Meselson dan Stahl adalah ilmuwan yang menunjukkan bahwa DNA mengikuti

model semi-konservatif. Mereka mampu menyangkal replikasi konservatif,

dimana semua DNA induk dilestarikan dalam molekul asli, setelah hanya satu
putaran replikasi DNA. Setelah empat ulangan lagi, mereka juga menyangkal
replikasi dispersif, yang menunjukkan bahwa DNA baru terdiri dari pergantian
DNA induk dan anak.

Advertisement

Model DNA Double Heliks

Model yang diusulkan Watson dan Crick pada tahun 1953 untuk
menggambarkan struktur molekul DNA adalah penemuan penting. Tapi saat itu,
banyak ilmuwan tidak yakin bahwa ini adalah model yang tepat. Sejalan dengan
model struktural DNA mereka, Watson dan Crick juga mengusulkan sebuah
model untuk menjelaskan bagaimana DNA disalin dalam sel.

Banyak ilmuwan berpikir model produksi DNA mereka tidak masuk akal, dan itu
menyebabkan beberapa orang meragukan apakah mereka benar seperti double
helix. Mari kita belajar lebih banyak tentang ilmu di balik penemuan DNA untuk
mengetahui bagaimana masalah ini diselesaikan.

Para ilmuwan telah mengenal waktu yang sangat lama bahwa organisme
membuat salinan DNA mereka. Membuat salinan tambahan dari instruksi dalam
DNA memungkinkan organisme untuk tumbuh dan berkembang biak. Kata ilmiah
untuk ‘copy‘ adalah ‘replikasi‘. Jadi ketika kita berbicara tentang DNA membuat
salinan dari dirinya sendiri, kita menyebutnya replikasi DNA.

Advertisement

Mari kita segera meninjau hal-hal yang telah kita pelajari tentang DNA. Sebuah
rantai DNA terdiri dari komponen yang lebih kecil yang disebut nukleotida.
Setiap nukleotida terdiri dari gula, fosfat dan basa nitrogen. Nukleotida dibagi
menjadi dua helai yang berhubungan bersama-sama seperti anak tangga pada
tangga, dan tangga dipelintir menjadi bentuk yang kita sebut double heliks.
Watson dan Crick pertama kali mengajukan model struktural, dan studi ilmiah
lebih lanjut telah menunjukkan bahwa mereka pada dasarnya benar. Jadi,
mengapa mereka ditantang oleh komunitas ilmiah?

Tiga Model Berbeda Untuk Replikasi DNA

Watson dan Crick telah mengusulkan bahwa untuk menggandakan dirinya, DNA
harus membuka ke pusat, semacam seperti ritsleting akan terpisah, sehingga
untai DNA baru bisa dibangun di atas helai terbuka. Mengikuti aturan bebas
pemasangan basa, adenin akan berpasangan dengan timin, dan sitosin akan
berpasangan dengan guanin. Ide ini disebut model template (cetakan), karena
salah satu untai DNA berfungsi sebagai cetakan untuk yang baru.

Watson dan Crick menduga bahwa model ini akan menghasilkan dua untai
ganda DNA baru, masing-masing dengan satu helai induk (atau template) DNA
dan satu untai DNA anak (atau yang baru disintesis) . Mereka menyebut
model semi-konservatif, karena setengah dari DNA induk itu dilestarikan di
setiap molekul DNA baru.
 Model Replikasi DNA

Para ilmuwan melihat DNA heliks ganda dan bertanya-tanya bagaimana di dunia
ini mungkin bisa membuka diri tanpa menjadi kusut atau terkoyak. Jadi mereka
pikir beberapa ide lain tentang bagaimana replikasi DNA bekerja. Salah satu
hipotesis, disebut modeldispersif, menyarankan bahwa DNA hanya disalin
menjadi potongan pendek pada suatu waktu, menghasilkan untai baru yang
berganti-ganti induk dan anak DNA. Ide lain, yang disebut model
konservatif, berpendapat bahwa DNA tidak terbelah sama sekali, tapi entah
bagaimana untaian induk terus utuh sambil membuat salinan sama sekali baru
dan terpisah.

Tak ada yang tahu pasti bagaimana replikasi DNA benar-benar bekerja sampai
dua ilmuwan bernama Matthew Meselson dan Franklin Stahl merancang
percobaan cerdik pada tahun 1958. Mereka menyadari bahwa mereka bisa
menguji semua tiga model sekaligus dengan melacak apa yang terjadi pada
salah satu untai DNA induk karena menghasilkan serangkaian eksemplar.

Setiap model memprediksi distribusi yang berbeda dari DNA induk mengikuti
putaran replikasi DNA. Jika Meselson dan Stahl mampu melacak induk dengan
DNA baru, mereka juga bisa mendukung atau menolak prediksi dari tiga model
yang berbeda.

Percobaan Meselson-Stahl
Meselson dan Stahl memutuskan cara terbaik untuk menandai DNA induk akan
mengubah salah satu atom dalam molekul DNA induk. Ingat bahwa nitrogen
ditemukan dalam basa nitrogen masing-masing nukleotida. Jadi mereka
memutuskan untuk menggunakan isotop nitrogen untuk membedakan antara
induk dan DNA yang baru disalin. Isotop nitrogen memiliki neutron tambahan
dalam inti, yang membuatnya lebih berat.

Anda dapat melihat dari tabel periodik yang sebagian atom nitrogen memiliki
berat atom 14. Kita menyebutnya atom N-14. Tapi sebuah isotop dengan
tambahan neutron memiliki berat 15, jadi kita menyebutnya N-15. Para ilmuwan
memutuskan untuk memulai dengan molekul DNA induk yang hanya berisi N-15.
Kalau saja N-14 nukleotida yang tersedia selama replikasi DNA, mereka akan
mampu membedakan mana bagian datang dari untai ganda asli dan bagian
mana telah dibuat selama proses replikasi.

Untuk membuat DNA harus melalui banyak putaran replikasi, Meselson dan
Stahl memanfaatkan kekuatan reproduksi umum bakteri E. coli. Mereka
memastikan bahwa batch pertama dari bakteri yang terdapat hanya DNA N-15.
Kemudian, mereka menempatkan bakteri menjadi media yang hanya
mengandung atom N-14. Dengan begitu, setiap kali bakteri direproduksi, mereka
akan dipaksa untuk menggabungkan N-14 ke dalam DNA baru mereka. Para
ilmuwan duduk kembali dan membiarkan bakteri mulai bekerja.

Dengan setiap generasi baru bakteri, Meselson dan Stahl mengambil sampel
sehingga mereka bisa melihat bagaimana DNA N-15 sedang didistribusikan
dalam molekul anak. Sekarang, Anda mungkin bertanya-tanya, bagaimana
mereka bisa membedakan antara DNA N-15 dan N-14 ? Ini tidak seperti Anda
benar-benar dapat melihat sebuah isotopnitrogen. Bagaimana para ilmuwan
mengetahui berapa banyak N-15 berada di dalam setiap molekul?

Jawabannya adalah berat atom. Karena N-15 memiliki satu neutron tambahan,
itu akan sedikit lebih berat dari N-14 dan karena itu membuat molekul DNA lebih
padat. Kita dapat memisahkan molekul DNA berdasarkan perbedaan dalam
kepadatan mereka. Untuk melakukan ini, kita menggunakan sentrifus, sebuah
perangkat tabung reaksi yang berputar dengan kecepatan yang sangat tinggi.
Ketika tabung reaksi diputar dalam sentrifugal, semua isi didorong ke arah
bawah. Zat yang tenggelam terberat jauh di bawah tabung, dan zat ringan
mengapung. Jadi, jika Anda menerapkan gaya sentrifugal untuk campuran dua
jenis DNA, berat DNA N-15 tenggelam untuk tingkat yang lebih rendah daripada
molekul N-14.

Setiap kali Meselson dan Stahl ingin mengambil sampel dari DNA bakteri,
mereka harus memotong organisme kecil dan mengosongkan semua isi ke
dalam tabung reaksi. Mereka dicampur dalam larutan garam dan kemudian
memutar tabung reaksi selama berjam-jam untuk membuat zat memisah.
Kemudian mereka menggunakan teknik khusus untuk melihat seberapa jauh
molekul DNA tenggelam di dalam tabung.

Ketika sampel kelompok bakteri pertama mereka, Meselson dan Stahl melihat
sebuah pita gelap dalam tabung tes di mana DNA N-15 telah tenggelam dan
berkumpul di satu tempat. Tapi setelah mereka membiarkan bakteri berkembang
biak, mereka mendapat hasil yang jauh berbeda dalam sampel mereka. DNA
masih tenggelam di dalam tabung, tetapi tidak hampir sejauh generasi pertama.
Ini adalah bentuk ringan dari DNA, yang berarti bahwa itu tidak benar-benar
dibuat dengan isotop N-15. Setelah satu replikasi, semua DNA telah diubah
menjadi hibrida DNA N-15 dan N-14 .

Hasil Dari Percobaan

Segera, Meselson dan Stahl tahu bahwa mereka bisa mengesampingkan salah
satu dari tiga model. Model konservatif, yang menunjukkan bahwa molekul DNA
asli tetap utuh,harus palsu. Model konservatif memperkirakan bahwa percobaan
sentrifugasi akan menghasilkan dua pita yang berbeda – satu pita yang mewakili
DNA dengan hanya N-15 dan satu pita yang mewakili DNA dengan hanya N-14.
Karena mereka mengamati hanya satu pita dengan DNA kepadatan menengah,
mereka tahu bahwa setiap satu dari molekul DNA baru masing-masing
terkandung campuran dari kedua bentuk nitrogen.

Tapi Meselson dan Stahl masih harus mencari tahu apakah replikasi DNA
mengikuti dispersif atau model semi-konservatif. Karena kedua model akan
menghasilkan hibrida induk dan anak DNA, pita menengah masih konsisten
dengan kedua model. Dalam rangka untuk mencari tahu apa yang sebenarnya
terjadi, Meselson dan Stahl harus membiarkan bakteri tetap bereplikasi dan
mempelajari sampel DNA setelah setiap generasi.

Sebelum kita mencari tahu apa yang sebenarnya terjadi, mari kita berpikir
tentang kemungkinan yang tersisa untuk percobaan ini. Bagaimana kita akan
tahu apakah replikasi DNA adalah dispersif atau semi-konservatif? Apa yang kita
harapkan untuk melihat apakah salah satu dari model yang mungkin itu benar?

Pertama, kita akan menganggap model dispersif benar menggambarkan

replikasi DNA. Dalam replikasi dispersif, DNA disalin dalam potongan pendek,
dan hasilnya adalah molekul yang bergantian potongan DNA induk dengan anak
DNA. Setelah satu replikasi, molekul baru akan 50% induk dan 50% anak DNA.
Setelah replikasi lain, hasilnya akan menjadi 25% dari induk asli dan 75% DNA
baru disalin.

Jadi dalam setiap generasi, jumlah DNA induk akan dipotong setengah. Dalam
kasus percobaan kami, generasi kedua ini akan memiliki DNA 25% N-15 dan
75% N-14 . Pada generasi ketiga, hanya akan 12,5% dari DNA N-15. Jadi kita
akan selalu berharap untuk melihat salah satu pita DNA terus menerus dalam
tabung tes. Pita ini akan bergerak sedikit lebih tinggi pada tabung pada setiap
generasi ketika molekul DNA menjadi semakin ringan dan lebih ringan.

Di sisi lain, data apa yang kita harapkan untuk melihat apakah model semi-
konservatif yang benar? Dalam model ini, setiap molekul DNA baru akan berisi
satu untai DNA induk penuh terkait di tengahnya dengan satu untai DNA penuh
anak. Setelah satu replikasi, semua DNA baru akan memiliki kepadatan yang
sama. Tapi, setelah putaran kedua replikasi, dua jenis DNA akan muncul:
beberapa hibrida N-15 dan N-14, seperti babak sebelumnya, dan beberapa yang
sepenuhnya terdiri dari DNA N-14.

Hal ini karena untai induk asli, ketika terpecah satu sama lain di awal,
dilestarikan dan disimpan sebagai helai DNA N-15 terus menerus. Mereka helai
induk dapat bermitra dengan N-14 nukleotida baru, tetapi mereka selalu akan
terhubung sepanjang rantai. Oleh karena itu, ketika jumlah N-14 akan tumbuh
dan berkembang atas setiap generasi, akan selalu ada dua molekul DNA yang
mengandung satu untai DNA induk masing-masing . Dalam percobaan, kita akan
mengharapkan untuk melihat dua band terpisah muncul dalam tabung uji: satu
dengan pertumbuhan populasi DNA N-14 dan satu dengan hibrida N-15 awal.

Ternyata, Meselson dan Stahl mengamati pemisahan band yang menjadi lebih
jelas pada setiap generasi baru. Mereka hanya harus mengamati empat putaran
replikasi sebelum mereka tahu pasti bahwa model semi-konservatif itu benar.

Ini adalah terobosan besar dalam bidang biologi karena begitu banyak ilmuwan
telah berdebat tentang masalah replikasi DNA. Meselson dan Stahl mampu
membantah dua hipotesis, dan sangat mendukung yang ketiga, hanya dengan
melakukan percobaan cerdik sederhana.