UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

FACULTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL Y RECURSOS

NATURALES

CULTIVO DE MICROORGANISMOS

 Garcia Campos, Arlyn Zulyn 1319510183

Docente: Blg. Suyo Loayza Beatriz

Asignatura: Microbiología General

Semestre: 2016 - B

Grupo horario: 92G

Mesa: N° 2

Bellavista, Octubre del 2016

 CULTIVO MICROBIOLÓGICO

INTRODUCCIÓN

Un cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las condiciones físicas,

químicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada. En
general, podemos distinguir cultivos líquidos y sólidos en función de las características
del medio y cultivos discontinuos y continuos en función de la disponibilidad de
nutrientes en el medio.

1. OBJETIVOS
 Comparar los principales métodos de cultivo utilizados para los diferentes tipos
de microorganismos.
 Conocer los principales métodos de cultivo utilizados para los diferentes tipos de
microorganismos.

2. MARCO TEORICO

- Sembrar: Es el acto de colocar el material bacteriológico en el medio de cultivo para

promover su crecimiento y desarrollo, y subsiguiente multiplicación.
El resultado de una siembra se llama: Cultivo
· Las siembras pueden ser:
- Primarias: cuando el material es inoculado en los medios por primera vez
- Secundarias: cuando el material a inocular procede de una siembra primaria

Métodos Generales:

1) Siembra por dilución: Se toma el tubo de ensayo con medio líquido, como el caldo
simple. Se toma el material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa cargada
con el material bacteriológico, se agita, con movimientos moderados.
Medio de cultivo: Liquido
Instrumento: Asa
Finalidad: poner la bacteria en suspensión
Diluciones sucesivas
Consiste en diluir una muestra hasta conseguir muy pocas células que, tras inocularse en
un medio de cultivo, generen colonias aisladas.

2) Siembra por estrías en superficie: Se siembra el material en la superficie del agar

inclinado en un tubo de ensayo, allí se extiende por toda la superficie con el asa
bacteriológica, previamente esterilizada y cargada con el material a sembrar, haciendo
estrías no muy amplias, pero tampoco muy estrechas. Se inicia por la parte más
profunda de la superficie inclinada y se termina la estría en la parte más cerca de la
boca del tubo.
Medio de cultivo: agar base inclinado
Instrumento: asa o aguja bacteriológica

3) Siembra por estría por agotamiento: Con éste procedimiento se puede

conseguir una buena separación de las colonias y aislarlas fácilmente. Para ello se
funde el medio de cultivo, se vuelca en caja de Petri y se deja solidificar. Con el asa
previamente esterilizada se toma material de un cultivo heterogéneo y se descarga sobre
la superficie del medio formando estrías. Esto puede realizarse de varias formas:
a- Al comienzo se coloca el inoculo, luego se continúa con las estrías. Cuando se quiere
obtener colonias muy separadas se puede utilizar dos o tres placas de Petri, para lo cual
se repite la operación sin tomar con el asa nuevo material.
b- Se puede dividir la placa de Petri en cuatro cuadrantes; una vez depositado el
material en el primero, siguiendo el sentido de las agujas del reloj, se hace una estría
luego en el segundo, tercero y cuarto cuadrante sin cargar nuevamente el asa; en el
último cuadrante aparecerán las colonias aisladas
c- El inóculo se extiende sobre una pequeña zona de la placa, próxima al borde, se
esteriliza el asa y se traza otra estría a partir del depósito y así sucesivamente.
Medio de cultivo: solido en placa de Petri
Instrumento. Asa
Finalidad. Obtener colonias aisladas

4) Por picadura o punción: Con una aguja se toma el material que se quiere sembrar y
se lo introduce en el tubo, con medio semisólido. Introducir la aguja hasta el fondo,
formando un canal de punción, trayecto por el cual la retiraremos luego. Este método se
utiliza para estudiar la movilidad de las bacterias.
Medio de cultivo. Semisólido
Instrumento: aguja bacteriológica
Finalidad: Estudiar la movilidad de las bacterias

5) Siembra en TSI: (Por picadura y estrías en superficie): el TSI (Triple Sugar Iron)
es un medio que contiene glucosa, sacarosa y lactosa, hierro y un indicador que es el
rojo fenol.
En este medio sembraremos por picadura y estrías en superficie, como ya conocemos,
para estudiar los cambios que ocurrirán en superficie y profundidad. A lo largo del canal
se desarrollan los microorganismos, y según lo hagan en la parte superior o inferior del
tubo, estarán indicando su comportamiento frente a los azucares, los cambios indican lo
siguiente:
 Crecimiento microbiano en medio líquido
Si la bacteria crece en un medio líquido, en la mayoría de los casos las células que se
producen en cada división continúan su vida independientemente formándose una
suspensión de células libres.
En un cultivo discontinuo de bacterias en medio líquido, se pueden diferenciar cuatro
fases en la evolución de los parámetros que miden el crecimiento microbiano:

1.- Fase lag o de adaptación durante que los microorganismos adaptan su metabolismo
a las nuevas condiciones ambientales (abundancia de nutrientes y condiciones de
cultivo) para iniciar la fase de crecimiento exponencial.
2.- Fase exponencial o logarítmica: en ella la velocidad de crecimiento es máxima y
el tiempo de generación es mínimo. Durante esta fase las bacterias consumen a
velocidad máxima los nutrientes del medio. La evolución del número de células durante
esta fase se explica con los modelos matemáticos que describiremos a continuación.

3.- Fase estacionaria: en ella no se incrementa el número de bacterias (ni la masa u

otros parámetros del cultivo). Las células en fase estacionaria desarrollan un
metabolismo diferente al de la fase exponencial y durante ella se produce una
acumulación y liberación de metabolitos secundarios que pueden tener importancia
industrial.

Los microorganismos entran en fase estacionaria porque se agota algún nutriente

esencial del medio o porque los productos de desecho que han liberado durante la fase
exponencial hacen que el medio sea inhóspito para el crecimiento microbiano.
La fase estacionaria tiene gran importancia porque probablemente represente con
mayor fidelidad el estado metabólico real de los microorganismos en los ambientes
naturales.
4.- Fase de muerte: se produce una reducción del número de bacterias viables del
cultivo.

Crecimiento microbiano en medio sólido

Las fases, parámetros y cinética de crecimiento discutidas para el caso de los cultivos
líquidos se presentan también en cultivos sólidos. La cinética de crecimiento, en este
caso, se puede estudiar siguiendo la evolución del número de células viables por unidad
de superficie o por unidad de masa.
Cuando una célula aislada e inmóvil comienza a crecer sobre un substrato sólido, el
resultado del crecimiento al cabo del tiempo es una colonia. Por consiguiente, se
denomina unidad formadora de colonia (UFC) a una célula bacteriana viva y aislada que
si se encuentra en condiciones de substrato y ambientales adecuadas da lugar a la
producción de una colonia en un breve lapso de tiempo. Si el número inicial de bacterias
por unidad de superficie es muy alto, la confluencia de las colonias da lugar a lo que se
llama un césped cuando se realizan los cultivos en placas de laboratorio.
En el caso de microorganismos móviles (deslizantes) o en el de los hongos filamentosos
que tienen un crecimiento trófico no se producen colonias aisladas sino formaciones
más difusas o miceliares.

1. MATERIALES
 medio de cultivo ya preparado
 asa de siembra
 mechero
 tubo de ensayo 1ml de agua destilada y 9ml de chica de jora 1/10

2. PROCEDIMIENTO
Cuando se utilice exclusivamente el asa de platino o nicrón.

 Coger el asa por el cabo, en forma similar, a cuando tomamos el lápiz para
escribir.

 Introduzca el asa de alambre de platino o nicrón directamente en la zona de color

azul de la llama del mechero, hasta que se ponga al rojo vivo. Seguidamente,
proceda a introducir lentamente el resto del alambre para lograr el mismo efecto.

 Retire el instrumento de la llama y espere de 4 a 5 segundos con el objetivo de

que el asa se enfríe.

 Con el asa estéril y fría tome el volumen o fragmento de la muestra que será
sembrado y trasládelo de inmediato para el medio del cultivo seleccionado.

 Si la siembra se fuera a producir en un medio solidificado en forma de cuña en

tubo de ensayo, proceda del siguiente modo:

 Con la mano opuesta a la que sujeta el asa, tome el tubo por l porción inferior.

 Con el dedo meñique de la mano que sostiene el asa, retire del tubo el tapón de
algodón o la tapa de rosca y reténgala(no colocar el tapón o la tapa sobre la mesa
de trabajo)

 Flamee de inmediato la boca del tubo de ensayo, pasándola una o dos veces por
la llama del mechero, con el objetivo de eliminar por incineración, los
microorganismos contaminantes que se encuentran en esa zona, por la parte
externa del tubo. Esta acción calórica, provoca además una convección del
movimiento del oxígeno presente en el interior del tubo hacia afuera, debido a la
desigualdad de calor, lo cual favorece que decrezca el riesgo de contaminación.

 Introduzca el asa con el volumen o fracción de la muestra en el tubo, hasta el

fondo de la cuña. A partir de este momento, la siembra puede realizarse de
 diferentes maneras, en dependencia del tipo de microorganismo que
pretendemos que se desarrolle en ese medio de cultivo:

 Deslizando el asa, desde el fondo hacia arriba, por toda la superficie de la cuña,
trazando una línea longitudinal.

 Deslizando el asa por la superficie de la cuña desde el fondo hacia arriba,

imprimiéndole un movimiento de zigzag.

 Motiando toda la superficie de la cuña con hisopo.

 Efectuando cualquiera de las tres variantes explicadas pero adicionalmente

roturando el medio con el asa, haciendo un pequeño corte longitudinal.

 Al concluir la siembra se flamea la boca y se taponea nuevamente el tubo

procediendo a esterilizar el asa en las llama del mechero.

Si la siembra se fuera a realizar en la superficie de un medio solidificado en placa

de Petri, proceda de la siguiente manera:
Con la mano opuesta a la que sujeta el asa de platino, tome la placa de Petry, de manera
que la tapa quede hacia arriba. Con ayuda del dedo pulgar abra parcialmente la placa.

 Introduzca el asa con la muestra y proceda a deslizarla suavemente en forma de

zigzag, desde la pared, hasta cubrir aproximadamente un tercio de toda la
superficie.

 Cierre la placa y gírela varios cm, en contra de las manecillas del reloj,
procediendo a abrirla nuevamente por igual procedimiento.

 Introduzca nuevamente el asa y haga un segmento similar al anterior, de manera

que las bacterias sembradas en el primer segmento sean removidas para el
segundo.

 Repita esta operación una o dos veces más.

 Finalmente cierre la placa y colóquela sobre la mesa de trabajo boca abajo.

 Esterilice el asa de platino a la llama del mechero, en la forma explicada antes de

dejarla en el puesto de trabajo.
 Rotular y guardar para la incubación

3. CONCLUSIONES

Una vez que ya tenemos los medios de cultivo preparados, hay que inocularlos, y para
ello se necesita:
Medio de cultivo.
Condiciones óptimas de incubación como temperatura, pH, presión, condiciones
atmosféricas (concentración de O2).

Estos medios de cultivo son sólidos (cultivos en reposo), o líquidos (para cultivos en
agitación)

Al realizar una siembra de microorganismos, debemos tener en cuenta que técnica se va

a utilizar, debido a que estas varían respecto a las características del microorganismo a
tratar. También debe tenerse en cuenta la forma, espacio y el objetivo al que se quiere
llegar, pues dependiendo de esto la técnica de siembra es diferente. Un microorganismo
se puede sembrar en un medio líquido o en la superficie de un medio sólido de agar .Un
cultivo de bacterias o de hongos es con el fin de aislarlas en el medio para lograr un
mejor estudio de ellos.

CUESTIONARIO

1. ¿Cuando realizaria cultivo por diluciones?

Técnica de las diluciones en serie:

Si el microorganismo que se busca en un cultivo mixto se encuentra en mayos
cantidad que cualquiera de los otros microorganismos, es posible obtenerlo en
cultivo puro mediante una serie de diluciones en tubo, del medio de cultivo
apropiado. Cuando la muestra este muy diluida contendrá solamente la bacteria que
buscamos. Aunque es recomendable confirmar mediante el procedimiento de la
siembra en placa la pureza del cultivo que se aisló de la manera descrita.

2. ¿Como se realiza los culltivos por diluciones en alimentos y agua, explique?

Se obtienen varias diluciones del alimento. Se inoculan 0,1 ml de cada dilución en

el medio de cultivo adecuado, se incuban y se determina el número de células
viables de tres tipos de organismos por el número de colonias observadas (número
de unidades formadoras de colonias (, UFCs).

Luego se describe el recuento de hongos (filamentosos y levaduras),

microorganismos mesofilos y enterobacterias. El procedimiento se diferencia en el
medio de cultivo y condiciones de incubación (temperatura y tiempo).

Inoculación de los medios de cultivo:

1-Preparar tres placas de cada medio de cultivo para cada dilución (de la 10-2 a 10-
4
) de alimento
2- Depositar en cada placa 0,1 ml de la dilución correspondiente.
3- Distribuir uniformemente sobre la superficie del medio de cultivo con espátula
de Drigalski
4- Incubar a la temperatura y tiempos indicados
5- Determinar el número de unidades formadoras de colonias por gramo de
alimento contando las placas que contengan de 30 a 300 colonias

3. ¿Que otras formas de siembra existen?

 Técnica por agotamiento de asa

 Siembra por estrías.

 Siembra por punción.

 Siembra volumétrica.
  Siembra masiva.

4. ¿Como se realizaria siembras de muestras de suelo, explique?

1- Área de muestreo:
El primer criterio es identificar poblaciones que son diferentes, las cuales podrán ser
muestreadas independientemente. En suelos podemos tener diferencias dadas por el tipo
de suelo dentro del potrero, profundidad, posiciones topográficas (zonas altas, laderas,
bajos), zonas erosionadas o blanqueales, manejos previos diferentes, áreas que producen
distinto.
Debe tenerse en cuenta que el área mínima a dividir será aquella que pueda manejarse
separadamente en las fertilizaciones.

2- Toma de la muestra:
En cada una de las áreas delimitadas previamente (paso 1), la muestra de suelo que la
representa se obtiene realizando un conjunto de tomas individuales, que luego se
juntarán en una sola muestra compuesta. Para la toma se debe limpiar de vegetación el
punto de muestreo tomando la precaución de no eliminar suelo.
Se van depositando todas las sub muestras en un balde o bolsa y luego de que se haya
llegado a la cantidad de sub muestras deseadas hay que homogeneizar la muestra
compuesta desmenuzando los terrones y eliminando piedras, palos, restos vegetales, etc.
que esta puede tener. Si la muestra es demasiado grande se procederá a cuartear la
misma. Para ello se extiende la muestra ya homogeneizada sobre un área limpia, se
divide en cuatro trazando una cruz sobre la tierra extendida y se eliminan dos cuartos
opuestos.

BIBLIOGRAFIA
http://html.tecnicas-de-cultivo-microbiologia.html

http://www.slideshare.net/aguero-luna/medios-de-cultivos

http://www.unavarra.es/genmic/microgral/Tema%2002.-
%20Cultivo%20de%20microorganismos.pdf