BAB I

PENDAHULUAN
1.1. Latar Belakang
Dalam dunia kesehatan, sterilisasi sangatlah penting dilakukan untuk
memberikan efek terapeutik yang maksimal. Steril artinya bebas dari segala
mikroba baik patogen maupun tidak. Sterilisasi merupakan suatu proses
membebaskan suatu peralatan atau bahan dari mikroorganisme yang tidak
dikehendaki. Sterilisasi dalam mikrobiologi merupakan proses penghilangan semua
jenis organisme hidup, dalam hal ini adalah mikroorganisme (protozoa, fungi,
bakteri, virus) yang tedapat pada atau di dalam suatu benda. Proses ini melibatkan
aplikasi biocidal agent atau proses fisik dengan tujuan untuk membunuh atau
menghilangkan mikroorganisme. Ketika untuk pertama kalinya melakukan
pemindahan biakan bakteri secara aseptik, sesungguhnya hal itu telah
menggunakan salah satu cara sterilisasi, yaitu pembakaran. Namun, kebanyakan
peralatan dan media yang umum dipakai di dalam pekerjaan mikrobiologi akan
menjadi rusak bila dibakar. Untungnya tersedia berbagai metode lain yang efektif.
Sterilisasi adalah suatu proses untuk membunuh semua jasad renik yang ada,
sehingga jika ditumbuhkan di dalam suatu medium tidak ada lagi jasad renik yang
dapat berkembangbiak. Sterilisasi harus dapat membunuh jasad renik yang paling
tahan panas yaitu spora bakteri. Adanya pertumbuhan mikroorganisme
menunjukkan bahwa pertumbuhan bakteri masih berlangsung dan tidak
sempurnanya proses sterilisasi. Jika sterilisasi berlangsung sempurna, maka spora
bakteri yang merupakan bentuk paling resisten dari kehidupan mikroba akan
diluluhkan. Tujuan utama dengan adanya sterilisasi adalah untuk meminimalisir
atau meniadakan potensi kontaminasi dari mikroba yang tidak diinginkan.
Kontaminasi yang timbul dari mikroba yang tidak diharapkan dikhawatirkan dapat
menghambat aktivitas dari mikroba yang ditumbuhkan atau dapat membahayakan
keselamatan dari pelaksana kegiatan tersebut. Metoda sterilisasi yang dilakukan
diupayakan berlangsung secara cepat dan dapat meminimalkan atau menghilangkan
potensi kontaminasi mikroba seefektif mungkin.

1
 2

Sterilisasi dapat dilakukan dengan berbagai cara yaitu pemanasan, penyaringan,

radiasi dan penambahan bahan kimia. Sedangkan sterilisasi dengan cara pemanasan
dapat dilakukan dengan panas basah, panas kering, pemanasan bertahap dan
perebusan.
Ada tiga cara yang umum digunakan dalam sterilisasi yaitu penggunaan
panas, penggunaan bahan kimia dan penyaringan (filtrasi). Bila panas digunakan
bersama dengan uap air maka disebut sterilisasi basah, bila tanpa kelembapan maka
disebut sterilisasi kering.
Dalam melakukan suatu pekerjaan di laboratorium sangat dipengaruhi oleh
kebersihan suatu alat yang digunakan sehingga perlu dilakukan sterilisasi untuk
mendapatkan hasil yang lebih optimal. Oleh karena itu, bagi seorang pemula di
bidang mikrobiologi sangat perlu mengenal teknik sterilisasi karena merupakan
dasar-dasar kerja dalam laboratorium. Steril merupakan syarat mutlak keberhasilan
kerja dalam laboratorium. Dalam melakukan sterilisasi, diperlukan teknik-teknik
agar sterilisasi dapat dilakukan secara sempurna, dalam arti tidak ada
mikroorganisme lain yang mengkontaminasi media. Oleh karena itu, begitu
pentingnya kita mengetahui berbagai metode sterilisasi.

1.2. Tujuan
Adapun tujuan penulisan paper ini yaitu:
1. Untuk mengetahui teknik-teknik sterilisasi alat dan ruangan laboratorium
dan menerapkan teknik-teknik tersebut dalam melakukan sterilisasi dalam
praktikum.
2. Untuk mengetahui jenis-jenis sterilisasi
 BAB II
PEMBAHASAN
2.1. Sterilisasi
Sterilisasi adalah segala proses dimana suatu objek, material atau lingkungan
dijadikan steril (Monrow, 2011). Menurut Purnawijayanti (2001), sterilisasi
merupakan suatu proses menghancurkan atau memusnahkan semua
mikroorganisme termasuk spora, dari sebuah benda atau lingkungan.
Dalam menggunakan alat-alat laboratorium kita perlu memperhatikan
kebersihan alat yang akan kita pakai. Ini semua memiliki tujuan untuk
memusnahkan semua bentuk kehidupan mikroorganisme patogen termasuk spora
yang mungkin telah ada pada peralatan, sehingga bila kita menggunakan alat-alat
laboratorium yang telah steril kemungkinan kemunculan mikroba yang tidak
diinginkan pun sangat kecil. Dalam mensterilkan alat-alat laboratorium, cara
kerjanya harus sesuai dengan alat yang disterilkan. Sesuai dengan pendapat dari
(Yalun, 2009) yaitu teknik sterilisasi berbeda-beda tergantung pada jenis
materialnya. Tujuannya agar setiap alat yang disterilkan, semua bagian alatnya
sudah dapat dipastikan bebas dari mikroorganisme yang tumbuh disekitarnya.
Sterilisasi didesain untuk membunuh atau menghilangkan mikroorganisme.
Target suatu metode inaktvasi tergantung dari metode dan tipe
mikroorganismennya, yaitu tergantung dari asam nukleat, protein, atau membrane
mikroorganisme tersebut. Agen kimia untuk sterilisasi disebut sterilant (Pratiwi,
2008).
Peranan sterilisasi pada pembuatan makanan yaitu berfungsi untuk menjamin
keamanan terhadap pencemaran oleh mikroorganisme dan memperpanjang waktu
simpan (Purnawijayanti, 2001).
Prinsip dasar sterilisasi yaitu memperpanjang umur simpan bahan pangan
dengan cara membunuh mikroorganisme yang ada di dalamnya. Mikroorganisme
yang tumbuh pada produk pangan biasanya dapat mencemari produk pangan dan
membuat makanan

3
 4

lebih cepat basi. Mikroorganisme pembusuk tersebut bisa berupa bakteri, khamir
(yeast) dan kapang (jamur) (Hiasinta, 2001).
Isilah lain yang umum dikenal adalah disinfeksi, yang merupakan proses
pembunuhan atau penghilangan mikroorganisme yang dapat menyebabkan
penyakit. Agen disinfeksi adalah disinfektan, yang biasanya merupakan zat kimiawi
dan digunakan untuk objek-objek tak hidup. Disinfeksi tidak menjamin objek
menjadi steril karena spora viabel dan beberapa mikroorganisme tetap dapat tersisa
(Pratiwi, 2008).
Mikroorganisme memiliki sensitivitas yang berbeda-beda terhadap metode
sterilisasi tertentu. Endospora bakteri resisten terhadap panas, iradiasi, dan
detergen; virus tanpa envelope resisten terhadap pelarut organik dan detergen;
mycoplasma dan virus tidak dapat dihilangkan dengan filter steril yang memiliki
ukuran pori 0,2 μm (Pratiwi, 2008).
Efisiensi metode sterilisasi dan efektivitas agen antimikroba dipengaruhi oleh
hal-hal berikut ini:
a) Ukuran Populasi
Populasi mikroorganisme yang besar memerlukan waktu lebih lama sampai
tercapainya kematian dibandingkan populasi yang terkecil.
b) Komposisi Populasi
Bentuk endospora bakteri lebih resisten dibandingkan bentuk vegetatifnya.
c) Konsentrasi/intensitas agen antimikroba
Makin tinggi konsentrasi agen, makin banyak mikroorganisme yang dapat
dimatikan. Pada titik tertentu, peningkatan konsentrasi tidak meningkatkan
kecepatan pembunuhan. Beberapa agen antimikroba justru lebih efektif pada
konsentrasi lebih rendah. Contohnya: etanol 70% lebih efektif dibandingkan
etanol 95%.
d) Lama paparan
Semakin lama populasi mikroorganisme terpapar agen antimikroba, semakin
banyak mikroorganisme yang mati.
e) Temperatur
Peningkatan temperatur dapat meningkatkan aktivitas agen anitimikroba.
 5

f) Lingkungan sekitar
Kondisi lingkungan sekitar dapat menghalangi atau mempercepat destruksi.
Untuk dapat mematikan mikroorganisme, sterilant harus dapat mencapai
mikroorganisme dan apabila mikroorganisme terdapat dalam bahan protein
seperti nanah, jaringan, atau eksudat jaringan, maka diperlukan sterilant degan
kadar dan jumlah yang lebih dari normal untuk dapat mematikan
mikroorganisme tersebut (Pratiwi, 2008).

2.2. Metode Sterilisasi

Metode sterilisasi terbagi atas tiga klasifikan utama, yaitu sterilisasi secara
fisik, secara kimia dan secara mekanis atau filtrasi.
a. Sterilisasi Mekanik
Sterilisasi secara mekanik (filtrasi) menggunakan suatu saringan yang
berpori sangat kecil (0.22 mikron atau 0.45 mikron) sehingga mikroba
tertahan pada saringan tersebut. Proses ini ditujukan untuk sterilisasi bahan
yang peka panas, misalnya larutan serum, enzim, toksin kuman, ekstrak sel
dan lain-lain (Fauzi, 2013).
b. Sterilisasi Kimia
Metode sterilisasi kimia di lakukan untuk bahan bahan yang rusak bila di
sterilkan pada suhu tinggi (misalnya bahan bahan dari plastik) (Pratiwi,
2000).
Metode sterilisasi kimiawi caranya yaitu dengan menghentikan
metabolisme protein seluler sehingga mematikan mikroba dan spora
(Baradero, et al., 2009).
c. Sterilisasi Fisik
Metode sterilisasi panas merupakan metode yang paling dapat di percaya
dan banyak di gunakan. Metode sterilisasi ini digunakan untuk bahan yang
tahan panas, metode sterilisasi panas dengan menggunakan uap air di sebut
metode sterilisasi basah. Metode sterilisasi panas tanpa kelembapan (tanpa
penggunaan uap air) disebut metode sterilisasi kering (Pratiwi, 2000).
 6

2.3. Jenis-jenis Sterilisasi dan Prinsipnya

a. Sterilisasi dengan Tekanan atau Sterilisasi Uap (autocalve)
Sterilisasi dengan tekanan atau sterilisasi uap prinsipnya adalah Suhu dan
tekanan tinggi yang diberikan kepada alat dan media yang disterilisasi
memberikan kekuatan yang lebih besar untuk membunuh sel dibanding
dengan udara panas. Biasanya untuk mesterilkan media digunakan suhu
121oC dan tekanan 15 lb/in2 (SI = 103,4 Kpa) selama 15 menit. Alasan
digunakan suhu 121oC atau 249,8oF adalah karena air mendidih pada suhu
tersebut jika digunakan tekanan 15 psi.
Metode sterilisasi uap umumnya digunakan untuk sterilisasi sediaan
farmasi dan bahan-bahan lain yang tahan terhadap temperature yang
dipergunakan dan tahan terhadap penembusan uap air, larutan dengan
pembawa air, alat-alat gelas, pembalut untuk bedah, penutup karet dan
plastic, dan media untuk pekerjaan mikrobiologi.

b. Sterilisasi Panas Kering (Oven)

Sterilisasi panas kering prinsipnya adalah protein mikroba pertama-tama
akan mengalami dehidrasi sampai kering dan selanjutnya teroksidasi oleh
oksigen dari udara sehingga menyebabkan mikrobanya mati. Digunakan
pada benda/bahan yang tidak mudah menjadi rusak, tidak menyala, tidak
hangus atau tidak menguap pada suhu tinggi.
Umumnya digunakan untuk senyawa-senyawa yang tidak efektif untuk
disterilkan dengan uap air, seperti minyak lemak, minyak mineral, gliserin
(berbagai jenis minyak), petrolatum jelly, lilin, wax, dan serbuk yang tidak
stabil dengan uap air. Metode ini efektif untuk mensterilkan alat-alat gelas
dan bedah. Contohnya alat ukur dan penutup karet atau plastik. Selain itu
bahan/alat harus dibungkus, disumbat atau ditaruh dalam wadah tertutup
untuk mencegah kontaminasi setelah dikeluarkan dari oven. Bahan-bahan
yang mengandung cairan, tidak dapat disterilkan dengan udara panas yang
kering.
c. Sterilisasi Gas atau Etilen Oksida
Sterilisasi gas atau etilen oksida prinsip dasarnya adalah etilen oksida
membunuh mikroba melalui reaksi kimia, yaitu reaksi alkilasi. Pada reaksi
 7

ini terjadi penggantian gugua atom hidrogen pada sel mikroba dengan
gugus alkil, sehingga metabolisme dan reproduksi sel terganggu.
Cara ini digunakan untuk mensterilkan obat serbuk seperti penisilin, juga
telah digunakan untuk sterilisasi benang, plastik tube. Penggunaan etilen
oksida untuk sterilisasi akhir peralatan parenteral tertentu seperti kertas
karf dan lapisan tipis polietilen. Semprot aerosol etilen oksida telah
digunakan untuk mensterilkan daerah sempit dimana dilakukan teknik
aseptis.

d. Sterilisasi Plasma
Sterilisasi plasma prinsipnya adalah menggunakan plasma yang terdiri atas
elektron, ion-ion, maupun partikel netral.

e. Sterilisasi Filtrasi
Sterilisasi filtrasi prinsipnya adalah menyaring suatu cairan non steril
dengan kertas membran sehingga cairan yang melewatinya akan terbebas
mikroba (steril). Pada umumnya bahan yang disterilkan melalui cara ini
adalah bahan yang mengandung senyawa tidak tahan suhu tinggi atau
tekanan tinggi seperti serum darah, antibiotik, glukosa dll. Filter apparatus
umumnya terdiri dari corong, filter base, penjepit corong, labu pengumpul,
selang, dan pompa vakum. Filter apparatus juga dapat digunakan untuk
menghitung mikroorganisme dengan prinsip yang sama dengan sterilisasi
filtrasi. Kertas membran filter memiliki pori-pori yang sangat kecil, lebih
kecil dari ukuran bakteri pada umumnya. Diameter pori-pori dapat
berukuran 0,2 um, 0,45 um, 0,65 um dll.

f. Sterilisasi Dingin
Sterilisasi dingin prinsipnya adalah menggunakan desinfektan yang dapat
merusak banyak mikroorganisme (bakteri, virus, dan kapang) tetapi tidak
dapat mematikan spora bakteri, tetapi disinfeksi tidak dapat mengantikan
sterilisasi autoklaf.
 8

g. Sterilisasi dengan Pemijaran

Cara ini terutama dipakai untuk sterilisasi jarum ose dan sebagainnya
terbuat dari platina, caranya dengan membakar alat-alat tersebut diatas api
lampu spirtus sampai pijar.

h. Sterilisasi Radiasi
1. Ultraviolet
Ultraviolet merupakan gelombang elektromagnetik dengan panjang
gelombang 100-400 mm dengan efek optimal pada 254 nm. Sumbernya
adalah lampu uap merkuri dengan daya tembus hanya 0,01-0,2 mm.
ultraviolet digunakan untuk sterilisasi ruangan pada penggunaan
aseptic.
2. Jon
Mekanisme mengikutitori tumbukan yaitu sinar langsung menghantam
pusat kehidupan mikroba (kromosom) atau secara tidak langsung
dengan sinar terlebih dahulu membentuk molekul dan mengubahnya
menjadi bentuk radikatnya yang menyebabkan terjadinya reaksi
sekunder pada bagian molekul DNA mikroba.
3. Gamma
Gamma bersumber dari Cu60 dan Cs137 dengan aktivitas sebesar 50-
500 kilo curie serta memiliki daya tembus sangat tinggi. Dosis
efektifitasnya adalah 2,5 MRad. Gamma digunakan untuk mensterilkan
alat-alat yang terbuat dari logam, kaet serta bahan sintesis seperti
pulietilen.

2.4. Faktor-faktor yang mempengaruhi Sterilisasi

a. Suhu
Suhu yang digunakan disesuaikan dengan bahan yang akan disterilisasikan
dan alat yang digunakan untuk sterilisasi. Hal ini dikarenakan perbedaan
jenis bahan alat yang digunakan.
 9

b. Waktu
Alat atau bahan yang akan disterilisasi tidak semua sama untuk perlakuan
waktu yang digunakan. Alat cenderung memerlukan waktu yang lebih
lama daripada bahan pada proses sterilisasi.

c. Kelembaban
Bahan yang akan disterilisasikan mempunyai tingkat kelembaban yang
berbeda, oleh sebab itu kelembaban harus disesuaikan dengan jenis bahan
yang akan disterilisasikan.

2.5. Kelebihan dan Kekurangan Sterilisasi

1. Sterilisasi dengan filtrasi
a) Kecepatan pada penyaringan sejumlah kecil larutan
b) Efektif untuk mensterilkan materi-materi yang tidak tahan panas
c) Penggunaan penyaring tertentu
d) Mempunyai kecenderungan meng-absorbsi beberapa senyawa aktif
tertentu selama proses penyaringan
e) Kemungkinan kerusakan bentuk penyaring sehingga kesterilan hasil
yang di peroleh tidak pasti
f) Tidak dapat menyaring virus
g) Hanya sekali pakai

2. Sterilisasi panas lembab

a) Waktu yang dibutuhkan untuk proses sterilisasi sedikit karena ada
bantuan panas dan uap
b) Dapat digunakan untuk sterilisasi hampir semua alat, termasuk alat ukur
c) Ada tetesan uap air pada alat dan bahan yang disterilkan
d) Sangat bergantung pada adanya kelembapan dan temperatur yang
ditingkatkan
e) Uap air yang menetes dapat merusak media-media tertentu
Autoclave adalah alat yang digunakan untuk sterilisasi panas lembab.
Kelebihan dari autoklaf ini adalah waktu yang diperlukan untuk proses
sterilisasi lebih cepat karena menggunakan uap panas dan tekanan.
 10

Kekurangan menggunakan alat ini adalah terdapatnya tetesan uap air

yang mengenai alat dan bahan yang disterilisasi.

3. Sterilisasi panas kering

a) Tidak ada uap air yang menetes pada alat dan bahan yang disterilkan
b) Memerlukan temperatur yang tinggi dan waktu yang lama.
c) Peralatan yang digunakan murah
d) Belum tentu dapat membunuh semua bakteri

4. Sterilisasi radiasi
a) Dengan panjang gelombang yang pendek, mempunyai daya
antimikrobal yang kuat.
b) Adanya pengaruh radiasi pada produk-produk dan wadah
c) Sinar UV dapat menyebab-kan kerusakan hati, kanker, dan lain-lain

5. Sterilisasi gas
a) Penggunaan alkohol dapat menyingkirkan minyak, partikel debu, dan
bakteri.
b) Waktu sterilisasi tergantung pada keberadaan kontaminasi kelembaban,
temperatur dan konsentrasi etilen oksida.
c) Sangat mudah terbakar bila bercampur dengan udara
 11

BAB III
KESIMPULAN
1. Sterilisasi merupakan suatu usaha untuk mensterilasasi alat dan bahan agar tidak
terkontaminasi dengan mikroba.
2. Setiap alat sterilisasi memiliki fungsi dan teknik penggunaan yang berbeda-beda.
3. Metode sterialisasi ada tiga yaitu sterilisasi kimia, sterilisasi mekanik dan sterilisasi
fisik.
 12

DAFTAR PUSTAKA

Anonim. 2013. http://praktikmikrobiologi.blogspot.com/2013/01/bab-3-sterilisasi-

bagian-1.html. diakses pada tanggal 16 September 2018.

Budhiyanto, 2012. Pengertian Sterilisasi Dan Macam. http://www.budhiyanto.com

/2012/07/pengertian-sterilisasi-dan-macam.html. diakses pada tanggal 16
September 2018.

Monrow, 2011. Sterilisasi. http://monrow.wordpress.com/2011/06/18/sterilisasi/.

Diakses 16 September 2018.

Nugroho, A dan Heru, S. 2000. Pedoman Pelaksanaan Tenik Kultur Jaringan.

Penebar Swadaya, Jakarta.

Pratiwi, 2008, General Microbiologi seventh edition, Cambrige University Press,

USA.

Pratiwi, Sylvia. 2008. Mikrobiologi Farmasi. Jakarta: Erlangga

Yalun, 2009. Teknik-Teknik Sterilisasi Bagian I Cairan Dan

Padatan.http://yalun.wordpress.com/2009/01/09/teknik-teknik-sterilisasi-
bagian-1-cairan-dan-padatan/. Diakses pada tanggal 16 September 2018.