Anda di halaman 1dari 20

9/10/2018

DNA REKOMBINAN

N. A. Choironi

DNA Rekombinan
› DNA rekombinan = rekayasa
genetik = cloning gen = cloning
molekuler = transgenik
› Rekayasa genetika: Pemindahan
materi genetik dari satu organisme
ke organisme yang lain
› Organisme transgenik:
organisme yang membawa gen
organisme lain hasil rekayasa
genetika

1
9/10/2018

FUTURE EXPERIMENTS

ButterCat CatCow Catrilla

TRANSGENIC
PLANT

2
9/10/2018

PRINSIP
DNA REKOMBINAN
› Isolasi DNA
› Pemotongan DNA
› Penggabungan DNA target dan
vektor kloning
› Transformasi DNA rekombinan
dan sel inang
› Identifikasi

PEMOTONGAN DNA

3
9/10/2018

PEMOTONGAN DNA
› Restriksi endonuklease

4
9/10/2018

DNA HASIL PEMOTONGAN ENZIM


RESTRIKSI

CARA KERJA ENZIM RESTRIKSI

› Enzim restriksi menghidrolisis ikatan fosfodiester


› Enzim restriksi ditingkatkan aktivitasnya dengan bantuan
kofaktor

5
9/10/2018

PENGGABUNGAN DNA

PENGGABUNGAN DNA
› Enzim DNA ligase

6
9/10/2018

CARA KERJA
ENZIM DNA
LIGASE
› Hidrolisis
kofaktor
› Kompleks AMP
berikatan
dengan aa
› Terbentuk
ikatan
fosfodiester

7
9/10/2018

VEKTOR

VEKTOR
› Vektor DNA plasmid
› Vektor DNA bakteriofag
› Vektor DNA hibrid

8
9/10/2018

pBR322

9
9/10/2018

pUC18/pUC19

BAKTERIOFAGA
DAN KOSMID
› Vektor plasmid
dengan ukuran
genom yang besar
› Jalur
– Siklus lisis
– Siklus lisogen

10
9/10/2018

SISTEM KLONING
BAKTERIOFAGA
› Pembuatan dan
penggabungan kepala
dan ekor
› L: gen untuk membuat
kepala dan ekor
› R: replikasi dan lisis

KOSMID

› Plasmid rekayasa yang


membawa sekuen cos
› Fragmen DNA diapit
molekul kosmid
› ATP komsentrasi tinggi
menghambat ligase
ujunng tumpul namun
tidak berpengaruh pada
ujung kohesif

11
9/10/2018

TRANSFORMASI KE
SEL INANG

METODE TRANSFORMASI
› Kimiawi dan kejutan panas
› Elektroporasi

12
9/10/2018

TEKNIK TRANSFORMASI DENGAN SEL


INANG TUMBUHAN
› Infeksi sel tumbuhan dengan patogen: bakteri
Agrobacterium tumefaciens atau virus tumbuhan tertentu
› Biolistic gun bombardment
› Induksi kimiawi dengan PEG
› Fusi protoplas
› Mikroinjeksi

INFEKSI SEL TUMBUHAN DENGAN


AGROBACTERIUM TUMEFACIENS

13
9/10/2018

BIOLISTIC GUN BOMBARDMENT

INDUKSI KIMIAWI
DENGAN PEG

14
9/10/2018

FUSI PROTOPLAS

MIKROINJEKSI

15
9/10/2018

ANALISIS DNA
REKOMBINAN

ANALISIS RESTRIKSI DNA

16
9/10/2018

DNA PROBE

17
9/10/2018

ANALISIS EKSPRESI GEN ASING


› Reaksi antigen
antibodi

ANALISIS EKSPRESI GEN ASING


› Enzim luciferase

18
9/10/2018

AMPLIFIKASI
DNA
› Teknik PCR

› Primer yang
digunakan
komplemen dengan
DNA rekombinan
tersebut

› Hasil amplifikasi dianalisis dengan elektroforesis  apakah


pita DNA teramplifikasi?

DNA SEQUENSING
› Penentuan urutan
nukleotida fragmen
DNA rekombinan

19
9/10/2018

MATURNUWUN

20