I. Objetivos:
2. Material:
2.1 Material Biológico:
• 1 Kg de suelo (cernido) por mesa.
• Hidrolizado de la caseína de leche.
2.2 Material de Laboratorio:
• Placas Petri estéreles (4)/mesa.
• Pipetas (1 de mL).
• Cocina eléctrica.
• Guantes impermeables.
• Frascos con 4.5Ml de diluyente. 8 por mesa.
• 4 Frascos conteniendo 200 mL de agua de caño estéril.
• Espátulas.
• Cernidores.
• Bolsas de plástico.
• Mascarillas.
• Balanza.
• Incubadora.
2.3 Medio de Cultivo:
• Medio de cultivo para recuento (PCA).
• Agua de caño estéril (200 mL aprox.).
Método:
En el método de vertido en placa las suspensiones de células microbianas se diluyen
antes de su siembra en placa. Se sigue esta técnica cuando la muestra contiene tantos
microorganismos, que la dilución no se puede realizar en una sola etapa. Por ejemplo,
una suspensión con mil millones de células por mililitro debe ser diluida 107 veces
para obtener una suspensión con un centenar de células por mililitro, Por tanto, se
realizan diluciones seriadas (en varias etapas), normalmente de diez en diez, pero a
veces de cien en cien. Para realizar diluciones de diez en diez, se añade 1 ml de la
suspensión bacteriana a 9 ml (el medio estéril o solución salina, igualmente estéril).
Se agita vigorosamente para diluir las células y el proceso se repite cuantas veces sea
necesario.
En el método de vertido en placa, las muestras diluidas se mezclan con agar fundido y
se vierten en placa. Algunas colonias quedarán embebidas en el agar y otras crecerán
en la superficie. Las colonias superficiales se extenderán y serán más grandes.
En esta técnica las placas se incuban hasta la aparición de las colonias. Como en el
método de siembra por estría, no existe la seguridad de que las colonias que aparecen
en las placas sembradas sean cultivos axénicos hasta que se repita el proceso. Presenta
la ventaja de que permiten obtener un mayor número de colonias aisladas que el
método de siembra por estría, por tanto se eligen cuando se ha de seleccionar una
cepa a partir de una mezcla con varios tipos de microorganismos.
Es necesario indicar, que esta forma de siembra no es capaz de poner de manifiesto
todos los microorganismos viables presentes en una muestra, debido a la variedad de
necesidades nutritivas y condiciones físicas exigidas por los diferentes tipos de
microorganismos, por lo cual el recuento en placa proporciona sólo una aproximación
de la población total presente en la muestra.
III. Procedimiento:
IV. Resultados:
En el recuento de placas de la muestra (suelo cernido) sin caseína de leche (al 1% de
concentración), se obtuvieron cuatro recuentos para todas las mesas, dos por cada
disolución: 10-6 y 10-7.
Pero debido a que el número óptimo de colonias que se han formado debe oscilar
entre 30 y 300 microorganismos, se descarta la disolución de 10-7, quedando como
resultado 4,45 * 107 UFC/g de suelo.
Pero debido a que el número óptimo de colonias que se han formado debe oscilar
entre 30 y 300 microorganismos, se descarta la disolución de 10-7, quedando como
resultado 1,5015 * 1010 UFC/g de suelo.
V. Discusión:
Se realizaron diversos conteos de placas, con dos muestras diferentes, la primera
sólo con agua y la segunda con hidrolizado de caseína de leche, con lo cual se
obtuvo 4,45 * 107 UFC/g de suelo y 1,5015 * 1010 UFC/g de suelo
respectivamente.
En los dos casos, en algunos cultivos, el número de colonias sobrepaso o no
alcanzo el número de colonias permitidas para un aceptable grado de
confiabilidad con respecto al experimento, es decir estuvieron fuera del rango de
30 a 300 UFC/g de suelo.
VI. Conclusiones:
Imagen N°9: Suelo (cernido) humedecido Imagen N°12: Conteo de las colonias en
con agua destilada. las placas.