berbagai
konsentrasi metanol dan etil asetat ekstrak (10 μL). Setelah masa inkubasi 5
menit, solusi berhenti (100 μL) ditambahkan ke media, dan nilai absorbansi
endpoint dicatat pada 405 nm. Aktivitas antioksidan (Inh%) dihitung sebagai
nilai persentase dengan menggunakan persamaan: Inh% = [(A0 - As) / A0] ×
100, dimana AS adalah absorbansi diperoleh pada akhir proses dengan ekstrak
sampel, dan A0 adalah absorbansi dari kontrol. Ekstrak konsentrasi
memberikan 50% penghambatan (IC50) adalah dihitung dari grafik
persentase penghambatan terhadap konsentrasi ekstrak.

E. Analisis HPLC

Analisis dilakukan dengan sistem LC terdiri dari satu seri HP Agilent 1100
kuaterner pompa, degasser, dan detektor array fotodioda. Sampel disuntikkan
ke HP Agilent 1100 autosampler dengan kolom termostatted kompartemen di
kolom Phenomenex-Luna C18 (5 μ, 250 mm; 4,6 mm) pada 30 ° C. Sistem
itu dikontrol, dan analisis data dilakukan dengan Perangkat lunak Agilent
Chem Station. Semua perhitungan mengenai analisis kuantitatif dilakukan
dengan standarisasi eksternal dengan pengukuran daerah puncak.

Analisis ini dilakukan dengan elusi gradien dengan laju aliran 1 mL/menit.
Suhu kolom ditetapkan menjadi 30 ° C. Fase gerak adalah campuran asam
trifloroasetat 0,1% dalam air (larutan A), asam trifloroasetat 0,1% dalam
metanol (larutan B), dan asam trifloroasetat 0,1% dalam asetonitril (larutan
C). Susunan gradiennya adalah (A: B: C); 80:10:10 pada 0 menit, 60:25:15
pada 5 menit, 50:30:20 jam 10 min, 40:40:20 pada 15 menit, dan 0:75:25
pada 20 menit. Durasi antara proses adalah 5 mnt. Semua pelarut adalah
terbang melalui 0,45 μm Millipore sebelum digunakan dan degassed dalam
ultrasonic bath.

Untuk studi kuantifikasi, luteolin (10 mg) ditimbang secara akurat ke dalam
10 mL volumetrik, dilarutkan dalam fase gerak, dan dilepaskan ke volume
untuk menyiapkan solusi stok. Solusi standar disiapkan dalam fase gerak
pada 5 konsentrasi yang berbeda tingkat dalam 10 mL volumetrik meminta
pembentukan dari kurva kalibrasi. Batas deteksi (LOD) adalah didirikan pada
rasio signal-to-noise (S / N) dari 3. Batas dari kuantifikasi (LOQ) didirikan
pada rasio signalto-noise (S / N) dari 10. LOD dan LOQ adalah eksperimental
diverifikasi oleh 6 suntikan luteolin di konsentrasi LOD dan LOQ.

Dari setiap solusi dan sampel 10 μL disuntikkan ke kolom, dan kromatogram


direkam dari 200 hingga 400 nm. Solusi standar dianalisis, dan kromatogram
3 dimensi (panjang gelombang, waktu, dan absorbansi) diperoleh untuk
memilih panjang gelombang optimal untuk deteksi fenolat ini dengan
sensitivitas maksimum. Kuantifikasi dilakukan dengan mengukur pada 340
nm untuk luteolin menggunakan detektor array foto-dioda. Waktu kerja
kromatografi adalah 20 menit dan volume kolom kekosongan adalah 1,60
menit.
III. HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil Penelitian

Adapun data hasil penelitian adalah sebagai berikut :

a. Tabel Nilai IC50 Ekstrak Marchantia Polymorpha

b. Gambar Chromatogram HPLC Ekstrak Marchantia polimorpha L.


B. Pembahasan

DPPH radikal scavenging assay adalah metode yang mudah, akurat, sensitif,
dan ekonomis biasa digunakan untuk mengevaluasi kemampuan antioksidan
untuk mengais radikal bebas. Di sisi lain, uji ABTS terutama didasarkan pada
penghambatan absorbansi kation radikal ABTS + oleh antioksidan. Kedua
metode digunakan untuk menentukan antioksidan profle dari ekstrak tumbuhan
dan sumber lain (11-13).

Dalam studi saat ini metode aktivitas antioksidan DPPH dan ABTS diterapkan
untuk mengevaluasi radikal potensi scavenging dari metanol dan etil ekstrak
asetat M. polymorpha. Menurut DPPH hasil aktivitas pemulungan radikal,
IC50 nilai ekstrak metanol M. polymorpha adalah 0,4495 ± 0,029 mg / mL, dan
ekstrak etil asetat M. polymorpha adalah 0,2756 ± 0,01 mg / mL, sedangkan
Trolox memamerkan IC 50 dari 0,0419 ± 0,002 mg / mL. Menurut hasil
aktivitas antioksidan ABTS, IC Nilai 50 dari ekstrak metanol M. Polymorpha
adalah 0,2441 ± 0,009 mg / mL, dan etil asetat ekstrak M. polymorpha adalah
0,2126 ± 0,01 mg / mL, sementara Trolox memamerkan IC Nilai 50 0,0431 ±
0,001 mg / mL (Tabel).

Berkenaan dengan hasil aktivitas antioksidan dan data literatur tentang


senyawa fenolik spesies Marchantia, kami memeriksa 7 fenolik senyawa
dengan aktivitas antioksidan yang dikenal (asam klorogenik, asam caffeic,
rutin, myricetin, quercetin, luteolin, dan kaempferol) dalam ekstrak yang dapat
bertanggung jawab atas potensi antioksidan dari liverwort (14,15). Menurut
hasil RP-HPLC kualitatif, sudah jelas bahwa di antara fenolik ini hanya
senyawa luteolin ditemukan dalam metanol ekstrak liverwort (Gambar). Waktu
retensi ini 7 fenolat masing-masing dicatat sebagai 6,5 menit, 8,1 menit, 10,3
min, 13,3 menit, 16,5 menit, 16,9 menit, dan 19,5 menit.
Kuantifikasi luteolin dilakukan oleh metode standar eksternal dan 0,0052 ±
0,0002% (w / w). Hubungan linier antara area puncak dan konsentrasi untuk
luteolin dapat diekspresikan sebagai y = 40356x - 13.308, dengan r = 0.9999.
Penyimpanan waktu luteolin adalah 16,9 menit, LOD adalah 0,053 μg / mL,
dan LOQ adalah 0,177 μg / mL untuk luteolin. Ketepatan metode (variasi
dalam-hari mereplikasi penentuan) diperiksa dengan menyuntikkan luteolin 9
kali di level LOQ. Ketepatan metode, dinyatakan sebagai% RSD di LOQ
tingkat, adalah 3,082% untuk luteolin [RSD% = (SD / mean)× 100]. Dalam
penelitian sebelumnya, flavonoid mayor dari Varietas M. polymorpha
dilaporkan sebagai apigeni dan glukosida luteolin, dan ini disertai oleh
sejumlah kecil apigenin dan luteolin (14). Di studi lain yang dilakukan pada M.
convoluta, kuantifikasi quercetin, apigenin, dan luteolin dilakukan, dan konten
luteolin adalah 0,0035% (15). Data ini mendukung temuan kami tentang
kandungan luteolin M. polymorpha.
IV. KESIMPULAN

Adapun kesimpulan dari penelitian ini adalah sebagai berikut :


1. Aktivitas antioksidan Liverwort Turki Marchantia polymorpha menunjukan
aktivitas sedang oleh kedua metode aktivitas antioksidan dengan nilai IC50
dekat dibandingkan dengan hasil yang diperoleh dengan Trolox
2. Ekstrak etil asetat memiliki aktivitas antioksidan yang sedikit lebih tinggi dari
ekstrak metanol, meskipun tidak mengandung salah satu senyawa fenolik.
Akibatnya, menurut hasil HPLC potensi antioksidan tanaman bisa sebagian
karena luteolin, tetapi ada kemungkinan bahwa phenolic lainnya dan bis
(bibenzyls) dalam liverwort juga berkontribusi (16-18).
DAFTAR PUSTAKA

1. Saroya AS. Herbalism, Phytochemistry, and Ethnopharmacology. Science


Publishers. Punjab; 2011: pp. 286-293.
2. Friederich S, Maier UH, Deus-Neumann B et al. Biosynthesis of cyclic
bis(bibenzyls) in Marchantia polymorpha. Phytochemistry 50: 589-598, 1999
3. Qu JB, Xie C-F, Ji M et al. Water soluble constituents from the liverwort
Marchantia polymorpha. Helv Chim Acta 90: 2109- 2115, 2007.
4. Asakawa Y, Tori M, Masuya T et al. Chemosystematics of bryophytes .34.
ent sesquiterpenoids and cyclic bis(bibenzyls) from the German liverwort
Marchantia polymorpha. Phytochemistry 29: 1577-1584, 1990.
5. So M-L, Chan W-H, Xia P-F et al. Two new cyclic bis(bibenzyl) s
isoriccardinquinone A and B from the liverwort Marchantia paleacea. Nat
Prod Res 16: 167-171, 2002.
6. Xiao JB, Ren FL, Xu M. Flavones from Marchantia convoluta: isolation of
apigenin-7-O-β-D-glucuronide and 5-hydroxyl-7- methoxyl-2-
methylchromone. J Pharm Allied Sci 3: 310-313, 2006.
7. Mewari N, Kumar P. Antimicrobial activity of extracts of Marchantia
polymorpha. Pharm Biol 46: 819-822, 2008.
8. Boisselier-Dubayle MC, Jubier MF, Lejeune B et al. Genetic variability in the
three subspecies of Marchantia polymorpha (Hepaticae): izozymes, RFLP,
and RAPD markers. Taxon 44: 363-376, 1995.
9. Barros L, Baptista P, Ferreira ICFR. Effect of Lactarius piperatus fruiting
body maturity stage on antioxidant activity measured by several biochemical
assays. Food Chem Toxicol 45: 1731- 1737, 2007.
10. Miller NJ, Rice-Evans CA. Factors influencing the antioxidant activity
determined by the ABTS (center dot+) radical cation assay. Free Radic Res
26: 195-199, 1997.
11. Singh S, Singh RP. In vitro methods of assay of antioxidants: an overview.
Food Rev Int 24: 392-415, 2008.
12. Kutlu T, Durmaz G, Ateş B et al. Antioxidant properties of different extracts
of black mulberry (Morus nigra L.). Turk J Biol 35: 103-110, 2011.
13. Guha G, Rajkumar V, Mathew L et al. Te antioxidant and DNA protection
potential of Indian tribal medicinal plants. Turk J Biol 35: 233-242, 2011.
14. Markham KR, Porter IJ. Flavonoids of the liverwort Marchantia
polymorpha. Phytochemistry 13: 1937-1942, 1974.
15. Chen X-Q, Xiao JB. RP-HPLC-DAD determination of flavonoids: separation
of quercetin, luteolin, and apigenin in Marchantia convoluta. Iran J Pharm
Res 3: 175-181, 2005.
16. Sabovljevic A, Sokovic M, Glamoclija J et al. Comparison of extract bio-
activities of in situ and in vitro grown selected bryophyte species. Afr J
Microbial Res 4: 808-812, 2010.
17. Niu C, Qu J-B, Lou H-X. Antifungal bis(bibenzyls) from the Chinese
liverwort Marchantia polymorpha L. Chem Biodivers 3: 34-40, 2006.
18. Schwartner C, Michel C, Stettmaier K et al. Marchantins and related
polyphenols from liverwort: physico-chemical studies of their radical-
scavenging properties. Free Radical Bio Med 20: 237-244, 1996.