ORIGINAL ARTICLES

Departemen Kontrol Kualitas1, Hetero Labs Ltd., Hyderabad, India; Obat-obatan invagen Inc2,
New York, AS; Departemen Kimia 3, Sri Krishna Devaraya University, Anantapur, India
Pengujian logam berat dalam bahan farmasi aktif: pendekatan alternatif
P. Raghuram1,3, IV Soma Raju2,3, J. Sriramulu3
Diterima 8 Juli 2009, diterima 10 Juli 2009
Pannala Raghuram, General manager, Kontrol kualitas, Hetero Labs Ltd., Hetero House,
Erragadda, Hyderabad- 500078, India ramp.raghu@gmail.com
Pharmazie 65: 15–18 (2010) doi: 10.1691 / ph.2010.9222
Prinsip dari uji logam berat farmakope adalah deteksi dan estimasi impunitas logam berwarna
dengan ion sulfida dibandingkan dengan standar timbal. Tes menderita kehilangan analit pada
ashing dan memiliki beragam tanggapan untuk berbagai logam. Spektroskopi emisi plasma-optik
induktif ditambah (ICP-OES) untuk memperkirakan 23 logam dalam bahan farmasi aktif sedang
diusulkan. Metode ini mencakup logam yang tercantum dalam panduan USP, Ph. Eur dan EMEA
tentang "Residu Katalis Logam atau Reagen Logam".
1. Pendahuluan
Kotoran logam dalam zat farmasi atau produk obat dapat berasal dari beberapa sumber
seperti bahan mentah, katalis logam atau reagen logam yang digunakan selama sintesis, peralatan
manufaktur dan perpipaan, pengemasan massal, lingkungan, pembersihan pelarut dll. Logam
berat paling sering terlibat dalam keracunan manusia adalah timbal, merkuri, arsen, dan
kadmium. Beberapa logam berat, seperti seng, tembaga, krom, besi, dan mangan, dibutuhkan
oleh tubuh dalam jumlah kecil, tetapi unsur-unsur yang sama ini dapat menjadi racun dalam
jumlah yang lebih tinggi. Kandungan logam berat dalam zat farmasi diuji untuk mengontrol dan
mengukur kadar logam sebagai suatu kelompok karena toksisitas unsur-unsur, tetapi juga karena
alasan bahwa residu logam berat adalah penanda umum untuk kualitas produk.
Spesifikasi untuk logam berat dalam bahan farmasi aktif diatur dengan
mempertimbangkan rute administrasi, dosis harian maksimum, durasi asupan dan penilaian
risiko yang khas. Batas umum untuk logam berat di Amerika Serikat Pharmacopeia (USP) dan
Eropa Pharacopeia (Ph.Eur) adalah 10 ppm atau 20 ppm. Pedoman EMEA tentang "batas
spesifikasi untuk residu katalis logam atau reagen logam" menetapkan batas maksimum residu
logam yang dapat diterima dalam zat dan eksipien obat.
USP termasuk tes umum untuk logam berat dengan perbandingan visual bersamaan
dalam volume VIII dari 1905. Farmakope Eropa lahir dengan tes logam berat dengan metodologi
yang dikenal diterapkan selama berabad-abad. Tujuan dari tes ini adalah untuk mendeteksi
keberadaan kotoran logam yang tidak diinginkan melalui presipitasi sulfida di kedua asam kuat
dan basa sedang. Ini adalah antimoni, arsenik, kadmium, tembaga, besi, timah, dan seng pada
saat itu. Kemudian oleh kemajuan dalam Good Manufacturing Practices, perkembangan dalam
manufaktur peralatan produksi yang terbuat dari paduan dan peningkatan kesadaran tentang
toksisitas logam, pengujian untuk kelompok target logam meningkat, tetapi metode ini tetap
sama. Presipitasi sulfida logam dan perbandingan visual bersamaan untuk pengujian logam berat
tidak spesifik dan mengalami masalah pemulihan. Metode yang diusulkan menggunakan
pencernaan asam dari sampel diikuti dengan analisis menggunakan spektroskopi emisi plasma-
optik yang digabungkan secara induktif; ICP – OES. Pencernaan asam dari sampel dilakukan
menggunakan asam nitrat, dan hidrogen peroksida dalam oven microwave. Beberapa metode
analisis telah dilaporkan dalam literatur untuk analisis logam berat di USP dan Ph.Eur oleh
berbagai teknik ICP. Sejauh ini, pengetahuan kami saat ini tidak ada kertas yang mencakup
penentuan ICP-OES dari semua logam yang disebutkan dalam USP, Ph.Eur. dan panduan EMEA
tentang "Residu Katalis Logam atau Reagen Logam". Sampel dicerna diencerkan dengan air ke
volume yang dibutuhkan, selanjutnya sampel dianalisis untuk 23 logam. Metode yang diusulkan
menunjukkan pemulihan dalam 80-120% dengan presisi di bawah 15% pada tingkat LoQ.
2. Investigasi dan hasil
2.1. Review metode dalam farmakope
2.1.1. Amerika Serikat pharmacopeia [USP] Bab umum <231> Logam berat
USP mendaftarkan 10 logam di bawah lingkup bab ini yaitu timbal, merkuri, bismut, arsen,
antimon, timah, kadmium, perak, tembaga, dan molibdenum. Prinsip dari metode ini adalah
deteksi dan estimasi pengotor logam yang diwarnai oleh ion sulfida dengan perbandingan
terhadap standar timbal.
Dasar kimia untuk penentuan adalah pembentukan endapan koloid dari garam sulfida logam
berat larut dan membandingkan warna sampel uji dengan larutan standar timbal berwarna
Pb2 + + H2S → PbS ↓ + 2H +
USP menetapkan tiga metode persiapan sampel yang berbeda sebelum perbandingan warna akhir
tergantung pada kelarutan sampel. Pemilihan metode tergantung pada kelarutan berair sampel
dan kemampuannya untuk membentuk larutan berwarna dalam kondisi asam ringan.
Pharmazie 65 (2010) 1 15
ORIGINAL ARTIKEL
Tabel 1: Daftar Monograf USP
Metode Deskripsi singkat Jumlah Monograf

Metode-l Larutan berair 137 Metode-ll Ashing 344 Metode-lll Pencernaan basah -Kjeldhal labu
2
Metode 1 adalah untuk pembentukan non-warna dan / atau substansi yang larut dalam air, yang
diuji dengan perbandingan warna setelah bereaksi dengan ion sulfida. Metode II adalah untuk
membentuk warna dan / atau air yang larut dalam zat yang diuji oleh charring / ashing diikuti
oleh perbandingan warna setelah bereaksi dengan ion sulfida. Metode III adalah untuk zat yang
tidak cocok untuk pengujian baik dengan Metode I atau Metode II. Sampel dicerna dalam labu
Kjeldhal dan setelah solusi yang jelas tercapai, reaksi sulfida dilakukan.
Kesesuaian metode diverifikasi dengan memeriksa pemulihan timbal. Tabel perbandingan
diberikan untuk jenis persiapan sampel bersama dengan jumlah monograf dalam USP tercantum
dalam Tabel 1.
2.1.2. Metode European Pharmacopeia [Ph.Eur] Bab Umum 2.4.8 Logam berat
Ph.Eur <2.4.8> mencantumkan 15 logam di bawah lingkup bab yaitu timbal, merkuri, bismut,
arsenik, antimon, timah, kadmium, perak, tembaga , molibdenum, vanadium, paladium,
platinum, emas dan ruthenium. Ini termasuk semua sepuluh logam yang ditentukan oleh USP
dan lima logam sebagai tambahan.
Selain itu, Ph.Eur menyatakan “jika hasilnya sulit untuk dinilai, masukkan solusi melalui filter
membran ukuran pori 3 μm”. Ph.Eur menyebutkan 7 metode persiapan sampel sebelum
perbandingan warna. Metode A adalah untuk zat yang tidak berwarna dan / atau larut dalam air,
yang diuji dengan perbandingan warna setelah bereaksi dengan ion sulfida. Metode B adalah
untuk zat-zat yang tidak larut dalam pelarut dan / atau pelarut organik, yang diuji dengan
perbandingan warna setelah bereaksi dengan ion sulfida. Untuk metode A dan B batas untuk
warna sampel uji sebelum menambahkan ion sulfida harus kurang intens daripada skala derajat 6
seperti yang ditentukan dalam Ph.Eur bab Umum 2.2.2: Tingkat warna cairan. Menghilangkan
sampel uji dengan standar utama yaitu monitor dianjurkan jika natrium sulfida digunakan di
tempat tioacetamide untuk metode A & B.
Metode C adalah metode Charring yaitu charring sampel pada suhu di bawah 800◦C selama
kurang dari dua jam waktu dan kemudian MgSO4 ditambahkan setelah menyiapkan sampel uji
dalam air diuji dengan perbandingan warna setelah bereaksi dengan ion sulingan. Metode D
adalah metode Charring yaitu charring sampel pada suhu di bawah 800◦C selama kurang dari
satu jam waktu dan kemudian MgO ditambahkan setelah menyiapkan sampel uji dalam air diuji
dengan perbandingan warna setelah bereaksi dengan ion sulingan. Menghilangkan sampel uji
dengan standar lead. Ya monitor direkomendasikan untuk metode C & D.

Tabel 2: Ph.Tim Monograf Mendatang

Metode-A Larutan berair 299 Metode- B Larutan organik 50 Metode-C Ashing MgSO
Metode E adalah peningkatan konsentrasi sampel diikuti oleh perbandingan warna setelah
bereaksi dengan ion sulfida. Metode ini umumnya untuk batas bawah biasanya ≤5 ppm. Metode
F mencerna sampel dalam labu Kjeldhal dan setelah solusi yang jelas tercapai, reaksi warna
dilakukan. Metode G adalah metode pencernaan tekanan gelombang mikro; sampel dicerna
dalam polimer fluoro atau kaca gelas kuarsa sampai setelah solusi yang jelas tercapai dan reaksi
warna dilakukan. Memutar sampel uji dengan standar utama yaitu monitor direkomendasikan
untuk metode F & G. Tabel 2 membandingkan metode persiapan sampel yang berbeda (Tabel 3).
2.1.3. Catatan tentang metode farmakope Metodemetode
-logam berat farmakope mengalami kekurangan dalam spesifisitas untuk berbagai logam di
bawah lingkup dan pemulihan ketika sampel uji dikotori. Kekurangan metode pengabuan USP
<231> dan Ph.Eur <2.4.8> jelas terlihat ketika pemulihan diuji untuk semua logam dan
menemukan bahwa pemulihan kurang dari 50% (Lewen et al. 2004). Percobaan dilakukan
pengujian semua sepuluh logam yang disebutkan dalam USP dan paladium pada 20 ppm di USP
<231> Metode I / Ph.Eur <2.4.8> Metode A dan diamati bahwa warna yang dikembangkan
bervariasi untuk yang berbeda. logam. Kemungkinan kurang pelaporan dan pelaporan berlebihan
bila dibandingkan dengan standar utama diamati. Solusi standar dari semua logam adalah
kelarutan yang berbeda karena tingkat variabel reaktivitas logam dengan ion sulfida, yang juga
menciptakan masalah dalam perbandingan warna dengan standar timbal. Ini jelas menunjukkan
bahwa ada kemungkinan erro- ditambahkan setelah menyiapkan sampel uji dalam air itu adalah
hasil yang buruk dalam melaporkan keberadaan logam berat dan konten diuji dengan
perbandingan warna setelah direaksikan dengan sulfida oleh metode farmakope.
Tabel 3: Katalis logam sesuai panduan EMEA

Paparan Paparan Parenteral Paparan

# Klasifikasi PDE (μg / hari) Conc. ppm PDE (μg / hari) Conc. ppm
1. Kelas-1A: Logam dengan perhatian keamanan yang signifikan 100 10 10 ∗ 1
Platinum (Pt), Palladium (Pd) 2. Kelas-1B 100 10 10 1
Iridium (Ir), Rhodium (Rh), Ruthenium (Ru), Osmium (Os) 3. Kelas-1C 300 30 30 3
Molibdenum (Mo), Nikel (Ni), Chromium (Cr), Vanadium (V) 4. Kelas-2: Logam dengan
keamanan rendah perhatian 2500 250 250 25
Tembaga (Cu ), Mangan (Mn) 5 Kelas-3: Logam Dengan Kepedulian Minimal 13000
1300 1300 130
Besi (Fe), Seng (Zn)
16 Pharmazie 65 (2010) 1
ARTIKEL ASLI
Tabel 4: ICP OES Analisis hasil dari 23 logam

Terjemahan judul tabel

USP < 231> SPESIFIKASI LOGAM
EROPAPHARMACOPEIA METAL <2.4.8 > [Selain di atas]
PANDUAN EMISI KATALIS[Selain di atas]
HASIL UJI UNTUK MENENTUKAN REAKTIVITAS DENGAN SULFIDE ION UNTUK
LOGAM TERPENTING USP DAN PALLADIUM
Logam berat Warna terbentuk setelah bereaksi dengan sulfida Ion Clearness larutan setelah
menambahkan ion hidrogen sulfida Keterangan
2.2. Panduan EMEA tentang "Residu Katalis Logam atau Reagen Logam"
Panduan EMEA pada katalis logam atau reagen logam menetapkan 14 logam yaitu platinum,
palladium, iridium, ruthenium, rhodium, osmium, molibdenum, nikel, krom, vanadium, tembaga,
mangan, besi, dan seng. Spesifikasi yang berbeda diusulkan berdasarkan klasifikasi dan tingkat
toksisitas (Tabel 4). Panduan EMEA menyatakan hal-hal berikut tentang metode logam berat
yang ada dalam farmakope “Uji batas logam semi kuantitatif secara umum berdasarkan
pengendapan pada pH 3,5 sulfida logam campuran dijelaskan dalam beberapa publikasi
(misalnya Ph. Eur). Tes semacam itu tidak cocok untuk menentukan kadar sebenarnya dari
residu logam tertentu dalam zat farmasi ”.
2.3. Penentuan ICP-OES logam berat dalam levetiracetam Levetiracetam
farmasi aktif diuji untuk 23 logam, 10 logam yang terdaftar dalam USP dan 15 logam yang
tercantum dalam Ph. Eur dan 13 logam dalam dokumen Panduan EMEA. [USP Alat berat: 1.
Timbal, 2. Merkuri, 3. Bismut, 4. Arsenik, 5. Antimon, 6. Timah, 7. Cadmium, 8. Perak, 9.
Tembaga, 10. Molibdenum, Ph. Eur logam berat (dalam kelanjutan dari 10 logam yang
tercantum dalam USP); 11. Vanadium, 12. Palladium, 13. Platinum, 14. Emas, 15. Ruthenium,
EMEA Guidance (Kecuali logam dalam daftar logam berat USP dan Ph. Eur); 16. Iridium, 17.
Rhodium, 18. Osmium, 19. Nikel 20. Chromium, 21. Mangan, 22. Besi, 23. Seng). Panjang
gelombang untuk pemindaian dipilih berdasarkan rekomendasi pabrikan ICP-OES dan dari
literatur yang tersedia. 23 logam yang diuji tidak terdeteksi dalam levetiracetam farmasi aktif
yang diuji. Tingkat LoQ diperiksa dengan spiking dengan sampel (kriteria penerimaan 80-120%,
Tabel 4) dan dengan ketepatan yang dapat diterima (kriteria penerimaan ≤15% [n = 3]). LoQ
semua logam adalah 0,4 ppm kecuali untuk timbal dan rutenium yang LoQ-nya 0,1 ppm. LoQ
yang dicapai sejalan dengan persyaratan panduan pemalsuan ICH Q1 & bab rancangan USP
pada pengotor logam yaitu kurang dari 30% dari spesifikasi. Pemulihan untuk semua logam
berada dalam 80% hingga 120% di tingkat LoQ mulai dari 85,6% hingga 115,6%. Ketepatan
pada LoQ kurang dari 15% [n = 3] (Tabel 4).
Tabel 5: Kondisi eksperimental

3. Diskusi
Prosedur pengujian logam berat pharmacopieal presipitasi sulfida logam dan perbandingan visual
bersamaan tidak spesifik untuk semua logam dan itu memiliki masalah pemulihan. Metode ini
juga memiliki kekurangan ketidaksesuaian untuk semua matriks sampel. Metode yang diusulkan
untuk pencernaan asam dari sampel yang diikuti dengan analisis menggunakan ICP – OES dapat
digunakan untuk estimasi logam yang ditentukan dalam dokumen USP, Ph.Eur, dan EMEA
Guidance pada residu logam untuk levetiracetam atau bahan farmasi aktif lainnya. (pemulihan
harus diperiksa). Metodologi ICP-MS yang relatif mahal seperti yang disarankan dalam beberapa
makalah penelitian mungkin tidak diperlukan untuk memperkirakan logam yang terdaftar.
4. Eksperimental
4.1. Sampel Chemicals Levetiracetam diterima dari Hetero Laboratories Ltd, Hyderabad, India.
Asam Nitrat - Supra murni, Asam perkhlorat, Hidrogen peroksida dibeli dari Merck LTD yang di
atas 99,5% kemurnian. Standar logam 1000 ppm dibeli dari Merck, Darmstadt, Jerman. Air
kemurnian tinggi disiapkan menggunakan sistem pemurnian air Millipore.
4.2. Peralatan secara Induktif Ditambah Plasma-Optical Emission Spectrometer (model- Liberty,
make-Varian) digunakan untuk eksperimen. Sinyal output dipantau dan diproses menggunakan
perangkat lunak Liberty pada komputer Pentium (peralatan digital Co.).
4.3. Kondisi eksperimental Parameter instrumental yang digunakan untuk mengoperasikan
Spektrometer Emisi-Optik Induksi Berganda diberikan pada Tabel 5.
4.4. Persiapan solusi 4.4.1. Persiapan sampel Persiapan sampel dilakukan dengan metode asam
pencernaan. Sampel (1 g) dimasukkan ke dalam bejana pencernaan dan 15 mL asam nitrat dan 2
mL hidrogen peroksida ditambahkan dan campuran tersebut dicerna dalam oven microwave
sampai solusi yang jelas tercapai. Peroksida hidrogen tambahan akan ditambahkan jika ada
endapan yang diamati. Volume dikurangi menjadi sekitar 5 mL. Suhu oven dinaikkan perlahan-
lahan pada ramp bertahap sekitar 10 ◦C dan dipertahankan pada 250 ◦C selama sekitar 10 menit.
Larutan yang dicerna dicampur, dipindahkan ke botol sampel 25 mL dan dibuat dengan air
Millipore untuk dianalisis oleh ICP – OES.
4.4.2. Sediaan kosong Solusi kosong disiapkan seperti yang dijelaskan seperti yang dijelaskan di
atas tetapi tanpa sampel.
4.4.3. Persiapan standar Solusi standar kerja yang dimaksudkan disiapkan dengan mengencerkan
masing-masing solusi standar 1000 ppm. Standar kerja disiapkan dari level LOQ hingga 10 ppm
(Tabel 4).
4.4.4. Spike solusi disiapkan oleh prosedur persiapan sampel di atas dengan menambahkan
konsentrasi yang diketahui dari larutan standar logam yang dimaksudkan untuk sampel sebelum
pencernaan. Setelah digesti pada larutan dicampur dan pindahkan vial sampel redtoa25mL dan
buat dengan air pori Milli untuk analisis oleh ICP – OES. Aquaregia conc HNO3 + HCl [1: 3] v /
v digunakan sebagai pengganti hidrogen peroksida, untuk platinum, iridium dan emas.

4.4.5. Desain studi Sampel diuji untuk 23 logam, 10 logam yang terdaftar dalam USP dan 15
logam yang terdaftar di Ph. Eur dan 13 logam dalam dokumen Panduan EMEA. Tingkat LoQ
diperiksa dengan spiking dengan sampel pada tingkat yang dapat diterima 80-120% (Tabel 4)
dan dengan ketepatan yang dapat diterima kurang dari 15% [n = 3].
Pengakuan: Penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada manajemen Hetero Labs LTD dan
Lucid Laboratories Hyderabad untuk mendukung pekerjaan ini.
Referensi
Eropa Pharmacopeia Volume # 6.0 (2008) General Chapter <2.4.8>
Logam berat. Panduan EMEA (2008) Panduan tentang batas spesifikasi untuk residu
katalis logam atau reagen logam. Lewen N, Mathew S, Schenkenberger M, Raglione T (2004)
Layar ICP-MS cepat untuk logam berat dalam senyawa farmasi. J Pharm Biomed Anal 35: 739–
752. Amerika Serikat pharmacopeia Volume # 32 (2009) General Chapter <231>
Heavy metals.
18 Pharmazie 65 (2010) 1