UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIAPAS

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

CAMPUS IV

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA II

Práctica 2:
Marcadores hepáticos

Alumna:
Dania Guadalupe Díaz Coutiño

Semestre:
6° “B”

Catedrática:
M.C. Teresa Virginia Lau Ham

Tapachula Chiapas de Cordova y Ordoñez octubre del 2018

INTRODUCCIÓN
Significancia clínica

La ALAT se encuentra en altas concentraciones en el hígado, riñón, corazón

y tejido muscular esquelético.

Su nivel se encuentra aumentado en enfermedades que involucran el hígado

(cirrosis, hepatitis viral, entre otras). Niveles bajos se detectan en pacientes
dializados o con deficiencia de vitamina B6.

La ASAT se encuentra presente en todos los tejidos, pero en altas

concentraciones en el hígado, musculo, riñón y corazón.

Su aumento se asocia a enfermedades que afectan dichos tejidos tales como

hepatitis, infarto del miocardio, entre otras.
ANTECEDENTES
La determinación de ALAT se realiza acoplando su acción transaminasa a la
acción de la enzima LDH en presencia de NADH. Este método se basa en el método
de Wroblewski y La Due.

La L-alanina en presencia de ALAT formándose piruvato y glutamato. El

piruvato producido es reducido por la enzima LDH con la consiguiente oxidación del
NADH a NAD.

La actividad de la ALAT se mide determinando la disminución de absorbancia

a 340 nm, según el NADH sea oxiddo a NAD.

La determinación de ASAT se realiza acoplando su acción transaminasa a la

acción de la enzima MDH en presencia de NADH. Este método se basa en el
método de Henry et al

El L-aspartato reacciona con el a-cetoglutarato en presencia de ASAT

formándose oxalacetato y glutamato. El oxalacetato producido es reducido por la
enzima MDH con la consiguiente oxidación del NADH a NAD. La actividad de la
ASAT se mide determinando a disminución de absorbancia a 340 nm según el
NADH sea oxidado a NAD.
REACTIVOS
ALAT
Reactivo 1 Cantidad
Buffer 7.5 120 mM
a-cetaglutarato 18 mM
L-alanina 600 mM
LDH 2500 U/L
Azida 0.3 %
Reactivo 2
NADH 1.5 mM
Estabilizadores c.s.

ASAT
Reactivo 1 Cantidad
Buffer 7.8 c.s.a-
Cetaglutarato 15 mM L-
Aspartato Menos 240 mM LDH
1200 U/L MDH 960
Azida 0.3 %
Reactivo 2
NADH 1.08 mM
Estabilizadores c.s.

MUESTRA
De preferencia utilizar suero sin hemolisis. Descartar muestras con hemolisis
visible ya que se pueden obtener valores falsamente elevados.

La ASAT es estable a lo menos 7 días entre 2° y 8°C y 15 días a -20°C

La ASAT es estable a lo menos 7 días entre 2° y 8°C y 15 días a -20°C

TECNICA
ALAT
Cantidad (mL)
Reactivo 1.0
Suero 0.1

Mezclar, incubar 60 segundos a temperatura ambiente leer a 340 nm cada minuto

hasta tener 4 lecturas.

ASAT
Cantidad (mL)
Reactivo 1.0
Suero 0.1

Mezclar, incubar 60 segundos a temperatura ambiente leer a 340 nm cada minuto

hasta tener 4 lecturas.

RESULTADOS

ALAT (TGP)
Lectura
1 0.328
2 0.308
3 0.282
4 0.256

ASAT (TGO)
Lectura
1 0.627
2 0.611
3 0.597
4 0.584
Cálculos:
ALAT
0.043/3 = 0.014
Promedio: 0.014
(0.014) (1768) = 24.75
ASAT
0.074/3 = 0.024
Promedio: 0.024
(0.024) (1768) = 42.43
Rangos de referencia
Prueba Normal
ALAT 24.75 0 – 36 U/L
ASAT 42.43 0 – 36 U/L

ESPECIFICACIONES DE DESEMPEÑO
 Linealidad: 500 U/L

Para valores superiores a 500 U/L, diluir la muestra con suero fisiológico y el
resultado obtenido se multiplica por el factor de dilución.

 Interferencias: hemolisis, bilirrubinas sobre 20 mg/dL, y la lipemia

(triglicéridos sobre 200 mg/dL) pueden interferir en la técnica. Otros
medicamentos y sustancias podrían interferir.