Partes del microscopio óptico y sus funciones[editar]

Tubo, cremallera de enfoque y tornillo macrométrico.

Oculares intercambiables de diferentes aumentos.

Tornillos macro y micrométrico.

Objetivos desmontados.

Diafragma - Condensador.

Platina y base.

Revólver.

1 * Ocular: lente situada cerca del ojo del observador. Capta y amplía la imagen formada en los objetivos.
2 * Objetivo: lente situada en el revólver. Amplía la imagen, es un elemento vital que permite ver a través de los
oculares.
3 * Condensador: lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.
4 * Diafragma: regula la cantidad de luz que llega al condensador.
5 * Foco: dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
6 * Tubo: es la cámara oscura que porta el ocular y los objetivos. Puede estar unida al brazo mediante una
cremallera para permitir el enfoque.
7 * Revólver: Es el sistema que porta los objetivos de diferentes aumentos, y que rota para poder utilizar uno u
otro, alineándolos con el ocular.
8 * Tornillos macro y micrométrico: Son tornillos de enfoque, mueven la platina o el tubo hacia arriba y hacia
abajo. El macrométrico permite desplazamientos amplios para un enfoque inicial y el micrométrico desplazamientos
muy cortos, para el enfoque más preciso. Pueden llevar incorporado un mando de bloqueo que fija la platina o el
tubo a una determinada altura.
9 *Platina: Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que se coloca la preparación, que permite
el paso de los rayos procedentes de la fuente de iluminación situada por debajo. Dos pinzas sirven para retener el
portaobjetos sobre la platina y un sistema de cremallera que permite mover la preparación. Puede estar fija o unida
al brazo por una cremallera para permitir el enfoque.
10 *Brazo: Es la estructura que sujeta el tubo, la platina y los tornillos de enfoque asociados al tubo o a la platina.
La unión con la base puede ser articulada o fija.
11 * Base o pie: Es la parte inferior del microscopio que permite que éste se mantenga de pie.

Sistema de iluminación[editar]
La fuente de luz (1), con la ayuda de una lente (o sistema) (2), llamada colector, se representa en el plano
del diafragma iris de abertura (5) del condensador (6). Este diafragma se instala en el plano focal anterior del
condensador (6) y puede variar su abertura numérica. El diafragma iris (3) dispuesto junto al colector (2) es el
diafragma de campo. La variación del diámetro del diafragma de campo permite obtener su imagen igual al campo
visual lineal del microscopio. La abertura numérica del condensador (6) supera, generalmente la de la abertura del
objetivo microscópico: es la iluminación que permite ver mejor lo que queremos observar como las células o las
membranas celulares entre otros.

 PARTES, MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO

Objetivo

Reconocer la importancia del microscopio

Manejar correctamente el microscopio.
Manejar correctamente el microscopio.
Señalar los componentes mecánicos y ópticos que constituyen el microscopio.
Partes de un microscopio óptico

Sistema óptico

OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo.

OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta.

CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.

DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.

FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

Sistema mecánico

SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.

PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación.

CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular.

REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los
objetivos.

TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y micrométrico que

consigue el enfoque correcto.

Manejo del microscopio óptico

Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina

completamente. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería
estar en esas condiciones.

Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.

Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10

aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.

Para realizar el enfoque:

Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo

macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que
se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de
ellos o ambos.

Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la

preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el
micrométrico hasta obtener un enfoque fino.

Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser
suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de
objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo
anterior y repetir la operación desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca
distancia de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances:
incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con
aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con el objetivo de
inmersión.

Empleo del objetivo de inmersión:

Bajar totalmente la platina.

Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la
zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.
Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el
de x40.

Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.

Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión.

Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la
gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la
lente.

Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de

inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo
de accidente es muy grande.

Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver
a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea
enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3.

Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el

objetivo de menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar la
preparación de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición
de observación.

Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica.
Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio.

Mantenimiento y precauciones

1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en

posición de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no
sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.
2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su
funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma
prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.
3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy
suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.
4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.
5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el
objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos recomendable).
En cualquier caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el
aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de
alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se
aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción.
6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico,
platina, revólver y condensador).
7. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la
preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de
objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a
través del ocular.
8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún
líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido
en xilol.
9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica
y, al acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos.

 MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

Nuestra capacidad para observar detalles estructurales de las células depende de
manera importante de las herramientas con las que contemos. El microscopio compuesto
ha sido de crucial importancia para el desarrollo de la ciencia y sigue siendo una
herramienta básica en la investigación de rutina.

Objetivos

Reconocer la importancia del microscopio electrónico.

Manejar correctamente el microscopio electrónico.
Manejar correctamente el microscopio.
Señalar los componentes mecánicos y ópticos que constituyen el microscopio.
Realizar montajes húmedos.
Comprobar las propiedades ópticas que posee el microscopio.

Materiales, Equipos y Reactivos

Microscopio compuesto eléctrico, portaobjetos, agua destilada, pelo de ceja, recorte de

periódico (letras), hilo y cristales de sal ó azúcar.

Procedimiento

Manejo del Microscopio

Observación a través del microscopio: Para el uso correcto del mismo es importante y
necesario seguir los pasos que se describen a continuación.

Iluminación
Prenda el microscopio con el objetivo de menor aumento (10X), observe por el ocular y
ajuste la luz hasta lograr una iluminación uniforme en el campo de visión. El condensador
debe estar cerca de la platina y el diafragma abierto.

Enfoque
Actualmente los microscopios poseen lentes parafocales, es decir, tienen un sistema
sincronizado de enfoque a diferentes aumentos. Así una vez enfocada la preparación a
menor aumento, queda enfocada al utilizar el objetivo de mayor aumento. Para un ajuste
mayor, se debe mover ligeramente el tornillo micrométrico. Por el contrario, los
microscopios antiguos tenían lentes no parafocales y se corría el riesgo que al girar el
revólver y pasar de una lente de menor aumento a una lente de mayor aumento, ésta
última tropezara con la preparación.

Para el enfoque el procedimiento técnico es el siguiente:

Enfoque visual a menor aumento

Se coloca la preparación centrada en la platina, mirando por fuera, se acerca el objetivo
de menor aumento a la lámina, girando el tornillo macrométrico hasta que quede a una
distancia ligeramente menor de la distancia de trabajo.
Ahora se enfoca girando el tornillo macrométrico hasta ver la imagen del preparado. Una
vez obtenida la imagen, complete el enfoque con el tornillo micrométrico o de ajuste fino.
Si es necesario, gradúa la intensidad luminosa ajustando la apertura del diafragma y la
altura del condensador. Evite sobre iluminación.

Enfoque visual a mayor aumento

Una vez observada la preparación a menor aumento, pase a posición de trabajo el
objetivo de mayor aumento, girando suavemente el revólver. Para el caso de microscopio
con lentes parafocales, queda enfocado automáticamente y se afina el enfoque con el
tornillo micrométrico. Si el microscopio posee lentes no parafocales, la lente puede
tropezar con la preparación, entonces levante el objetivo empleando el tornillo
macrométrico y proceda a acercar el objetivo a la preparación 8 menos de 1mm
observando por fuera y no a través del ocular. Enfoque la imagen con el tornillo
micrométrico alejando siempre el objetivo de la preparación.

Enfoque visual con el objetivo de inmersión (100X)

Coloque una gota muy pequeña de aceite de inmersión sobre la laminilla cubreobjetos (si
la preparación es un extendido fijado, coloque la gota de aceite de inmersión
directamente sobre la lámina) y proceda como en el caso anterior, teniendo en cuenta
que la distancia de trabajo es menor con el objetivo de inmersión y se requiere mayor
intensidad de luz.

Precaución
Una vez realizada la observación limpia con papel de lentes el objetivo de inmersión pues
al solidificarse se puede dañar la lente. Para lo anterior, tenga cuidado de girar el revólver
directamente al objetivo de menor aumento sin devolverlo ya que mojaría el objetivo de
mayor aumento con aceite de inmersión. Finalmente retira la lámina del microscopio.

Recomendaciones para el cuidado del microscopio

Al limpiar las partes ópticas utiliza solo papel de lentes y xilol no use pañuelo. En caso de
no lograr una limpieza apropiada, solicite ayuda al profesor. En las preparaciones de
montajes húmedos o coloreados no debe quedar líquido sobre la laminilla o debajo de la
lámina. Las preparaciones no deben tocar la lente de los objetivos. Al colocar o retirar una
lámina, el objetivo de menor aumento debe estar en posición de trabajo. Cuando utilice
micro preparados fíjese que la laminilla quede en la cara superior de la lámina, es decir
mirando hacia el objetivo. Mantenga seca y limpia la platina del microscopio. Si se
derrama sobre ella algún líquido, séquela utilizando panola o papel absorbente. Limpie
siempre el objetivo de inmersión después de usarlo, solo con papel para lente o papel de
arroz. No debe retirar ningún componente óptico o mecánico del microscopio, ni
intercambiar los oculares. Una vez utilizado, el microscopio debe quedar limpio y con el
objetivo de menor aumento en posición de trabajo. Para transportar el microscopio tómelo
del brazo del aparato con una mano y con la otra de la base, siempre en posición vertical
pues al voltearlo se pueden caer las lentes y el espejo.

Realizar un montaje húmedo de una letra pequeña de un periódico; Haga el montaje de la

siguiente forma:

Sobre una lámina porta objetos limpia, coloque una gota de agua. Dentro de la gota de
aguas ponga la letra impresa. Acerque la laminilla en posición oblicua y apoyando una
arista sobre la lámina al lado de la gota, déjela caer suavemente sobre esta. La
preparación debe quedar totalmente cubierta y embebida en el líquido. Evite el exceso de
agua colorante en preparaciones coloreadas, en los bordes de la laminilla o sobre esta
retire el sobrante con papel absorbente. Antes de colocar la lámina sobre la platina fíjese
que esté completamente seca en la parte inferior. Si usted ve que la preparación se está
deshidratando puede agregar agua en forma de gota y al lado de la laminilla.

Observar el montaje a través del microscopio

Inicie sus observaciones con el objetivo de menor aumento, el cual le brindará una
imagen panorámica amplia y con mayor profundidad de foco. Luego pase a mayor
aumento y precise las estructuras. Siéntese en posición correcta y cómoda para observar
y dibujar. Acostúmbrese a observar con ambos ojos abiertos eso le evitará la fatiga
ocular.

Desarrolle:

¿Cuáles son los pasos para la elaboración de un montaje húmedo?

¿Cómo se procede para lograr una iluminación adecuada?
¿Cómo se enfoca el microscopio al iniciar la observación?
¿Cómo es la posición de la imagen resultante?
¿Al mover el portaobjetos de derecha a izquierda a qué lado se mueve la imagen?
¿Con qué objetivo se logra una imagen completa o un campo de visión más grande?
¿Con qué objetivo se observa mejor los detalles de una imagen?
¿Con el objetivo de mayor aumento se necesita mayor o menor iluminación de la que se
necesita con el de menor aumento?

Observar una hebra de hilo, los cristales de sal o azúcar y el pelo de ceja ; Realice un
montaje húmedo de cada uno; Obsérvelos al microscopio siguiendo los pasos anteriores.

Conclusiones finales:

¿Cuál es la utilidad del microscopio?

¿Qué imagen produce el microscopio simple?
¿Qué imagen produce el microscopio compuesto?
¿Qué imagen produce el objetivo?
¿Qué es poder de resolución?
¿Qué imagen produce el ocular?
¿Para qué sirve el aceite de inmersión?

TIPOS DE MICROOSCOPIO:
Un microscopio óptico es un microscopio basado en lentes ópticas. También se le conoce como microscopio
de luz, (que utiliza luz o «fotones») o microscopio de campo claro. El desarrollo de este aparato suele asociarse
con los trabajos de Anton van Leeuwenhoek. Los microscopios de Leeuwenhoek constaban de una única lente
pequeña y convexa, montada sobre una plancha, con un mecanismo para sujetar el material que se iba a examinar
(la muestra o espécimen). Este uso de una única lente convexa se conoce como microscopio simple, en el que se
incluye la lupa, entre otros aparatos ópticos.

Microscopio simple

Microscopio simple de Leeuwenhoek. La muestra se colocaba en la punta del

tornillo, en frente de la única lente, de la que destaca la pequeñez de su diámetro.

Un microscopio simple es aquel que utiliza una sola lente para ampliar las
imágenes de los objetos observados. Es el microscopio más básico. El
ejemplo más clásico es la lupa.1
El microscopio óptico estándar, llamado microscopio compuesto, utiliza dos
sistemas de lentes alineados, el objetivo y el ocular.

Microscopio de luz ultravioleta

Microscopio de luz fluorescencia - Las lentes del objetivo, que habitualmente se componen de vidrio se
sustituyen por lentes de cuarzo, y la iluminación se produce por lámparas de mercurio. No usa filtros y se observa
en placas fotográficas. La variedad de fluorescencia, si usa filtros, y la observación es directa.
Microscopio de luz ultravioleta – La imagen en el microscopio de luz ultravioleta depende de la absorción de esa
luz por las moléculas de la muestra. La fuente de luz ultravioleta tiene una longitud de onda de 200 nm, por lo tanto
puede alcanzar una resolución de 100 nm. La microscopia ultravioleta no es muy diferente del funcionamiento de
un espectrofotómetro pero sus resultados son registrados en fotografías. La muestra no se puede observar
directamente a través del ocular porque la luz ultravioleta puede dañar la retina. El método sirve para detectar
ácidos nucleicos, proteínas que contienen determinados aminoácidos. Mediante longitudes de ondas específicas
para la iluminación se puede obtener mediciones espectrofotométricas para cuantificar el ADN y el ARN de cada
célula.
El microscopio de luz ultravioleta utiliza el rango ultravioleta del espectro luminoso en lugar del rango visible, bien
para aumentar la resolución con una longitud de onda menor o para mejorar el detalle absorbiendo selectivamente
distintas longitudes de onda de la banda ultravioleta. Dado que el vidrio no transmite las longitudes de onda más
cortas de la luz ultravioleta, los elementos ópticos de estos microscopios están hechos con cuarzo, fluorita o
sistemas de espejos iluminados. Además, dado que la radiación ultravioleta es invisible, la imagen se muestra con
fosforescencia (véase Luminiscencia), en fotografía o con un escáner electrónico.
Microscopio de fluorescencia
La fluorescencia es uno de los fenómenos físicos más utilizados en microscopía biológica y analítica,
principalmente por su alta sensibilidad y especificidad.
El microscopio de fluorescencia es una variación del microscopio de luz ultravioleta en el que los objetos son
iluminados por rayos de una determinada longitud de onda. La imagen observada es el resultado de la radiación
electromagnética emitida por las moléculas que han absorbido la excitación primaria y reemitido una luz con mayor
longitud de onda. Para dejar pasar sólo la emisión secundaria deseada, se deben colocar filtros apropiados debajo
del condensador y encima del objetivo. 1
La microscopía de fluorescenica se utiliza para detectar sustancias con
autofluorescencia como la vitamina A o sustancias marcadas con
fluorocromos. Además permite determinar la distribución de una solo
especie de molécula, su cantidad y ubicación en el interior de la célula.
Se pueden realizar estudios de colocalización e interacción, así como
observar las concentraciones de iones y procesos inta y extracelulares
como la endocitosis y exocitosis.2
La fluorescencia es un fenómeno de lumuniscencia de vida corta, y es la
propiedad que tienen ciertas moléculas denominadas fluorocromos y
fluoróforos.
Fluorocromos: Molécula capaz de absorber fotones y emitir fotones d4e
menor energía (mayor longitud de onda).
3
Fluoróforos: Parte del fluorocromo responsable de la emisión de fluorescencia

Microscopio de luz polarizada

Microscopio petrográfico usado para el estudio de secciones delgadas de roca en petrografía.

Instrumento para ampliar imágenes mediante lentes de aumento. Usado durante la exploración de petróleo para el análisis de
muestras de rocas.

El microscopio petrográfico, microscopio polarizador o de luz polarizada es un microscopio óptico al que se le

han añadido dos polarizadores (uno entre el condensador y la muestra y el otro entre la muestra y el observador).
El material que se usa para los polarizadores son prismas de Nicol o prismas de Glan-Thompson (ambos
de calcita), que dejan pasar únicamente la luz que vibra en un único plano (luz polarizada). Esta luz produce en el
campo del microscopio claridad u oscuridad, según que los dos nícoles estén paralelos o cruzados.
Algunos compuestos inorgánicos responden al efecto de la luz, éstos tienen un alto grado de orientación molecular
(sustancias anisótropas), que hace que la luz que los atraviesa pueda hacerlo en determinados planos vibratorios
atómicos.
El prisma de Nicol permite el paso de luz en un solo plano, así la calcita gira la posición de polarización, facilitando
la identificación de sustancias que extinguen la luz. Al fenómeno de extinción de luz causado por estos planos
atómicos y orientaciones moleculares se llama birrefringencia.
Este tipo de microscopio se usa para poder identificar sustancias cristalinas (minerales) o fibrosas (como
el citoesqueleto), sustancia amiloide, asbesto, colágeno, cristales de uratos, queratina, sílice, polen, etc.

Microscopio de campo oscuro

La microscopía de campo obscuro produce imágenes con un fondo oscuro.

Diagrama que ilustra la trayectoria de la luz a través de un microscopio de campo obscuro.

El microscopio de campo obscuro (en inglés: Dark field microscope or dark ground microscope) es ?

un microscopio que utiliza un haz enfocado de luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre la
muestra. El objeto iluminado dispersa la luz y se hace así visible contra el fondo obscuro que tiene detrás, como las
partículas de polvo iluminadas por un rayo de sol que se cuela en una habitación cerrada. Por ello las porciones
transparentes del espécimen quedan oscuras, mientras que las superficies y partículas se ven brillantes, por la luz
que reciben y dispersan en todas las direcciones, incluida la del eje óptico que conecta el espécimen con la pupila
del observador. Esta forma de iluminación se utiliza para analizar elementos biológicos transparentes y sin
pigmentar, invisibles con iluminación normal, sin fijar la muestra, es decir, sin matarla. También es bastante utilizado
en la observación de muestras metalográficas para la observación de detalles en superficies con alta reflectancia.
El objetivo recibe la luz dispersa o refractada por las estructuras del espécimen. Para lograrlo, el microscopio de
campo oscuro está equipado con un condensador especial que ilumina la muestra con luz fuerte indirecta. En
consecuencia el campo visual se observa detrás de la muestra como un fondo oscuro sobre el cual aparecen
pequeñas partículas brillantes de la muestra que reflejan parte de la luz hacia el objetivo.
Microscopio de contraste de fases
El microscopio de contraste de fases permite observar células sin colorear y resulta especialmente útil para
células vivas.1 La mayoría de los organismos vivos no pueden ser teñidos debido a que los colorantes utilizados
pueden dañar su estructura celular hasta el punto de su muerte. Esta técnica de microscopía aprovecha las
pequeñas diferencias de los índices de refracción en las distintas partes de una célula y en distintas partes de una
muestra de tejido. La luz que pasa por regiones de mayor índice de refracción experimenta una deflexión y queda
fuera de fase con respecto al haz principal de ondas de luz que pasaron la muestra. Aparea otras longitudes de
onda fuera de fase por medio de una serie de anillos ópticos del objetivo y del condensador, anula la amplitud de la
porción fuera de fase inicial del haz de luz y produce un contraste útil sobre la imagen. Las partes oscuras de la
imagen corresponden a las porciones densas del espécimen; las partes claras de la imagen corresponden a
porciones menos densas. Por lo tanto estos microscopios se utilizan para observar células vivas, tejidos vivos y
cortes semifinos no coloreados.2
Dos modificaciones del microscopio de fase son el microscopio de interferencia y el microscopio de interferencia
diferencial.[cita requerida]
Su inventor fue en 1932 el físico neerlandés Frits Zernike, lo que junto al método de contraste de fases le valió para
ganar el Premio Nobel de Física en 1953.

Microscopio confocal

Principios en los que se basa la microscopía confocal.

El microscopio confocal es un microscopio que emplea una técnica óptica de imagen para incrementar
el contraste y/o reconstruir imágenes tridimensionales utilizando un "pinhole" espacial (colimador de orificio
delimitante) para eliminar la luz desenfocada o destellos de la lente en especímenes que son más gruesos que
el plano focal.1 El pinhole es una apertura localizada delante del fotomultiplicador que evita el pasaje de
fluorescencia de las regiones de la muestra que no están en foco, la luz que proviene de regiones localizadas por
encima o por debajo del plano focal no converge en el pinhole y no es detectada por el fotomultiplicador. Esta
técnica ha ido adquiriendo cada vez mayor popularidad entre las comunidades científica e industrial. Se aplica
típicamente en las ciencias biológicas y en la inspección de semiconductores.

Microscopio compuesto
Objetivos de un microscopio moderno.

Un microscopio óptico compuesto, o simplemente microscopio compuesto, es un microscopio que cumple su

misión —producir una imagen ampliada de una muestra de algo— por medio de dos sistemas ópticos (hecho cada
uno de una o más lentes) que actúan sucesivamente. Se distingue de un microscopio simple (por ejemplo una lupa
de mano o una lupa de relojero) que amplía el objeto mediante un solo sistema de lentes (generalmente una sola
lente).
Los microscopios compuestos sirven para ampliar mucho (típicamente un microscopio moderno está preparado
para elegir ampliaciones de entre 40 y 1500 veces) un objeto transparente, el cual es iluminado desde el otro lado,
al trasluz. Se emplean para examinar cosas que no se distinguen a simple vista, como las células de una muestra
de sangre o un tejido. Hay una clase especial de microscopios compuestos, los que se llaman lupas binoculares,
que se usan para ampliar modestamente (de 4 a 40 veces en general) y para manipular objetos pequeños y opacos
iluminados desde el lado del observador, tales como insectos, flores, joyas o el molde inicial de una moneda.
Los dos sistemas ópticos por los que llamamos compuesto a un microscopio son el objetivo, que proyecta una
primera imagen, y el ocular, que amplía la imagen anterior. La mayoría de los microscopios compuestos están
dotados de varios objetivos colocados en un dispositivo rotatorio, el revólver, que permite alternar entre ellos.; y la
mayoría de los microscopios de trabajo y profesionales están dotados además de dos oculares, que amplían la
misma imagen, para que la observación prolongada sea más saludable; pero los microscopios no se llaman
compuestos por tener más de un objetivo o más de un ocular, sino porque la imagen que ve el observador se ha
formado en dos fases, no en una sola, como en un microscopio simple.

Microscopio electrónico

Microscopio electrónico.

Un microscopio electrónico usa electrones en lugar de fotones o luz visible para formar imágenes de objetos
diminutos. Los microscopios electrónicos permiten alcanzar amplificaciones mayores antes que los
mejores microscopios ópticos, debido a que la longitud de onda de los electrones es bastante menor que la de los
fotones "visibles".
El primer microscopio electrónico fue diseñado por Ernst Ruska y Max Knoll entre 1925 y 1932, quienes se basaron
en los estudios de Louis-Victor de Broglie acerca de las propiedades ondulatorias de los electrones.

Limitaciones del microscopio electrónico

Microscopio electrónico de transmisión[editar]
Artículo principal: Microscopio electrónico de transmisión

El microscopio electrónico de transmisión emite un haz de electrones dirigido hacia el objeto cuya imagen se desea
aumentar. Una parte de los electrones rebotan contra la Pared celular o son absorbidos por los ribosomas y otros lo
atraviesan la Membrana plasmática, formando una imagen aumentada de la muestra.
Microscopio electrónico de barrido (MEB)[editar]
Imagen de una hormiga tomada con un MEB (microscopio electrónico de barrido).

Artículo principal: Microscopio electrónico de barrido

En el microscopio electrónico de barrido (MEB) la muestra es recubierta con una capa de metal delgado, y es
barrida con electrones enviados desde un cañón. Un detector mide la cantidad de electrones enviados que arroja la
intensidad de la zona de muestra, siendo capaz de mostrar figuras en tres dimensiones, proyectados en una
imagen de TV. Su resolución está entre 3 y 20 nm, dependiendo del microscopio. Permite obtener imágenes de
gran resolución en materiales pétreos, metálicos y orgánicos.

Un microscopio electrónico de transmisión (TEM, por sus siglas en inglés, o MET, en español) es
un microscopio que utiliza un haz de electrones para visualizar un objeto, debido a que la potencia amplificadora de
un microscopio óptico está limitada por la longitud de ondade la luz visible. Lo característico de este microscopio es
el uso de una muestra ultrafina y que la imagen se obtenga de los electrones que atraviesan la muestra.
Los microscopios electrónicos de transmisión pueden aumentar un objeto hasta un millón de veces.

El microscopio electrónico de barrido (MEB o SEM, por Scanning

Electron Microscope) es una técnica de microscopía electrónica capaz de
producir imágenes de alta resolución de la superficie de una muestra
utilizando las interacciones electrón-materia. Utiliza un haz de electrones en
lugar de un haz de luz para formar una imagen.
Apoyándose en los trabajos de Max Knoll de los años 1930 fue Manfred von
Ardenne quien logró inventar el MEB en 1937 que consistía en un haz de
electrones que barría la superficie de la muestra a analizar, que, en respuesta,
reemitía algunas partículas. Estas partículas son analizadas por los diferentes
sensores que hacen que sea posible la reconstrucción de una imagen
tridimensional de la superficie.
Los MEB poseen una gran profundidad de campo, que permite enfocar a la
vez gran parte de la muestra. También producen imágenes de alta resolución,
de forma que las características más ínfimas de la muestra pueden ser
examinadas con gran amplificación. La preparación de las muestras es
relativamente fácil ya que la mayoría de los MEB sólo requieren que estas
sean conductoras. La muestra generalmente se recubre con una capa de
carbono o una capa delgada de un metal, como el oro, para darle carácter conductor. Posteriormente, se barre la
superficie con electrones acelerados que viajan a través del cañón. Un detector formado por lentes basadas
en electroimanes, mide la cantidad e intensidad de los electrones que devuelve la muestra, siendo capaz de
mostrar figuras en tres dimensiones mediante imagen digital.

La microscopía de iones en campo (FIM) es una técnica analítica empleada en ciencia de materiales. El
microscopio de iones en campo es una variedad de microscopio que puede ser usado para visualizar la ordenación
de los átomos que forman la superficie de la punta afilada de una aguja de metal. Fue la primera técnica con la que
se consiguió resolver espacialmente átomos individuales. La técnica fue desarrollada por Erwin Müller. En 1951 se
publicaron por primera vez imágenes de estructuras atómicas de tungsteno en la revista Zeitschrift für Physik.
En la FIM, se produce una aguja de metal afilada y se coloca en una cámara de ultra alto vacío, que después se
llena con un gas visualizador tal como el helio o el neón. La aguja se enfría hasta alcanzar
temperaturas criogénicas (20-100 K). Luego se aplica un voltaje positivo que va de 5.000 a 10.000 voltios sobre la
punta. Los átomos de gas absorbidos por la punta se ven ionizados por el fuerte campo eléctrico que existe en las
proximidades de ella. La curvatura de la superficie cercana a la punta provoca una imanación natural; los iones son
repelidos bruscamente en dirección perpendicular a la superficie (un efecto de "proyección de punto"). Se coloca un
detector de modo que pueda recoger esos iones repelidos; y la imagen formada por todos los iones repelidos
puede tener la resolución suficiente como para mostrar átomos individuales en la superficie de la punta.
Un microscopio de sonda de barrido (también llamado SPM por sus siglas en inglés Scanning Probe
Microscopy) es aquel que tiene el transmisor en la parte exequimal del lente (Objetivo 4x). Este microscopio
electrónico utiliza una sonda que recorre la superficie del objeto a estudiar. La rama de microscopios SPM se fundó
con la invención del microscopio de efecto túnel en 1981.
Su uso en investigaciones científicas es el de regular la imagen mediante un barrido de electrones haciendo que la
imagen aumente (10.000.000 nm).
Un microscopio de efecto túnel (en inglés, Scanning tunneling microscope o STM) es un instrumento para tomar
imágenes de superficies a nivel atómico. Su desarrollo en 1981 hizo ganar a sus inventores, Gerd Binnig y Heinrich
Rohrer (de IBM Zürich), el Premio Nobel de Física en 1986.12 Para un STM, se considera que una buena resolución
es 0.1 nm de resolución lateral y 0.01 nm de resolución de profundidad.3 Con esta resolución, los átomos
individuales dentro de los materiales son rutinariamente visualizados y manipulados. El STM puede ser usado no
solo en ultra alto vacío, sino que también en aire, agua, y varios otros líquidos o gases del ambiente, y a
temperaturas que abarcan un rango desde casi cero Kelvin hasta unos pocos cientos de grados Celsius.4
El STM está basado en el concepto de efecto túnel. Cuando una punta conductora es colocada muy cerca de la
superficie a ser examinada, una corriente de polarización (diferencia de voltaje) aplicada entre las dos puede
permitir a los electrones pasar al otro lado mediante efecto túnel a través del vacío entre ellas. La
resultante corriente de tunelización es una función de la posición de la punta, el voltaje aplicado y la densidad local
de estados (LDOS por sus siglas en inglés) de la muestra.

Microscopio de fuerza atómica

Diagrama de un microscopio de fuerza atómica

El microscopio de fuerza atómica (AFM, de sus siglas en

inglés Atomic Force Microscope) es un instrumento mecano-óptico capaz
de detectar fuerzas del orden de los nanonewtons. Al rastrear una
muestra, es capaz de registrar continuamente su topografíamediante una
sonda o punta afilada de forma piramidal o cónica. La sonda va acoplada a
un listón o palanca microscópica muy flexible de sólo unos 200 µm. El
microscopio de fuerza atómica ha sido esencial en el desarrollo de
la nanotecnología, para la caracterización y visualización de muestras a
dimensiones nanométricas.

Comparación del AFM con otros

microscopios[editar]
Microscopio óptico
El microscopio óptico es una herramienta muy útil para obtener imágenes de muestras orgánicas e inorgánicas,
pero está limitado para una resolución de 1mm a 1 micra. 2
Microscopio electrónico
El microscopio electrónico tiene una resolución entre 1mm y 1nm. Es, por lo tanto, idóneo para la determinación de
estructuras a nivel molecular y atómico. La resolución no está limitada por la difracción, pero sí por las lentes. El
microscopio de campo cercano tiene una resolución todavía mayor: entre 1µm y 1Å.3
TEM
El Microscopio electrónico de transmisión, tiene las siguientes características que lo hacen muy útil:

 Resolución atómica.

 Puede determinarse estructuras en 2 dimensiones.

 Interacción electrones a electrones.

SEM
El Microscopio electrónico de barrido tiene las siguientes características:

 Resolución atómica.
 Requiere vacío.

 Debe cubrirse a menudo el espécimen.

 Permite características superficiales.

STM
El microscopio de efecto túnel (STM) es un instrumento que permite visualizar regiones de alta o baja densidad
electrónica superficial, y de ahí inferir la posición de átomos individuales o moléculas en la superficie de una red.
La "observación" atómica se ha vuelto una tarea común en muchos laboratorios debido al bajo costo de este tipo de
microscopía en comparación con la microscopía electrónica. 4
Las técnicas de microscopía de barrido por sondeo (SPM: Scanning probing microscopy) que incluyen al STM y al
AFM se utilizan en áreas de la ciencia que van desde la biología hasta la física del estado sólido.

Microscopía virtual

Vista microscópica de una muestra histológica humana de mama, teñida con hematoxilina y eosina.

El estudio a distancia de las imágenes se puede denominar telehistología, telecitología o telepatología dinámica
virtual dependiendo del tipo de información biológica. Mediante un microscopio virtual, una persona localizada en
cualquier lugar del mundo controlará el área de estudio del preparado microscópico (lámina virtual), y analizará los
tejidos o células en el aumento que desee con el simple uso de periféricos como el ratón con unos pocos clics y sin
factores horarios intervinientes.

Descripción[editar]
Un microscopio virtual puede ser estático o dinámico , estático es cuando una imagen se encuentra previamente
digitalizada a un aumento determinado (20x, 50x, 100x). Un microscopio virtual dinámico (también denominado
interactivo) permite hacer zoom a la imagen en tiempo real, y en algunos casos, permitir el control del campo
visualizado mediante la manipulación remota de las muestras un microscopio robotizado, el cual consiste
básicamente en un microscopio con un sistema de captación de imágenes adosado (p. ej., cámara digital) y
conectado a una computadora, con lo que es posible controlar los parámetros del microscopio remotamente (ejes
x,y, y z, luz, diafragma, aumentos)

Microscopios virtuales en educación[editar]

Con la llegada de las imágenes digitales y redes informáticas como Internet, es fácil compartir fotografías macro y
microscópicas. El continuo progreso de las tecnologías permitió la aparición de una forma específica de
telepatología dinámica ("láminas virtuales) y junto con herramientas de navegación, logran hacer de cualquier
computadora personal un microscopio digital. El uso de estas herramientas en la educación continua, conlleva un
desarrollo óptimo del conocimiento en futuros médicos u otros trabajadores del área de la salud.
Estereomicroscopio

Estereomicroscopio

Un estereomicroscopio o microscopio de disección es un tipo de microscopio óptico. Se utiliza para trabajar

con muestras que tienen mayor necesidad de ser diseccionadas para ver con más detalle las partes pequeñas que
las componen, sean de plantas, insectos e incluso paneles electrónicos. O simplemente para ver objetos como
sellos, monedas, rocas, minerales, fósiles, especímenes arqueológicos e incluso joyas (piedras preciosas).
Los estereomicroscopios (muchas veces denominados: lupas estereoscópicas o simplemente lupas) tienen la
capacidad única de ver los objetos en tridimensional.