ADN polimerasa

Las ADN polimerasas son enzimas polimerasas (celula-

res o virales) que intervienen en el proceso de replicación
del ADN. Llevan a cabo la síntesis de la nueva cadena de
ADN emparejando los desoxirribonucleótidos trifosfato
(dNTP) con los desoxirribonucleótidos complementarios
correspondientes del ADN molde. Los dNTP que se usan
en la replicación del ADN contienen tres fosfatos unidos
al grupo hidroxilo 5' de la desoxirribosa y dependiendo de
la base nitrogenada serán dATP, dTTP, dCTP o dGTP.
La reacción fundamental es una transferencia de un grupo
fosfato en la que el grupo 3'-OH actúa como nucleófilo
en el extremo 3' de la cadena que está en crecimiento. El
ataque nucleofílico se produce sobre el fosfato α (el más
próximo a la desoxirribosa) del desoxirribonucleósido 5' Función correctora exonucleasa 3' → 5' de las ADN polimera-
trifosfato que entra, liberándose pirofosfato inorgánico y sas.
alargándose el ADN (al formarse un nuevo enlace fosfo-
diéster). A diferencia de la mayoría de procesos biológi-
cos que ocurren en la célula en los que sólo se separa un Las ADN polimerasas también realizan otras funciones
grupo fosfato (Pᵢ), durante la replicación se separan los durante el proceso de replicación. Además de participar
dos últimos grupos fosfato, en forma de grupo pirofosfa- en la elongación, desempeñan una función correctora y
to (PPᵢ)... reparadora gracias a su actividad exonucleasa 3', que les
confiere la capacidad de degradar el ADN partiendo de
Este proceso se puede resumir en una ecuación química:
un extremo de éste. Es importante que existan estos me-
canismos de corrección ya que de lo contrario los erro-
(DNA) + dNTP ↔ (DNA) ₊₁ + PPᵢ res producidos durante la copia del ADN darían lugar a
mutaciones.
A pesar de que la ADN polimerasa sólo tiene un sitio ac-
tivo para emparejar los cuatro dNTPs diferentes, la unión
correcta de los pares de bases A:T, C:G es posible basán-
dose en la geometría de éstos: si la unión es incorrecta se
1 ADN polimerasas de E. coli
produce un desplazamiento del fosfato α haciendo más
difícil su unión al extremo 3'-OH y ralentizando así el rit- (ADN polimerasa en celulas procariotas) Las principales
mo de catálisis, lo que da lugar a que la ADN polimerasa ADN polimerasas en E. coli son las ADN Pol I, ADN Pol
añada preferentemente las bases correctas. II, ADN Pol III, y cada una de ellas está especializada en
una o más de estas funciones según cuál sea su papel en
Las ADN polimerasas pueden añadir hasta 1000 la replicación. La procesividad se relaciona con cuánto
nucleótidos por segundo. Esto es debido a su naturale- tiempo permanece unida la ADNpol al ADN cuando es-
za, es decir, el número de nucleótidos que son capaces tá agregando nucleótidos. Así, la ADN Pol I que es poco
de añadir cada vez que se asocian al molde de ADN que procesiva (añade entre 20 y 100 nucleótidos por aconteci-
van a copiar. Dado que la adición de los nucleótidos es miento de unión), es la encargada de la eliminación de los
un proceso que dura unos milisegundos, la velocidad de cebadores y el “relleno” del espacio que dejan con ADN
catálisis va a depender del tiempo que la ADN polimerasa (actividad exonucleasa 3' → 5' y actividad polimerasa 5'
permanece unida al ADN, esto es, de su procesividad. → 3'). La ADN Pol II está encargada de la reparación de
El crecimiento de la cadena se produce en dirección 5' los quiebres producidos en el ADN (actividades polime-
→ 3', ya que se requiere de un grupo 3'-OH libre para rasa 5' → 3' y exonucleasa 3' → 5'), la ADN Pol III que
el inicio de la síntesis puesto que éste es el que realiza el es muy procesiva es la principal encargada de la elonga-
ataque nucleofílico sobre el fosfato α del dNTP, de forma ción del ADN (actividad polimerasa 5' → 3') durante la
que las ADN polimerasas requieren de un iniciador 3'- cual también realiza tareas de corrección (actividad exo-
OH (que puede ser de ADN o ARN) llamado cebador nucleasa 3' → 5'). Notar que actividad correctora y de
que es sintetizado por la ARN primasa. El extremo 3' del reparación no son lo mismo. Sólo la ADN pol I y beta
cebador se denomina extremo cebador. tienen actividad de reparación, en cambio todas las poli-

1
2 3 ADN POLIMERASA DEL FAGO Φ29
merasas tienen actividad correctora (poseen 2 sitios acti-
vos: un sitio de polimerización y otro de corrección). ¿Por
qué ocurre? ¿Cómo se da cuenta la DNApol de que hubo
un error en la replicación del ADN? Ocurre por el fenó-
meno de tautomerización. Los nucleótidos cambian a su
forma química alternativa, la DNApol las confunde con
otro nucleótido y lo elonga. Cuando este vuelve a su con-
formación más estable provoca un cambio en el ancho de
la hebra (20A) y termina abriéndose. Esto es detectado
por la polimerasa, quien cambia conformacionalmente y
deja la hebra posicionada en el sitio de corrección. Las
ADN Pol IV y V, identificadas en 1999, están involucra-
das en una forma poco común de reparación del ADN.
Holoenzima ADN Pol III de E. coli.
A diferencia de lo que ocurre con la ADN Pol I, que só-
lo debe añadir unos 5-10 nucleótidos una vez elimina-
do el cebador, es importante que la ADN Pol III sí sea
muy procesiva, y por esa razón suele formar parte de un
complejo denominado holoenzima ADN Pol III que le da
una mayor procesividad. Este complejo consta de diver-
sas subunidades polipeptídicas encargadas cada una de
una función, y que constituyen en su conjunto un dímero
asimétrico: una mitad se encarga de la síntesis de la hebra
adelantada y la otra mitad de la hebra rezagada. El cora-
zón catalítico lo componen las subunidades α que corres-
ponden a dos copias de la ADN Pol III, la subunidad ε
con actividad correctora exonucleasa 3' → 5' y la subuni-
dad θ cuya función podría ser la de ensamblar las otras
dos; las subunidades τ mantienen la estructura dimérica;
el complejo γ lo conforman las subunidades γ y δ cuya su
función es la de aumentar la procesividad de la ADN Pol
III; la subunidad β sujeta la ADN Pol III al ADN.
Actividad correctora exonucleasa 3' → 5' de la subunidad ε de
la holoenzima ADN Pol III.
2 ADN polimerasas eucarióticas
Hay 13 tipos aunque las más importantes son dos:
• ADN polimerasa α (alfa): se encuentra en el nú-
cleo celular, se inhibe por afidicolina y en humanos
presenta 4 subunidades, aunque las más importantes
son dos:
• Subunidad mayor (130 kDa): tiene actividad
polimerasa.
• Subunidad menor (48 kDa): tiene un centro
activo de primasa para sintetizar el cebador
necesario para la replicación. Como todas las
polimerasas poseen un dominio común, repre-
sentado como una mano, en la cual se incluye
un dominio exonucleasa. Por lo tanto sí posee
una facultad correctora.
• ADN polimerasa σ (sigma): se localiza en el nú-
cleo celular y se inhibe mediante alidilcolina. Tiene
una o dos subunidades dependiendo del organismo.
Tiene una alta capacidad de polimerización y acti-
vidad correctora de errores (exo 3'→5'). Carece de
actividad primasa.
La primasa (que es parte de la molécula de ADN polime-
rasa α) sintetiza cebadores de ARN y además comienza
la elongación con ADN de las dos cadenas. Después se
produce un cambio de polimerasa y entra la ADN poli-
merasa σ, que continúa la síntesis.
3 ADN polimerasa del fago Φ29
El fago Φ29 sintetiza una ADN polimerasa propia. Esta
enzima es muy utilizada en biología molecular para múlti-
ples procedimientos de desplazamiento de amplificación
de ADN, y tiene una serie de características que la hacen
particularmente adecuada para esta aplicación.
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4 Reacción en cadena de la polime-

rasa
La propiedad de las ADN polimerasas para replicar he-
bras de ADN se utiliza para la reacción en cadena de la
polimerasa, conocida como PCR por sus siglas en inglés,
para obtener un gran número de copias de un fragmen-
to de ADN particular, amplificándolo para propósitos de
investigación. En los procesos de PCR se requiere la utili-
zación de polimerasas termoestables, como la polimerasa
Taq, debido a que es necesario aplicar altas temperaturas
para desnaturalizar la molécula de ADN.

5 Bibliografía
«La Replicación».
4 6 TEXT AND IMAGE SOURCES, CONTRIBUTORS, AND LICENSES

6 Text and image sources, contributors, and licenses

6.1 Text
• ADN polimerasa Fuente: http://es.wikipedia.org/wiki/ADN%20polimerasa?oldid=76706783 Colaboradores: Youssefsan, PACO, Josea-
perez, Moriel, Zwobot, Cookie, Tano4595, Aracne, El Moska, Niqueco, Taragui, Xuankar, Rembiapo pohyiete (bot), Orgullobot, Ro-
botQuistnix, Yrbot, BOT-Superzerocool, YurikBot, GermanX, KnightRider, Eskimbot, Paintman, F.A.A, Ignacio Icke, Retama, Otacon,
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SA-2.5-es Colaboradores: http://www.ucm.es/info/genetica/grupod/Replicacion/Replicacion.htm#Inicio Artista original: César Benito Ji-
ménez
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BY-SA-3.0 Colaboradores: Trabajo propio Artista original: Yikrazuul
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cencia: CC-BY-SA-2.5-es Colaboradores: http://www.ucm.es/info/genetica/grupod/Replicacion/Replicacion.htm#Inicio Artista original:
César Benito Jiménez
• Archivo:Holoenzimapol3.jpg Fuente: http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/d/dc/Holoenzimapol3.jpg Licencia: CC-BY-
SA-2.5-es Colaboradores: http://www.ucm.es/info/genetica/grupod/Replicacion/Replicacion.htm#Inicio Artista original: César Benito Ji-
ménez

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