Anda di halaman 1dari 16

WANTAI HbsAg ELISA

PENGGUNAAN YANG DIMAKSUDKAN


WANTAI HBsAg ELISA adalah enzim yang terkait dengan immunologiassay untuk
deteksi kualitatif HBsAg dalam serum manusia atau plasma. Ini dimaksudkan untuk
skrining donor darah dan untuk mendiagnosis pasien yang terkait dengan infeksi
virus hepatitis B.
RINGKASAN
HBV adalah virung DNA beruntai ganda yang terbungkus dan tergabung dalam
keluarga hepadnaviridae dan diakui sebagai penyebab utama penularan darah
hepatitis bersama dengan virus hepatitis C (HCV). Infeksi dengan HBV menginduksi
spektrum manifestasi klinis mulai dari penyakit ringan, tidak jelas hingga hepatitis
fulminan, penyakit hati kronis berat, yang pada beberapa kasus dapat menyebabkan
sirosis dan karsinoma hati. Klasifikasi infeksi hepatitis B membutuhkan identifikasi
beberapa penanda serologi yang diekspresikan selama tiga fase (inkubasi, akut dan
sembuh) dari infeksi. Sekarang beberapa tes diagnostik digunakan skrining, diagnosis
klinis dan manajemen diasease. Antigen permukaan hepatitis B atau HBsAg, yang
sebelumnya digambarkan sebagai antigen Australia, adalah protein terpenting dari
amplop virus hepatitis B. Antigen permukaan mengandung determinat "a", umum
untuk semua subtipe virus dan imunologis dibedakan dalam dua subkelompok yang
berbeda (ay dan ad). HBV memiliki 10 serotipe utama dan empat subtipe HBsAg
telah dikenali (adw, ady, ayw dan ayr). HbsAg dapat dideteksi 2 hingga 4 minggu
sebelum tingkat ALT menjadi tidak normal dan 3 hingga 5 minggu sebelum gejala
berkembang. Deteksi serologis HBsAg adalah metode yang kuat untuk diagnosis dan
pencegahan infeksi HBV dan ELISA telah menjadi sistem analitis yang digunakan
secara luas untuk skrining donor darah dan diagnostik klinis HBV pada individu yang
terinfeksi.
PRINSIP UJI
Untuk mendeteksi HBsAg, WANTAI HBsAg ELISA menggunakan metode ELISA
antibodi “sandwich” di mana, strip microwell polistirena telah dilapisi dengan
antibodi monoklonal khusus untuk HBsAg. Sampel serum atau plasma pasien
ditambahkan ke microwell bersama dengan antibodi kedua terkonjugasi enzim lobak
peroksidase (HRP-Conjugated) dan diarahkan terhadap epitop yang berbeda dari
HBsAg. Selama inkubasi, imunokompleks spesifik yang terbentuk dalam kasus
kehadiran HBsAg dalam sampel, ditangkap pada fase padat. Setelah mencuci untuk
menghapus sampel protein serum dan HRP-terkonjugasi yang tidak terkonjugasi,
perubahan kromogen yang mengandung tetramethyl-benzine (TMB) dan urea
peroksida ditambahkan ke dalam sumur. Dengan adanya antibodi-antibodi-antigen-
antibodi (HRP) "sandwich" immunocamplex, Chromogens yang tidak berwarna
dihidrolisis oleh HRP terikat yang terkonjugasi ke produk berwarna biru. Warna biru
menjadi kuning setelah menghentikan reaksi dengan asam sulfat. Jumlah intensitas
warna dapat diukur dan sebanding dengan jumlah antigen yang ditangkap dalam
sumur, dan jumlahnya dalam sampel masing-masing. Sumur yang mengandung
sampel negatif untuk HBsAg tetap tidak berwarna.
COMPONENTS
PLATE Plate
Kode 5 (Sumur 1x96) Microwell Strip microweel kosong yang dipasang pada
8 x 12/12 x 8 - weel pegangan strip putih. Piring disegel dalam kantong
per piring aluminium dengan desikan. Setiap sumur mengandung
antibodi monoklonal yang reaktif terhadap HBsAg (anti-
HBs). Strip microwell dapat dipecahkan untuk digunakan
secara terpisah. Letakkan sumur atau strip yang tidak
terpakai di dalam kantong plastik tertutup yang disegel
O
bersama dengan pengering dan kembali ke 2-8 C.
Setelah terbuka, tusuk; e selama 4 minggu pada 2-8 O C.
KONTROL (-) NEGATIVE CONTROL
Kode 8 (1x1ml per Cairan kekuningan yang diisi dengan vial dengan tutup
vial) ulir hijau. Stabilisasi protein-strabilized yang diuji tidak
reaktif untuk HBsAg. Siap digunakan seperti yang
disediakan. Setelah terbuka stabil selama 4 minggu pada
2-8 O C.
KONTROL (+) PENGENDALIAN POSITIF
Kode 7 (1x1ml per Cairan berwarna merah diisi dalam botol dengan tutup
botol) sekrup berwarna hijau. HBsAg diencerkan dalam buffer
protein-stabil. Siap digunakan seperti yang disediakan.
Setelah terbuka stabil selama 4 minggu pada 2-8 O C.
AB HRP HRP-CONJUGATE
Kode 6 (1x7ml per Cairan berwarna merah yang diisi dalam botol dengan
botol) tutup sekrup berwarna hijau. Horseradish peroxidase-
konjugasi anti-HBS. Siap digunakan seperti yang
disediakan. Setelah terbuka stabil selama 4 minggu pada
2-8 O C.
WASH BUF 20X WASH BUFFER
Kode 1 (1x30ml per Cairan tak berwarna diisi dengan 3 botol bening dengan
botol) tutup sekrup putih. Buffer solotion yang mengandung
surfaktan. Konsentrat harus diencerkan 1 hingga 20
dengan air suling / deionisasi sebelum digunakan. Setelah
dilarutkan, stabil selama 1 minggu pada suhu kamar, atau
selama 2 minggu ketika dicelupkan pada 2-8 O C.
CHROM SOL A CHROMOGEN SOLUTION A
Kode 2 (1x8ml per Cairan tak berwarna dalam botol putih dengan tutup
botol) sekrup berwarna hijau. Urea peroksidase soliton. Siap
digunakan seperti yang disediakan. Setelah terbuka stabil
selama 4 minggu pada 2-8 O C.
CHROM SOL B CHOROMOGEN SOLUTION B
Kode 3 (1x8ml per Cairan tak berwarna dalam botol hitam dengan tutup
botol) sekrup hitam. Solusi TMB. Siap digunakan seperti yang
disediakan. Setelah terbuka, stabil selama berminggu-
minggu pada 2-8˚C.
STOP SOL STOP SOLUTION; cairan tak berwarna dalam botol putih
Kode 4 (1x8 ml per dengan tutup sekrup putih, larutan asam sulfat encer
botol) (0,5M H2SO4).
Siap digunakan seperti yang disediakan. Setelah terbuka,
stabil selama 4 minggu pada 2-8˚C

 TAS SEALITAS PLASTIK; untuk melampirkan strip yang tidak digunakan


 PAKET INSERT
 TEMPAT SAMPUL PLAT
 Untuk menutupi piring selama inkubasi dan mencegah penguapan atau
kontaminasi dari sumur.

BAHAN YANG DIPERLUKAN TAPI TIDAK DISEDIAKAN


Air suling atau deionisasi yang baru, sarung tangan dan pewaktu sekali pakai,
wadah limbah yang tepat untuk material yang berpotensi terkontaminasi, sistem
pengeluaran dan / atau pipet, tip pipet sekali pakai, jaringan penyerap atau handuk
bersih, inkubator kering atau air mandi 37 ± 1˚C, pembaca pelat, panjang gelombang
tunggal 450 nm atau dual wavelength 450/630 nm, microwell aspirasi / sistem
pencucian.

KOLEKSI SPESIMEN, TRANSPORTASI, DAN PENYIMPANAN


1. Koleksi spesimen; tidak diperlukan persiapan khusus dari pasien. Mengumpulkan
spesimen sesuai dengan praktik laboratorium normal. Baik serum segar atau
spesimen plasma dapat digunakan dengan pengujian ini. Darah yang dikumpulkan
oleh venipuncture harus digunakan untuk menggumpal secara alami dan lengkap -
serum / plasma harus dipisahkan dari bekuan sedini mungkin untuk menghindari
hemolisis RBC. Perawatan harus diambil untuk memastikan bahwa spesimen
serum jelas dan tidak terkontaminasi oleh mikroorganisme. Setiap materi yang
tampak mengartikulasikan dalam spesimen harus dilakukan dengan sentrifugasi bt
di 3000 RPM (putaran per menit) selama 20 menit pada suhu kamar atau dengan
penyaringan.
2. Spesimen plasma yang dikumpulkan ke dalam EDTA, natrium sitrat atau heparin
dapat dicicipi, tetapi spesimen higly lipaemic, ikterik, atau hemolitik tidak boleh
digunakan karena mereka dapat memberikan hasil yang salah dalam pengujian.
Dp tidak panas menonaktifkan spesimen. Ini dapat menyebabkan ceterloration
dari analit target. Sampel dengan kontaminasi mikroba yang terlihat tidak boleh
digunakan.
3. WANTAI HBsAg ELISA ditujukan HANYA atau pengujian sampel serum atau
plasma individu. Jangan gunakan pengujian untuk menguji sampel mayat, air liur,
air kencing atau cairan tubuh lainnya, atau darah yang dikumpulkan (campuran).
4. Transportasi dan penyimpanan: simpan spesimen pada 2-8˚C. speceimens tidak
diperlukan untuk pengujian dalam waktu 1 minggu harus disimpan beku (-20˚C
atau lebih rendah) siklus freeze-thaw ganda harus dihindari. Untuk pengiriman,
sampel harus dikemas dan diberi label sesuai dengan peraturan lokal dan
internasional yang ada untuk transportasi sampel klinis dan agen etologi.

PENYIMPANAN DAN STABILITAS


Komponen kit akan tetap stabil selama tanggal kedaluwarsa yang tertera pada
label dan paket bila disimpan antara 2-8˚C, jangan dibekukan. Untuk menjamin
kinerja maksimum WANTAI HBsAg ELISA, selama penyimpanan, lindungi reagen
dari kontaminasi dengan mikroorganisme atau bahan kimia.
TINDAKAN PENCEGAHAN DAN KESELAMATAN
UNTUK DIGUNAKAN HANYA DARI PROFESIONAL YANG
BERKUALIFIKASI
Tes ELISA adalah waktu dan suhu yang sensitif. Untuk menghindari hasil
yang salah, ikuti langkah-langkah prosedur uji dan jangan mengubahnya.
1. Jangan menukar reagen dari berbagai macam atau menggunakan reagen dari kit
lain yang tersedia secara komersial. Komponen-komponen kit ini secara tepat
dicocokkan untuk kinerja optimal dari pengujian.
2. Pastikan semua reagen berada dalam validitas yang ditunjukkan pada kotak kit
dan lot yang sama. Jangan pernah menggunakan perumpamaan di luar tanggal
kedaluwarsa yang tercantum pada label atau kotak.
3. LANGKAH KARENA - LANGKAH KRITIS; biarkan reagen dan spesimen
mencapai suhu kamar (18-30 ° C) sebelum digunakan. Kocok reagen dengan
lembut sebelum digunakan. Kembalilah ke 2-8˚C segera setelah digunakan.
4. Gunakan hanya volume sampel yang cukup sebagaimana ditunjukkan dalam
langkah-langkah prosedur. Kegagalan untuk melakukannya, dapat menyebabkan
sensitivitas tes yang rendah.
5. Jangan menyentuh bagian luar bagian luar sumur; sidik jari atau goresan dapat
mengganggu pembacaan. Saat memerah hasilnya, pastikan bahwa buttom piring
kering dan tidak ada gelembung udara di dalam sumur.
6. Jangan biarkan microplate wells mengering setelah langkah pencucian. Segeralah
lanjutkan ke langkah berikutnya. Hindari pembentukan gelembung udara saat
menambahkan reagen.
7. Hindari uji langkah-langkah interupsi lama. Yakinkan kondisi kerja yang sama
untuk semua dengan baik.
8. Kalibrasikan pipet secara teratur untuk memastikan keakuratan sampel / reagen
yang dikeluarkan. Gunakan tip pipet pembuangan yang berbeda untuk setiap
spesimen dan reagen untuk menghindari kontaminasi silang.
9. Yakinkan bahwa suhu inkubasi adalah 37˚C di dalam inkubator.
10. Saat menambahkan spesimen, jangan menyentuh bagian bawah sumur dengan
ujung pipet.
11. Saat mengukur dengan pembaca pelat, detennine absorbansi pada 450nm atau
pada 450 / 630nm.
12. Aktivitas enzimatik dari HRP-conjugate mungkin terpengaruh dari debu dan
bahan kimia reaktif dan zat seperti natrium hipoklorit, asam, alkali, dll. Tidak
mempengaruhi penetapan kadar dalam kehadiran zat-zat ini.
13. Jika peralatan sepenuhnya otomatis, selama inkubasi, jangan tutup pelat dengan
penutup pelat. Menyadap sisa-sisa di dalam piring setelah dicuci, juga bisa
dihilangkan.
14. Semua spesimen dari asal manusia dapat dianggap berpotensi menular. Kepatuhan
yang ketat terhadap peraturan GLP (Good Laboratory Practice) dapat memastikan
keamanan pribadi.
15. PERINGATAN; bahan dari asal manusia mungkin telah digunakan dalam
persiapan kontrol negatif dari kit. Bahan-bahan ini telah diuji dengan alat tes
dengan kinerja yang diterima dan ditemukan negatif untuk antibodi terhadap HIV
½ HCV, TP dan HBsAg. Namun, tidak ada metode analitik yang dapat
mengasumsikan bahwa agen infeksi pada spesimen atau reagen tidak ada sama
sekali. Oleh karena itu, tangani pereaksi dan spesimen dengan sangat hati-hati
seakan mampu menularkan penyakit infeksi. Bovine berasal serum telah
digunakan untuk menstabilkan kontrol negatif ard positif. Bovine serum albumin
(BSA) dan fetal calf sera (FCS) berasal dari hewan dari area geografis bebas
BSE / TSE.
16. Jangan makan, minum, merokok, atau oleskan kosmetik di laboratorium
pengujian. Jangan pernah menyemprotkan larutan melalui mulut.
17. Bahan kimia harus ditangani dan dibuang hanya sesuai dengan GLP saat ini
(Good Laboratory Practices) dan peraturan lokal atau nasional.
18. Ujung pipet, strip vial, dan kontainer spesimen harus dikumpulkan dan diautoklaf
selama tidak kurang dari 2 jam pada suhu 121˚C atau diobati dengan natrium
hipoklorit 10% selama 30 menit untuk didekontaminasi sebelum langkah
pelepasan lainnya. Larutan yang mengandung natrium hipoklorit TIDAK
PERNAH diautoklaf. Keamanan bahan Lembar data (MSDS) tersedia atas
permintaan
19. Beberapa reagen dapat menyebabkan toksisitas, irradiasi, luka bakar, atau
memiliki efek karsinogenik sebagai bahan baku. Kontak dengan kulit dan mukosa
harus dihindari tetapi tidak terbatas pada reagenst, stop solution, chromogens, dan
buffer pencuci.
20. Larutan berhenti 0,5 M H2SO4 adalah asam. Gunakan dengan hati-hati.
Bersihkan tumpahan segera dan bersihkan dengan air jika bersentuhan dengan
kulit atau mata.
21. ProclinTM 300 0,1% digunakan sebagai pengawet, dapat menyebabkan sensasi
kulit. Bersihkan tumpahan segera atau cuci dengan air jika bersentuhan dengan
kulit atau mata.
Indikasi kerusakan ketidakstabilan dari reagen, nilai kontrol positif atau
negatif, yang berada di luar rentang kendali mutu yang ditunjukkan, merupakan
indikator kemungkinan kerusakan reagen dan / atau kesalahan operator atau
peralatan. Dalam hal demikian, hasilnya harus dianggap tidak valid dan sampel harus
diuji ulang. Dalam kasus hasil yang keliru konstan dan pemburukan atau
ketidakstabilan yang terbukti dari reagen, segera ganti reagen dengan yang baru atau
hubungi dukungan teknis wantai untuk bantuan lebih lanjut.

PROSEDUR
Reagen persiapan: biarkan reagen mencapai suhu kamar (18-30˚c). periksa
konsentrat pembasuhan cucian untuk keberadaan kristal garam. Jika kristal telah
terbentuk, selesaikan dengan peringatan pada kristal 37˚c larut. Dilule the wash buffer
(20X) seperti yang ditunjukkan dalam instruksi untuk mencuci. Gunakan air suling
atau deionisasi dan hanya membersihkan pembuluh untuk mencairkan buffer. Semua
reagen lain siap digunakan seperti yang disediakan
1. Persiapan: tandai tiga sumur sebagai kontrol negatif (misalnya B1, C1, D1), dua
sumur sebagai kontrol positif (misalnya E1, F1) dan satu sumur (misalnya A1,
baik sampel maupun HRP-konjugat harus ditambahkan ke dalam sumur kosong ).
Jika hasilnya akan ditentukan dengan menggunakan pembaca pelat panjang
gelombang ganda, persyaratan untuk menggunakan sumur kosong bisa
dihilangkan. Gunakan hanya jumlah strip yang diperlukan untuk tes.
2. Menambahkan sampel: tambahkan 50 µl kontrol positif, kontrol negatif, dan
spesimen ke dalam sumur masing-masing kecuali yang kosong, perhatikan:
gunakan ujung pipet pembuangan terpisah untuk setiap spesimen, kontrol negatif,
kontrol positif untuk menghindari kontaminasi silang. Campur dengan mengetuk
piring dengan lembut.
3. Menambahkan HRP-conjugate: tambahkan 50 µl HRP-cojugate ke dalam masing-
masing juga kecuali yang kosong dan aduk dengan mengetuk pelat dengan lembut
4. Inkubasi: di atas piring dengan penutup pelat dan diinkubasi selama 60 menit
pada suhu 37˚c.
5. Mencuci: pada akhir inkubasi, lepaskan dan buang penutup pelat. Cuci masing-
masing dengan baik 5 kali dengan pencuci pencuci yang diencerkan. Setiap kali
memungkinkan microwell untuk berendam selama 30-60 detik. Setelah siklus
pendaratan terakhir, matikan piring ke kertas atau handuk doan dan ketuk untuk
menghilangkan sisa-sisanya.
6. Mewarnai: tambahkan 50 µl larutan chromogen A dan 50 µl chromogen B ke
masing-masing lubang induksi kosong. Inkubasi lempeng di 37 ˚c selama 15
menit menghindari cahaya. Reaksi enzimatik mengubah larutan kromogen dan
HRP-conjugate menghasilkan warna biru pada kontrol positif dan sampel positif
HBsAg.
7. Menghentikan reaksi: menggunakan pipet multisaluran atau secara manual,
tambahkan 50 µl larutan berhenti ke setiap sumur dan aduk dengan lembut, warna
kuning yang intensif berkembang dalam kontrol positif dan HBsAg, sampel
sumur positif
8. Mengukur absorbansi: kalibrasikan pembaca pelat dengan sumur kosong dan baca
absorbansi pada 450 nm. Jika instrumen filter ganda digunakan, atur panjang
gelombang referensi pada 630 nm. Hitung nilai cut-off dan evaluasi hasilnya.
(Catatan: baca absorbansi dalam 10 menit setelah menghentikan reaksi)
INSTRUKSI UNTUK MENCUCI
1. Prosedur pencucian yang baik sangat penting untuk mendapatkan data analitis
yang tepat dan tepat
2. Oleh karena itu, direkomendasikan untuk menggunakan mesin pencuci piring
ELISA berkualitas baik, yang dipelihara pada tingkat kinerja pencucian terbaik.
Secara umum, tidak kurang dari 5 siklus pencucian otomatis sebesar 350-400 μl /
woll cukup untuk menghindari reaksi positif palsu dan latar belakang yang tinggi.
3. Untuk menghindari kontaminasi silang dari lempeng dengan spesimen atau HRP-
konjugat, setelah inkubasi jangan membuang isi dari sumur tetapi biarkan mesin
pencuci piring menghirupnya secara otomatis.
4. Yakinkan bahwa saluran pencuci cairan pencuci piring mikro tidak terhalangi atau
terkontaminasi dan volume pencucian bulus yang cukup diberikan setiap kali ke
dalam sumur
5. Dalam kasus pencucian manual, kami menyarankan untuk melakukan 5 siklus
pencucian, mengeluarkan 350-400 μl / well dan menghirup cairan tersebut selama
5 kali. Jika hasil buruk (latar belakang tinggi) diamati, tingkatkan siklus
pencucian atau perendaman per sumur
6. Dalam hal apapun, cairan yang disedot keluar strip harus diperlakukan dengan
larutan sodium hypochlorite pada konsentrasi akhir 2,5% selama 24 jam, sebelum
mereka terbuang dengan cara yang tepat.
7. Pembasuh pencuci yang pekat harus diencerkan 1: 20 sebelum digunakan. Jika
kurang dari seluruh piring digunakan, propare volume proporsional larutan

KONTROL KUALITAS DAN PERHITUNGAN HASIL


Setiap lempeng harus dipertimbangkan secara terpisah ketika menghitung
dan menafsirkan hasil pengujian, terlepas dari jumlah lempeng bersamaan. Hasilnya
dihitung dengan menghubungkan masing-masing spesimen serapan (A) nilai ke nilai
cut-off (C.O.) dari pelat. Jika pembacaan cut-off didasarkan pada pembaca plat filter
tunggal, hasilnya harus dihitung dengan mengurangkan nilai kosong A dari nilai
laporan cetak spesimen dan kontrol. Jika pembacaan didasarkan pada pembaca plat
filter ganda, jangan kurangi nilai kosong A dari nilai laporan cetak.

SPESIMEN DAN KONTROL


Perhitungan nilai Cut-off (C.O.) = Nc × 2.1
(Nc + nilai absorbansi rata-rata untuk tiga kontrol negatif).
Penting: jika nilai rata-rata A dari kontrol negatif lebih rendah dari) .05, ambillah
sebagai 0,05.

Kontrol kualitas (uji validasi): hasil tes valid jika kriteria kontrol kualitas terpenuhi.
Dianjurkan agar setiap labolatorium harus membuat sistem kualitas yang sesuai
dengan bahan kontrol kualitas similarto atau secara idenikal dengan sampel pasien
yang dianalisis.
 Nilai dari sumur kosong, yang hanya berisi Chromogen dan solusi berhenti,
adalah <0,080 pada 450 nm.
 Nilai A dari kontrol positif harus ≥ 0,800 pada 450/630 nm atau pada 450 nm
setelah blanking.
 Nilai A dari kontrol negatif harus ≤ 0,100 pada 450 / 630nm atau pada 450nm
setelah blanking.
Jika salah satu dari kontrol Negatif Sebuah nilai tidak memenuhi kriteria kontrol
Kualitas, itu harus dibuang dan nilai rata-rata dihitung lagi menggunakan dua nilai
yang tersisa. Jika lebih dari satu kontrol Negatif Suatu nilai tidak memenuhi
spesifikasi Kontrol Kualitas Rnge, pengujian tidak valid dan harus diulang.

Contoh:
Kontrol kualitas
Blank kosong Nilai: A1 = 0,025 pada 450nm (Catatan: blanking hanya diperlukan
saat membaca dengan filter tunggal pada 450nm).
Tidak ada: B1 C1 D1
Kontrol negatif Nilai setelah pengosongan: 0,020 0,012 0,016
Tidak ada: E1 F1
Nilai kontrol positif A setelah mengosongkan: 2.421 2.369
Semua nilai kontrol A berada dalam rentang kendali mutu yang ditentukan

Perhitungan Nc: = 0.016 (Nc lebih rendah dari 0,05, jadi ambillah

sebagai 0,05)
Perhitungan cut-off: (C.O) = 0,05 × 2,1 = 0,105

INTERPRETASI HASIL
 Hasil negatif (A / C. <1). Spesimen yang memberikan absorbansi kurang dari nilai
cut-off adalah negatif untuk pengujian ini, yang menunjukkan bahwa untuk
antigen virus hepatitis B survace telah dideteksi dengan WANTAI HBsAg ELIS,
oleh karena itu pasien mungkin tidak menular dan tidak ada tanda-tanda infeksi.
 Hasil positif (A / C.O ≥1): spesimen memberikan absorbansi sama atau lebih
besar dari nilai cuy-off dianggap awalnya reaktif, yang menunjukkan bahwa
antigen permukaan virus hepatitis B mungkin telah terdeteksi menggunakan
WANTAI HbsAg ELISA. Semua spesimen yang awalnya reaktif harus diuji ulang
dalam duplikat menggunakan WANTAI HbsAg ELISA sebelum interpretasi hasil
uji akhir. Spesimen yang berulang reaktif dapat dianggap positif untuk antigen
permukaan virus hepatitis B dengan WANTAI HbsAg ELISA.
 Borderline (A / C.O = 09-1.1): spesimen dengan absorbansi untuk rasio cut-off
antara 0,9 dan 1,1 dianggap batas dan pengujian ulang dari spesimen ini dalam
duplikat diperlukan untuk mengkonfirmasi hasil awal.
Tindak lanjut, konfirmasi dan tambahan mencicipi spesimen positif dengan
sistem analitik lainnya (misalnya PCR) diperlukan. Diagnosis klinis tidak boleh
ditetapkan berdasarkan hasil tes tunggal., Harus mengintegrasikan data dan temuan
klinis dan labolatorium lainnya.

HASIL AWAL INTERPRETASI DAN IKUTI –UP


SEMUA REAKTIF INOVASI ATAU SAMPEL BORDERLINE
Ulangi dalam rangkap dua
Interpretasi

IND = tidak dapat ditafsirkan

 Jika, setelah pengujian ulang sampel yang pada awalnya reaktif, kedua sumur
adalah hasil negatif (A / C.O <0.9), sampel ini harus dianggap sebagai positif
yang tidak dapat ditimbang ulang (atau positif palsu) dan dicatat sebagai negatif.
Seperti halnya banyak tes ELISA yang sangat sensitif, hasil positif palsu dapat
terjadi karena alasan hemat, yang sebagian besar terkait dengan, tetapi tidak
terbatas, langkah mencuci yang tidak memadai. Untuk informasi lebih lanjut
mengenai wantai ELISA Pemecahan Masalah, silakan lihat “ELISA dan panduan
mengatasi masalah".
 Jika setelah pengujian ulang dalam rangkap dua, satu atau kedua sumur adalah
hasil positif, hasil akhir dari tes ELISA ini harus dicatat sebagai berulang kali
reaktif. Spesimen yang berulang reaktif dapat dianggap positif untuk antigen
permukaan virus hepatitis B dan oleh karena itu pasien mungkin terinfeksi
dengan HBV dan unit darah harus dibuang.
 Setelah menguji ulang induplicates, sampel dengan nilai dekat dengan nilai Cut-
off harus ditafsirkan dengan coution dan dianggap sebagai "borderline" zona
sampel, atau tidak dapat ditafsirkan untuk waktu pengujian.
KARAKTERISTIK KINERJA
Spesifisitas klinis: Spesifitas klinis dari pemeriksaan ini
ditentukan oleh panel sampel yang diperoleh dari 2500 donor darah
sehat dan 300 pasien yang tidak terdiagnosis. Sampel dan sampel
berulang yang dikonfirmasi positif dengan uji referensi tidak
dimasukkan dalam perhitungan spesifisitas.

Jumlah - + dikonfirmasi kekhususan positif


Sampel positif salah
Donatur 2500 2444 56 53 99.88%
3
pasien 300 273 27 26 99,64%
1

Kepekaan klinis . Sensitivitas klinis dari wantai HBsAg ELISA dihitung oleh panel
sampel yang diperoleh dari 670 hepatitis dengan riwayat klinis yang baik berdasarkan
penilaian referensi untuk deleksi HbsAg, HbeAg, anti-Hbe, dan anti-HBc, Tes HBsAg
ELISA berlisensi digunakan sebagai sebuah uji comfirmatory. Hasil evaluasi
diberikan di bawah ini. Hasil yang diperoleh di laboratorium individu mungkin
berbeda.
Spesifisitas Analitycal:
Tidak ada reaktivitas silang yang diamati dengan sampel dari pasien yang terinfeksi
HAV, HCV, HIV, CMV dan TP.
Tidak ada gangguan dari faktor rheumatoid hingga 2000 U / ml yang diamati.
Tidak ada efek kait dosis tinggi hingga konsentrasi HBsAg 200000ng / ml yang
diamati selama pengujian klinis.
Spesimen Frosen telah diuji juga untuk memeriksa gangguan karena pengumpulan
dan kekokohan
Sensitivitas titik akhir analitis (batas deteksi lebih rendah):
Sensitivitas pengujian telah dihitung dengan menggunakan standar referensi yang
diberikan dari laboratorium rujukan untuk produk imunologi di bawah kementerian
kesehatan, Cina. Alat tes ini menunjukkan sensitivitas pada cut-off 0,5 ng / ml (adr)
dan 0,5 ng / ml (adw, ay)

BATASAN
Hasil positif harus dikonfirmasi dengan metode lain yang tersedia dan
diinterpretasikan bersama dengan informasi klinis pasien.
Antigen mungkin tidak terdeteksi selama tahap awal penyakit. Oleh karena itu, hasil
negatif yang diperoleh dengan WANTAI HBsAg ELISA hanya indikasi bahwa
sampel tidak mengandung tingkat antigen permukaan virus hepatitis B yang dapat
dideteksi dan setiap hasil negatif tidak boleh dianggap sebagai bukti yang
meyakinkan bahwa individu tersebut tidak terinfeksi HBV atau unit darah tidak
terinfeksi BHV.
Jika, setelah pengujian ulang sampel yang pada awalnya reaktif, hasil uji negatif,
sampel ini harus dianggap tidak dapat diulang (positif palsu) dan ditafsirkan sebagai
negatif. Seperti banyak tes ELISA yang sangat sensitif, hasil positif palsu dapat
terjadi duo tu beberapa alasan, yang sebagian besar terkait tetapi tidak terbatas pada
langkah pencucian yang tidak memadai. Untuk informasi lebih lanjut mengenai
wantai ELISA troubleshoothing, silakan lihat "ELISAs dan pemecah masalah"
wantai, atau hubungi dukungan teknis wantai untuk bantuan lebih lanjut.
Kesalahan assay yang paling umum adalah: menggunakan kit di luar tanggal
kadaluwarsa, prosedur pencucian yang buruk, reagen yang terkontaminasi, operasi
yang tidak sesuai dengan peralatan laboratorium, kesalahan waktu, penggunaan
spesimen atau reagen yang sangat mengalami hemolisis, operasi yang tidak sesuai
dengan peralatan laboratorium, kesalahan waktu, penggunaan spesimen yang sangat
mengalami hemolisis atau spesimen yang mengandung fibrin, spesimen serum yang
tidak digumpalkan.
Prevalensi marker akan memengaruhi nilai prediksi pengujian.
Uji ini tidak dapat digunakan untuk menguji plasma yang dikumpulkan (campuran).
WANTAI HBsAg ELISA telah dievaluasi hanya dengan spesimen serum atau plasma
individu.
WANTAI HBsAg ELISA adalah uji kualitatif dan hasilnya tidak dapat digunakan
untuk mengukur konsensus antigen.

DAFTAR ISI

1. Stevens, C. E., P. E Taylor, dan M. J. Tong. 1988. Hepatitis virus dan penyakit
hati. Alam R. Riss, New York, N.Y. 142. Stevens, C. E., P. E Taylor, dan M. J.
Tong, P.T.Toy, G.N.Vyas, P, V.Nair
2. J.Y.Wwiessman, dan S. Krugman. 1987. Vaksin hepatitis B ragi-rekombinan.
Khasiat dengan hepatitis B imunue glubolin dalam pencegahan perinatal hepatitis
B. Penularan virus. JAMA 257: 2612-2616. 143. Stevens, C. E., P Toy P. E
Taylor, T. Lee, dan H.Y. Menyalak. 1992. Prospek untuk pengendalian infeksi
virus hepatitis B: implikasi vaksinasi masa kanak-kanak dan perlindungan jangka
panjang. Pediatrics 90 (suppl.): 170-173
3. Hurie, M.B., E.E.Mast, dan J.P. Davis 1992. Horisontal penularan infeksi virus
hepatitis B ke anak-anak kelahiran AS dari pengungsi Hmong. Pediactrics 89:
269-273.
4. Szmuness, W., C. E. Stevens, E. J. Harley, E. A. Zang, W. R. Olesko, D. C.
Williams, R. Sadovsky, J. M. Morrison, dan A. Kellner. 1980. Vaksin Hepatitis B:
demonstrasi kemanjuran dalam uji coba terkontrol pada populasi berisiko tinggi
di AS. N. Engl. J. Med. 303: 833-841.
5. Bhatnagar, P. K., E. Papas, H. E. Blum. D. R. Milich, D, Nitecki, M.J. Karels, dan
G. N. Vyas. 1982. Respon imun terhadap analog peptida sintetis dari antigen
permukaan hepatitis B spesifik untuk determinan. Proc. Nati.Acad. Sci. USA 79:
4400-4404