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UNIVERSIDAD NACIONAL DE JAEN

FACULTAD DE TECNOLOGIA MÉDICA

HEMOTERAPIA Y BANCO DE SANGRE

GUIA DE PRÁCTICAS

DOCENTE: JOSE JESUS DE LA CRUZ ZELADA

2018
INTRODUCCION

Con la promulgación de la Ley Nº 26454, en mayo de 1995, que declara de orden público
y de interés nacional la obtención, donación, conservación, procesamiento, transfusión y
suministro de sangre humana, sus componentes y derivados, se inicia una necesaria
regulación de estas actividades asistenciales en nuestro país.

El Programa Nacional de Hemoterapia y Bancos de Sangre (PRONAHEBAS), es el


órgano técnico – normativo del Ministerio de Salud, responsable de establecer las normas
y adecuar los procedimientos para garantizar el uso y aprovisionamiento de sangre segura
y oportuna. Su ámbito es nacional y su accionar se realiza en forma descentralizada
desde el nivel local, con el fin primordial de obtener sangre segura y oportuna, teniendo
como principio básico la promoción de la donación voluntaria de sangre.

La Hemoterapia como práctica médica, implica el conocimiento del uso apropiado de la


sangre, sus componentes y derivados. Este acto médico es de gran responsabilidad y
debe llevarse a cabo únicamente después de un estudio racional y específico de la
patología a tratar, evaluándose cuidadosamente los beneficios y los riesgos potenciales
de la hemoterapia, transfundiéndose lo estrictamente necesario.

Por lo anterior, la presente guía de prácticas constituye una valiosa fuente de consulta de
procedimientos y técnicas para la formación de los alumnos de la Universidad de Jaén,
pudiendo desarrollar en el laboratorio y hospitales lo aprendido en aulas de clases durante
todo el curso lectivo, al mismo tiempo, poder brindar las pautas necesarias para optimizar
el uso de éste valioso y escaso recurso terapéutico.
REGLAMENTO GENERAL DE PRACTICAS DEL LABORATORIO DE
HEMOTERAPIA Y BANCO DE SANGRE

1. El alumno deberá ingresar al laboratorio con equipo de bioseguridad:


– Bata blanca hasta la rodilla y de manga larga (con su respectivo nombre y el logo de
la universidad bordado).
– Gafas de seguridad.
2. Para tener derecho a ingresar al laboratorio, el alumno debe entregar al inicio de cada
práctica:
- Reporte de la prácticaanterior.
El laboratorio inicia puntualmente, no se permitirá el ingreso tarde bajo ninguna excusa.
NO SE REPONDRÁ LABORATORIO POR NINGÚN MOTIVO
3. En el laboratorio está prohibido el ingresode:
- Teléfonos celulares, localizadores, reproductores de música, cámaras o cualquier otro
artefacto electrónico (iPod, iPad, Laptops, tablets, etc.) que pueda interferirconla
atención del estudiante.
- Comida y bebidas.
- Gorras, suéteres o chumpas que no sean del uniforme.
- Mochilas, bolsos u otro accesorio que no sea requerido por el docente.
- Todas las pertenencias deberá dejarlas en los casilleros asignados
4. No puede trabajaren el laboratorio si tiene uñas acrílicas y joyería.
5. Las personas con cabello largo deben recogerlo con una cola o gancho (no fleco).
6. El alumno es responsable del material que recibe, manteniéndolo limpio y en perfecto
estado a lo largo de cada práctica. Deberá realizar una requisición del material antes
de iniciar la práctica y al finalizar será revisado por las licenciadas acargo.
7. En caso de que el estudiante dañe parcial o totalmente un material, deberá firmar un
vale con su nombre, número de puesto, descripción del material dañado, fecha y
firma, comprometiéndose a reponer el material durante las dos prácticas siguientes, de
no hacerlo perderá el derecho a ingresaral laboratorio. NOTA: El estudiante deberá
estar solvente al momento de realizar los exámenes parciales y elfinal delaboratorio.
8. Los alumnos serán responsables de dejar los reactivos cerrados y sin contaminar por
otros, las mesas limpias y en orden, lo mismo que el equipo que sea utilizado durante la
práctica.
9. Es necesario que cualquier persona que se encuentre dentro de las
instalaciones del laboratorio se comporte de forma adecuada, cumpliendo con el
reglamento y las normas de seguridad requeridas (Práctica No.1).

ASPECTOS A EVALUAR

1. DESARROLLO DE LA PRÁCTICADE LABORATORIO


Antes de poder realizar cualquier trabajo dentro del laboratorio, el estudiante deberá
demostrar fehacientemente que tiene el conocimiento necesario para poder llevar a
cabo la práctica. Para ello se realizará un examen corto al inicio de cada práctica. El
examen corto será sobre el contenido de la práctica y tendrá un valor de30 puntos.
Durante el desarrollo de la práctica el docente evaluará los siguientes aspectos:
atención, orden, limpieza y capacidad y disposición para seguir instrucciones. Las faltas
graves, especialmente las que puedan poner en riesgo la salud y seguridad de los
demás, puede ameritar el retiro temporal o definitivo de un estudiante, teniendo cero en
la práctica completa.
Toda expulsión del laboratorio es contada como inasistencia, aunque el estudiante ya
haya firmado la lista de asistencia.
2. REPORTE DE LABORATORIO:
Laprincipalformadeevaluacióndeltrabajohechodurante ellaboratorio,así
comolacomprensiónobtenidadespuésderealizadalapráctica,es el reportede laboratorio.
En él se evidencia el nivel de comprensión y la calidad detrabajo realizado porel
estudiante.
Es necesario que muestre tanto una buena redacción como una buena ortografía.
Como futurosprofesionalesdelascienciasmédicas,esimportante quelos
estudiantesejercitenymejorensuhabilidadderedaccióndeinformes,yaqueesparte de
laformación detodoprofesional.
GeneralidadesparapresentarelReporte:
– Hojastamaño A4 cartaimpresas y presentadas en folder manila.
– Letratipo Arial,tamaño11 a espaciocerrado(1,5)

El reportedelaboratorioincluye las siguientes secciones:

Sección Contenido Valor (pts)

Encabezado Debemostrartodalainformacióndeidentificacióndel ---


estudiante y dela práctica.
Debeexpresaren formaclaray brevelosobjetivos,así
comolosresultadosyconclusionesmásimportantes
Resumen 5
delapráctica,deberáredactarseentiempopasadoeimperson
al. Máximo 10 líneas.

Sedeberábuscarinformaciónrelacionadaaltemade la
práctica, elcualservirá tambiénpara
Marco Teórico reforzarelconocimiento adquirido durantela misma. 10
Deberá de tenerporlo menosdos páginas yno
excederdediez.

Se solicita que esta sección se presente en cuadros


tabuladosde fácillectura,a manera quela interpretación
sea defácil entendimiento paracualquier otrapersona que
nohayaestadoen eldesarrollodela
práctica.Cadacuadrodebetenernúmero,títuloquelo
describa yfuente dedonde se obtuvo la información.
Resultados NOseaceptandatos,cálculosyresultadosescritosa mano. 25
Depresentarlos así,secalificarácon un cero esa
sección.Enelcasoderealizardibujosestosdebendeestar
descritos,pintadosyseñaladosencasodequeen cada uno
hayan distintasestructuras.

Es un análisis e interpretación de los resultados


obtenidos,contrastandoconlodescritoenlateoría.El
estudiante puede poneren práctica el aprendizaje que
Discusión de haya obtenido. Debe explicar su experimento en base
alprincipioquímicoestudiado,utilizandounlenguaje técnico- 25
Resultados científico y redacción adecuada. Además, debe discutir
sobre las posibles fuentes de errorinvolucradas en la
práctica y posibles formas de mejorar la ejecución
yrendimiento de la misma.

Responden a los objetivos y se derivan de


losresultadosobtenidos,nodeben ser muyextensas.
Comoregla,nosepuedeconcluirteoríaniaspectos queno
Conclusiones hayan sido incluidos en la discusión. Deberán colocar por 20
lomenos 3.Conclusiones

Responder las interrogantes planteadas alfinal de cada


Cuestionario 10
práctica enelmanual de laboratorio.

Referencias Presentar según los lineamientos del curso de 5


Metodología de la Investigación.
Nota total del reportede laboratorio 100
NOTA:Algunasseccionesnotienenvalorasignado,yaquesupresencianoagrega puntos, sin
embargosuausencia sírestapuntosdela notadelreporte delaboratorio.
Losestudiantesquenollegueno estén presente a la hora de
lecturadelosresultados,NOpodránentregar reporte, aunque hayan elaborado otraspartesde
la práctica.
Nora total del reporte de laboratorio: 100 % es igual a 20.

OBSERVACIONES IMPORTANTES:
– Elreportedelaboratoriodebeserentregadoenelperiododelaboratoriode la
siguientepráctica.
– No secalificaránreportes sin nombre.
– No serecibirán reportesparcial ototalmenteescritosAMANO.
– No se recibirán reportes tardíos ni en formatos electrónicos (correo electrónico o
traslado porUSB).
– El reporte debeentregarse engrapado(noclips).
– Toda aquella personaque se haya ausentado o haya sido retirada por cualquier motivo
de una práctica, NO TIENE DERECHO a entregar el informe
respectivo,sinimportarsila faltahayasidojustificada. Sinembargo, estonoquieredecir que
elalumnoseliberedelaevaluacióndeltemadela prácticadurante laspruebas parciales yfinal
dellaboratorio.
Losreportessecorregirán y devolveránen lasemanasiguientealaentregadel mismo.
Sialgúnalumnotienecualquierdudaoreclamosobrelaformaenquesehacalificado su reporte,
debe hablar con su instructor DENTRO DE LA PRIMERA SEMANA después de haberlo
recibido corregido NO AL FINAL DEL SEMESTRE. No se aceptaránreclamos
posteriores.

IMPORTANTE:
Se tomarácomofaltagrave (nota 0)cualquier indicio de plagio:
- Reproducción no autorizada de una publicación, palabra porpalabra, incluyendo
internet),
- Copiatotaloparcialdelcontenidodelreporteporpartededosomás alumnos(la
sanciónaplicaatodoslosestudiantesinvolucrados). Todo caso quedarádocumentado,y
unareincidenciapuedesignificarel retirodefinitivo del laboratorio.
PRACTICA Nº 01

NORMAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

1. Introducción: Las siguientesson lasprácticasgeneralesrequeridas paratodo


laboratorioquemaneja sustancias infecciosas.

a.Deberáestardisponibleunmanualdeprocedimientosespecíficos(deseguridad) en el
laboratorio para todo el personal que trabaje en él. Todos sus
requerimientosdeberán serseguidos,elmismoestarádocumentadoyserá revisadoy
actualizadoconregularidad. Deberáestarcolocadoenunlugar accesible
paratodosyseráfirmadopor todoel personal.

b.El personal debe recibir entrenamiento sobre todos los potenciales peligros
asociados con el trabajo, así como sobre las precauciones necesarias para
prevenirlaexposiciónaagentesinfecciosos y la disposicióny descartede materiales. El
personal debe mostrarevidencia de que ha entendido las instrucciones dadas en el
entrenamiento, el cual deberá ser documentado y firmadoporelpersonaly
porelsupervisor; deberántambiénimplementarse programascontinuos
deentrenamiento.

c.No está permitido comer, beber, fumar, guardar cualquier tipo de alimentos,
pertenenciaspersonalesoutensilios. Estáprohibidomaquillarse,colocarseo removerse
lentes de contacto. El uso de lentes de contacto está permitido
solamentecuandonohayotraopción. Elusodejoyas yaccesorios no es
recomendadoen ellaboratorio.

d.Está prohibido pipetear con la bocacualquiersustancia.

e.Elcabellolargodebeestaratadoatrásoarregladodemanera quenoentreen
contactoconlasmanos,con lasmuestras,conlos contenedoresni conelequipo.

f.El accesoallaboratorio y áreasde apoyoestálimitadoapersonal autorizado. No se


admiten niños.

g.Lasheridasabiertas,cortadas, rasguñosy abrasionesdebenestarcubiertos con


materiales aprueba deagua.

h.Los laboratorios debenmantenerse limpios. El almacenamientodemateriales que


nosonpertinentesaltrabajoyquenopuedanserfácilmentedescontaminados (porejemplo
revistas,libros,correspondencia),debe serminimizado;el trabajo de papeleríay
escriturade reportesdebe estarapartede lasáreasde trabajocon material infeccioso.

i.Deberá usarse ropa protectora,apropiadamente cerrada,portodo el personal,


incluyendovisitantes,estudiantes y todas las personas que entren o trabajen en el
laboratorio. Deberáusarsezapatocerradoy contaconesadecuadosen todaslas áreas
delaboratorio. Labata del laboratorio“debe”serusadasiempre.

j. Cuandosesabedeunriesgopotencialdeexposiciónasalpicadurasyotros objetos, ya sea


durante las operaciones de rutina o bajo circunstancias especiales
(ej.Accidentes),debeusarseproteccióndelosojosylacara.Debetenerse cuidadosa
consideración para identificar los procedimientos que requieran protecciónde ojos y
cara.

k.Para todos los procedimientos que involucren contacto directo con la piel y material
biológicooanimalesinfectados, debenusarse guantes(delátex,vinilou otroco-polímero).
Estosdeberánserremovidos antes deabandonar el laboratorio ydescartados.

l. La ropa protectora (bata) no debe ser usada en las áreas que no son de
laboratorio(pasillos,biblioteca, etc.).

m.Si existe sospecha o certeza de exposición, la ropa contaminada debe ser


descontaminadaantesde lavarla.

n.El uso de agujas, jeringas y otros objetos punzo-cortantes debe estar


estrictamentelimitado; lasagujasyjeringasdeben ser usadas sólo para la
inyecciónparenteralyaspiracióndefluidosdeanimalesdelaboratorio. Debe
tenerseespecialcuidadocuandoseusanagujasy jeringasparaevitarauto- inoculacióny
generacióndeaerosolesdurantesuusoydescarte. Lasagujasno
debenserdobladas,cortadas,tapadasoremovidasdelasjeringas; debenser
colocadasrápidamente enuncontenedorresistentedepunzo-cortantes parasu
descarte.

o.Lasmanosdebenserlavadasdespuésquesehanquitadolos guantesy antesde dejar


ellaboratorio, así como en cualquier momento después de manipular material
conocido osospechoso de estarcontaminado.

p.Las superficies de trabajo deben estar limpias y descontaminadas con un


desinfectanteadecuado (etanol70%)al finaldeltrabajoydespuésdecualquier
salpicadura de material potencialmente infeccioso. Nousarcloroen las
campanas,exceptoen caso de algúnderrame.Es altamentecorrosivo.

q.Si algún material o equipo debe salir del laboratorio para servicio de
mantenimientoopara descarte,debeserapropiadamentedescontaminadoy
etiquetadocomotal. Esresponsabilidaddeloperadorautoclavearydescartar todo
desecho potencialmentepeligroso.

r.Deberealizarseregularmenteunmonitoreo delasautoclavesusadaspara
descontaminar,usando indicadoresbiológicosy todoslos resultadosdebenser
archivados.

s.Todo material contaminado,sólido o líquido,debe serdescontaminadoantes de


descartarlo odereusarlo.
t. Todo el tiempo deben estardisponibles los desinfectantes efectivos dentro de las
áreas endondesemanipula ose almacenamaterial infectivo

u.Paraeltransportede materialesinfecciososdentrode lasinstalaciones, deberán


usarsecontenedores aprueba dederrames.

v.Lassalpicaduras,accidentesoexposicionesamaterialesinfecciosos, debenser
reportadosinmediatamentealsupervisordellaboratorio. Deben mantenerse
registrosescritosde talesincidentesdentrodel Departamento,y losresultadosde las
investigaciones detales incidentesdeben ser usados paraeducación continua.

w.Debe mantenerseun programaefectivo de control de insectosyroedores.

2. Objetivo General:En esta práctica el estudiante aprenderá lasnormas de bioseguridad


aplicadas al laboratorio deinmunología.

3. Objetivos Específicos:

Que el estudiante:

- Sefamiliarice las normas de bioseguridad en ellaboratorio de inmunología

- Conozca la importancia de los riesgos biológicos del manejo de material infeccioso

- Apliquesusconocimientosenlaresolucióndecasosdeaccidenteocupacional con
material infeccioso

4. Procedimiento:

Reviseliteraturasobrebioseguridadenellaboratorioyresuelvalossiguientescasosde
accidenteocupacional:

CASONo.1

Edad:34años

Sexo: femenino

Profesión: técnicode laboratorio

Evento:Manipulación de tubode ensayo para procedimiento devalores sanguíneos

Situación:Rupturade tubo de ensayoque provocó herida del dedo medio de la mano


derecha encontacto consangre depaciente VIHpositivo,se desconoce valores de CD4
ycarga viral.

¿Cuáleselriesgoparaeltécnicodelaboratorioalentrarencontactoconlasangredel
paciente?
¿Quémedidas deintervención se le debenderealizársele al técnicode laboratorio?

¿Quémedidasdeprotecciónyprevenciónquedebióutilizareltécnicoparadisminuirel
riesgodecontactocon elmaterial infeccioso?

CASONo.2

Edad 27 años

Sexo:Femenino

Profesión: Médico

Evento:colocacióndesondanasogástricaacontuberculosispulmonar,confranca
hemoptisis yhematemesis.

Situación:hemoptisisyhematemesisactivaduranteelprocedimientodecolocaciónde la
sondaquecontamina la conjuntiva del médico.

¿Cuál es el riesgoparael médico al entrarencontactoconlosfluidos delpaciente?

¿Quémedidas deintervención se le debenderealizársele al médico?

¿Quémedidasdeprotecciónyprevenciónquedebióutilizarelmédicoparadisminuirel
riesgodecontactocon elmaterial infeccioso?
PRACTICA Nº 02

SELECCIÓN DEL DONANTE

1. Definición: es uno de los procesos más importantes, el cual permite proteger la


seguridad de la sangre, comprende desde la captación de la población que tiene la
intención de donar, hasta la venopunción que permite la donación de la sangre.

2. Objetivo:

- Proteger la salud de los Receptores de sangre

- Dar la información detallada de los posibles riesgos en una Donación.

- Lograr la autoexclusión de postulantes en conducta de riesgo.

3. Alcance: Centro de Hemoterapia y Campaña de donación

4. Muestra: No aplica.

5. Materiales:

- Ambiente cómodo y privado.

- Registro de postulantes Manual Electrónico.

- Fichas: Autoexclusión, Selección del donante y Consentimiento informado

- Tubos, capilares, Ligadura, Microcentrífuga, Balanza y Tensiómetro

6. Procedimiento:

- Recepcionan al postulante, con profesionalismo.

- Solicitar Documento de Identidad DNI vigente.

- Realizar la entrevista con lenguaje claro y comprensible, explicar que es un período


de ventana" así como los riesgos que existen en una donación sobre todo ara el
receptor.

- Realizar la entrevista de acuerdo al formato de selección de postulante.

- Pesar, tallar y evaluar la presión arterial.

- Realizar procedimiento de Autoexclusión (Primera opción).

- Verificar los accesos venosos de ambos brazos.


- Tomar muestra para Hematocrito, Grupo Sanguíneo y Factor Rh y Pruebas de
Tamizaje.

- Si el postulante es aceptado firmara y pondrá su huella digital en la ficha de selección


de postulante, de autoexclusión así como él en consentimiento informado.

- Pasar los datos de las fichas al software bbcore y generar las etiquetas de
identificación ara las fichas tubos.

- Archivar la ficha de selección de postulante, de autoexclusión y consentimiento


informado (Completamente llenado, firmado y sellado por el entrevistador).

7. Interpretación:

El postulante puede ser aceptado o rechazado (temporal o definitivamente), de acuerdo


a los criterios de evaluación, se informara al postulante.

8. Cuestionario:
a. Describa brevemente elproceso de Selección del postulante.
b. Mencione el tiempo que pueden diferirse temporalmente a los donantes por vacunas.
PRACTICA N° 03

VENIPUNCIÓN YMANEJO DE ESPECÍMENES HEMATOLÓGICOS

1.
Introducción:Lasvenasdeunpacienteconstituyenlaprincipalfuentedeespecímenesparaa
nálisis delaboratorio,comopuntodeentradade medicamentos,así comoel sitioidealpara
transfusionessanguíneasy/oprocedimientosintravenosos. Elproceso medianteelcual la
sangre esremovida de la vena esconocido como venipunturaoflebotomía.

La importancia de laflebotomía reside enqueesel primer contacto entreel laboratorio y


sus pacientes, mientras que desde el punto de vista de la muestra, un proceso
cuidadosoconllevaunamuestraapropiadamentecolectada,así comolagarantíadela
seguridaddesuorigeny el correctoenvasadoy transporte, factoresnecesariosparala
correcta evaluación e informede losexámenes arealizar.

Latomademuestradesangreparaanálisisdelaboratoriosepuederealizarmediante
lassiguientes técnicas: venosaoperiféricay capilar. Paralamayoría delosexámenes
clínicos,incluyendohemogramasy dosificación dehemoglobina,se recomiendautilizar
sangrevenosa,mientras queparalas fórmulasleucocitariaso frotesperiféricospuede
extraerse sangre en el lóbulo de laoreja o de la yema de un dedo. En los casos de
niños,serecomienda utilizarla yema del dedogordo del pie odeltalón.

2. Objetivos:

Que el estudiante:

- Sefamiliarice con el equipo utilizado para la extracción de sangre.

- Realice la extracción desangre venosa utilizandojeringao equipovacutainer.

- Conozca la importanciade realizarcorrectamente esteprocedimiento.

3. Alcance:Enestaprácticaelestudianteaprenderáelprocedimientocorrectode extracciónde
sangre venosa.

4. Antecedentes: Requerimientos para la venipuntura:

4.1Ordenmédica:

Unasolicitudmédicadebeacompañarcada muestra admitida dentro dellaboratorio.


Dicho documento debe contener la información apropiada para el correcto
procesamiento de lamuestra. Loselementos esenciales de una ordenmédica son:

- Nombre del paciente

- Número de identificacióndel paciente y/o númerode historia clínica


- Géneroyedad del paciente

- Nombrecompleto delmédico solicitante yanálisisrequeridos

4.2Equipo necesario parala venipunción:

El siguienteequipo esnecesario para la venipunturaderutina:

- Equipo Vacutainero
Tubosdevacío:Estosdispositivosestándiseñadosparallenarseconun volumen
predeterminadode sangre pormedio de vacío,esto garantiza una
adecuadarelaciónentresangreyanticoagulante. Lostaponesdegoma estáncodificados
porcolorde acuerdo con eladitivo que contienen así por ejemplo, lostubos
morados(EDTA)sonlos más utilizadosparahematología rutinaria y
lostuboscelestes(citrato)para pruebas de
coagulación.

- Agujas especiales paraadaptador.

- Adaptadorparatubosde vacío.

- Jeringuillas de 3,5y10cc.

Agujas:Estánnumeradasdependiendodesucalibre. Paracoleccióndesangre
parahemogramas,serecomiendaunaaguja de diámetro de 0.8mm (21G)para evitar
dañoalascélulas. Las agujas de 0.9-1.1mm de diámetro(20G-19G) se utilizan
normalmentepara punción venosa enadultos.

- Torniquete: Generalmente una liga plana de látex.

- Alcohol:Etílico oisopropílico al 70%.

- Algodón

- Gasasy/o vendas adhesivas

- Dispensadorde agujas

4.3Etiquetadodelostubos:

Unadecuadoetiquetado delostubos esesencialpara quelos resultados delosanálisis


concuerden con el paciente correcto. Loselementos clave en eletiquetado para
garantizarla calidad de la muestrapre-analítica son:

- Nombre o iniciales del paciente

- Número de identificacióndel paciente

- Fecha yhora de latomade muestra


- Iniciales delflebotomista

5. PUNCIÓN VENOSA:

5.1. Fundamentoteórico:

Lapunciónvenosapermiteextraeruna mayorcantidadde sangreparalaspruebas


necesarias en hematología. Las venasde elección suelen serlas dela cara anteriordel
antebrazo(venacubital,venacefálicay lavenabasílica)porqueresulta fácilaccedera ellas.
Lascifrashemáticaspermanecenconstantesnoobstanteelsitioseleccionado para obtener
la punción venosa.

5. 2. Preparacióndel paciente:

- Instruyaalpacientesobrelatécnicaparatomarlamuestra. Valorelaexistenciade
problemashemorrágicoso decirculación, o alergias en látex.

- Evitepuncionarenunáreaconhematoma,fístulas,quemaduras,escoriacionesde la
piel,cicatrices odel costado enquese harealizado mastectomía reciente.

- Evitepuncionarenelbrazodondehayvenoclisis,inyecciónintramuscularpreviao
administración demedicamentos vía intravenosa.

- Avisaral pacientequeal introducir la agujasentirá dolor.

- Extiendacompletamenteelbrazoconlasuperficiepalmarhaciaarriba. Solicite ayuda del


paciente, si éste está consciente,pararealizarpalanca con el brazo libre.

- Si existen dificultades para extraer la muestra, se


entibia la extremidad con masajes. Se debe permitir
que la extremidad permanezca inclinada durante
varios minutosantesderealizarlapunción. Si
elpacientenotienepruebasdeglucosa o
electrolitos,favorecerelejercicio leve del brazo.

5.3. Metodología

5.3.1. Precauciones Generales:


- Durantelatomademuestradebenguardarselasmásestrictasnormasdehigiene.

Practiquelasprecaucionesuniversalesmínimascontodopacienteaseratendido.
Todamuestradebeserconsideradapotencialmenteinfecciosaysedebentomarlas
precaucionesquegaranticen laseguridad delflebotomistayde los pacientes.

- El material descartable ausarse abrirá sólo al momento de suutilizacióny,una vez


manipulado,nopodráguardarsenuevamenteaúncuando se le considerenuevo.

oTome precauciones al manipularagujas y/o


lancetas.

oNo dejeagujas y/o lancetas usadas enlamesa de


trabajo.

oNo coloqueel protectora la aguja.

oEvite que losniñostoquen ojueguencon los


equipos deflebotomía.

- Unavezrealizadalatomademuestra,descartarinmediatamentelosmateriales usados
enrecipientespara esefin.

- Losrecipientes quecontienenalgodóny
losdedesechodebenestarperfectamente
cerradostodoeltiempoyse abriránsolamente al
momentode usar.

- Al momento de hacer laextracción,colocarselos


guantesdesechables, loscualesse mantendrán
puestosdurantetodo elprocedimiento.

- Si ocurre un pinchazo accidental, informar


inmediatamenteal jefe delaboratorio. Mantengala
calma,y láveseinmediatamentecon agua, jabóny alcohol. Favorezcalasalida de
sangrepor presión continua.

5.3.2. Procedimiento:

- Identifique correctamente al paciente.

- Prepárelo correctamenteparala extracción.

- Coloqueuntorniqueteenlapartesuperiordelbrazo (aproximadamente 5cmpor encima


delpliegue) para producir congestión venosa. Eltorniquete prolongadocausaestasisy
hemo-concentración. El lazodebesercolocado de modode producir una
compresióndelmúsculono mayora1mm.

- Seleccioneelsitiodelapunción:Pidaalpaciente queabray cierreel


puñovariasveces;escojauna vena accesible.
- Limpie elsitiodela punción,previoa puncionar debeestar seco. Debe tenerpresente
que una vez realizada la decontaminación,no debe volvera tocar el área venosa.

- Pararealizarlapunciónelpacientedebetenerel puño cerrado.

- Coloquelapuntadelaagujaenunángulode15-30º sobre la superficie de la vena


escogida y atravieselapielconunmovimientofirmeyseguro,hasta el lumen dela vena.

- Unavezquepenetraenlavena,lasangrellenalos
tubosaspiradoresautomáticamenteporlapresiónnegativadentrodel tubo enelcaso
deVacutainer, mientras quecon jeringassedebejalarelémbolo con movimiento
continuo para extraer la sangre hasta el volumen requerido. Evite presionar
fuertemente laagujadurante la extracción.

- Solicite al paciente que abra elpuñoyaflojeel torniquetepara quelasangre


fluyamejory remueva la aguja del brazo con movimiento suave al terminar de
colectar,sin apretarel área de lapunción con el algodón.
Presioneelalgodónsobreelsitiodela
punciónaplicandounapresiónadecuadaynoexcesivaparaevitarlaformaciónde
hematoma.

- Descartarlasagujasy/ojeringuillas en uncontenedorapropiado.

6. Materiales yEquipo:

- Algodón

- Etanol al 70%

- Ligadura

- Tubosvacutainercon anticoagulante EDTA

- Jeringasde3 cc

- Descartadordepunzocortantes

- Bolsas rojas.

7. Cuidados yotros aspectos relevantes deseguridad:


Observartodaslas normas debioseguridad. Debe tomarseencuentaquetodoel tiempose
estátrabajando conmuestraspotencialmenteinfectivas.

8. Formatode presentación de resultados:


Entreguelahojadetrabajo delcuestionarioescrita amano, junto consuparejade extracción
9. Cuestionario:
a.Describa brevemente elproceso deextracción
b.Cuál es elcalibredelaaguja utilizada para elprocedimiento devenipunción?
c.¿Por qué se utiliza una ligadura en el brazo para realizar la extracción sanguínea?

d. ¿Porquénosedebederealizarlaextracciónsanguíneaenunavenamuy delgada y cuál


esla consecuencia dehacerlo?
e. ¿Cuálespuedenserlascausasporlacualdejadesalirsangredurantela
extracciónsanguínea?

f.Mencione tres precauciones para evitar hemólisis de la muestra de sangre obtenida

g.Mencione tresprecauciones paraevitarhematomas


h.Comosedebedeintroducirel bisel dela agujay¿Por qué?
i. Mencionedossolucionesdesinfectantesquesepuedenutilizar,ademásdel etanol al 70%
j. Definaqueesunanticoagulante
k. Qué anticoagulante contienen cada uno de los tubos vacutainerque se
identificanconlostapones decolores
l.¿Quéventajastiene lautilizaciónde mariposasparaextraersangre?
m. ¿En quésediferencia lasangrearterial dela sangre venosa?
n. ¿Quédiferencia hayentre sueroyplasma?
o. ¿Quéventajatiene laextracciónvenosasobre lacapilar?
p. Defina quéesunsistemadeextraccióntipovacutainer,como funcionay quése
requiereparalaextracción convacutaineradiferenciade laextracción con jeringa

q. ¿Quédiferencia hayentre venopunciónyvenociclis?


r. Quevenas sepuedenutilizarpararealizarlaflebotomía enel brazo

NOTA:coloquesubibliografía alfinal del cuestionario


PRACTICA Nº 04

EXTRACCION DE UNIDAD DE SANGRE

1. Definición: es un proceso por el cual se toma de sangre del donante a nivel de una vena
para poder recolectar una unidad de sangre total, la cual después de ser extraída se
realiza el tamizaje con los siete marcadores serológicos.

2. Objetivo:Extraer un volumen de sangre en condiciones de asepsia, que garantice


componentes adecuados y no represente peligro para la salud del donante

3. Alcance:Servicio de Banco de Sangre del Hospital Regional Lambayeque.

4. Muestra: Sangre venosa.

5. Materiales:

- Material estéril para asepsia hemostasia.

- Camillas o sillones reclinables que brinden comodidad y favorezcan el manejo de las


reacciones adversas.

- Bolsas recolectora de sangre con CPD – cuadruples

- Hemobasculas.

- Pinzas, Alcohol 75º y esparadrapo.

6. Procedimiento:

- Identificar al donante solicitando DNI y verificar sus datos y resultados en el software


bbcore; si está apto o No reactivo se procederá a realizar la extracción.

- Ubicar al donante en la camilla en posición semisentada.

- Codificar la bolsa principal y bolsas satélites, colocarlas en la hemobascula.

- Ele ir una vena de fácil acceso visible.

- Colocar la ligadura sin mucha presión, porque afecta la obtención de las plaquetas y
el factor VIII

- Realizar la asepsia de piel con alcohol de 70 0 o alcohol yodado al 3%.

- Punzar la piel con la aguja en Angulo de 45 0 , luego disminuir al 10 0 de inclinación.

- Fijar la aguja y la arte inicial de la tubuladura con esparadrapo.


- Controlar el volumen extraído, programando un volumen total no menor de 450cc.

- Idealmente no extraer más del 10% del volumen sanguíneo total y en ningún caso
más del 13%.

- El proceso de extracción no será mayor de 12 minutos.

- Al finalizar sellar la tubuladura.

- Mezclar la sangre de la tubuladura con el anticoagulante dejar de 2 0 3 secciones ara


realizar pruebas de compatibilidad.

- Remitir la unidad al área de fraccionamiento de componentes sanguíneos.

- Al concluir la extracción, el donante re osara 10 minutos.

7. Interpretación:

Si el proceso de extracción se dio satisfactoriamente la unidad es utilizada, caso


contrario se someterá a control de calidad.

8. Cuestionario:
a. Describa brevemente elproceso de extracción sanguínea.
b. ¿Cuáles son los niveles mínimos y máximos para una colecta de sangre?.
PRACTICA Nº 05
PREPARACION DE PAQUETE GLOBULAR

1. Definición:Son todas las células rojas que están presentes en la sangre (eritrocitos o
hematíes), son los elementos más numerosos (cuantitativamente) presentes, uno de
sus componentes principales es la hemoglobina y su función principal es la de
transportar el oxigeno hacia los diferentes tejidos en un ser.

2. Objetivo:Proporcionar san re segura eficaz ara el beneficio del receptor.

3. Alcance:Servicio de Banco de Sangre del Hospital Regional Lambayeque.

4. Muestra:Sangre entera recién recolectada por flebotomía, extraída en bolsa cuádruple.

5. Materiales:

- Bolsas de extracción.

- Centrífuga refrigerada.

- Balanza de platillos.

- Extractor de plasma.

- Pinzas, tijeras, guantes.

- Sellador de bolsa

6. Procedimiento:

- Dejar la bolsa de sangre extraída en reposo por 30 min., luego centrifugar la san re
entera a 2000 rpm por 4 min. a 200 C

- Colocar la bolsa de san re centrifugada en el extractor de plasma

- Pinzar las tubuladuras de las bolsas de transferencia y dejar libre la más cercana a la
bolsa primaria.

- Romper el sellado de la bolsa primaria en la parte superior y dejar fluir el plasma en la


bolsa de transferencia que quedo libre removiendo de 200 a 250 ml de plasma,
quedando un paquete globular con un hematocrito de 70 — 80%

- Sellar la tubuladura de comunicación se arar las dos bolsas.

- Transferir la solución aditivoOptisol a la bolsa que contiene el paquete lobular,


homogenizar suavemente.

- Concluido el procedimiento sellar las bolsas


- Verificar el paquete globular con el plasma con el sistema de codificación.

- Colocar el sello de calidad, el volumen en ml. correspondiente al peso del paquete


globular.

- Conservar el paquete globular entre 2 0 C a 80 C.

- Introducir al software los datos: Fraccionamiento de componentes, validación de la


unidad, sello de calidad eso del paquete globular.

7. Interpretación:

Si el proceso de fraccionamiento se dio satisfactoriamente la unidad es utilizada, caso


contrario se someterá a control de calidad.

8. Cuestionario:
a. Describa brevemente elproceso de fraccionamiento y obtención del paquete globular.
PRACTICA 06
PREPARACION DE PLASMA FRECO CONGELADO

1. Definición: es el componente que se obtiene tras la centrifugación de una unidad de


450 ml de sangre total, en las seis horas que siguen a su obtención. Tiene un volumen
que oscila entre 200-250 ml. Puede almacenarse hasta un año a – 70º C.

2. Objetivo: Obtener un producto que conserva los factores lábiles de coagulación.

3. Alcance:Servicio de Banco de San re del Hospital Regional Lambayeque.

4. Muestra:Sangre entera recién extraída en bolsa cuádruple.

5. Materiales:

- Congeladora a -70 0 C

- Centrífuga refrigerada.

- Balanza de platillos.

- Extractor de plasma.

- Pinzas, tijeras, guantes.

- Sellador de bolsa.

6. Procedimiento:

- Centrifugar la sangre entera colectada, dentro de las primeras seis horas de extraída
la san re a 2600 rpm por 15 min. a 200 C

- Colocar la bolsa de san re centrifugada en el extractor de plasma

- Pinzar las tubuladuras de las bolsas de transferencia y dejar libre la más cercana a la
bolsa primaria.

- Romper el sellado de la bolsa primaria en la parte superior y dejar fluir el plasma en la


bolsa de transferencia que quedo libre transfiriendo de 200 a 250 ml de plasma.

- Concluido el procedimiento sellar las bolsas

- Verificar el paquete globular con el plasma con el sistema de codificación.

- Colocar el sello de calidad, el volumen en ml. correspondiente al peso del plasma


fresco.
- Congelar inmediatamente el plasma fresco.

- Introducir al software los datos: Fraccionamiento de componentes, validación de la


unidad, sello de calidad eso del plasma fresco.

7. Interpretación:

Si el proceso de fraccionamiento se dio satisfactoriamente la unidad es utilizada, caso


contrario se someterá a control de calidad.

8. Cuestionario:
a. Describa brevemente elproceso de fraccionamiento y obtención del plasma fresco
congelado.
PRACTICA 07
PREPARACION DE PLAQUETAS

1. Definición:es un componente que se obtiene por diferentes métodos (convencional o


buffycoat) las cuales son pequeños fragmentos de células sanguíneas. Su función es
formar coágulos de sangre que ayuden a sanar las heridas y a prevenir el sangrado. La
médula ósea produce las plaquetas.

2. Objetivo:Mantener un depósito suficiente de plaquetas para cubrir demandas y


mantener la actividad plaquetaria al tiempo máximo de almacenar.

3. Alcance:Servicio de Banco de Sangre del Hospital Regional Lambayeque.

4. Muestra:Sangre entera recién extraída en bolsa cuádruple.

5. Materiales:

- Centrifuga refrigerada.

- Rotador de plaquetas.

- Balanza de platillos.

- Extractor de plasma.

- Pinzas, tijeras, guantes.

- Sellador de bolsa

6. Procedimiento:

Inmediatamente después de obtener el Plasma Rico en Plaquetas se procederá a:

- Centrifugar el plasma rico en plaquetas a 2600 rpm por 15 min. a 20 0 C

- Colocar la bolsa centrifugada en el extractor de plasma y transferir el plasma


sobrenadante a la segunda bolsa de transferencia, dejando un volumen no menor de
50ml.

- Verificar la bolsa de plaqueta simple con el plasma con el sistema de codificación.

- Colocar el sello de calidad, el volumen en ml. correspondiente al peso de la plaqueta.

- Dejar la unidad de plaqueta simple sobre la mesa de trabajo a 20 0 C — 24 0 C por una


hora para que desagregue espontáneamente. No agitar porque puede ocurrir
agregación irreversible.
- Colocar la unidad de plaquetas simple en un agitador con rotación suave constante,
por 5 días.

- Introducir al software los datos: Fraccionamiento de componentes, validación de la


unidad, sello de calidad eso de la plaqueta.

7. Interpretación:

Si el proceso de fraccionamiento se dio satisfactoriamente la unidad es utilizada, caso


contrario se someterá a control de calidad.

No refrigerar la sangre antes ni durante la separación de plaquetas. Una unidad de


plaquetas sim le contiene 5.5 X I0 10 más de plaquetas.

8. Cuestionario:
a. Describa brevemente elproceso de fraccionamiento y obtención de plaquetas.
PRACTICA 08
PREPARACION DE CRIOPRECIPITADOS

1. Definición:Es la fracción de las proteínas plasmáticas que permanecen insolubles


cuando el plasma fresco congelado es descongelado en condiciones apropiadas de
temperatura. Contiene factor VIII (coagulante, 80-120 U), factor VIII-Von Whillebrand,
fibrinógeno (alrededor de 250 mg), factor XIII y fibronectina.

2. Objetivo:

- Mantener un depósito suficiente para el tratamiento de pacientes con deficiencia del


factor VIII (von Willebrand) y fibrinógeno.
- Contar con factores de coagulación suficientes para tratamiento sin riesgo de
sobrecargar de volumen.

3. Alcance:Servicio de Banco de Sangre del Hospital Regional Lambayeque.

4. Muestra:Sangre entera recién extraída en bolsa cuádruple.

5. Materiales:

- Centrifuga refrigerada.
- Congeladora a -70 0 C
- Balanza
- Extractor de plasma.
- Pinzas, tijeras y guantes.
- Sellador de bolsa

6. Procedimiento:

- Descongelar lentamente el plasma fresco entre 2 0 C a 8 0 C en un período de 12hrs

- Centrifugar el plasma a 3200 rpm por 7 min. a 5 0C

- Colocar la bolsa centrifugada en el extractor de plasma y pasar el sobrenadante


rápidamente a otra bolsa satélite, dejando 15 a 20 ml de sobrenadante para
resuspender el crioprecipitado.

- Identificar el crioprecipitado el plasma residual.

- Colocar sello de calidad y guardar el crioprecipitado a -70 0C por un año a partir de


fecha de reparación del plasma fresco congelado.

- Introducir al software los datos: Fraccionamiento de componente, validación de la


unidad, sello de calidad.
7. Interpretación:

Si el proceso de fraccionamiento se dio satisfactoriamente la unidad es utilizada, caso


contrario se someterá a control de calidad.

Una unidad de crioprecipitado contiene 80 a 100 UF de factor VIII, 250 m de fibrinógeno el


30% de factor XIII.

8. Cuestionario:
a. Describa brevemente elproceso de fraccionamiento y obtención de crioprecipitados.
PRACTICA Nº 09
ENSAYO INMUNOENZIMÁTICOS(ELISA)

1. Introducción:LatécnicaELISA
(ensayosdeinmunoabsorbencialigadaaenzimas)sebasaenla
deteccióndeunantígenoinmovilizadosobreunafasesólida medianteanticuerpos que
directaoindirectamenteproducenuna reacción marcada enzimáticamentecuyo
producto,puedeser medidoespectrofotométricamente. Lacantidaddeantígenose
determinacomparando lacurvaestándargeneradaconcantidadesconocidasdel antígeno.
Ventajas:versátil, robusto,simple en su realización,emplea reactivos económicos y
consigue,medianteelusodela fasesólida,de unaseparación fácilentrela fracción
retenidaylafracciónlibre, esfácildeadaptara analizadoresautomáticos. Estese
caracteriza porserun método cuantitativamente exactoporla medición de lavelocidad
dela reacciónyla duracióndela reacciónenuninstantefijo único
Desventajas:paraadaptarloaanalizadoresautomáticossenecesitande reactivosmuy
purificas, loqueaumenta elcosto de las pruebas.

2. Alcance:
En estapráctica el estudiante comprenderá y observará la aplicación y la
elaboracióndel ensayo de inmunoabsorbencia ligadaa enzima(ELISA).

3. Objetivos:
Queel estudiante:
- Conozca losprincipios enlosquese basala prueba deELISA
- Sefamiliarice conel equipoutilizado para laelaboracióndella pruebadeELISA.
- Conozcalaimportanciadeestetipodepruebasysuaplicaciónenelámbitode la medicina.

4. Antecedentes:
Dispositivos Empleados
EnElisa:
Se hanensayado numerosas fases sólidas, desde los tubos de cristal de los
orígenesalasactualesmicroplacasde 96 pocillosde plástico tratadoparaaumentarsu
capacidaddeabsorcióndemoléculasy confondosdepocilloópticamenteclarospara poder
realizarlas medidas de densidad óptica en instrumentos específicos,
espectrofotómetrosdelecturadeplacas quehanrecibidoelnombredelectoresELISA.
Actualmenteseestándesarrollandodispositivosdemayorcapacidad,porejemplocon
384 y1536 pocillos, adecuados para los sistemas de “screening” masivo de los
sistemasrobotizados (HTS, Highthroughputsystem).
LoslectoresELISAsonespectrofotómetroscapacesderealizarlecturasseriadasde
cadaunode lospocillosdelaplacaELISA.Adiferenciade unespectrofotómetro
convencional,concapacidaddeleertodaslas longitudesdeondadel ultravioletayel
visibledemaneracontinua,loslectoresde ELISAdisponendesistemas de filtrosque sólo
permitenla lecturadeuna opocaslongitudes deonda.Sonlaque se corresponden con las
necesarias para determinarla densidad óptica de los cromógenos más
comúnmenteutilizados.

Fases deunensayo
ELISA:
Las4fasesdeunensayo ELISA sonlas siguientes:
1. Unión del antígeno(odelanticuerpo)alos pocillos:

Launióndeanticuerposoantígenosserealizaconfacilidadalasuperficiede
plásticostratadosquetienengranafinidad porproteínas.
Generalmenteestepasoyanoserealizadebidoaqueloskitscomercialesyalo traen.

2. Formaciónde una o máscapas deinmunocomplejos:


Se realizaal agregarla muestradel
pacientequecontienelosantígenoso anticuerposa detectar.
En el casodel antígeno unido ala placa se puede detectarmediante
un anticuerpoanti-antígeno marcado
(ELISAdirecto)oempleandounanticuerpo primarioanti-
antígenoyunsecundarioantiprimariomarcado(ELISAindirecto).
Estesegundométodopermitelaamplificacióndelaseñalalpoderseunirunoo
másanticuerpossecundariosacadaanticuerpo primario.Enelcasodel anticuerpo
unidoalaplacaseincubaconuna mezcladeantígenoy antígenomarcado.Se
ensayandiferentesrelaciones deantígenofriofrentea unacantidadfija de antígeno
marcado.Esel ensayo de competicióndel antígeno.

3. Conjugado:
Seagregaunanti-anticuerpoligadoaunaenzima(fosfatasaoperoxidasa)que se une al
inmunocomplejoqueya sehaformado.

4. Reveladode lareacciónenzimática.
Despuésdeunlavadoparaeliminartodaslas moléculasmarcadasno
fijadasen

formadeinmunocomplejosseañadeelsustratoenzimáticoensolución(cromógeno). Se
dejareaccionaryseleela densidad óptica(D.O.) medianteespectrofotometría.

Tipos deensayosELISA:
SehandesarrolladomúltiplesvariantesdeensayosELISA que permitendesdela
cuantificacióndeunantígeno ensolución,la deteccióndeunanticuerpoen una solución
por ejemploen el clonaje de anticuerpos monoclonales, o la determinación de la
subclase (idiotipo)de unanticuerpo.A continuación sedescribenlos máscomunes. La
versión máscomúndeELISA esel ensayo sandwich.
- Ensayodirecto:(EnsayoELISAsimplededoscapas).LasplacasELISAse preparan
recubriendolospocillosconlassolucionesenlas quesesospechase
encuentraelantígeno. Seincubanconanticuerposmarcados. Indicanla
presenciadeantígeno enlasoluciónanalizada.Esnecesarioincluircontroles
negativosqueserán muestrasdel mismo tipodelasanalizadas(sangre,orina,
etc.)peroenlas quese tengalacertezadelaausenciadelantígenobuscado.
Asimismose incluyencontrolespositivos(solucionesdondeseencuentrael antígeno
buscado,obiense lehaañadido).
- Ensayoindirecto:LasplacasELISAsepreparandeunaformaidénticaala
anterior.Loscontroles positivosy negativos sonlosmismos.Elsistemade
detecciónempleados anticuerpos:unoprimariocontraelantígeno,yuno
secundariomarcadocontraelprimario.Ladeteccióntienemayorsensibilidad
porpresentarunaamplificacióndeseñal debidaalaunióndedosomás
anticuerposecundarios porcadaprimario.Esel ensayomáspopular,comoloes la
inmunofluorescenciaindirecta, pues un mismo secundario marcado y un
mismosistema enzimático permitecuantificarunagrancantidaddeantígenos.
- Ensayo sandwich: (Ensayo de captura de antígeno y detección mediante
inmunocomplejos).Se tratadeunensayo muyempleadoenel quese recubreel
pocilloconunprimeranticuerpoanti-antígeno. Despuésdelavarelexcesode
anticuerposeaplicalamuestraproblemaenlaqueseencuentraelantígeno, que
seráretenido en el pocilloalserreconocido porel primeranticuerpo.
Despuésdeunsegundo lavadoqueeliminaelmaterialnoretenidoseaplicauna
soluciónconunsegundoanticuerpoanti-antígenomarcado.Así puescada molécula
deantígeno estaráunidaa unanticuerpo enla base quelo retiene y un
segundoanticuerpo,almenos, quelomarca.Esteensayotieneunagran
especificidadysensibilidaddebidoalaamplificacióndeseñal quepermiteel
segundoanticuerpo.

Aplicaciones:
Estemétodohatenidounaenormeaplicaciónentodosaquelloscampos enlos que
seprecisabalacuantificación de productos medianteanticuerpos:diagnóstico clínico,
detección viral, clasificación de anticuerpos en isotipos, búsqueda de
anticuerposmonoclonales,etc.

EnzimaSustrato Tampón:
Estas enzimas son utilizadas enla etapa de detección,las cuales unen de manera
covalenteamAbs(anticuerposmonoclonales),sinafectarlacapacidaddeunióna
antígenosdelanticuerpo,obien,sininhibirlaactividaddelaenzima. Una gran variedad
de sustratosse puede incubarcon estas enzimas para generarproductos de
colorsusceptiblesde cuantificación medianteespectrofotómetrosconplacasde
microtitulación. Las enzimas más comunes empleadas en la etapa dedetección son:
peroxidasadesuero de caballoy la fosfatasaalcalina. Acontinuaciónsedescribe la
preparacióndelas enzimasmás comunes:
HRP(peroxidasaderábano)OPD10mg/25mL detampón citratosódico0.15M
pH 5;añadir microLde30%peróxidodehidrógeno 30%
AP (Fosfatasaalcalina)PNPP 5 mg/5 mL de tampón dietanolamina-HCl0.1MpH
9.8+1mMcloruro demagnesio
TMB (tetrametilbenzidina)2.5mg/250 microLdeDMSO;hasta 25 ml con tampón
citratosódico 0.1MpH 6; añadir5microLdeperóxidodehidrógeno30%

5. Materiales:
- Alcohol al 70%
- Algodón
- Beakerconcloroal 5%
- Cloroal 5%
- Kitdereactivos paraELISA
- Pipetas automáticas de100 uL
- Pipetasautomáticas de1000uL
- Puntas azules parapipetas de200-1000uL
- Puntas amarillas parapipetas de200-1000uL

6. Procedimiento:
- Permitir que los reactivos alcancen la temperatura ambiente.Organizar y etiqueta
conel númeronecesario detiras.
- Añadir 100 uL control positivo, control negativo y suero de paciente por duplicado
enlos pocillos.
oPozos B1,C1 y D1: C-
oPozos E1 yF1: C+
oPozos G1 y H1: Mx1
- Añadir 50 ulde conjugado en los pozos B1 al H2. Cubrir con cinta
adhesiva.Mezcle suavemente.Incubar durante90 minutosa37°C.
- Lavar llenandocada pozo con 350 uLde solución de lavado. Repetir el
procedimiento5 veces
- Añadir 100uldecromógeno (sustrato) a los pozos A1 a H1. Mezcle
suavemente.Cubrirconcintaadhesivaeincubar30minutosprotegidosdela luz.

- Añada50ul desolucióndeparadaa lospozos A1 aH1.Si el cambio decolorno


pareceuniforme,golpeesuavemente laplacaparaquesemezcle bien.

7. Cuidados yotrosaspectos relevantes deseguridad


Apliquelasmedidasdebioseguridadeneldescartedelosmateriales,sueroymanejo de
reactivos.

8. Formatode presentación de resultados


Presentarlosresultadosenformaescrita,conuna discusióndelosmismos.
Investiguelos diferentesanálisisquese pueden realizarutilizandoenensayo deELISA.

9Cuestionario:
a. Describa brevemente elproceso del ELISA de los marcadores serológicos en el
banco de sangre.
PRACTICA Nº 10

DETERMINACIÓN DE HEMATOCRITO

1. Definición: Relación entre el volumen ocupado por los hematíes y el correspondiente a


la sangre total, y depende principalmente de la concentración de hemoglobina.

2. Objetivo: Realizar en forma adecuada y correcta la toma de muestra y determinación


del hematocrito del donante.

3. Alcance: Centro de Hemoterapia y Campaña de donación

4. Muestra: Sangre Total

5. Materiales:

- Capilares de vidrio con anticoagulante

- Cera o plastilina

- Algodón al 70%

- Lancetas hemolíticas descartables

- Centrifuga de microhematocrito

- Sistema de lectura o lector de hematocrito.

6. Procedimiento:

- Lavado de manos

- Colocación del mandil

- Colocarse los guantes estériles

- Desinfectar el dedo índice con algodón y alcohol yodado.

- Punzar con una lanceta el dedo seleccionado.

- Llenar hasta un máximo de 3/4 de la capacidad del tubo capilar con sangre total y
sellar un extremo del mismo con plastilina y cera.

- Centrifugar el microtubo por 5 minutos


- Finalizar la centrifugación, comprobar que no se haya producido salida de sangre del
capilar y extraerlo de la centrifuga. Para leer el resultado puede emplearse un lector
de hematocrito.

7. Interpretación:Hematocrito mayor de 38% nivel aceptable para la donación en mujeres


y mayor de 41% nivel aceptable para la donación en varones.

8. Cuestionario:
a. Describa brevemente elproceso dela práctica.
b. ¿Cuáles son los niveles de hematocrito aceptables para poder donar en hombres y
mujeres?

.
PRACTICA Nº 11

REACCIONESDEHEMAGLUTINACIÓN DIRECTAE INDIRECTA

(GrupoABOyRh)

1.
Introducción:Lahemaglutinaciónesunareaccióndeaglutinación,específicamenteinvoluc
rando al eritrocitocomoel portadordelantígenoodelanticuerpo. Ladeterminacióndegrupo
sanguíneosebasaenlareacciónantígeno-anticuerpo,lacualsepuedellevaracabo deforma
directa(determinando losantígenos presentes enla superficie del eritrocito del
pacientealcontactodelreactivoantiA,B,ABoD)oindirecta (determinandolos
anticuerpospresentesenelsuerodelpacienteyenfrentándoloaeritrocitosconocidos (A,Bo
AB).

2. Objetivos:
- Comprender las bases teóricas de la reaccióndeaglutinaciónparala
eterminacióndegruposanguíneo
- Conocerlos diferentesfactoresquecontribuyena la reacción.

3. Alcance:Alfinaldelaprácticasepretende queelestudiantetengaunavisiónclaradel
fenómeno de aglutinación Jdel complejoantígeno-anticuerpo paraladeterminación de
gruposanguíneoABOy RHy queadquieralasdestrezasparaaplicardiferentes
metodologías basadas en dicha reacción.

4. Antecedentes:
El gruposanguíneosonlostiposen queseha clasificadolasangredelaspersonas
enrelaciónconlacompatibilidaddeloshematíesysuerodeotroindividuoquela recibe.
Segúnla clasificacióndeLandsteiner(clasificaciónhoy universal)y sedenominan:
O,A,B,AB.Se caracterizanporlasdiferentescombinaciones dedosaglutinógenos
existentes enlosglóbulos rojosydedosaglutininascontenidasenelsuero.
Loseritrocitos poseen antígenosensu membrana que sondistintos paracada
individuo;laspruebasutilizadasparaestablecerlahemoclasificación sanguínea
relacionadaalosdiversos grupossanguíneos,aprovechanlascaracterísticas
inmunológicasque expresacadaindividuodeacuerdoasuparticularcodificación
genética.Endichaspruebasseevidencianlosantígenosy/oanticuerposdel grupo
sanguíneo,deacuerdoasu comportamientoinvitro.
EnelsistemaABOseinvestigantantoantígenos oaglutinógenos comolos anticuerposo
isoaglutininasnaturales.
ElfactorRhesunaglutinógenoencontradoen1940porLandsteineryWeiner,en los
glóbulos rojos deprimates(Macacusrhesus) yque tambiénexiste normalmente
enel85%deloshumanos,queporestacausasedenominaRhpositivos.EnelsistemaRh,
existenvariosantígenos:D,C,c,E,e;sinembargo,derutina,solosedeterminalapresenciade
lantígenoDenloseritrocitosydeacuerdoasupresenciaoausenciase dice queunindividuo
es Rh D positivo o RhD negativo.

5. Materiales:
- Alcohol al 70%
- Algodón
- Beakerconcloroal 5%
- Cloroal 5%
- Descartadores depunzo cortantes
- Glóbulos rojosA,ByO
- Láminasescavadas.
- Palillos
- Suero Anti A,Anti B, AntiA,B yanti D(anti–Rh)
- Laminasportaobjetos
- Tubosdeensayo
- Suero degruposA, B, AB yO

6. Procedimiento:
6.1. Hemoclasificacióndirecta:
6.1.1. Método enlámina:
- Marcartresláminasportaobjetocomo A,B, AB yD.
-Adicionarunagotadeanti A, anti B,anti AB yantiD ensu lugar correspondiente.
- Agregarunagota deeritrócitos del paciente acada antisuero.
- Mezclarcada preparaciónconun palillo de madera.
- Rotar manualmentecada laminaconcuidadodequenosemezclen.
- Observar aglutinaciónyregistrar losresultados:

POSITIVO:Laaglutinaciónfuertedelosglóbulos rojos enpresencia decualquier


anticuerpoABOy Rh. Las reacciones positivas muestran3+deaglutinación.

NEGATIVO:Lapresencia deunasuspensiónuniforme (O) deglóbulosrojos.


6.1.2. Método entubo:
- Separarelplasmadeloseritrocitosdelamuestradesconocida.
- Lavarlosglóbulos rojosdel paciente 3vecesconsecutivos ensoluciónsalinay preparar
unasuspensiónfinal al 5%endichasolución.
- RotularcuatrotubosconAnti A, AntiB,Anti AB yAnti D.
- Colocarunagota desuero AntiA,Anti B, AntiAB y Anti D enel tuborespectivo.
- Agregarunagota de la suspensiónal 5%deeritrocitos acada unodelostubos.
- Mezclarcada tubo y centrifugar15–30segundosa 3400rpmo1minutoa1000 rpm.
- Resuspendersuavemente losbotonescelularesyobservaraglutinación:
(4+) Botóncompleto,fácilmente desprendible, fondolimpio
(3+) Botón disperso,2o3 partes,fondolimpio
(2+) No haybotón, pequeñosgrumos
(1+) Pequeñosgrumos
(0)No hayseñales degrumos (aglutinación)

6.2. HemoclasificaciónInversa:
6.2.1. Método entubo:
- Marcartrestubos comoA,B yO.
- Adicionardosgotas desuero del paciente acada tubo.
- Agregarunagota desuspensióndeeritrocitosdelgrupoA altuborotuladocomo
A,unagotadeeritrocitosdelgrupoB altuborotulado comoB yunagotade
eritrocitosdelgrupoO al tuborotulado comoO.
- Incubar de5–15minutosatemperaturaambiente
- Centrifugarpor15–30 segundosa 3400rpm o 1minuto a1000rpm.
- Resuspenderlosbotonescelularesyobservaraglutinación.
- Interpretar los resultados.

7. Cuidados yotros aspectos relevantes deseguridad:


Recuerdequelasmuestrasdepacientes sonpotencialmenteinfectivas,porloquedebe
observarlasmedidasuniversales debioseguridad.
Aplique tambiénlasmedidasdebioseguridadenel descartedelosmateriales.

8.Cuestionario:
a.Cuálessonlos carbohidratospresentesenlosgrupos A, B, AB yO?
b.Completeelsiguientecuadro de Tipificación ABO:
PRUEBA CELULAR PRUEBA SERICA

Glóbulos rojos desconocidos Suero desconocido Interpretación

Anti-A Anti-B Anti-AB A1 B O

AB

c. ¿Quéinmunoglobulinasonlos anticuerpospresentesenelgrupoABO?
d. ¿Quéinmunoglobulinasonlos anticuerpospresentesenel Rh?
e. ¿PorquélareaccióndeaglutinaciónesmásevidenteenladeterminacióndeABOqueenRh?,
expliquesurespuesta
PRACTICA Nº 12

TIPIFICACION DEL D débil DEL SISTEMA RH.

1. Definición:No todos los glóbulos rojos pueden ser clasificados como Rh positivo o Rh
negativo, mediante las pruebas de aglutinación directa con los sueros anti-Rh. Otras, no
muestran aglutinación directa; no pueden ser clasificadas como Rh negativo porque el
antígeno D puede estar presente en tales células pero débilmente expresado, por lo que
se requiere de pruebas adicionales como la antiglobulina para poderlo mostrar. Estos
tipos de reactividad son debidos a variantes del antígeno D. Y los individuos cuyos
glóbulos rojos exhiben tal comportamiento son clasificados como Du variantes.

2. Objetivo: Demostrar la presencia del antígeno D

3. Alcance: Centro de Hemoterapia

4. Muestra: Sangre total anticoagulada

5. Materiales y equipos:

- Tubos de vidrio 12 x 75 mm.

- Guantes.

- Suero Anti-D policlonal o monoclonal.

- Albúmina al 22%.

- AntiglobulinaPoliespecífica IgGC3d.

- Células control de Coombs.

- Centrífuga de inmunohematologia.

- Aglutinoscopio

- Solución salina (NaCl) al 0,9 0/00.

6. Procedimiento:

- Preparar una suspensión al 5% de glóbulos rojos en estudio.

- Colocar 1 gota de Anti D en un tubo limpio y rotulado “D”.

- Colocar 1 gota de suero control RH o albúmina bovina 22% en tubo limpio y rotulado
“control”.

- Agregar una gota de la suspensión al 5% de glóbulos rojos en estudio, a cada uno de los
tubos.
- Mesclar consuavidad y centrifugar a 3400 RPM por 15 seg. o por 1 min. a 1000 RPM.

- Resuspender con suavidad y examinar macroscópicamente en busca de aglutinación


con la ayuda del aglutinoscopio.

- Leer, interpretar y registrar los resultados. Si la reacción es negativa continuar


procedimiento.

- Incubar en baño María ambos tubos a 37°C durante 30 minutos. Luego repetir paso 5 y
6 si es negativo continuar.

- Lavar los glóbulos rojos 4 veces con suero salino decantando totalmente el último
lavado.

- A cada tubo agregar 2 gotas de reactivo de antiglobulina humana poli específica. Repetir
paso 5 y 6.

- Comprobar con células Control de Coombs.

8. Interpretación:

- La aglutinación de los glóbulos rojos en estudio constituyen resultados positivos.

- La resuspensión de las células constituyen un resultado negativo

- La validación como Rh Negativo se dará si ambos tubos no aglutinan.

TABLA RH NEGATIVO TIPICO

D ctrl. RH Interpretación

Lectura inmediata 0 0 Continuar

Lectura incubación 0 0 Continuar

Lectura Suero de Coombs 0 0 Continuar

Control de Coombs 1+/2+ 1+/2+ NEGATIVO

TABLA RH POSITIVO DEBIL

D ctrl. RH Interpretación

Lectura inmediata 0 0 Continuar

Lectura incubación 0 0 Continuar

Lectura Suero de Coombs 1+ 0 POSITIVO

Control de Coombs 1+/2+ POSITIVO


TABLA RH NO DETERMINADO

D ctrl. RH Interpretación

Lectura inmediata 0 0 Negativo

Lectura incubación 0 0 Negativo

Lectura Suero de Coombs 1+ 1+ Invalido(+)

Control de Coombs

*Realizar estudio complementario TCD

Nota:

- La persona Rh positivo variante Du, se comporta como Rh positivo

- Cuando dona y como Rh negativo cuando recibe sangre.

9. Cuestionario:
a. Describa brevemente elproceso dela práctica.
PRACTICA Nº 13
PRUEBA DE COOMBS DIRECTO CUALITATIVO

(POLIESPECIFICO - MONOESPECIFICO).

1. Definición: es la prueba para detectar la sensibilización in vivo de los glóbulos rojos por
anticuerpos tipo Ig G o fracciones de complemento fijados a la membrana de eritrocito.

2. Objetivos: Determinar la presencia de Anticuerpos adheridos a la membrana del


hematíe.

3. Alcance: Centro de Hemoterapia

4. Muestra: Sangre total anticoagulada

5. Materiales y equipos:

- Tubos de vidrio 12x 75 mm.

- Guantes.

- Pipeta Pasteur.

- Centrífuga de inmunohematologia

- Solución salina (NaCl) 0.9 0/00

- Reactivo Coombs PoliclonalAntiglobulina Humana(IgG-C3d)

6. Procedimiento:

- Preparar una suspensión al 5% de glóbulos rojos en estudio con solución salina al 0.9% y
lavados 4 veces.

- Agregar 1 gota de suero de Coombs poliespecifico

- Mezclar con suavidad y centrifugar a 3,400 rpm. x 15 segundos o por 1 min. A 1,000 rpm.

- Leer, interpretar y registrar los resultados. De salir positivos realizar la misma operación
con los sueros monoespecíficos.

- Leer la aglutinación en cruces.

7. Interpretación:

- La aglutinación de los glóbulos rojos en estudio constituyen resultados positivos.

- La resuspensión de las células constituyen un resultado negativo.


Los resultados negativos deben ser comprobados con las células control coombs. Si el
resultado es negativo la prueba es “no valida” y deberá repetirse.

PRACTICA Nº 14

PRUEBA DE COOMBS DIRECTO CUANTITATIVO

(POLIESPECIFICO-MONOESPECIFICO).

1. Definición: es la prueba para detectar la sensibilización in vivo de los glóbulos rojos por
anticuerpos tipo Ig G o fracciones de complemento fijados a la membrana de eritrocito.

2. Objetivos: Determinar el título de Anticuerpos adheridos a la membrana del hematíe.

3. Alcance: Centro de Hemoterapia

4. Muestra: Sangre total anticoagulada

5. Materiales y equipos:

- Tubos de vidrio 12x 75 mm.

- Guantes.

- Pipeta Pasteur.

- Centrífuga de inmunohematologia

- Solución salina (NaCl) 0.9%.

- Reactivo Coombs PoliclonalAntiglobulina Humana(IgG-C3d)

6. Procedimiento:

- Lavado de manos.

- Uso de mandil.

- Colocarse los guantes.

- Preparar una suspensión al 5% de glóbulos rojos en estudio con solución salina al 9º/oo y
lavados 4 veces en cada tubo rotulado.

- Realizar la dilución del Suero de Coombs al ½, ¼, 1/8, 1/16, 1/32, 1/164, 1/128, 1/256,
1/512, 1/1024

- Agregar 1 gota de Suero de Coombs Monoespecifico previamente diluido a cada tubo.

- Mezclar con suavidad y centrifugar a 3,400 rpm. x 15 segundos o por 1 min. A 1,000 rpm.

. Leer, interpretar y registrar los resultados. Leer la aglutinación en cruces.


7. Interpretación:

- La aglutinación de los glóbulos rojos en estudio constituyen resultados positivos.

- La resuspensión de las células constituyen un resultado negativo.

- Los resultados negativos deben ser comprobados con las células control coombs. Si el
resultado es negativo la prueba es “no valida” y deberá repetirse.

- La sumatoria del contaje de los puntos según la aglutinación será el score asignado.

Tabla de score:

Evaluación en cruces Puntuación

4+ 10 puntos

3+ 8 puntos

2+ 6 puntos

1+ 4 puntos

½+ (leer en microscopio) 3 puntos

0 0 puntos

Ejemplo:

Ig G ½ ¼ 1/8 1/16 1/32 1/64

Lectura 3+ 3+ 2+ 1+ ½+ 0

Score 8 8 6 4 3 0 = 29

Ig G Dils = 1/32

Score= 29

Nota: Las muestras para Coombs Directo deben ser trabajadas dentro de los 30 min de
extraídas para evitar la elusión de anticuerpos (glóbulos rojos que se rompen y liberan
anticuerpos).
PRACTICO Nº 15

PRUEBA DE COOMBS INDIRECTO

1. Definición: es la prueba de antiglobulina indirecta que permite detectar la sensibilización


in vitro de los glóbulos rojos, usando glóbulos rojos con antígenos de mayor frecuencia e
importancia clínica.

2. Objetivos: Determinar la especificidad del anticuerpo circulante contra


antigenoshematicos.

3. Alcance: Centro de hemoterapia, servicios de hemoterapia y medicina transfusional.

4. Muestra: sangre total anticoagulada y suero.

5. Materiales y equipos:

- Tubos de vidrio 12x 75 mm .

- Guantes.

- Pipeta pasteur.

- Centrífuga de inmunohematologia

- Solución salina (NaCl) al 0.9º/oo

- Suero o plasma del paciente

- Células detectores de Anticuerpos de Fenotipos conocidos del 3% a 5% panel celular.

- Antiglubulina Humana Poli especifica IgG-C3d

6. Procedimiento:

- Lavado de manos.

- Uso del mandil.

- Colocarse los guantes

- Enumerar los tubos como 1, 2, 3, 4 hasta 11 según sea el caso de 11 o más células.

- Dispensar 1 gota de glóbulos rojos en cada uno de los tubos debidamente rotulados.

- Agregar 2 gotas del suero problema a cada tubo.

- Mezclar, centrifugar a 3,400 RPM.x15 seg. O por 1 min. A 1000 rpm Leer y anotar los
resultados.
- Leer aglutinación y/o hemólisis, resuspender completamente el boton celular y anotar
resultado.

- Agregar 2 gotas de albúmina al 22% y repetir paso 4 y 5.

- Incubar a 37°C por 15min. Repetir pasos 4 y 5

- Lavar lo GR con solución salina por 4 veces decantando totalmente en el último lavado.

- Agregar dos gotas de reactivo de antiglobulina humana poliespecífica. Repetir los pasos 4
y 5.

- Agregar 1 gota de células Control de Coombs en aquellos sin aglutinación.

- Repetir pasos 4 y 5.

7. Interpretación:

- La aglutinación de los glóbulos rojos en estudio constituyen resultados positivos.

- La resuspensión de las células constituye un resultado negativo.

8. Cuestionario:
a. Describa brevemente elproceso del Coombs Directo e Indirecto.
b. Establescame un cuadro comparativo de del Coombs Directo e Indirecto.
PRACTICA 16
AFERERESIS (PLAQUETOFERESIS)

1. Definición:(más exactamente llamado thrombocytapheresis o thrombapheresis.


Aunque estos nombres se utilizan raramente) es el proceso de recolección de
trombocitos, más comúnmente llamados plaquetas, un componente de la sangre
implicada en la coagulación de la sangre. El término se refiere específicamente al método
de recolección de las plaquetas, que se realiza mediante un dispositivo que se utiliza en
donación de sangre separa las plaquetas y devuelve otras porciones de la sangre del
donante. Transfusión de plaquetas puede ser un procedimiento de salvamento en la
prevención o tratamiento de las complicaciones más serias de sangrado y hemorragia en
los pacientes que sufren de trastornos que se manifiesta como trombocitopenia (bajo
conteo de plaquetas) o disfunción de la plaqueta. Este proceso también puede ser
utilizado terapéuticamente para tratar los trastornos ocasionados en las cuentas de
plaqueta extraordinariamente alta tales como Trombocitosis esencial.

2. Objetivo:Extraer un concentrado de plaquetas a partir de un único donante, utilizando


separadores celulares.

3. Alcance:Servicio de Banco de Sangre del Hospital Regional Lambayeque.

4. Muestra:Sangre venosa.

5. Materiales:

- Ambiente cómodo y privado con camilla o sillón reclinable


- Kit para aféresis.
- Equipo de Aferesis

6. Procedimiento:

- Recepciona el formato de solicitud de plaquetaféresis y selección del donante.


- Evalúa al donante a través del Servicio de Hemoterapia.
- Evalúa al donante mediante los resultados de laboratorio
- Informa al donante acerca del procedimiento a realizar con la posterior firma del
consentimiento informado.
- El Médico especialista evalúa al donante.
- Termino de la sesión o inicio de sesiones adicionales.
- Paciente se beneficia con la plaquetaféresis en el Servicio de Banco de Sangre del
Hospital Regional Lambayeque.

7. Interpretación:

Si el proceso de fraccionamiento se dio satisfactoriamente la unidad es utilizada, caso


contrario se someterá a control de calidad.
REFERENCIA BIBLIOGRAFICA:

1.- Manual de la AABB 2017

2.-PANIAGUA R. 1999 Biología Celular 1º Edición, Editorial Mc Graw-Hill Interamericana

3.- BRAVO LINDORO AMALIA G. Terapia transfusional en Pediatría.


Editorial Prado, SA México.
4.- Serie de Monografías Escuela de Brasil. Actualización en Hemoterapia.

Volumen 5, Agosto 1998.

5.- GEOFF DANIELS S. Human Blood Groups 1ra. Edición 1995

Editorial Offices. 1995

6.- CORTES BUELVAS, ARMANDO. Practica Contemporánea de la Transfusión


sanguínea. Impresora Feriva, SA.2008 Colombia.
7.- ORGANIZACIÓN MUNDIAL DE LA SALUD. TheClinical Use of Blood in Medicine. OMS
2001.
8.- MOLLISON P. L. Blood Transfusión in Clinical Medicine
Editorial Offices 10ma. Edición 1997.
9.- MINTZ, PAUL D. transfusiónTherapy : Clinical Principles and Practice.

AABB Press Bethesda, Maryland 1999.

10.- RUDMANN, SALLY V. Blood Banking and transfusión Medicine.

W. B. Saunders Company. 1995

11.- McLEOD BRUCE C., Apheresis Principles and Practice.

AABB Press Bethesda, Maryland 1997.

12.- BENJAMINI ELI ImnunologyA Short Course. 1ra. Edicion.

Editorial Wiley-Liss, NY 1996

13.- LINARES, J. Inmunohematologia y Transfusión.

1ra. Edición Editorial Cromotip1986.

14.- PUNCIO R. 2000. Biología 6º Edición Editorial Mc Graw-Hill Interamericana


15.- SOLOMON EP et al. 2001 Biología. 5º Edición. Mc Graw-Hill Interamericana
16.- STRYER L. 2003. Bioquímica. 5º Edición. Editorial Reverte S.A.
PAGINAS DE INTERNET :

1. http://web.mit.edu/esgbio/www/7001mainhtml
2. http://www.ibiblio.org/virtualcell/textbook/contents.htm
3. http://freemedicaljournals.com
4. http://freebooks4doctors.com/
5. http://laguna.fmedic.unam.mx/
6. http://www2.uah.es/biomodel/
7. http://laguna.fmedic.unam.mx/
8. http://www2.uah.es/biomodel/
9. http://uah.es/biomodel/c_enlaces/libros-virtu.htm
10. http://biopsicologia.net/inicio.php4

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